林蛙抗菌肽替代抗生素在宠物食品添加剂中的应用的制作方法

本发明涉及物技术和宠物营养，具体而言，本发明涉及林蛙抗菌肽替代抗生素在宠物食品添加剂中的应用。

背景技术：

1、抗生素自发现以来，在防治细菌感染、促进动物生长方面发挥了巨大作用。在宠物养殖和家庭饲养中，抗生素也常被添加于食品或药品中，用于预防和治疗各类细菌性疾病。然而，长期、不当或过量使用抗生素导致了严峻的公共卫生问题，主要包括：（1）细菌耐药性的产生与蔓延。许多常见病原菌，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等，已对多种抗生素产生耐药性，使得感染治疗愈发困难，甚至出现“超级细菌”。（2）药物残留问题。抗生素在动物体内代谢不完全，可能残留于宠物排泄物或体内，通过环境传播或直接接触影响人类健康，并破坏生态平衡。（3）对宠物自身的潜在危害。部分抗生素可能引起宠物肠道菌群失调、肝肾功能损伤或过敏反应。

2、随着“健康养宠”理念的普及和消费者对食品安全性的日益关注，宠物食品的“无抗化”、“绿色化”已成为行业发展的明确趋势。寻求安全、高效、不易产生耐药性的抗生素替代品是当前宠物营养与健康领域的研究热点。目前，市场上出现的替抗产品主要包括益生菌、益生元、植物提取物、酶制剂、抗菌肽等。

3、抗菌肽是生物体先天免疫系统产生的一类具有广谱抗菌活性的小分子多肽。与传统抗生素作用机制不同，抗菌肽主要通过破坏细菌细胞膜的完整性来杀灭细菌，不易诱导产生耐药性，且对真菌、病毒及某些癌细胞也显示出活性，部分还具有免疫调节功能。因此，抗菌肽被认为是极具潜力的新一代抗生素替代品。目前已有部分抗菌肽（如乳酸链球菌素）在食品防腐中得到应用，但在宠物食品添加剂领域，高效、安全、适用于工业化生产的抗菌肽产品仍然稀缺。

4、林蛙是我国传统的药用动物资源，其体内含有多种生物活性成分。从天然生物资源中发掘新型抗菌肽，并结合现代生物技术进行开发应用，对于推动宠物食品行业的绿色转型，保障宠物及人类健康具有重要的现实意义。然而，如何从林蛙中高效制备出高纯度、高活性的特定抗菌肽，并系统验证其在宠物应用中的安全性、有效性（包括抗菌、抗炎及体内功效），最终将其转化为可稳定添加于宠物食品的替抗添加剂，是本领域需要解决的技术问题。

技术实现思路

1、本发明旨在提供一种新型的林蛙抗菌肽、其优化的工业化制备方法及其在宠物替抗领域的应用。

2、具体地，本发明提供了一种全新的林蛙抗菌肽，其氨基酸序列为seq id no：1。

3、本发明进一步提供了上述抗菌肽的制备方法。该方法包括对林蛙原料进行顺序的胃蛋白酶和胰蛋白酶双酶解，酶解后对酶解液进行超声处理以促进活性成分释放。随后，通过离心、过滤得到上清液，并采用活性炭和β-环糊精联合进行脱色和除味处理，以改善产物的色泽和适口性。处理后的液体经浓缩、超滤初步分离后，再依次通过葡聚糖凝胶层析和反相高效液相色谱进行精细纯化，获得高纯度的抗菌肽溶液。最后，该溶液可通过冷冻干燥或喷雾干燥工艺制成稳定的粉剂。该方法通过集成超声辅助提取、联合脱色除味及灵活的干燥工艺，提高了提取效率，改善了产品品质，并适于规模化生产。

4、本发明还提供了一种含有上述林蛙抗菌肽的宠物替抗食品添加剂。该添加剂由林蛙抗菌肽粉剂与可饲用载体（如微晶纤维素）按一定比例混合而成，便于在宠物食品生产中添加和使用。

5、此外，本发明涉及上述林蛙抗菌肽或其制备的添加剂在制备用于宠物抗菌、抗炎的食品或食品添加剂中的应用。实验证实，该抗菌肽能有效抑制多种宠物常见病原菌，并能减轻炎症反应。在动物模型中，它显示出良好的治疗皮肤感染的效果，在宠物犬的饲喂试验中表现出安全性和改善皮炎症状的有效性。

6、本发明与现有技术相比，至少具有如下有益效果：

7、提供了一种全新结构的抗菌肽：序列为seq id no：1。

8、制备工艺优化，适合产业化：通过在传统酶解工艺中引入超声处理，提高了活性肽的溶出率和提取效率。采用活性炭与β-环糊精联合进行脱色除味，有效去除了产物中的杂质色素和不良气味，改善了作为食品添加剂的感官品质。提供冻干或喷雾干燥两种成粉方式，增加了生产灵活性，喷雾干燥尤其适合连续化、大规模生产。

9、高效安全的替抗解决方案：该抗菌肽具有广谱抗菌活性，且细胞毒性与动物实验表明其安全性高，为替代抗生素提供了理想选择。

10、具备多重生物活性：集抗菌与抗炎功能于一体，对宠物健康具有综合调理作用。

11、应用形式便捷：最终产品为标准化粉剂，易于与其他原料均匀混合，可方便地应用于各类宠物食品中。

1.一种林蛙抗菌肽，其特征在于，其氨基酸序列为seq id no：1。

2.一种如权利要求1所述的林蛙抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤s3中，所述超声处理的功率为300-500w，温度为20-40℃，时间为10-30分钟。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤s4中，所述脱色、除味处理是向过滤后的上清液中加入活性炭和β-环糊精，在30-50℃下搅拌0.5-2小时，然后过滤除去吸附剂。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤s7中，所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。

6.一种宠物替抗食品添加剂，其特征在于，包含权利要求1所述的林蛙抗菌肽以及可饲用载体。

7.如权利要求6所述的宠物替抗食品添加剂，其特征在于，以所述添加剂的总质量计，所述林蛙抗菌肽的质量百分比为0.1%-5%。

8.一种如权利要求1所述的林蛙抗菌肽在制备具有抗菌和/或抗炎功能的宠物食品或食品添加剂中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述宠物食品或食品添加剂用于预防或治疗由金黄色葡萄球菌、大肠杆菌或铜绿假单胞菌引起的宠物细菌性感染或相关炎症。

10.一种宠物食品，其特征在于，包含宠物食品基础原料以及如权利要求6或7所述的宠物替抗食品添加剂。