包含表皮调节素抑制剂的癌症免疫治疗用抗癌辅助剂及癌症转移抑制用组合物的制作方法

本专利申请要求于2024年3月22日提交韩国特许厅的专利申请第10-2024-0039969号及于2024年6月24日提交韩国特许厅的专利申请第10-2024-0081965号的优先权，所述专利申请的公开内容以引用的方式并入本说明书中。本发明是在韩国保健福祉部的支持下，由课题固有编号1465036429、子课题编号hr20c0025020022组成，所述课题的研究管理专业机构为韩国保健产业振兴院，研究项目名称为“培育研究型医院r＆d”。课题执行机构为三星首尔医院，以“基于超精密多重组学分析系统的免疫细胞治疗生物标志物及新型靶标开发”的研究课题，于2022年1月1日～2022年12月31日进行的研究。本发明是在韩国科学技术信息通信部的支持下，由课题固有编号1711188753、子课题编号2020r1a2c2006408组成，所述课题的研究管理专业机构是韩国研究财团，研究项目名称为“个人基础研究”。课题执行机构为三星首尔医院，以“通过大肠癌患者的巨噬细胞介导的免疫分析（immune profiling）的免疫微环境调控技术开发”的研究课题，于2023年3月1日～2024年2月29日进行的研究。本发明涉及一种包含表皮调节素（epiregulin；ereg）抑制剂的癌症免疫治疗用抗癌辅助剂，具体地，涉及一种通过调控肿瘤相关巨噬细胞（tam）极化来诱导肿瘤微环境变化的癌症免疫治疗用抗癌辅助剂及癌症转移抑制用组合物。

背景技术：

1、大肠癌（colorectal cancer；crc）是一种在大肠黏膜发生的恶性肿瘤，是5年生存率较低的高致命性疾病。尽管存在多种通过直接抗癌剂攻击癌细胞的治疗方案，但实际上在抑制癌症患者的癌细胞增殖、转移方面存在困难。与化学疗法相比，免疫疗法具有能够延长总生存期（overall survival）的优点，但存在因患者不同而效果不同以及可能因免疫系统过度激活而引起副作用的问题。尤其，正在开发多种免疫治疗法，以诱导向抗肿瘤（anti-tumor）细胞占据优势状态转变，为此，不仅需要了解肿瘤细胞本身，还需要了解构成肿瘤微环境的细胞的功能。

2、大肠癌（crc）具有肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophage；tam）、单核细胞、自然杀伤细胞、cd4+t细胞及cd8+t细胞等多种免疫细胞浸润的微环境。其中，肿瘤相关巨噬细胞（tam）极化为m1巨噬细胞或m2巨噬细胞以适应环境。已知m1巨噬细胞通过细胞凋亡来降低大肠癌细胞的生存力，而m2巨噬细胞与m0巨噬细胞相比，显著增加大肠癌细胞的生存力。

3、表皮调节素（epiregulin；ereg）已知为表皮生长因子受体（epidermal growthfactor receptor；egfr）和erb-b2-酪氨酸-激酶受体4（erbb4）的配体。erbb4存在于细胞膜上，除了激活各种下游信号传导体系之外，还具有一种重要机制，即通过如mmp1等蛋白酶（protease）切割（cleavage）后转移至细胞核以调节基因表达，但目前尚未阐明erbb4在大肠癌中发挥作用的明确机制。因此，当前亟需一种以肿瘤相关巨噬细胞的ereg为靶标、诱导肿瘤微环境变化的治疗剂。

4、关于本发明的现有技术文献，有非专利文献lee等人（et al.）《fbw7-mcl-1信号轴是调控m1、m2巨噬细胞相关结直肠癌细胞进展的关键：验证靶向pi3kγ的免疫治疗价值》（“the fbw7-mcl-1 axis is key in m1 and m2 macrophage-related colon cancercell progression: validating the immunotherapeutic value of targeting pi3kγ”

experimental ＆ molecular medicine volume 52(2020): 815-831）。

技术实现思路

1、【发明要解决的问题】

2、本发明旨在提供一种以肿瘤相关巨噬细胞（tam）的表皮调节素（ereg）为靶标诱导巨噬细胞极化变化的组合物、以及具有抑制癌细胞增殖等效果的抗癌辅助剂及转移抑制用组合物。

3、【用于解决问题的手段】

4、本发明通过阐述ereg参与调控作为构成肿瘤微环境的重要细胞之一的肿瘤相关巨噬细胞的极化，从而证实了在治疗大肠癌的联合疗法开发过程中，以巨噬细胞的ereg为靶标可具有前景。

5、以下，对本发明进行更详细的说明。

6、本发明的一实施方式涉及一种包含表皮调节素（ereg）抑制剂的癌症免疫治疗用抗癌辅助剂。

7、在本发明中，表皮调节素（ereg）抑制剂可诱导肿瘤微环境变化，但不限于此。

8、在本发明中，表皮调节素（ereg）抑制剂可包含seq id no：4的序列的小干扰rna（small interfering rna，sirna），但不限于此。

9、在本发明中，表皮调节素（ereg）抑制剂可诱导肿瘤相关巨噬细胞（tam）极化为m1巨噬细胞，但不限于此。

10、在本发明中，表皮调节素（ereg）抑制剂可抑制肿瘤相关巨噬细胞（tam）极化为m2巨噬细胞，但不限于此。

11、在本发明中，表皮调节素（ereg）抑制剂可诱导m2巨噬细胞极化为m1巨噬细胞，但不限于此。

12、在本发明中，癌症免疫治疗用抗癌辅助剂还可含选自由常用于制备药物组合物的适当的载体、崩解剂、甜味剂、包衣剂、膨胀剂、润滑剂、滑泽剂、香味剂、抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂、稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂及润滑剂组成的组中的一种以上的添加剂。

13、在本发明中，免疫治疗用抗癌辅助剂可通过静脉内、动脉内、腹腔内、肌内、胸骨内、经皮、鼻内、吸入、局部、直肠、口服、眼内或皮内途径，以常规方式向对象进行施用。

14、在本发明中，免疫治疗用抗癌辅助剂的给药剂量可根据对象的状况及体重、疾病的种类及程度、药物形态及对象的肿瘤进展情况而有所不同，可由本领域技术人员适当选择。

15、在本发明中，对象可以为哺乳动物，例如可以为人或小鼠，但不限于此。

16、在本发明中，癌症可以为ereg表达高的癌，所述癌选自由大肠癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胃癌及鳞状细胞癌组成的组中的一种以上，但不限于此。

17、本发明的一实施方式涉及一种包含表皮调节素（ereg）抑制剂的癌症转移抑制用组合物。

18、本发明的一实施方式涉及一种抑制肿瘤相关巨噬细胞（tam）的表皮调节素（ereg）表达的方法。

19、本发明的一实施方式涉及一种通过抑制表皮调节素（ereg）的表达来诱导肿瘤相关巨噬细胞（tam）极化为m1巨噬细胞的方法。

20、本发明的一实施方式涉及一种通过抑制表皮调节素（ereg）的表达来抑制肿瘤相关巨噬细胞（tam）极化为m2巨噬细胞的方法。

21、本发明的一实施方式涉及一种通过抑制表皮调节素（ereg）的表达来诱导m2巨噬细胞极化为m1巨噬细胞的方法。

22、本说明书中的术语“表皮调节素（epiregulin；ereg）”是指根据美国国立卫生研究院（nih）的定义，编码表皮生长因子（egf）蛋白家族（family）成员（member）的基因及由该基因编码的蛋白，并且均包含由该基因编码的表皮生长因子受体（egfr）和erb-b2-酪氨酸-激酶受体4（erbb4）的配体、参与炎症等广泛生物学过程的蛋白以及在人体细胞组织中可促进癌症进展的蛋白。

23、本说明书中的术语“肿瘤微环境”是指不仅包含肿瘤内的免疫细胞、基质细胞等细胞，还包括穿过它们的血管、细胞外基质以及低氧、酸性环境的概念。

24、本说明书中的术语“肿瘤微环境变化”是指通过施用组合物来抑制肿瘤进展或使症状好转、发生有利改变的所有行为。例如，可指在肿瘤相关巨噬细胞中m2/m1比率调节为小于3的情况，但不限于此。

25、本说明书中的术语“sirna”是指引起rna干扰（rnai）现象的双链rna分子。sirna通过与具有互补核苷酸序列的特定mrna结合，以阻碍翻译的方式进行基因敲减、抑制基因表达。

26、本说明书中的术语“抑制”是指减缓或阻碍基因的表达或化学反应等，例如，可指减少、阻断或下调表皮调节素（ereg）的表达，但不限于此。

27、本说明书中的术语“肿瘤相关巨噬细胞（tam）”是指在肿瘤微环境中大量存在的免疫细胞，均包含单核细胞来源的巨噬细胞及组织常驻巨噬细胞。

28、本说明书中的术语“巨噬细胞极化（macrophage polarization）”是指在特定时间、空间中巨噬细胞的激活模式。巨噬细胞具有多种可能性且能够以多种方式激活，巨噬细胞的极化因整合多种因素而具有可塑性，因此并非固定不变。所述巨噬细胞极化诱导及抑制通过生物体的组织微环境、细胞存活途径及细胞因子等进行调控。

29、本说明书中的术语“m1巨噬细胞”通常是指被ifn-γ或脂多糖（lipopolysaccharide，lps）激活并生成促炎性（pro-inflammatory）细胞因子的分类为炎性巨噬细胞的群体。所述m1巨噬细胞包括以经典（classically）方式激活并生成一氧化氮及活性氧的免疫细胞的概念。

30、本说明书中的术语“m2巨噬细胞”是指生成诱导细胞增殖的多胺（polyamines）或脯氨酸（proline），并分类为抗炎性（anti-inflammatory）巨噬细胞的群体。所述m2巨噬细胞包括替代性（alternative）激活并具有促进再生（pro-regenerative）性质的免疫细胞概念。

31、本说明书中的术语“癌症免疫治疗”是指利用人体免疫功能的癌症治疗，更具体地，是指以癌细胞及肿瘤微环境的抗原为对象，通过免疫反应进行的治疗。可包括抗体治疗、免疫细胞治疗、免疫检查点抑制剂治疗、双特异性t细胞结合抗体（bite）及嵌合抗原受体t细胞（car-t）治疗。

32、本说明书中的术语“抗癌辅助剂”是指可改善或补充抗癌剂的抗癌效果的制剂。可用于在初次治疗后为降低癌症复发风险而额外进行的癌症治疗，所述癌症治疗可包括化学疗法、激素疗法、靶向疗法及免疫疗法。本发明的抗癌辅助剂可与抗癌剂联合施用。联合施用可包括与抗癌剂同时、分别或依次施用。

33、本说明书中的术语“转移”是指癌细胞从原发肿瘤分离，侵入循环系统及淋巴系统等，逃避免疫反应而增殖。

34、【发明效果】

35、本发明涉及一种包含表皮调节素（ereg）抑制剂的癌症免疫治疗用抗癌辅助剂，通过靶向肿瘤相关巨噬细胞（tam）的表皮调节素（ereg），诱导肿瘤微环境的变化。抑制表皮调节素的表达可通过调节肿瘤相关巨噬细胞的极化，引出降低癌细胞增殖（proliferation）和转移（metastasis）的效果。