一种含IL-2的免疫缀合物及其用途的制作方法

本发明属于生物医药，具体涉及一种含il-2的免疫缀合物及其用途。

背景技术：

1、肿瘤微环境（tumor microenvironment, tme）通常通过增加treg的产生和/或减少t细胞生长因子或其信号传导来限制免疫治疗的效果。一个主要挑战是提供足够的细胞因子来重新激活ctl或克服treg。

2、目前pd-1/pd-l1阻断抗体在多种肿瘤适应症已经跻身一线治疗，成为一线标准疗法。但是仅有~20%的患者对pd-1/pd-l1阻断治疗起效，绝大多数患者要么对免疫检查点治疗没有反应，要么会对这种治疗方式很快产生耐药性。

3、在肿瘤免疫治疗中，cd8+t细胞对于肿瘤的杀伤和控制至关重要，而白介素2（il-2）又是关键的t细胞生长因子，对treg细胞和t细胞都能起到促进细胞活化和增殖的作用。il-2通过与il-2受体结合来发挥作用，il-2受体主要分为三个亚单位：il-2受体α链（il-2rα，也称为cd25）、il-2受体β链（il-2rβ，也称为cd122）、以及共同的γ链（il-2rγ，也称为cd132）。il-2与il-2rα的结合主要是介导il-2与il-2受体的结合，而il-2与il-2rβγ的结合主要是传递下游生物活性信号。il-2受体在初始t细胞、活化t细胞、耗竭t细胞以及treg细胞上的表达都各不相同，因此il-2对于这些效应细胞的作用也各不相同。在tregs中，三种亚单位都是高表达，因此il-2比较容易通过高亲和力受体结合到treg细胞上，继而增强tregs的生存和增殖，从而促进tregs的免疫抑制活性。

4、与treg相比较，肿瘤外周初始t细胞和nk细胞缺乏il-2rα的表达，只表达il-2rβγ受体，而肿瘤内激活或耗竭的t细胞上，il-2r的表达又有所增高。对于目前的肿瘤免疫治疗中，临床上使用的大剂量il-2，除了优先扩增tregs细胞，抑制肿瘤免疫治疗以外，高剂量的il-2还会通过结合初始t细胞表面的il-2rβγ而激活这些外周的t细胞。

5、本领域仍有进一步改进il-2疗法的需求。

技术实现思路

1、本公开提供了一种工程化的低亲和力il-2（low affinity il-2，lail-2），以大大降低il-2与il-2rα和il-2rβγ的亲和力，以降低其对treg的效应并进一步降低il-2的潜在毒性。同时，还提供了一种免疫缀合物，将lail-2与抗pd-1抗体融合表达形成免疫缀合物（anti-pd-1-lail-2），以增加il-2半衰期的同时，将lail-2靶向肿瘤微环境的t细胞，特别是cd8+t细胞，使抗pd-1抗体与il-2通过cis 的作用协同促进肿瘤微环境杀伤性t细胞的活化，逆转肿瘤微环境耗竭的t细胞，起到显著的肿瘤杀伤作用，有突破pd-1耐受的潜力。

2、为了实现上述目的，本公开采用如下技术方案：

3、第一方面，本公开提供一种免疫缀合物，其中，所述免疫缀合物包含lail-2，所述lail-2与野生型il-2相比包含至少一个选自氨基酸序列位置38、42和88上的突变，所述野生型il-2的氨基酸序列为如seq id no: 1所示的氨基酸序列。

4、第二方面，本公开还提供一种编码前述免疫缀合物的核酸。

5、第三方面，本公开还提供一种包含前述核酸的载体。

6、第四方面，本公开还提供一种包含前述核酸或前述载体的细胞。

7、第五方面，本公开还提供一种药物组合物，包含前述免疫缀合物、前述核酸、前述载体和/或前述细胞。

8、第六方面，本公开提供前述免疫缀合物、前述核酸、前述载体、前述细胞或前述药物组合物在制备用于预防和/或治疗癌症的药物中的用途。

9、本公开实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：

10、lail-2与抗pd-1抗体融合形成的免疫缀合物（anti-pd-1-lail-2）能靶向肿瘤微环境中的t细胞，在阻断pd-1-pd-l1结合的同时，可以协同促进杀伤性t细胞活化，逆转t细胞耗竭，显著杀伤肿瘤，在mc38细胞肿瘤模型小鼠中可实现100%肿瘤消退，且未观察到显著体重降低，安全性具有显著优势。同时，lail-2降低了与il-2rα、il-2rβγ受体的结合，减少了对非靶细胞的结合和激活，降低了外周的毒性。此外，该免疫缀合物延长了il-2的半衰期，简化治疗程序，具有突破pd-1耐受的潜力，为肿瘤免疫治疗提供新方案，成药性优势明显。

1. 一种免疫缀合物，其中，所述免疫缀合物包含：特异性结合程序性死亡受体1的抗体（抗pd-1抗体）或其抗原结合片段、连接子及lail-2，所述lail-2与野生型il-2相比包含氨基酸突变r38l、f42a和n88d，所述野生型il-2的氨基酸序列为如seq id no: 1所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的免疫缀合物，所述lail-2与野生型il-2相比还包含位置3和/或位置125的突变，所述位置3的突变为t3a，所述位置125的突变为c125a或c125s。

3. 根据权利要求1或2所述的免疫缀合物，其中，所述lail-2包含seq id no: 3或5所示的氨基酸序列，或与其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3任一项所述的免疫缀合物，所述抗体或其抗原结合片段选自单链fv（scfv）片段、fab片段、fab’片段、f(ab’)2、fv片段、二硫键稳定性fv片段（dsfv）、二硫键稳定性scfv（dsscfv)、(dsfv)2、vhh；

5.根据权利要求1-4任一项所述的免疫缀合物，其中，所述抗pd-1抗体包含：

6.根据权利要求1-5任一项所述的免疫缀合物，其中，所述抗pd-1抗体包含：

7.根据权利要求4-6任一项所述的免疫缀合物，其中，所述fc来源于igg1、igg2、igg3或igg4，优选地，所述fc来源于igg1。

8. 根据权利要求1-7任一项所述的免疫缀合物，其包含：

9.根据权利要求4-8任一项所述的免疫缀合物，所述fc的一条多肽链包含t366w及s354c突变，另一条多肽链包含t366s、l368a、y407v及y349c突变；

10.根据权利要求1-9任一项所述的免疫缀合物，其中，所述连接子为1g4s、2g4s或3g4s，优选为1g4s。

11. 根据权利要求4-10任一项所述的免疫缀合物，其中，所述fc包含选自seq id no:9-12所示的氨基酸序列。

12. 根据权利要求1-11任一项所述的免疫缀合物，其中，所述抗pd-1抗体的重链fd段包含如seq id no: 14所示的氨基酸序列。

13. 根据权利要求1-12任一项所述的免疫缀合物，其中，所述抗pd-1抗体的轻链包含如seq id no: 13所示的氨基酸序列。

14. 根据权利要求1-13任一项所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物包含：

15. 根据权利要求1-14任一项所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物包含：

16.编码权利要求1-15任一项所述免疫缀合物的核酸。

17.包含权利要求16所述的核酸的载体。

18.包含权利要求16所述的核酸或权利要求17所述的载体的细胞。

19.一种药物组合物，包含权利要求1-15任一项所述的免疫缀合物、权利要求16所述的核酸、权利要求17所述的载体和/或权利要求18所述的细胞；

20.一种在有需要的受试者中预防和/或治疗癌症的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1-15任一项所述的免疫缀合物、权利要求16所述的核酸、权利要求17所述的载体、权利要求18所述的细胞或权利要求19所述的药物组合物；