QPRT在制备免疫检查点单抗黑色素瘤免疫治疗药物中的应用

本发明涉及生物，具体涉及pd-1/pd-l1免疫检查点单抗黑色素瘤免疫治疗领域。

背景技术：

1、肿瘤免疫检查点（immune checkpoint）是免疫系统中的负向调节机制，用于维持免疫平衡和防止自身免疫反应。程序性死亡受体-1（programmed cell death receptor 1,pd-1）及其配体（pd-l1/pd-l2）构成的pd-1/pd-l1轴是最重要的免疫检查点之一。在正常生理条件下，pd-l1通过与效应t细胞表面的pd-1结合，可以抑制t细胞的活化、增殖和效应功能，从而维持免疫稳定。然而，恶性肿瘤可通过高表达pd-l1来逃逸免疫监视，形成“冷肿瘤”微环境，导致肿瘤细胞不被免疫系统识别和清除。pd-1单克隆抗体（包括nivolumab、pembrolizumab等）通过阻断pd-1与pd-l1的相互作用，解除对t细胞的抑制，恢复效应t细胞的活性，对多种恶性肿瘤（包括黑色素瘤、肺癌、肾癌等）显示显著的临床疗效。然而，大量临床数据表明，单独使用pd-1免疫检查点抑制剂的客观缓解率（orr）仅为15%—40%，存在严重的原发性耐药问题

2、qprt是磷酸核糖转移酶家族成员，通过催化喹啉酸（quinolinic acid，qa）的分解，参与色氨酸代谢犬尿氨酸途径，即nad+的从头合成途径。该途径产生犬尿氨酸（kyn）、3-羟基犬尿氨酸（3-hk）和喹啉酸等代谢物，可调节免疫功能和神经功能。在肿瘤微环境中，此途径常被激活，导致色氨酸消耗和nad+积累，抑制t细胞增殖，促进免疫逃逸。nad+作为重要的辅酶，参与糖酵解、三羧酸循环等代谢途径，为肿瘤细胞的增殖和生存提供能量和物质基础。qprt是在犬尿氨酸-喹啉酸-nad+通路中将喹啉酸转化为nad+的唯一关键酶，通过qprt调控nad+的生成，肿瘤细胞能够适应微环境中的代谢压力。研究报道，qprt在黑色素瘤中高表达，并与不良预后相关。qprt的高表达可能帮助肿瘤细胞维持足够的nad+水平，以支持其代谢活动。抑制qprt可以通过阻断喹啉酸向nad+的转化，直接减少nad+的水平，从而限制肿瘤细胞的能量供应。

3、艾曲波帕（eltrombopag），别名瑞弗兰，是一种口服生物利用的促血小板生成素受体激动剂，临床上主要用于对皮质类固醇、免疫球蛋白或脾切除术反应不足的1岁及以上持续性或慢性原发免疫性血小板减少症（itp）成人和儿童患者。研究显示，艾曲波帕能够与血小板生成素受体（c-mpl）结合，激活下游信号通路，如jak2/stat、mapk和pi3k/akt，这些通路在促进巨核细胞的存活和分化中发挥着关键作用，通过促进巨核细胞的分化和增殖，显著提高血小板生成，成为治疗血小板减少症的重要药物之一。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的是提供pd-l1/pd-1免疫检查点单抗黑色素瘤免疫检测或者免疫治疗辅助药物的新研发方向，开发新的联合用药的模式。

2、本发明的技术方案是：

3、本发明的实验结果发现qprt在多种实体瘤组织中高表达，皮肤黑色素瘤中表达差异最明显，且与免疫治疗响应呈负相关。在黑色素瘤细胞中敲降qprt，可通过上调ccl5，激活cd8+t细胞，增强其抗肿瘤效应，从而有效抑制黑色素瘤的进展。针对qprt这一新靶点，本发明为pd-1免疫检查点单抗肿瘤免疫治疗提供新的免疫检测靶点，便于开发检测试剂或者提供免疫治疗辅助药物或者联合用药。

4、具体的，本发明公开了检测qprt表达量的试剂在制备黑色素瘤免疫治疗预后检测试剂或者检测试剂盒中的应用，所述免疫治疗为pd-1/pd-l1等免疫检查点抑制剂治疗。

5、本发明还公开了qprt的抑制剂在制备黑色素瘤免疫治疗药物中的应用，所述免疫治疗为pd-1/pd-l1等免疫检查点抑制剂治疗。

6、进一步的，qprt通过上调ccl5，激活cd8+t细胞，增强其抗肿瘤效应。

7、进一步本发明公开了qprt的抑制剂与pd-1/pd-l1免疫检查点单抗药物联用在制备黑色素瘤免疫辅助治疗药物中的应用。

8、进一步优选的，所述qprt的抑制剂为qprt的shrna或艾曲波帕。

9、进一步优选的，shrna如seq id no.1-seq id no.4所示。

10、本发明还首次发现艾曲波帕的新用途，具体是，艾曲波帕可以作为qprt抑制剂应用。

11、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

12、1、本发明的实验结果发现：观察临床上已接受icb治疗的黑色素瘤患者的组织病理染色结果以及临床预后，通过比较qprt与pd-l1在肿瘤中的表达，并关联患者的无进展生存时间及总生存时间，我们发现qprt表达较低且pd-l1表达较高的患者在接受icb治疗之后的免疫应答效果更好，患者无进展生存时间及总生存时间更长，且均有显著统计学差异。从以上结果均可提示我们针对qprt这一新的靶点，可为pd-l1/pd-1免疫检查点单抗肿瘤免疫治疗提供新的免疫检测靶点，开发检测试剂或者提供免疫治疗辅助药物的新研发方向，开发新的联合用药的模式。

13、2、本发明发现艾曲波帕（eltrombopag）与qprt酶活中心有较好的结合，可在一定程度上阻断qprt催化位点，从而发挥对qprt酶活性的抑制作用。其有望作为qprt靶向抑制剂用于黑色素瘤免疫辅助治疗。

14、3、本发明发现艾曲波帕（eltrombopag）剂量依赖性促进cd8+t细胞活化并显著增加前体耗竭t细胞浸润，并且联合pd-1单抗具有协同抑制小鼠肿瘤增殖，进一步增强cd8+t细胞杀伤能力，且无显著毒副表现。

15、本研究结果提示qprt是调控黑色素瘤免疫的潜在重要治疗靶点，开发调控qprt表达水平的药物或试剂有望为黑色素瘤的治疗药物提供新的思路和策略。

16、以下结合附图和具体实施方式对本发明的详细结构作进一步描述。

1.检测qprt表达量的试剂在制备黑色素瘤免疫治疗预后检测试剂或者检测试剂盒中的应用，所述免疫治疗为pd-1/pd-l1免疫检查点抑制剂治疗。

2.qprt的抑制剂在制备黑色素瘤免疫治疗药物中的应用，所述免疫治疗为pd-1/pd-l1免疫检查点抑制剂治疗。

3.根据权利要求2的应用，其特征是，qprt通过上调ccl5，激活cd8+t细胞，增强其抗肿瘤效应。

4.qprt的抑制剂与pd-1/pd-l1免疫检查点单抗药物联用在制备黑色素瘤免疫辅助治疗药物中的应用。

5.根据权利要求2-4中任意一项所述应用，其特征是，所述qprt的抑制剂为shrna或艾曲波帕。

6.根据权利要求2-4中任意一项所述应用，其特征是，所述shrna如seq id no.1-seqid no.4所示。