特异性人钠-葡萄糖协同转运蛋白2免疫原性肽段LE9及其治疗性疫苗的制作方法

本发明涉及医疗生物，具体涉及一种特异性人钠-葡萄糖协同转运蛋白2免疫原性肽段le9及其治疗性疫苗。

背景技术：

1、糖尿病（diabetes mellitus, dm）已成为全球范围内发病率和死亡率居高不下的重大代谢性疾病，严重影响人类健康并带来沉重的社会经济负担。根据病因差异，糖尿病主要分为1型糖尿病（t1dm）和2型糖尿病（t2dm）。t1dm是一种由自身免疫反应介导的胰岛β细胞破坏性疾病，导致胰岛素绝对缺乏，患者需终身依赖外源性胰岛素替代治疗，且面临极高的低血糖风险。t2dm约占糖尿病总患病人数的90%以上，其核心病理机制为胰岛素抵抗伴随进行性β细胞功能衰退，多与遗传易感性及不良生活方式相关，起病隐匿，多发于中老年群体。尽管二者发病机制迥异，但慢性高血糖状态是其共同特征，长期血糖控制不佳将引发视网膜病变、肾病、神经病变及心血管疾病等多系统微血管和大血管并发症。

2、现有的临床治疗手段在t1dm和t2dm的管理中各有侧重：

3、1.t1dm的治疗重心在于模拟生理性胰岛素分泌以平稳控糖；

4、2.t2dm早期则主要依赖生活方式干预及口服降糖药，随着病程进展，晚期常需联用胰岛素。

5、然而，传统疗法在实际应用中面临诸多瓶颈：一方面，外源性胰岛素及部分口服药物的药代动力学特性易导致血糖波动性增大，难以兼顾强效降糖与低血糖风险的规避；另一方面，现有药物在体重管理、心血管及肾脏保护方面的获益有限，无法满足患者对综合代谢调控的需求。

6、近年来，钠-葡萄糖协同转运蛋白2（sglt2）抑制剂作为一类突破性降糖药物，通过选择性抑制肾脏近端小管对葡萄糖的重吸收，促进尿糖排泄，从机制上绕开了胰岛素抵抗环节。该类药物不仅有效降低了t2dm患者的血糖水平，还在t1dm辅助治疗中显示出减少胰岛素用量、减轻体重的潜力，并提供了明确的心肾保护作用，重塑了糖尿病的治疗格局。然而，目前全球已上市的sglt2抑制剂均为小分子化学药物（包括进口原研药及国产仿制药/改良型新药）。此类药物半衰期较短，需每日口服给药，导致患者依从性受限，且血药浓度峰谷波动较大，不利于全天候平稳控制血糖。

7、相比之下，治疗性疫苗作为一种长效生物制剂，凭借其免疫原性可在体内形成“药物储库”，诱导产生长效的药效学效应，通常可实现每月甚至每季度一次的皮下给药频率。这种给药方式在慢性病管理中极具优势，能显著提高患者依从性并维持稳定的药效浓度。遗憾的是，截至目前，全球尚无靶向sglt2的长效治疗性疫苗问世。

8、因此，开发一种能够诱导机体产生持久、高效且特异性靶向sglt2的免疫应答，从而实现长效平稳降糖的新型生物制品，是当前糖尿病药物研发领域亟待解决的技术难题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服糖尿病领域治疗的不足，尤其是糖尿病治疗依从性差的现实问题，以及目前无针对人sglt2的长效治疗药物的空白，提供了一种特异性人钠-葡萄糖协同转运蛋白2免疫原性肽段及其治疗性疫苗。本发明基于治疗性疫苗研发平台，综合生物信息学、药理学及前沿治疗理念，开创性地筛选出了特异性针对sglt2的抗原表位肽段，该肽段与qβ-2aa病毒样颗粒蛋白偶联得到治疗性疫苗，该疫苗能够有效降低糖尿病模式动物血糖，并具有肾脏保护作用。

2、为实现上述目的，本发明所设计的技术方案如下：

3、本发明提供了一种特异性人钠-葡萄糖协同转运蛋白2免疫原性肽段le9，所述免疫原性肽段le9的氨基酸序列为lrpragdre。

4、本发明还提供了一种上述的免疫原性肽段le9在制备抑制人钠-葡萄糖协同转运蛋白2的转运活性的药物或疫苗中的应用。

5、本发明还提供了一种上述的免疫原性肽段le9在制备用于治疗糖尿病的治疗性疫苗中的应用。

6、本发明还提供了一种用于治疗糖尿病的治疗性疫苗，所述治疗性疫苗含有上述的免疫原性肽段le9。

7、进一步地，所述治疗性疫苗还包括病毒样颗粒载体，且该疫苗是由免疫原性肽段le9与病毒样颗粒载体偶联而成，且免疫原性肽段le9与病毒样颗粒载体偶联时，免疫原性肽段le9的n端连接有半胱氨酸残基（cys, c）。

8、再进一步地，所述病毒样颗粒载体为qβ-2aa病毒样颗粒蛋白。

9、再进一步地，所述免疫原性肽段与qβ-2aa病毒样颗粒蛋白通过异双功能交联剂sulfo-smcc化学偶联而成。

10、本发明还提供了一种上述的治疗性疫苗的制备方法，包括以下步骤：

11、（1）采用固相合成法合成氨基酸序列如seq id no:1所示的免疫原性肽段le9并在n端连接有半胱氨酸残基（cys, c），得到肽段le9-1，冻干后于-80℃保存，备用；

12、（2）将qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒原核表达质粒转化大肠杆菌感受态细胞bl21（de3）并诱导表达，经酸化处理、饱和硫酸铵沉淀、疏水层析和凝胶层析纯化，制备qβ-2aa病毒样颗粒蛋白；

13、（3）通过异双功能交联剂sulfo-smcc将肽段le9-1与qβ-2aa病毒样颗粒蛋白化学偶联，透析去除游离肽段，制备得到治疗性疫苗。

14、本发明还提供了一种上述的治疗性疫苗在制备下列制剂中的应用：

15、（1）降低血糖、用于治疗1型糖尿病或2型糖尿病的注射制剂；

16、（2）具有肾脏保护作用、用于改善糖尿病肾病的注射制剂。

17、再进一步地，所述注射制剂为冻干粉针剂或注射液。

18、本发明的有益效果：

19、1.本发明基于特异性针对sglt2靶点，筛选得到免疫原性肽段，从而开发了一种用于治疗糖尿病的治疗性疫苗；该治疗性疫苗具有作用时间持久，能够降低模式动物血糖和改善糖尿病肾病，应用于糖尿病患者，可以显著提高治疗的有效性和依从性。

20、2.相对化学合成药而言，该治疗性疫苗具有治疗特异性高、效应维持时间长、依从性好等显著的优势，具有极强的临床转化前景。

1.一种特异性人钠-葡萄糖协同转运蛋白2免疫原性肽段le9，其特征在于：所述免疫原性肽段le9的氨基酸序列为seq id no:1所示。

2.一种权利要求1所述的免疫原性肽段le9在制备抑制人钠-葡萄糖协同转运蛋白2转运活性的药物或疫苗中的应用。

3.一种权利要求1所述的免疫原性肽段le9在制备用于治疗糖尿病的治疗性疫苗中的应用。

4.一种用于治疗糖尿病的治疗性疫苗，其特征在于：所述治疗性疫苗含有权利要求1所述的免疫原性肽段le9。

5.根据权利要求4所述的治疗性疫苗，其特征在于：所述治疗性疫苗还包括病毒样颗粒载体，且该疫苗是由免疫原性肽段le9与病毒样颗粒载体偶联而成，且免疫原性肽段le9与病毒样颗粒载体偶联时，免疫原性肽段le9的n端连接有半胱氨酸残基。

6.根据权利要求5所述的治疗性疫苗，其特征在于：所述病毒样颗粒载体为qβ-2aa病毒样颗粒蛋白。

7.根据权利要求6所述的治疗性疫苗，其特征在于，所述免疫原性肽段le9与qβ-2aa病毒样颗粒蛋白通过异双功能交联剂sulfo-smcc化学偶联而成。

8.一种权利要求7所述的治疗性疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.一种权利要求4所述的治疗性疫苗在制备下列制剂中的应用：

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述注射制剂为冻干粉针剂或注射液。