一种含CXCL10的VZV铝佐剂疫苗组合物及其用途

本发明属于生物，涉及一种含cxcl10的vzv铝佐剂疫苗组合物及其用途。

背景技术：

1、水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus，vzv）原发感染可引起水痘。原发感染消退后，病毒可长期潜伏于感觉神经节，并在年龄增长、免疫衰老或免疫功能受损时重新激活，引起带状疱疹以及带状疱疹后神经痛等并发症。现有研究表明，vzv特异性t细胞免疫是维持病毒潜伏状态和抑制病毒再激活的重要免疫学基础。随着年龄增长，vzv特异性细胞免疫逐渐下降，并与带状疱疹发病风险增加相关。因此，对于预防带状疱疹的疫苗，除诱导抗体应答外，增强抗原特异性cd4+t细胞和cd8+t细胞应答同样重要。

2、vzv糖蛋白e（glycoprotein e，ge）是vzv病毒包膜及感染细胞表面表达量较高的糖蛋白，含有多个b细胞和t细胞抗原表位，能够诱导体液免疫和细胞免疫，已成为重组带状疱疹亚单位疫苗的主要抗原。由于重组蛋白抗原本身诱导t细胞免疫的能力有限，其免疫效果在很大程度上依赖佐剂。以单磷酰脂质a、qs-21和脂质体组成的复合佐剂可诱导较强的ge特异性细胞免疫，但接种后局部疼痛、肌痛和疲劳等短期反应较为常见，且其制剂组成、生产工艺和质量控制相对复杂。

3、铝盐佐剂包括氢氧化铝和磷酸铝，具有应用历史较长、生产工艺成熟、配方简单及总体安全性记录较充分等特点，能够有效增强蛋白抗原的抗体应答。专利cn112870344b公开了重组vzv-ge-fc融合蛋白与铝佐剂组成的疫苗制剂，并主要评价了结合抗体和中和抗体水平。然而，铝佐剂通常更有利于诱导体液免疫，其增强th1型免疫、cd8+t细胞应答以及ifn-γ、il-2等细胞因子应答的能力相对有限。因此，vzv-ge蛋白与铝佐剂组成的疫苗虽然具有较好的制剂基础和安全性基础，但仍存在抗原特异性t细胞免疫应答不足的问题。

4、为增强vzv疫苗的细胞免疫，现有技术采用了cpg、poly i:c、qs-21、脂质体及乳剂等免疫刺激组分。例如，专利cn115177724a公开了vzv-ge蛋白、铝佐剂和cpg的组合；专利cn116350770a公开了vzv-ge蛋白、脂质体、qs-21和poly i:c组成的复合疫苗制剂。上述佐剂能够增强t细胞免疫，但较强的先天免疫激活可能伴随局部或全身反应，且多组分制剂的生产和质量控制较为复杂。由此可见，现有vzv-ge疫苗佐剂技术面临如下问题：铝佐剂配方简单且安全性基础较好，但细胞免疫增强能力有限；复合免疫刺激佐剂能够诱导较强的细胞免疫，但可能增加反应原性和制剂复杂性。如何在保留铝佐剂技术优势的基础上，以组成明确的免疫调节组分增强vzv特异性t细胞免疫，是本领域需要解决的技术问题。

5、细胞因子和趋化因子是机体内源性免疫调节分子，可通过调节抗原递呈细胞和t细胞的迁移、定位及相互作用增强免疫应答。cxcl10又称ip-10，是cxcr3的配体，能够促进活化t细胞、自然杀伤细胞及部分抗原递呈细胞的募集，并参与th1型免疫应答。外源给予cxcl10后是否产生明显的系统暴露及心肌损伤相关生化信号，也是其作为疫苗佐剂时需要考察的问题。

6、因此，有必要提供一种由vzv-ge蛋白、氢氧化铝和重组cxcl10蛋白组成的疫苗组合物，以在保留铝佐剂配方简单、工艺成熟和总体安全性基础的同时，增强vzv-ge特异性t细胞免疫应答。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种能够增强vzv-ge铝佐剂疫苗抗原特异性t细胞免疫应答的疫苗组合物。所述疫苗组合物在氢氧化铝佐剂基础上加入重组cxcl10蛋白，以提高vzv-ge抗原特异性cd4+t细胞产生il-2和ifn-γ的能力以及cd8+t细胞产生il-2的能力。

2、为解决上述技术问题，本发明第一方面提供一种组合物，包括vzv-ge蛋白、cxcl10蛋白和铝佐剂；

3、所述vzv-ge蛋白为如下任一种：

4、a1)所示蛋白的氨基酸序列是seq id no.1；

5、a2）在a1）所述蛋白的n端或/和c端连接标签得到的融合蛋白质；

6、所述cxcl10蛋白为如下任一种：

7、b1)所示蛋白的氨基酸序列是seq id no.3；

8、b2）在b1）所述蛋白的n端或/和c端连接标签得到的融合蛋白质。

9、seq id no.1中第1-31位为信号肽，第32-537位为vzv-ge抗原片段，第538-545位为8×his标签。编码所述seq id no.1所述vzv-ge蛋白的核苷酸序列如seq id no.2所示，共1638个核苷酸；其中第1-1635位编码seq id no.1所示前体多肽，第1636-1638位为终止密码子tga。

10、上文所述组合物中，所述铝佐剂为氢氧化铝；

11、或/和，所述vzv-ge蛋白、所述 cxcl10蛋白和所述氢氧化铝中铝元素的质量比为1-5：10-50：1-5。

12、上文所述组合物中，所述vzv-ge蛋白、所述cxcl10蛋白和所述氢氧化铝中铝元素的质量比为1：10：1。

13、上文所述组合物中，所述组合物由所述vzv-ge蛋白、所述cxcl10蛋白、所述氢氧化铝和药学上可接受的缓冲液组成；

14、所述vzv-ge蛋白的浓度为0.1 mg/ml；

15、所述cxcl10蛋白的浓度为0.1 mg/ml；

16、所述氢氧化铝的浓度为1mg/ml。

17、在某些实施方式中，所述药学上可接受的缓冲液为pbs缓冲液或0.9%氯化钠溶液。

18、第二方面，本发明提供了第一方面所述组合物在制备如下任一种中的应用：

19、c1、水痘疫苗；

20、c2、带状疱疹疫苗；

21、c3、预防或治疗由水痘-带状疱疹病毒引发的疾病的产品；

22、c4、提高vzv-ge铝佐剂疫苗的细胞免疫应答的产品。

23、上文中，所述细胞免疫应答包括提高vzv-ge抗原特异性ifn-γ+cd4+t细胞、il-2+cd4+t细胞和il-2+cd8+t细胞中的至少一种细胞亚群的比例。

24、第三方面，本发明提供了第一方面中所述cxcl10蛋白在制备提高vzv-ge铝佐剂疫苗的细胞免疫应答产品中的应用。

25、第四方面，本发明提供了一种产品，包括第一方面所述组合物。

26、上文所述产品具有如下任一种功能：

27、d1、预防或治疗由水痘-带状疱疹病毒引发的疾病；

28、d2、提高vzv-ge铝佐剂疫苗的细胞免疫应答。

29、上文中，所述vzv-ge铝佐剂疫苗包括所述vzv-ge蛋白和所述氢氧化铝，不含有所述cxcl10蛋白。

30、本发明的试验证明，本发明具有如下优点：

31、1）本发明将重组cxcl10蛋白与氢氧化铝共同用于vzv-ge蛋白疫苗，形成由vzv-ge蛋白、氢氧化铝和cxcl10组成的三元组合物，为增强vzv-ge铝佐剂疫苗的细胞免疫应答提供了新的技术方案。

32、2）在vzv-ge蛋白和氢氧化铝剂量相同的条件下，与不含cxcl10的对照组合物相比，加入cxcl10后，免疫小鼠脾脏中vzv-ge抗原特异性ifn-γ+cd4+t细胞、il-2+cd4+t细胞和il-2+cd8+t细胞比例显著改变，其中上述三个细胞亚群的比例显著升高。

33、3）外源给予cxcl10后，小鼠血清cxcl10浓度显著升高，表明外源cxcl10产生了明确的系统暴露；在本试验所采用的给药剂量和观察时间内，cxcl10组与pbs组血清心肌肌钙蛋白i（cardiac troponin i，ctni）水平无显著差异。

34、4）本发明在成熟的氢氧化铝佐剂体系中加入单一重组趋化因子蛋白，不依赖角鲨烯乳剂、皂苷、poly i:c、cpg或复杂脂质体结构，具有组分明确和制剂路线相对简洁的特点。