TaqDNA聚合酶的核酸适配体及其应用、TaqDNA聚合酶抑制剂和PCR试剂盒的制作方法

本发明涉及生物，尤其是涉及一种taq dna聚合酶的核酸适配体及其应用、taq dna聚合酶抑制剂和pcr试剂盒。

背景技术：

1、目前taq dna聚合酶是分子诊断领域中常用的核酸扩增酶，其起到针对目的片段进行扩增，实现特定片段数量的快速增长，放大检测信号的作用，但由于taq酶裸酶在常温状态下也有极低的活性存在，如果在具有反应底物的情况下，非反应程序条件也会有缓慢反应发生，会引发引物和模板的非特异性结合，造成非特异扩增。为了避免这种非预期的反应发生，通常情况会对taq酶进行封闭形成热启动酶，热启动酶在室温情况下不发挥活性，在扩增预变性95℃条件下，抗体和酶发生不可逆的分离，此时taq酶的活性得以释放，结合引物和模板进行扩增。但由于抗体和酶的结合属于抗原和抗体的结合，taq酶的空间结构复杂，活性区域较广泛，单一抗体的结合并不能完全封闭其活性，抗体封闭的热启动酶会出现结合力强但活性区域未完全覆盖的情况，或者热启动酶在后续储存过程出现活性少量释放的情况，这些都将对目前qpcr试剂全预混形式使用场景造成困扰。如果未完全封闭的taq酶放置在全预混扩增体系下，在储存阶段时（非预期扩增时）会对引探和模板进行提前消耗，最后造成全预混试剂的扩增性能下降。

2、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的第一目的在于提供一种taq dna聚合酶的核酸适配体，以解决上述技术问题。

2、本发明的第二目的在于提供上述taq dna聚合酶的核酸适配体的应用。

3、本发明的第三目的在于提供一种taq dna聚合酶抑制剂。

4、本发明的第四目的在于提供一种pcr试剂盒。

5、为了实现以上目的，特采用以下技术方案：

6、第一方面，本发明提供了一种taq dna聚合酶的核酸适配体，所述taq dna聚合酶的核酸适配体的核酸序列如seq id no.1所示。

7、作为进一步技术方案，所述核酸适配体的3’末端含有封闭修饰；

8、作为进一步技术方案，所述封闭修饰为spacer c3修饰。

9、第二方面，本发明提供了上述taq dna聚合酶的核酸适配体在如下a-c任一项中的应用：

10、a. 检测taq dna聚合酶；

11、b. 抑制taq dna聚合酶的活性；

12、c. 制备以taq dna聚合酶作为核酸扩增酶的pcr试剂盒。

13、第三方面，本发明提供了一种taq dna聚合酶抑制剂，包括上述taq dna聚合酶的核酸适配体。

14、作为进一步技术方案，还包括抗taq dna聚合酶的抗体。

15、第四方面，本发明提供了一种pcr试剂盒，包括taq dna聚合酶和上述taq dna聚合酶抑制剂。

16、作为进一步技术方案，所述taq dna聚合酶和taq dna聚合酶抑制剂结合。

17、作为进一步技术方案，每1 u taq dna聚合酶添加0.8×10-6μmol的taq dna聚合酶的核酸适配体。

18、作为进一步技术方案，还包括pcr缓冲液、dntps、引物对和mgcl2。

19、相较于现有技术，本发明具有如下有益效果：

20、本发明提供的taq dna聚合酶的核酸适配体能够特异性结合taq dna聚合酶，并抑制taq dna聚合酶活性，与抗taq dna聚合酶的抗体搭配，能够实现比单独抗体封闭和单独适配体封闭更好的效果，提高封闭后热启动酶的热稳定性。

1. 一种taq dna聚合酶的核酸适配体，其特征在于，所述taq dna聚合酶的核酸适配体的核酸序列如seq id no.1所示。

2. 根据权利要求1所述的taq dna聚合酶的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的3’末端含有封闭修饰。

3. 根据权利要求2所述的taq dna聚合酶的核酸适配体，其特征在于，所述封闭修饰为spacer c3修饰。

4. 权利要求1-3任一项所述taq dna聚合酶的核酸适配体在如下a-c任一项中的应用：

5. 一种taq dna聚合酶抑制剂，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的taq dna聚合酶的核酸适配体。

6. 根据权利要求5所述的taq dna聚合酶抑制剂，其特征在于，还包括抗taq dna聚合酶的抗体。

7. 一种pcr试剂盒，其特征在于，包括taq dna聚合酶和权利要求5或6所述的taq dna聚合酶抑制剂。

8. 根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述taq dna聚合酶和taq dna聚合酶抑制剂结合。

9. 根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，每1 u taq dna聚合酶添加0.8×10-6μmol的taq dna聚合酶的核酸适配体。

10.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括pcr缓冲液、dntps、引物对和mgcl2。