一种人类免疫缺陷病毒重组抗原及其制备方法和应用与流程

本发明涉及生物，具体涉及一种人类免疫缺陷病毒重组抗原、核酸、载体、细胞、人类免疫缺陷病毒重组抗原的制备方法和人类免疫缺陷病毒重组抗原的应用。

背景技术：

1、目前在人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，hiv）的免疫检测中以双抗原夹心法（double-antigen sandwich immunoassay）最为广泛，其中，标记抗原（labeled antigen）的质量是决定检测灵敏度的关键因素之一。标记抗原的免疫活性直接影响方法的整体性能。高活性标记抗原所要求的抗原应具备良好的溶解性及正确的空间折叠构象。因为抗原的免疫活性高度依赖其天然构象，尤其是构象依赖型表位（conformational epitopes）。

2、现有重组抗原技术方案大致可分为2类：

3、一类是将重组抗原以包涵体形式表达后使用表面活性剂溶解重组蛋白。比如雅培专利us8785596中使用4% sds溶解gp41重组蛋白并保存在包含0.1%sds的缓冲溶液中。若抗原以包涵体（inclusion body）形式表达，通常表明未发生正确折叠，导致溶解性差；此类抗原经标记后免疫活性往往显著降低。

4、另一类是大多数技术方案采用的融合重组蛋白表达。例如菲鹏生物在专利cn101475642使用ht系列融合蛋白使gp41重组蛋白可溶表达；而罗氏在us 6962982、us20090291892等专利中使用fkpa，spla，slyd等融合蛋白来表达可溶性的重组抗原。抗原的反应活性上，可溶表达融合抗原通常比表面活性剂溶解抗原高；但引入的融合蛋白增加了非特异性反应的风险。

5、综上，现有重组抗原技术方案存在的问题关键在于：难以得到可溶表达的人类免疫缺陷病毒重组抗原。

技术实现思路

1、本发明的目的是克服现有技术存在的难以得到可溶表达的人类免疫缺陷病毒重组抗原的问题，提供了一种人类免疫缺陷病毒重组抗原及其制备方法和应用。本发明提供的人类免疫缺陷病毒重组抗原能够实现可溶表达或部分可溶表达，且纯化后能在不含变性剂或表面活性剂的常规生理缓冲溶液中稳定并具有良好的免疫反应性。

2、为了实现上述目的，本发明第一方面提供了一种人类免疫缺陷病毒重组抗原，该抗原具有式（1）所示的结构：

3、nh2-fp-nhr-x1-chr-mper-l1-fp-nhr-x2-chr-mper-l2-fp-nhr-x3-chr-mper-cooh式（1）；

4、其中，x1、x2和x3中的一个或两个各自独立地为loop序列，其余各自独立地为连接肽；

5、其中，l1和l2各自独立地为连接肽；

6、其中，fp和mper各自独立地为无，或部分序列，或全部序列。

7、优选地，所述loop序列包括gp41或gp36蛋白的loop序列。

8、优选地，该抗原具有seq id no:1或seq id no:3所示的氨基酸序列。

9、本发明第二方面提供了编码第一方面所述的人类免疫缺陷病毒重组抗原的核酸。

10、优选地，该核酸具有seq id no:2或seq id no:4所示的核苷酸序列。

11、本发明第三方面提供了一种载体，该载体含有第二方面所述的核酸。

12、本发明第四方面提供了一种细胞，该细胞含有第三方面所述的载体。

13、本发明第五方面提供了一种人类免疫缺陷病毒重组抗原的制备方法，该方法包括：对第四方面所述的细胞进行诱导表达，得到人类免疫缺陷病毒重组抗原。

14、本发明第六方面提供了第一方面所述的人类免疫缺陷病毒重组抗原、或第二方面所述的核酸、或第三方面所述的载体、或第四方面所述的细胞在制备人类免疫缺陷病毒重组抗原和/或制备人类免疫缺陷病毒的检测产品中的应用。

15、本发明第七方面提供了一种人类免疫缺陷病毒的检测产品，该产品含有第一方面所述的人类免疫缺陷病毒重组抗原、和/或第二方面所述的核酸、第三方面所述的载体和第四方面所述的细胞中的至少一种制备得到的人类免疫缺陷病毒重组抗原。

16、通过上述技术方案，本发明能够获得以下技术效果：

17、本发明提供的人类免疫缺陷病毒重组抗原能够实现可溶表达或部分可溶表达，且纯化后能在不含变性剂或表面活性剂的常规生理缓冲溶液中稳定并具有良好的免疫反应性。

1.人类免疫缺陷病毒重组抗原，其特征在于，该抗原具有式（1）所示的结构：

2.根据权利要求1所述的人类免疫缺陷病毒重组抗原，其中，所述loop序列包括gp41或gp36蛋白的loop序列；

3.根据权利要求1或2所述的人类免疫缺陷病毒重组抗原，其中，该抗原具有seq idno:1或seq id no:3所示的氨基酸序列。

4.编码权利要求1-3中任意一项所述的人类免疫缺陷病毒重组抗原的核酸。

5.根据权利要求4所述的核酸，其特征在于，该核酸具有seq id no:2或seq id no:4所示的核苷酸序列。

6.载体，其特征在于，该载体含有权利要求4或5所述的核酸。

7.细胞，其特征在于，该细胞含有权利要求6所述的载体。

8.人类免疫缺陷病毒重组抗原的制备方法，其特征在于，该方法包括：对权利要求7所述的细胞进行诱导表达，得到人类免疫缺陷病毒重组抗原。

9.权利要求1-3中任意一项所述的人类免疫缺陷病毒重组抗原、或权利要求4或5所述的核酸、或权利要求6所述的载体、或权利要求7所述的细胞在制备人类免疫缺陷病毒重组抗原和/或制备人类免疫缺陷病毒的检测产品中的应用。

10.人类免疫缺陷病毒的检测产品，其特征在于，该产品含有权利要求1-3中任意一项所述的人类免疫缺陷病毒重组抗原、和/或权利要求4或5所述的核酸、权利要求6所述的载体和权利要求7所述的细胞中的至少一种制备得到的人类免疫缺陷病毒重组抗原。