小分子化合物EPIC-0307与阿托伐他汀联合在协同治疗胶质瘤中的应用的制作方法

本发明属于生物医学，具体地，涉及小分子化合物epic-0307与阿托伐他汀联合在协同治疗胶质瘤中的应用。

背景技术：

1、胶质母细胞瘤（gbm）是中枢神经系统中侵袭性最强的原发性恶性肿瘤之一，具有极高的致死率和复发率，其治疗仍是神经外科及肿瘤学领域面临的严峻挑战。目前，gbm的标准治疗方案包括手术切除、放射治疗和化疗药物治疗等综合治疗，但患者经综合治疗后的中位生存期仍较短。肿瘤高度异质性、血脑屏障的阻隔作用以及对传统替莫唑胺化疗产生的多重耐药性，共同导致gbm临床治疗效果不佳。因此，探索新的抗肿瘤药物及联合用药靶向策略，以突破gbm治疗瓶颈，已成为提高胶质母细胞瘤患者生存时间和生活质量的迫切需求。

2、基于前期发明人课题组的研究成果，发明人合成了一种能够有效且选择性地抑制pradx-ezh2相互作用的小分子化合物，命名为epic-0307，epic-0307为发明人课题组自主产权的表观遗传小分子抑制剂。阿托伐他汀（ato, atorvastatin）为临床常用的降脂药，是一种安全性记录良好的降脂药，其主要作用为靶向甲羟戊酸途径后影响胆固醇与异戊二烯基供给，干扰多种小g蛋白膜定位与信号转导，改变细胞膜脂质组成、辅酶q生成与细胞抗氧化体系供给。

3、目前，尚未见小分子化合物epic-0307与阿托伐他汀两者联合用于治疗gbm的相关研究或公开报道。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明聚焦于epic-0307与阿托伐他汀的联合抗肿瘤作用在胶质母细胞瘤中的效果，从细胞实验和动物实验两个层面探究了epic-0307与阿托伐他汀的协同抗胶质母细胞瘤作用，为后续围绕epic-0307单药及联合用药抗胶质母细胞瘤的转化研究奠定了基础。

2、为了实现上述发明目的，本发明采用了如下技术方案：

3、本发明的第一方面提供了小分子化合物epic-0307或其可药用盐、与阿托伐他汀或其可药用盐联合在制备协同治疗胶质瘤的药物中的应用，所述小分子化合物epic-0307的结构式如式（i）所示：

4、

5、式（i）。

6、在本发明的具体实施方案中，本发明采用zip（zero interaction potency，零相互作用效力）模型对epic-0307与阿托伐他汀的联合用药效应进行了评价。具体地，在tbd0220和u87-mg胶质母细胞瘤细胞中，分别设置epic-0307单药组、阿托伐他汀单药组及不同浓度组合的联合处理组，处理48 h后采用cck-8法检测细胞活力，并将各浓度组合对应的抑制数据输入zip模型进行协同分析。结果显示，epic-0307与阿托伐他汀在tbd0220细胞中的总体zip协同评分为12.33，在u87-mg细胞中的总体zip协同评分为16.226，均大于10，表明二者在所检测的浓度矩阵内均具有协同抑制胶质母细胞瘤细胞生长的作用。

7、其中，所述zip模型以“零相互作用效力”为零假设，即假定两种药物彼此不改变对方的剂量-效应关系，并据此计算理论预期效应；将联合用药的实际效应与所述理论预期效应相比较，二者的差值即为协同评分。按照以下标准判断：

8、zip协同评分>10：两种药物联合具有协同作用；

9、zip协同评分为-10~10：两种药物联合主要表现为相加作用或无明显协同/拮抗作用；

10、zip协同评分<-10：两种药物联合具有拮抗作用。

11、在一些实施方案中，所述epic-0307（结构式如式（i）所示）可以为游离形式，也可以为其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、晶型、共晶、前药、立体异构体、互变异构体或其组合。

12、在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐是指在不明显影响epic-0307药理活性和安全性的前提下，由epic-0307与药学上可接受的酸或碱形成的盐。可选地，当epic-0307具有碱性基团时，所述可药用盐包括但不限于：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、乙酸盐或苯甲酸盐中的一种或多种；当epic-0307具有酸性基团时，所述可药用盐包括但不限于：钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐、三乙醇胺盐、精氨酸盐、赖氨酸盐或有机胺盐中的一种或多种。

13、在另一些实施方案中，所述epic-0307或其可药用盐可单独制备为药学制剂，也可与阿托伐他汀或其可药用盐共同制备为同一制剂，或者分别制备后以组合包装形式提供。

14、在一些实施方案中，所述阿托伐他汀（分子式为c33h35fn2o5，cas号为134523-00-5）可为游离酸形式，也可以为药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、晶型、共晶、前药、立体异构体或其组合。优选地，所述阿托伐他汀可药用盐包括但不限于：阿托伐他汀钙、阿托伐他汀钠、阿托伐他汀钾、阿托伐他汀镁、阿托伐他汀锌、阿托伐他汀铵盐、阿托伐他汀有机胺盐或其他药学上可接受的盐。

15、在另一些实施方案中，所述阿托伐他汀或其可药用盐可与epic-0307或其可药用盐同时给药、依次给药或分别给药；二者可以共同存在于同一药物制剂中，也可以分别制成独立制剂后按预定给药方案联合使用。优选地，所述阿托伐他汀可与epic-0307共同或分别施用，以协同抑制胶质瘤细胞生长、增殖、克隆形成和/或迁移，并改善胶质瘤治疗效果。

16、进一步，所述小分子化合物epic-0307或其可药用盐、与阿托伐他汀或其可药用盐的浓度比例为（1-30 μm）：（5-40 μm）。

17、进一步，所述小分子化合物epic-0307或其可药用盐、与阿托伐他汀或其可药用盐的浓度分别为（1、5、10、15、20、30 μm）、（5、10、15、20、40 μm）。

18、在本发的具体实施方案中，epic-0307与ato的浓度分别为（1、5、10、15、20、30 μm）、（5、10、15、20、40 μm）时，epic-0307和ato联合均表现出协同作用。

19、进一步，所述胶质瘤为胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤和/或室管膜瘤。

20、在一些实施方案中，所述胶质瘤为来源于中枢神经系统胶质细胞或胶质细胞前体细胞的原发性肿瘤，包括但不限于：胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、室管膜瘤或其组合。所述星形细胞瘤可以为弥漫性星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤或高级别星形细胞瘤；所述少突胶质细胞瘤可以为少突胶质细胞瘤或间变性少突胶质细胞瘤；所述室管膜瘤可以为幕上室管膜瘤、后颅窝室管膜瘤或脊髓室管膜瘤。优选地，所述胶质瘤为高级别胶质瘤；更优选地，所述胶质瘤为胶质母细胞瘤。

21、进一步，所述药物的剂型为口服固体制剂、口服液体制剂、注射制剂、纳米或靶向制剂、局部或缓释制剂或组合包装制剂。

22、在一些实施方案中，所述药物的剂型为口服固体制剂。所述口服固体制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、口崩片、咀嚼片、分散片、缓释片、控释片、肠溶片、缓释胶囊、控释胶囊或其组合。所述epic-0307或其可药用盐与阿托伐他汀或其可药用盐可以共同制备为同一口服固体制剂，也可以分别制备为独立的口服固体制剂后联合给药。所述口服固体制剂还可包括稀释剂、填充剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、包衣材料、增溶剂和/或稳定剂等药学上可接受的辅料。

23、在一些实施方案中，所述药物的剂型为口服液体制剂。所述口服液体制剂包括口服溶液剂、口服混悬剂、乳剂、糖浆剂、滴剂或其组合。对于水溶性较低的epic-0307或阿托伐他汀或其可药用盐，可采用增溶剂、助溶剂、表面活性剂、乳化剂、包合剂和/或黏度调节剂制备所述口服液体制剂。所述epic-0307或其可药用盐与阿托伐他汀或其可药用盐可以共同分散或溶解于同一液体制剂中，或者分别制备为独立液体制剂后联合施用。

24、在一些实施方案中，所述药物的剂型为注射制剂。所述注射制剂包括注射液、注射用无菌粉末、注射用冻干粉针、注射用浓溶液、注射用乳剂、注射用混悬剂或其组合。所述注射制剂可以采用静脉注射、肌内注射、皮下注射、瘤内注射、脑室内注射、鞘内注射或局部注射的给药方式。所述epic-0307或其可药用盐与阿托伐他汀或其可药用盐可以共同制备为同一注射制剂，也可以分别制备为独立注射制剂，并以同时给药、依次给药或分别给药的方式联合施用。

25、在一些实施方案中，所述药物的剂型为纳米或靶向制剂。所述纳米或靶向制剂包括脂质体、脂质纳米颗粒、聚合物纳米粒、聚合物胶束、纳米乳、固体脂质纳米粒、纳米晶、树枝状大分子载体、蛋白质载体、抗体偶联载体、配体修饰载体或其组合。所述纳米或靶向制剂可用于提高epic-0307和/或阿托伐他汀的溶解性、稳定性、生物利用度、血脑屏障通透性、肿瘤靶向性和/或在肿瘤部位的药物蓄积。所述配体可以为能够识别脑肿瘤细胞、肿瘤血管、血脑屏障转运体或肿瘤微环境相关靶点的配体。

26、在一些实施方案中，所述药物的剂型为局部或缓释制剂。所述局部或缓释制剂包括缓释微球、缓释植入剂、原位形成凝胶、可注射水凝胶、局部植入片、药物洗脱支架、贴敷制剂或其组合。所述局部或缓释制剂可在胶质瘤切除术后置于肿瘤切除腔、肿瘤周围组织和/或肿瘤局部，以使epic-0307或其可药用盐和阿托伐他汀或其可药用盐在局部持续释放。所述缓释制剂可以实现两种活性成分的同步释放、顺序释放或以不同释放速率释放。

27、在一些实施方案中，所述药物的剂型为组合包装制剂。所述组合包装制剂包括含有epic-0307或其可药用盐的第一制剂、含有阿托伐他汀或其可药用盐的第二制剂以及用于指导联合给药的说明材料；所述第一制剂与第二制剂可以采用相同或不同剂型。所述组合包装制剂中，epic-0307或其可药用盐与阿托伐他汀或其可药用盐可以按照预定剂量、给药频率和给药顺序同时、依次或分别施用，以协同治疗和/或预防胶质瘤。

28、本发明的第二方面提供了一种协同治疗胶质瘤的药物组合物，所述药物组合物包含小分子化合物epic-0307或其可药用盐、与阿托伐他汀或其可药用盐。

29、进一步，所述小分子化合物epic-0307或其可药用盐与阿托伐他汀或其可药用盐的浓度比例为（1-30 μm）：（5-40 μm）。

30、在一些实施方案中，所述小分子化合物epic-0307或其可药用盐与阿托伐他汀或其可药用盐可以共同存在于同一药物组合物中；或者，所述小分子化合物epic-0307或其可药用盐与阿托伐他汀或其可药用盐可以分别存在于独立制剂中，并以同时给药、依次给药或分别给药的方式联合施用。

31、在一些实施方案中，所述胶质瘤为胶质母细胞瘤。所述药物组合物能够抑制胶质瘤细胞的生长、增殖、克隆形成和/或迁移；和/或降低肿瘤负荷、延缓肿瘤进展、延长荷瘤受试者的生存时间和/或改善胶质瘤相关症状。

32、在一些实施方案中，所述药物组合物还可包含一种或多种其他能够用于治疗和/或预防胶质瘤的药物，所述其他药物包括但不限于：化疗药物、靶向治疗药物、免疫治疗药物、抗血管生成药物、放射增敏剂、糖皮质激素、抗癫痫药物和/或对症支持治疗药物中的至少一种。

33、在一些实施方案中，所述化疗药物包括但不限于：替莫唑胺、卡莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、丙卡巴肼、顺铂、卡铂、依托泊苷、伊立替康或其可药用盐中的至少一种。所述靶向治疗药物包括但不限于：针对egfr、pdgfr、vegfr、pi3k、akt、mtor、braf、mek、idh和/或parp的抑制剂中的至少一种；所述抗血管生成药物包括但不限于：贝伐珠单抗或其生物类似物中的至少一种。

34、在一些实施方案中，所述其他药物与epic-0307或其可药用盐、阿托伐他汀或其可药用盐可以共同存在于同一药物制剂中，也可以分别制备为独立制剂后以同时、依次或分别给药的方式施用。所述其他药物可用于进一步抑制胶质瘤细胞增殖、降低肿瘤负荷、延缓肿瘤进展、提高对放疗和/或化疗的敏感性、降低复发风险和/或改善受试者的临床症状。

35、本发明的第三方面提供了一种协同治疗胶质瘤的药物制剂，所述药物制剂包含本发明第二方面所述的药物组合物。

36、在一些实施方案中，所述药物制剂还包含药学上可接受的辅料，具体地，所述药学上可接受的辅料包括但不限于：药学上可接受的载体、稀释剂、填充剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂、缓释材料和/或靶向递送材料中的至少一种。

37、在一些实施方案中，所述药物制剂为单一复方制剂，所述单一复方制剂中同时包含小分子化合物epic-0307或其可药用盐以及阿托伐他汀或其可药用盐。所述单一复方制剂可以使两种活性成分同步释放，以共同作用于胶质瘤细胞。

38、在另一些实施方案中，所述药物制剂为组合制剂，包括含有小分子化合物epic-0307或其可药用盐的第一制剂，以及含有阿托伐他汀或其可药用盐的第二制剂。所述第一制剂和所述第二制剂可以采用相同或不同的剂型，并可以同时、依次或分别施用。

39、在一些实施方案中，所述药物制剂为口服固体制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、分散片、口崩片、缓释片、控释片、肠溶片、缓释胶囊、控释胶囊或其组合。

40、在一些实施方案中，所述药物制剂为口服液体制剂，包括口服溶液剂、口服混悬剂、乳剂、糖浆剂、滴剂或其组合。对于溶解性较低的epic-0307或阿托伐他汀，可采用助溶剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂、包合剂和/或黏度调节剂进行制备。

41、在一些实施方案中，所述药物制剂为注射制剂，包括注射液、注射用无菌粉末、注射用冻干粉针、注射用浓溶液、注射用乳剂、注射用混悬剂或其组合。所述注射制剂可经静脉、肌内、皮下、瘤内、脑室内、鞘内和/或局部途径施用。

42、在一些实施方案中，所述药物制剂为纳米制剂或靶向制剂，包括脂质体、脂质纳米颗粒、聚合物纳米粒、聚合物胶束、纳米乳、固体脂质纳米粒、纳米晶、树枝状大分子载体、蛋白质载体、抗体偶联载体、配体修饰载体或其组合。所述纳米制剂或靶向制剂用于提高epic-0307和/或阿托伐他汀的溶解性、稳定性、生物利用度、血脑屏障通透性、肿瘤靶向性和/或肿瘤部位药物蓄积。

43、本发明的第四方面提供了小分子化合物epic-0307或其可药用盐、与阿托伐他汀或其可药用盐联合在制备用于体外非治疗目的地抑制胶质瘤细胞增殖和/或迁移的药物中的应用。

44、在一些实施方案中，所述联合处理组相对于epic-0307或其可药用盐单独处理组以及阿托伐他汀或其可药用盐单独处理组，具有更强的细胞增殖抑制作用和/或细胞迁移抑制作用。

45、本发明的第五方面提供了一种体外非治疗目的地抑制胶质瘤细胞增殖和/或迁移的方法，其特征在于，所述方法包括：采用小分子化合物epic-0307或其可药用盐、与阿托伐他汀或其可药用盐联合处理胶质瘤细胞。

46、在一些实施方案中，所述胶质瘤细胞为胶质母细胞瘤细胞，优选为tbd0220细胞和/或u87-mg细胞。所述epic-0307或其可药用盐与阿托伐他汀或其可药用盐可以同时施加于所述胶质瘤细胞，也可以按照预定时间间隔依次施加于所述胶质瘤细胞。

47、本发明还提供了一种治疗和/或预防胶质瘤的方法，所述方法包括：给有需要的受试者施用治疗和/或预防有效量的小分子化合物epic-0307或其可药用盐、与阿托伐他汀或其可药用盐。

48、在一些实施方案中，所述受试者是指患有胶质瘤、具有发生胶质瘤风险或需要接受胶质瘤治疗和/或预防的哺乳动物。所述受试者优选为人；在其他实施方案中，所述受试者还可以为非人哺乳动物，包括非人灵长类动物、啮齿类动物、兔、犬、猫、马、牛、羊或猪等。所述胶质瘤优选为胶质母细胞瘤，所述受试者可为经影像学、组织病理学、分子病理学和/或临床检查确诊为胶质瘤的个体，或者为存在胶质瘤复发风险、进展风险或遗传易感风险的个体。

49、在另一些实施方案中，所述治疗和/或预防有效量是指能够在不给所述受试者造成不可接受毒性或不良反应的前提下，对胶质瘤产生治疗和/或预防作用的小分子化合物epic-0307或其可药用盐与阿托伐他汀或其可药用盐的给药量。

50、其中，所述治疗和/或预防作用包括但不限于：抑制或减缓胶质瘤细胞增殖、克隆形成或迁移，降低肿瘤负荷，延缓肿瘤生长或进展，延长受试者生存时间，降低肿瘤复发风险，和/或改善与胶质瘤相关的临床症状中的至少一种。所述有效量可根据受试者的物种、体重、年龄、性别、疾病类型、肿瘤分期、给药途径、给药频率、单药或联合给药方案及个体耐受性进行常规确定。

51、具体地，所述小分子化合物epic-0307或其可药用盐与阿托伐他汀或其可药用盐以同时、依次或分别给药的方式联合施用，能够产生协同治疗和/或预防胶质瘤的作用。与仅施用epic-0307或其可药用盐、或仅施用阿托伐他汀或其可药用盐相比，所述联合施用能够更有效地抑制胶质瘤细胞的生长、增殖、克隆形成和/或迁移，降低肿瘤负荷，延缓肿瘤生长或进展，延长受试者生存时间，和/或降低胶质瘤复发或进展风险。优选地，所述胶质瘤为胶质母细胞瘤。

52、相对于现有技术，本发明具有的优点和有益效果如下：

53、本发明首次发现小分子化合物epic-0307与阿托伐他汀两者联合对胶质瘤具有协同增效的治疗效果，与epic-0307或阿托伐他汀单独使用相比，二者联合能够更有效地协同抑制胶质瘤细胞的增殖、克隆形成及迁移，并能够降低肿瘤负荷、延缓肿瘤进展和延长荷瘤动物的生存时间。在体外实验中，epic-0307与阿托伐他汀联合处理tbd0220和u87-mg胶质母细胞瘤细胞后，表现出协同抑制细胞生长的作用；在体内实验中，联合用药组表现出更明显的肿瘤抑制效果，且未观察到明显的主要脏器组织损伤。本发明为后续的临床转化研究奠定了坚实基础，在开发新型胶质瘤联合疗法方面具有明确的开发潜力和广阔的应用前景。