一种JAK抑制剂中间体的检测方法与流程

本发明涉及药物分析检测，更具体的说是涉及一种jak抑制剂（ilunocitinib）中间体的检测方法。

背景技术：

1、ilunocitinib片剂（zenrelia™）是礼蓝动保开发的一种新型janus激酶(jak)抑制剂，于2024年9月被美国食品和药物管理局（fda）批准。ilunocitinib对jak1、jak2和酪氨酸激酶2(tyk2)具有很强的抑制作用，用于控制犬与过敏性皮炎相关的瘙痒以及控制特应性皮炎。目前还未查询到关于ilunocitinib的确切中文名称。

2、ilunocitinib，cas号为1187594-14-4，分子式为c17h17n7o2s，分子量为383.43，结构式如下图所示，其化学名称为2-[1-环丙基磺酰基-3-[4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基]乙腈。

3、

4、ilunocitinib的定向合成涉及多步反应，相应生成多个中间体，而前一步的中间体又是下一步反应的原料，对于前一个中间体反应剩余量及下一步反应产物的生成量的监控，将直接影响最终成品的质量和收率，因此建立一种简便、高效的检测方法对ilunocitinib合成过程的全部中间体进行分析检测是非常有必要的。目前尚未有ilunocitinib中间体的检测方法的相关专利或者文献报道，其它替尼类产品检测方法仅涉及相对应产品单个中间体及该中间体的相关杂质分析，而本发明提供了合成ilunocitinib全部中间体的检测方法。已有专利中述及的结构差别较大，个别方法检测时间较长，利用缓冲盐影响色谱柱寿命且不利于液质的定性研究，一种方法不能完成全部中间体的检测。因此开发一种高效、灵敏、耐用、分离度好，适用于检测ilunocitinib合成过程中全部中间体的方法对于实现ilunocitinib最终产品的质量控制具有重要意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种jak抑制剂中间体的检测方法，该方法建立一种同时测定jak抑制剂中间体的检测方法，使得相关中间体之间实现有效分离，准确测定jak抑制剂中间体含量，且该方法专属性好，操作简便，快速、重复性、准确性及稳定性高，可用来控制jak抑制剂合成过程中间体的质量及反应进程，实现jak抑制剂制备过程控制。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种jak抑制剂中间体的检测方法，采用高效液相色谱法对jak抑制剂中间体进行检测，所述方法包括以下步骤：

4、配制含jak抑制剂中间体的对照品溶液和供试品溶液；

5、将所述对照品溶液和供试品溶液分别注入高效液相色谱仪进行检测；

6、采用外标法以峰面积计算各中间体的含量。

7、其中，所述高效液相色谱法的色谱条件为：

8、色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；

9、流动相：甲醇和含体积分数0.05%-0.15%三氟乙酸的水溶液；

10、洗脱方式：梯度洗脱；

11、检测波长：200nm-260nm；

12、流速：0.8ml/min-1.2ml/min；

13、柱温：25℃-35℃；

14、进样浓度：0.2mg/ml-0.5mg/ml

15、进样量：10μl-25μl；

16、稀释液：0.05%三氟乙酸水(a)：甲醇(b)=30：70或者0.05%三氟乙酸水(a)：甲醇(b)=50：50。

17、进一步地，所述jak抑制剂中间体包括中间体a、中间体b、中间体c和中间体d中的任意一种或多种；

18、所述中间体a为2,2-二甲基丙酸-(4-{1-[3-(氰甲基)-1-(环丙基磺酰基)氮杂环丁-3-基]吡唑-4-基}吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基酯；

19、中间体a

20、所述中间体b为2,2-二甲基丙酸-(4-{1-[3-(氰甲基)氮杂环丁-3-基]吡唑-4-基}吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基酯盐酸盐；

21、

22、中间体b

23、所述中间体c为2,2-二甲基丙酸-(4-{1-[3-(氰甲基)-1-{[(2-甲基丙-2-基)氧基]羰基}氮杂环丁-3-基]吡唑-4-基}吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基酯；

24、

25、中间体c

26、所述中间体d为3-(3-氰基丙-2-烯亚基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯；

27、

28、中间体d

29、进一步地，所述梯度洗脱程序为：以含体积分数0.05%三氟乙酸的水溶液为流动相a，以甲醇为流动相b，按如下程序进行梯度洗脱：0min时，流动相a为70%，流动相b为30%；7min时，流动相a为55%，流动相b为45%；9min时，流动相a为30%，流动相b为70%；25min时，流动相a为30%，流动相b为70%；30min时，流动相a为70%，流动相b为30%。

30、进一步地，所述色谱柱为agilentextendc18色谱柱，规格为4.6mm×250mm，填料粒径为5μm。

31、进一步地，所述对照品溶液的配制方法为：精密称取jak抑制剂各中间体对照品适量，分别加入稀释液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，摇匀后用0.45μm滤膜过滤，即得。

32、进一步地，所述供试品溶液的配制方法为：精密称取jak抑制剂各中间体适量，分别加入稀释液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，摇匀后用0.45μm滤膜过滤，即得。

33、进一步地，所述含量的计算公式为：jak抑制剂中间体含量（%）=（供试品峰面积/对照品峰面积）×（对照品浓度/供试品浓度）×100%。

34、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明具有如下技术效果：

35、本发明提供了一种高效液相色谱法同时测定jak抑制剂中4种中间体的方法，可以将合成过程中产生的所有中间体有效分开，该方法采用常规十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相不含缓冲盐，对色谱柱及仪器系统伤害较小，同时可以为某些副产物的定性研究提供液质检测的条件。经过验证，该方法具有分析速度快、专属性好、准确度高、回收率好、线性关系优异及耐用性好等优点。

36、4种中间体通过工艺带入残留到成品中的可能性极大，若不对其进行严格控制，将影响最终产品质量。在合成过程中对每一步中间体进行严格控制，有利于提升产品收率、降低生产成本。且同一个方法贯穿所有中间体的检测，有利于表观分析相关杂质/中间体的生成和去除情况，且方便用相对保留时间对其未知杂质进行定位和统计。因此，本发明的方法对于jak抑制剂中间体的控制及质量的提高非常关键，将直接影响最终产品的质量和成本，对企业来说就是产品核心竞争力的体现。

1.一种jak抑制剂中间体的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法对jak抑制剂中间体进行检测，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述jak抑制剂中间体包括中间体a、中间体b、中间体c和中间体d中的任意一种或多种；

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：以含体积分数0.05%三氟乙酸的水溶液为流动相a，以甲醇为流动相b，按如下程序进行梯度洗脱：0min时，流动相a为70%，流动相b为30%；7min时，流动相a为55%，流动相b为45%；9min时，流动相a为30%，流动相b为70%；25min时，流动相a为30%，流动相b为70%；30min时，流动相a为70%，流动相b为30%。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为agilent extend c18色谱柱，规格为4.6mm×250mm，填料粒径为5μm。

5.根据权利要求1所述的jak抑制剂中间体的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液的配制方法为：精密称取jak抑制剂各中间体对照品适量，分别加入稀释液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，摇匀后用0.45μm滤膜过滤，即得。