包含细胞疗法与人工耳蜗的组合方法与流程

背景技术：

1、在工业化国家中，超过5%的人口具有明显的听觉或听力损失病症，这些病症的严重程度在对语言理解的轻度困难到重度失聪的范围内。听力损失与年龄相关，约4%的45岁以下人群以及约34%的65岁以上人群具有衰弱性听力损失。在大多数情况下，原因与位于内耳耳蜗中的毛细胞及其相关螺旋神经节神经元的退化和死亡相关。不存在克服听觉神经元损失的治疗选项。

2、在一些情况下，人工耳蜗可解决听力损失。人工耳蜗绕过耳蜗中受损或功能失调的毛细胞，并且直接经由电极列阵刺激听觉神经，这些电极将信号从接收器发送至听觉神经的不同区域。然而，当听力损失包括螺旋神经节神经元的明显损失时，人工耳蜗可为无效的，或者在其中存在神经元功能障碍或者部分但显著的神经元细胞损失的情况下效果较差。因此，本领域需要另外的解决听力损失的方法，以及增强人工耳蜗功效的方法。

技术实现思路

1、本公开提供了治疗患有听觉病症的受试者的方法，其包括植入人工耳蜗并给予治疗有效量的包含一种听觉细胞群的药用组合物，其中：(a) 群中大于或等于75%的细胞表达巢蛋白和sox2两者；(b) 群中大于或等于80%的细胞表达β微管蛋白iii；(c) 群中大于或等于5%的细胞表达trkb；和(d) 群中小于或等于1%的细胞表达tra-1-60和/或ssea5。在一些实施方案中，药用组合物包含药学上可接受的载体。在一些实施方案中，药用组合物增强人工耳蜗的功效。

2、本公开提供了增强患有听觉病症的受试者的人工耳蜗有效性的方法，其包括给予治疗有效量的包含一种听觉细胞群的药用组合物，其中：(a) 群中大于或等于75%的细胞表达巢蛋白和sox2两者；(b) 群中大于或等于80%的细胞表达β微管蛋白iii；(c) 群中大于或等于5%的细胞表达trkb；和(d) 群中小于或等于1%的细胞表达tra-1-60和/或ssea5。在一些实施方案中，药用组合物包含药学上可接受的载体。

3、在一些实施方案中，在植入人工耳蜗之前给予药用组合物。在一些实施方案中，在植入人工耳蜗之后给予药用组合物。在一些实施方案中，在植入人工耳蜗的同时给予药用组合物。

4、在一些实施方案中，将药用组合物给予受试者的内耳或中耳。在一些实施方案中，给予内耳包括给予耳蜗。在一些实施方案中，将药用组合物给予鼓阶、蜗轴和螺旋神经节。在一些实施方案中，经由注射给予药用组合物。在一些实施方案中，注射包括通过受试者耳囊中的开孔插入套管，或者通过受试者圆窗插入套管。

5、在一些实施方案中，听觉病症包括传导性听力损失、感音神经性听力损失、中枢性听力损失、混合性听力损失、听神经病谱系障碍、中枢听觉处理障碍、耳鸣，或隐性听力损失。在一些实施方案中，听觉病症包括耳蜗毛细胞或耳蜗神经元的损失。在一些实施方案中，听觉病症包括耳蜗毛细胞的损失或耳蜗神经元的损失。

6、本公开提供了治疗患有选自以下的听觉病症的受试者的方法：传导性听力损失、感音神经性听力损失、混合性听力损失、听神经病谱系障碍和隐性听力损失，所述方法包括给予治疗有效量的包含一种听觉细胞群的药用组合物，其中(a) 群中大于或等于75%的细胞表达巢蛋白和sox2两者；(b) 群中大于或等于80%的细胞表达β微管蛋白iii；(c) 群中大于或等于5%的细胞表达trkb；和(d) 群中小于或等于1%的细胞表达tra-1-60和/或ssea5。在一些实施方案中，药用组合物包含药学上可接受的载体。

7、本公开提供了治疗患有听力损失的受试者的方法，例如隐性听力损失，其包括给予治疗有效量的包含一种听觉细胞群的药用组合物，其中(a) 群中大于或等于75%的细胞表达巢蛋白和sox2两者；(b) 群中大于或等于80%的细胞表达β微管蛋白iii；(c) 群中大于或等于5%的细胞表达trkb；和(d) 群中小于或等于1%的细胞表达tra-1-60和/或ssea5。在一些实施方案中，药用组合物包含药学上可接受的载体。

8、在一些实施方案中，将药用组合物给予患有隐性听力损失的受试者的内耳或中耳。在一些实施方案中，受试者用人工耳蜗进一步治疗。

9、在一些实施方案中，药用组合物被冷冻保存，并且方法包括在给予之前解冻药用组合物。

10、在一些实施方案中，群中大于或等于85%的细胞表达巢蛋白和sox2两者。在一些实施方案中，群中大于或等于85%的细胞表达β微管蛋白iii。在一些实施方案中，群中大于或等于15%的细胞表达trkb。在一些实施方案中，群中小于或等于0.1%的细胞表达tra-1-60和/或ssea5。在一些实施方案中，群中大于或等于80%的细胞表达巢蛋白。在一些实施方案中，群中大于或等于80%的细胞表达sox2。在一些实施方案中，群中小于或等于20%的细胞表达pax8和/或pax2。在一些实施方案中，细胞群不显著表达pax2和/或pax8。在一些实施方案中，群中大于或等于10%的细胞表达glua4。在一些实施方案中，群中小于或等于10%的细胞表达myo7a。

11、在一些实施方案中，(a) 群中大于或等于85%的细胞表达巢蛋白和sox2两者；(b)群中大于或等于90%的细胞表达β微管蛋白iii；(c) 群中大于或等于15%的细胞表达trkb；(d) 群中大于或等于10%的细胞表达glua4；(e) 群中小于或等于10%的细胞表达myo7a；和(f) 群中小于或等于0.1%的细胞表达tra-1-60和/或ssea5。

12、在一些实施方案中，群中大于或等于50%的细胞表达cd133。

13、在一些实施方案中，(a) 群中约70%-100%之间的细胞表达巢蛋白和sox2两者；(b)群中约80%-100%之间的细胞表达β微管蛋白iii；(c) 群中约5%-80%之间的细胞表达trkb；和(d) 群中0-约0.1%之间的细胞表达tra-1-60和/或ssea5。

14、在一些实施方案中，群中约10%-95%之间的细胞表达glua4。在一些实施方案中，群中0-约30%之间的细胞表达myo7a。

15、在一些实施方案中，听觉细胞群包括晚期onp细胞、成熟听觉神经元、螺旋神经节神经元、或其任何组合。在一些实施方案中，听觉细胞群包括耳部的感觉细胞群。在一些实施方案中，感觉细胞群选自毛细胞、支持细胞、耳神经元祖细胞和感觉神经元祖细胞。

16、在一些实施方案中，通过流式细胞术或免疫荧光测定表达本文所述的任何标志物的细胞百分比。在一些实施方案中，通过流式细胞术或免疫荧光测定表达巢蛋白、sox2、β微管蛋白iii、trkb、glua4、tra-1-60和/或ssea5的细胞百分比。

17、在一些实施方案中，细胞群包括细胞聚集体、单细胞、或其组合。

18、在一些实施方案中，听觉细胞群包含至少100,000个细胞。在一些实施方案中，听觉细胞群包含100,000个细胞-100万个细胞之间。

19、在一些实施方案中，将约100,000-100万个之间的细胞给予受试者。在一些实施方案中，将每毫升约3000万个细胞-每毫升约7亿个细胞之间给予受试者。

20、在一些实施方案中，通过包括以下的方法得到听觉细胞群：(a) 得到未分化多能干细胞的培养物；(b) 在足以诱导多能干细胞分化为非神经元外胚层细胞的培养条件下培养未分化的多能干细胞；和(c) 在足以将非神经元外胚层细胞分化成听觉细胞的培养条件下培养来自(b)的细胞。