一种用于化学发光免疫检测的样本稀释液和化学发光免疫检测方法与流程

本发明涉及体外诊断化学发光免疫分析试剂，特别是涉及一种用于化学发光免疫检测的样本稀释液和化学发光免疫检测方法。

背景技术：

1、血清/血浆是临床检验中最复杂的生物样本基质之一，其含有高丰度蛋白质、脂质、胆红素、血红蛋白及多种内源性代谢物。这些非目标物质可通过非特异性结合、空间位阻或物理性遮蔽等方式干扰抗原-抗体免疫反应，导致检测信号偏离真实值，即基质效应。研究表明，基质效应可致目标物回收率偏离率达20%以上，且该偏差在抗原抗体中尤为显著。

2、当前商业化稀释液的设计遵循“基础缓冲体系+非特异性封闭+表面活性优化”的通用框架，通过蛋白类封闭剂（如bsa、酪蛋白）、非离子型表面活性剂（如tween-20）、高分子聚合物（如peg、聚乙烯醇、聚氧化乙烯）及糖类稳定剂（如海藻糖、甘露醇）等组分，实现调节样本浓度、维持ph/离子强度稳定、降低基质干扰、减少非特异性吸附等功能。在化学发光免疫分析中，样本稀释液作为前处理核心试剂，用于稀释高浓度样本、消除基质干扰、维持反应环境稳定，已成为不可或缺的配套耗材。

3、然而，面对日益复杂的临床实际情况，现有商业化稀释液的局限性日益突出：

4、其一，抗基质干扰能力不足。临床送检样本中溶血、脂血等异常基质发生率居高不下。血红蛋白可通过过氧化物酶样活性干扰标记酶催化效率，脂质微粒可遮蔽抗原表位或改变抗体结合动力学。多重干扰叠加下，常规稀释液缺乏的螯合/吸附/屏蔽设计，无法有效中和这些干扰物，检测结果易出现方向性偏差，甚至产生假阳性或假阴性。

5、其二，稀释后待测组分稳定性不足。人血清/血浆本身富含天然蛋白（如白蛋白、球蛋白）和多种内源性抗氧化物质（如尿酸、维生素c等），这些保护成分在未稀释的血清/血浆中共同构成一个天然保护网络，通过非特异性结合、自由基清除、金属离子螯合等多重机制，延缓待测标志物的降解。然而，当临床样本按常规比例（如1:10、1:100）进行稀释后，上述保护成分浓度呈数量级下降，天然保护网络迅速瓦解。此时，被稀释的待测物（尤其是结构柔性的多肽激素、氧化敏感型酶类及不稳定肿瘤相关抗原）在失去天然庇护后，其降解速率急剧上升：一方面，稀释液自身缺乏外源性的保护剂或蛋白酶抑制剂，无法补偿被稀释掉的天然保护力；另一方面，游离态待测物在低蛋白浓度环境中更易发生去折叠、聚集或表面吸附，进一步缩短其有效检出窗口。此类因样本降解引起的误差表现为单向性漂移（信号随时间递减），成为检验质量体系中隐蔽性极强的系统性漏洞。

6、因此，亟需研发一种新型血清/血浆样本稀释液，使其能够有效降低内源性干扰物的基质效应、抗降解，保障稀释后待测组分的长期稳定性，并在货架期内保持低本底与高精密度。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种用于化学发光免疫检测的样本稀释液和化学发光免疫检测方法，用于解决现有技术中的问题。

2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明是通过以下技术方案获得的。

3、本发明的第一方面提供一种用于化学发光免疫检测的样本稀释液，其包含以下组分：5-10g/l稳定剂、1-3g/l保护剂、2-5g/l缓冲剂、6-8g/l无机盐和0.1-0.5g/l防腐剂；

4、所述保护剂选自硫脲、焦磷酸盐、葡萄糖酸盐和乙酰半胱氨酸中的一种或多种。

5、本发明的另一方面还提供如上文所述稀释液的制备方法，包括以下步骤：

6、1)水、无机盐、缓冲剂和稳定剂进行第一次混合，得到第一混合物；

7、2)将第一混合物、保护剂和防腐剂进行第二次混合，得到第二混合物；

8、3)过滤，得到所述样本稀释液。

9、本发明的另一方面还提供如上文所述样本稀释液在制备化学发光免疫检测试剂盒中的应用。

10、本发明的另一方面还提供一种用于化学发光免疫检测的试剂盒，包含如上文所述样本稀释液。

11、本发明的另一方面还提供一种化学发光免疫检测方法，包括如下步骤：

12、使用如上文所所述样本稀释液对待测样本进行处理；以及对处理后的待测样本进行检测。

13、如上所述，本发明的一种用于化学发光免疫检测的样本稀释液和化学发光免疫检测方法，具有以下有益效果：

14、1)大分子稳定剂+保护剂协同：稳定剂隔绝杂蛋白非特异吸附，保护剂同步清除稀释后体系大量自由基，双重保护待测蛋白、生物标志物，解决普通稀释液样本快速降解、基质干扰双重缺陷。

15、2)本发明的样本稀释液系针对安图a2000全自动化学发光免疫分析仪的流体动力学特性及磁珠固相分离体系进行系统性优化与浓度筛选所获得的专用配方。与安图生物原装配套的样本稀释液相比，本发明的样本稀释液在检测准确性、分析精密度及样本稳定性等多个关键技术性能指标上均展现出更优的技术效果。

1.一种用于化学发光免疫检测的样本稀释液，其特征在于，其包含以下组分：1-3g/l保护剂、5-10g/l稳定剂、6-8g/l无机盐、2-5g/l缓冲剂和0.1-0.5g/l防腐剂；

2.如权利要求1所述样本稀释液，其特征在于，所述焦磷酸盐选自焦磷酸钠和焦磷酸钾中的一种或两种；

3.如权利要求2所述样本稀释液，其特征在于，所述聚丙烯酸钠的重均分子量为5000-10000 g/mol；

4.如权利要求1-3任一项所述样本稀释液，其特征在于，所述样本稀释液还包含黄色示踪色素；以样本稀释液的总体积为基准计，所述黄色示踪色素的含量为0.01-0.02g/l。

5.如权利要求4所述样本稀释液，其特征在于，所述黄色示踪色素选自日落黄、柠檬黄、姜黄色素中的一种或多种。

6.如权利要求4所述样本稀释液，其特征在于，所述样本稀释液的ph值为5-7。

7.如权利要求1-6任一所述样本稀释液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.如权利要求1-6任一项所述样本稀释液在制备化学发光免疫检测试剂盒中的应用。

9.一种用于化学发光免疫检测的试剂盒，其特征在于，包含如权利要求1-6任一项所述样本稀释液。

10.一种化学发光免疫检测方法，其特征在于，包括如下步骤：