一种通过调控CollagenVII表达修复皮肤基底膜的抗衰组合物及应用的制作方法

本发明涉及化妆品，尤其是涉及一种通过调控collagen vii表达修复皮肤基底膜的抗衰组合物及应用。

背景技术：

1、皮肤老化是一个复杂的、多层次的生物学过程，不仅涉及真皮层成纤维细胞功能衰退和以i型、iii型胶原蛋白为代表的结构蛋白流失，更与表皮-真皮连接层（dermal-epidermal junction, dej）的结构退行性改变密切相关。dej是由基底角质形成细胞和真皮成纤维细胞共同合成与分泌的特殊基底膜结构，其核心功能依赖于由vii型胶原蛋白（collagen vii）构成的锚定纤维。该锚定纤维一端插入dej致密板，另一端延伸至真皮乳头层并包裹间质胶原纤维，在超微结构上起到将表皮机械“锚定”于真皮的关键作用，是决定皮肤紧致度、弹性和抗剪切力的结构基础。

2、大量研究证实，无论是内源性衰老还是外源性光老化，dej区的collagen vii表达量均呈年龄依赖性显著下降，导致锚定纤维密度降低、结构模糊，dej界面趋于扁平化，进而引发皮肤松弛、皱纹加深及屏障功能衰退。因此，特异性促进collagen vii的合成与正确沉积，是修复基底膜、实现深层皮肤抗衰老的核心策略之一。

3、然而，现有用于抗衰老及皮肤修复的技术方案存在诸多不足。主流策略主要聚焦于刺激真皮层成纤维细胞合成i型或iii型胶原蛋白，例如使用视黄醇及其衍生物、维生素c、或某些信号肽等。这些方案普遍存在靶向性差的缺陷，其对dej区collagen vii的诱导能力十分有限。另有部分方案采用直接补充外源性胶原蛋白的策略，但大分子蛋白难以有效透皮到达dej靶区，其实际功效与体外测试结果存在显著差距，且本质上仍为“被动补充”思维，未能调动细胞自身的内源性修复机制。此外，还有方案侧重于提供泛化的代谢支持或抗氧化保护，此类方式虽有助于改善细胞微环境，但缺乏启动collagen vii特异性转录的“指令性”信号，难以精准激活锚定纤维的修复程序。

4、近年来，关于糖基化修饰在调控细胞外基质稳态中的作用被逐渐揭示。研究表明，整合素β1和β4亚基胞外域的唾液酸化程度，可直接调控整合素的构象活化及其与下游黏着斑激酶（fak）的偶联效率，进而通过erk/mapk级联反应影响多种细胞外基质基因的转录。这提示通过外源性干预糖基化信号通路，有望开辟一条特异性调控collagen vii合成的上游新路径。然而，如何将此类上游信号触发与细胞能量代谢支持进行协同设计，使代谢能量精准导向特定结构蛋白的合成途径，从而构建多层次协同修复体系，在本领域中尚属技术空白。

5、例如，专利申请（cn120093654a）公开了一种包含红景天超临界流体提取物、红景天醇提取物和红景天多糖提取物的组合物，并声称其具有皮肤基底膜修护作用。该文献数据显示，所述组合物可在mrna水平上上调多种基底膜成分的表达。然而，该技术方案的局限性在于：其一，其功效验证仅停留在基因表达变化的表型描述层面，未能揭示所述组合物调控基底膜蛋白表达的具体分子通路和作用靶点，机理不明，导致其成分优化和功效强化缺乏可预期的技术指引；其二，该组合物的三种组分均系对同一植物原料（红景天）进行不同溶剂分级提取后再复配所得，其化学组成具有天然的同源性，功效谱存在重叠，缺乏不同作用机制成分之间的靶向互补与协同设计，因而对collagen vii的特异性调控能力和效率仍有待提升。

6、又如，专利申请（cn120535609a）公开了一种重组iv型胶原蛋白，其由特定氨基酸序列重复串联而成，并声称可通过促进基底膜细胞表达iv型、vii型和xvii型胶原蛋白来实现基底膜修复。然而，该技术方案本质上仍属于外源性蛋白补充策略。其发挥功效的理论基础是作为信号分子片段促进内源性胶原合成，但鉴于胶原蛋白大分子在完整皮肤屏障条件下透皮吸收极为困难，难以高效到达dej靶位，其体外细胞实验数据与化妆品涂抹的实际应用场景之间存在巨大差距，且该文献未提供任何经皮渗透或体内功效数据予以验证。此外，该重组蛋白为iv型胶原片段，其声称可交叉促进vii型胶原表达的具体分子机制未被阐明，使得其作用的特异性和可控性存在较大疑问。

7、专利申请（cn115944556a）公开了一种具有抗衰和去皱功效的组合物及其制备方法与应用。所述具有抗衰和去皱功效的组合物包括以下组分：n-乙酰神经氨酸、氨基丁酸、肌醇、烟酰胺和水。该组合物所用组分安全可靠，吸收性好，且体现出优异的抗衰、去皱和提亮肤色的效果，有着良好的应用前景。

8、综上所述，现有技术中缺乏一种能够从上游糖基化信号触发出发，通过明确的分子靶点特异性启动collagen vii转录，同时协同提供细胞能量与合成支持，从而实现高效、可控的基底膜修复与抗衰老作用的组合物或方案。本领域迫切需要开发一种机制清晰、靶向性强、能够有效解决上述问题的创新技术方案。

技术实现思路

1、本发明的目的就是为了解决上述问题至少其一而提供一种通过调控collagenvii表达修复皮肤基底膜的抗衰组合物及应用，通过功效成分协同抗氧化，有效清除自由基，减缓皮肤细胞氧化损伤，并促进胶原蛋白的生长与皮肤细胞的再生，改善细纹、暗沉及肌肤松弛问题，具有抗衰除皱功效。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：一种通过调控collagen vii表达修复皮肤基底膜的抗衰组合物，该组合物包括质量比为（0.01-1.5）：（0.01-2）：（0.01-1）：（0.01-1.5）的n-乙酰神经氨酸、黑孢块菌提取物、滨海剌芹愈伤组织培养物滤液和六肽-11。

3、进一步地，所述的n-乙酰神经氨酸、黑孢块菌提取物、滨海剌芹愈伤组织培养物滤液和六肽-11的质量比为（0.05-1.5）：（0.1-2）：（0.1-1）：（0.01-1.5）。

4、进一步地，所述的n-乙酰神经氨酸、黑孢块菌提取物、滨海剌芹愈伤组织培养物滤液和六肽-11的质量比为（0.2-1.5）：（0.3-2）：（0.3-1）：（0.2-1.5）。

5、本发明还涉及一种护肤品，包括基质辅料和功效成分，所述功效成分包括所述的通过调控collagen vii表达修复皮肤基底膜的抗衰组合物。

6、进一步地，所述的护肤品中功效成分的质量百分比含量为0.01-10%。

7、进一步地，所述的护肤品中功效成分的质量百分比含量为1-6%。

8、进一步地，所述的基质辅料选自保湿剂、增稠剂、柔润剂、乳化剂、皮肤调理剂、ph调节剂、防腐剂、螯合剂、芳香剂及溶剂中的任意一种或多种。

9、进一步地，所述保湿剂选自甘油、戊二醇、1，2-戊二醇、丁二醇、丙二醇、1，3-丙二醇、己二醇、1，2-己二醇、双丙甘醇、辛苷醇、辛基十二醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇、聚乙二醇-14、聚乙二醇-32、海藻糖、甘露糖醇、甘油葡糖苷、甜菜碱、葡萄糖、聚谷氨酸钠中的一种或多种；

10、所述增稠剂选自卡波姆、黄原胶、羟乙基纤维素、丙烯酸（酯）类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酸钠/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/vp共聚物、聚丙烯酸钠、小核菌胶中的一种或多种；

11、所述柔润剂选自辛酸/癸酸甘油三酯、异十六烷、异硬脂酸异丙酯、牛油果树果脂、角鲨烷、聚二甲基硅氧烷、乙烯基二甲基硅氧烷、聚甲基硅倍半氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、氢化聚异丁烯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、二辛基醚、碳酸二辛酯、霍霍巴籽油、白池花籽油、山茶籽油、植物甾醇/山嵛醇/辛基癸醇月桂酰谷氨酸酯中的一种或多种；

12、所述乳化剂选硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇、鲸蜡硬脂醇、甘油硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯se、peg-100硬脂酸酯、鲸蜡硬脂基葡糖苷、山梨坦油酸酯、甘油硬脂酸酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-20、月桂醇聚醚-7、硬脂酰谷氨酸钠、卵磷脂、氢化卵磷脂中的一种或多种；

13、所述皮肤调理剂选自透明质酸钠、水解透明质酸、乙酰化透明质酸钠、泛醇、生育酚乙酸酯、胆甾醇、植物鞘氨醇、甘草酸二钾、尿囊素、红没药醇中的一种或多种；

14、所述ph调节剂选自精氨酸、三乙醇胺、氢氧化钠、氢氧化钾、柠檬酸、柠檬酸钠中的一种或多种；

15、所述防腐剂选自对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、苯甲酸、山梨酸钾、苯甲酸钠中的一种或多种；

16、所述螯合剂选自edta二钠、edta四钠、谷氨酸二乙酸四钠中的一种或多种；

17、所述芳香剂选自日用香精；

18、所述溶剂为去离子水。

19、进一步地，所述的护肤品包括精华水、精华液、乳液、面霜、面膜中的一种或几种。

20、进一步地，所述的护肤品为面霜，其包括以下重量份的组分：

21、。

22、本发明提供的上述通过调控collagen vii表达修复皮肤基底膜的抗衰面霜的制备方法，包括以下步骤：

23、（1）水相制备：将水加入水相锅中，搅拌下依次投入甘油、1,2-戊二醇、丁二醇、海藻糖、木糖醇、1,3-丙二醇、丙烯酸钠/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、泛醇，加热至75-80℃，搅拌溶解均匀，保温备用。

24、（2）油相制备：将异十六烷、异硬脂酸异丙酯、辛酸/癸酸甘油三酯、牛油果树果脂、聚二甲基硅氧烷、乙烯基二甲基硅氧烷、聚甲基硅倍半氧烷、植物甾醇/山嵛醇/辛基癸醇月桂酰谷氨酸酯、聚二甲基硅氧烷醇、peg-100硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇、鲸蜡硬脂基葡糖苷、山梨坦油酸酯、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇、硬脂酸、生育酚乙酸酯加入油相锅中，加热至75-80℃，搅拌至完全熔融均匀，保温备用。

25、（3）均质乳化：在搅拌下将油相缓慢加入水相中，加毕后以均质机在3000-5000rpm条件下均质3-5分钟，形成均匀乳液。

26、（4）降温与添加：将乳液搅拌冷却至60-65℃，加入精氨酸，搅拌均匀；继续冷却至40-45℃，依次加入n-乙酰神经氨酸、黑孢块菌提取物、滨海剌芹愈伤组织培养物滤液、六肽-11、香精、对羟基苯乙酮和1,2-己二醇，搅拌至完全溶解并分散均匀。

27、（5）出料：继续搅拌冷却至35-38℃，检测ph值和粘度合格后，出料，即得所述抗衰面霜。

28、在上述制备工艺中，n-乙酰神经氨酸、黑孢块菌提取物、滨海剌芹愈伤组织培养物滤液和六肽-11四种功效成分均于40-45℃的降温阶段加入，避免了高温对唾液酸结构完整性、黑孢块菌提取物和滨海剌芹愈伤组织培养物滤液中多酚类活性成分的氧化降解以及六肽-11肽类结构的潜在影响，最大程度保障了活性组分的生物学功效。所得面霜质地细腻均匀，稳定性良好，适用于日常皮肤护理。

29、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

30、1、本发明首次将n-乙酰神经氨酸引入皮肤基底膜修复领域，利用其参与整合素β1和β4亚基末端唾液酸化修饰的独特生化功能，从"糖基化信号→整合素活化→fak/erk磷酸化→col7a1基因转录"这一上游信号轴特异性启动collagen vii的合成程序；同时引入六肽-11通过激活tgf-β/smad通路从互补维度强化col7a1转录输出，形成针对collagen vii合成的双通路协同转录驱动，克服了现有技术方案对dej区collagen vii诱导能力有限、靶向性不足的缺陷。体外离体皮肤实验结果显示（以实施例3为代表），经本发明组合物干预后，sds损伤模型组皮肤中collagen vii蛋白的平均光密度值由0.1112回升至0.1161，接近空白对照组水平（0.1175），从蛋白表达层面验证了上述双通路调控机制的有效性。

31、2、本发明将n-乙酰神经氨酸、黑孢块菌提取物、滨海剌芹愈伤组织培养物滤液和六肽-11四种不同作用机制的成分进行科学复配，构建了"信号启动-双重代谢保护-合成强化"的四维协同网络：n-乙酰神经氨酸负责信号启动，黑孢块菌提取物富含的多酚、氨基酸及小分子代谢活性因子提供前端代谢支持（维护线粒体效率、稳定折叠微环境），滨海剌芹愈伤组织培养物滤液富含的多酚及黄酮类成分提供末端活性氧清除与内质网保护，六肽-11通过tgf-β/smad通路进一步强化蛋白质合成输出，四者在collagen vii合成全链条上环环相扣、各司其职。

32、人体功效测试结果表明，含全部四种功效成分的实施例1、实施例2、实施例3的d28皮肤弹性提升率分别为18.86%、19.75%、16.42%，均显著优于缺失任意一种成分的对比例1-4（d28弹性提升率在8.27%至9.62%之间）；改善幅度随缺失成分数量的增加而持续衰减：同时缺失n-乙酰神经氨酸与六肽-11的对比例7弹性提升率降至4.72%，仅含单一功效成分的对比例11-14弹性提升率进一步降至3.95%-4.45%，空白例1仅为1.85%。皱纹改善指标呈现与弹性指标高度一致的规律，表明四种功效成分的协同增效均为必要，任意成分均不可简单替代或省略。

33、3、本发明组合物从分子蛋白表达、超微结构和宏观功效三个层面形成完整的功效验证证据链。

34、（1）体外离体皮肤实验（以实施例3为代表）结果如下：

35、在组织化学层面，pas染色结果显示，经实施例3面霜干预后，sds损伤模型皮肤的连续基底膜比例由模型组的18.29%显著提升至51.04%（空白对照组为88.63%），基底膜的连续性及完整性得到显著改善；透射电子显微镜观察进一步证实，干预后网板层纤维恢复紧密连接，纤维排列致密度明显增强，半桥粒-锚丝复合体形态趋于完整，真皮胶原纤维与网板层纤维的连接状态明显改善，整体超微结构接近空白对照组水平。

36、在表皮结构层面，h&e染色结果显示，经实施例3干预后，皮肤表皮厚度由模型组的约66.73μm恢复至约90.26μm（空白对照组约103.21μm），表明本发明组合物对sds诱导的表皮萎缩具有积极的保护与修复作用。

37、（2）人体功效测试（实施例1-3）结果如下：

38、在皮肤皱纹改善方面，三个实施例均呈现持续累积改善趋势（d28效果优于d7效果）。其中，功效成分含量最高的实施例2，d28时鱼尾纹体积减少4.33%、眉间纹体积减少3.90%、前额细纹体积减少14.39%；实施例1 d28时鱼尾纹体积减少4.05%、眉间纹体积减少3.68%、前额细纹体积减少13.89%；实施例3 d28时鱼尾纹体积减少3.52%、眉间纹体积减少3.12%、前额细纹体积减少12.15%；三个实施例效果随活性成分总含量的增加而依次提升，呈现明确的剂量-效应关系。c-cube鱼尾纹成像图像（以实施例3为例）直观呈现了鱼尾纹由使用前的深、密、粗糙逐步改善为使用28天后的浅、疏、平滑的渐进变化过程，与皱纹体积定量数据相互印证。

39、在皮肤弹性与紧致度改善方面，实施例1、2、3的d28皮肤弹性提升率分别为18.86%、19.75%、16.42%，紧致度改善率分别为12.38%、12.97%、10.85%，三者效果随活性成分含量的增加而依次提升，且各组d28效果均优于d7效果，呈现随使用时间延长持续累积改善的特性，印证了锚定纤维网络逐步重建、dej结构修复不断深化的过程。

40、综合以上体外实验与人体功效测试结果，本发明所述组合物通过"糖基化信号→双通路转录强化→双重代谢保护→dej结构重建"的四维协同机制，在多个层面实现了对皮肤基底膜的结构性修复，并带来了紧致度、弹性及皱纹等宏观抗衰指标的持续改善，具有机制明确、功效确凿、剂量-效应关系清晰、使用效果随时间持续累积等显著技术优势。