反应用板的制作方法

本发明涉及用于测定具有基于免疫学测定法等生化反应处理的生理活性的试样物质的量的、装入生化反应用基体的反应用板。

背景技术：

1、检查体内物质的存在以及量的生物体相关物质的检查在知晓健康状态并决定治疗方法方面是重要的。另外，生物体关联物质的检查在生活环境多种多样的现代，需要进行多种检查，要求迅速化、高灵敏度化。例如，对于过敏性疾病的治疗，首先掌握自己患有的过敏性疾病是重要的。近年来，过敏的原因也有多种，为了接受使用适当的药物等适当的治疗，需要确定其原因。

2、作为过敏的检查方法，已知有各种方法，例如，如专利文献1中记载的那样，通常为通过固相夹心免疫学测定法对针对从受试者采集的血液样本中针对特定过敏原的ige抗体进行定量的方法。在该方法中，例如，使配体捕捉抗体吸附在玻璃过滤器等固相载体上，准备将配体捕捉抗体吸附部位以外的蛋白质吸附部位用酪蛋白等封闭剂封闭的物质，另一方面，准备将尘螨、花粉等特定过敏原与配体结合的物质，将其与血液样本混合，形成与配体结合的特定过敏原和血液样本中的针对所述特定过敏原的ige抗体的复合体。然后，将含有该复合体的混合液添加到在上述固相载体上吸附有配体捕捉抗体的物质中，使复合体中的配体部分与配体捕捉抗体结合，接着，添加用酶等标记的抗ige抗体，使复合体中的ige抗体部分与标记抗ige抗体结合。接着，去除未与复合体结合的过量的标记抗ige抗体，进行与标记的种类相应的显色反应，检测出与ige抗体结合的标记抗ige抗体。将得到的检测结果与预先使用标记ige抗体制成的标准曲线进行比较，对血液样本中的针对特定过敏原的ige抗体进行定量。

3、为了进行上述检查，已知有使用使一个特定过敏原与一个生物体反应用基体的多孔性过滤器结合而成的生物体反应用基体来检查有无过敏的方法及其装置。另外，作为使用生物体反应用基体检查有无过敏的其他方法及其装置的例子，已知有专利文献2中记载的生化反应用基体。该基体具备反应用板、吸收体、收纳容器以及罩，该收纳容器具备用于收纳反应用板的反应用板收纳部和收纳吸收体的吸收体收纳部以及被保温部，所述罩以覆盖收纳于收纳容器的反应用板以及吸收体的至少一部分的方式组装于收纳容器，反应用板具有：反应区，其供与检体中的被检物质特异性反应的特异性结合物质固定化；流路部，其将吸收体与反应区连接，罩具备用于向反应用板注入检体等的注入孔。

4、现有技术文献

5、专利文献

6、专利文献1：（日本）2011-133285号公报

7、专利文献2：国际公开第wo2019/151468号

技术实现思路

1、发明所要解决的技术问题

2、例如，在使用了专利文献2所记载的反应用板的检查中，具有反应区和流路部，所述反应区供与检体中的被检物质特异性反应的特异性结合物质（例如抗原（过敏原））固定化，所述流路部将吸收体和反应区连接，罩具有用于向所述反应用板注入检体等的注入孔，因此能够削减检查的工序数（例如，削减为了排出清洗液而从反应区吸收清洗液的工序等）而容易地进行检查。

3、使用这样的反应用板，在分析装置内，通过如下工序进行检查：（1）稀释检体添加工序，将检体（检体可以被稀释，以下也称为“稀释检体”）分注至生化反应用基体的反应用板的反应区并使其与在反应区固定化的ige结合；（2）检体清洗工序，为了去除反应区内的未反应的检体成分而使用清洗液进行清洗；（3）标记抗体添加工序，添加用alp（碱性磷酸酶）等酶标记的抗ige抗体（所谓的被标记的二次抗体，以下，在本说明书中，也简称为“标记抗体”）而进行ige抗体与标记抗体的结合；（4）标记抗体清洗工序，为了去除未反应的标记抗体而使用清洗液进行清洗；（5）检查工序，添加化学发光基质，用相机拍摄化学发光强度。特别是在（4）标记抗体清洗工序中，为了清洗标记抗体而进行多次（例如10次左右）清洗，该标记抗体清洗工序的次数越多，清洗工序的时间越长，存在无法实现检查时间缩短的问题。需要说明的是，“（4）标记抗体清洗工序”是指从工序（3）中添加的标记抗体被从反应区去除（排液）的状态开始，向反应区注入清洗液，搅拌该清洗液，去除（排液）清洗液的一系列工序，“标记抗体清洗工序的次数”是指进行该一系列工序的次数。

4、因此，本发明人等重新考虑标记抗体清洗工序的次数，用比以前的清洗次数少的清洗次数确认是否对检查结果有影响。该确认的结果如图10（b）所示，在划分反应区的流出防止壁周边的反应区确认到不需要的发光。可知这是因为，在流出防止壁周边的反应区残留有未洗净的标记抗体，该未洗净的标记抗体发光。而且，判明了存在如下问题：若存在这样的不需要的发光，则无法进行准确的检查，或者必须增加清洗工序的次数。

5、另外，在专利文献2中记载的反应用板中的反应区中，预先在其表面涂布聚合物等固定化剂，经由该固定化剂与检体中的被检物质特异性反应的特异性结合物质（例如抗原（过敏原））固定于反应区。然而，明确了在固定化剂未以均匀的厚度涂布于反应区的整个表面的情况下，在反应区固定化的特异性结合物质的量及密度根据固定化的部位而不同，即使是相同的特异性结合物质，也存在根据部位而成为不同的检查结果的课题。

6、例如，专利文献2中记载的反应用板中的反应区由于其外缘被流出防止壁包围，因此在反应用板上涂布固定化剂时，固定化剂被流出防止壁的内壁面的表面张力吸引等，流出防止壁周边的反应区的固定化剂的涂膜变厚，流出防止壁周边的反应区的涂膜的厚度有时比反应区的中心部的厚度厚。由此，在反应区的中心部与流出防止壁周边的外周部之间，检测灵敏度改变，有时产生检查结果不同的课题。因此，为了进行稳定的检查，考虑仅使用反应区的中心部，但在该情况下，存在如下问题：由于反应区的面积变大，因此使用的检体（检体稀释液）、抗体以及清洗液等的量变多，结果清洗工序的时间变长，无法实现检查时间的缩短。

7、因此，本发明是为了解决这样的问题而完成的，其目的在于：1）提供一种即使在削减了反应区的清洗次数的情况下，也能够通过进行可靠的清洗来进行稳定的检查的反应用板；及/或2）提供一种通过在反应区的外周部和中心部使检测灵敏度一致，能够在外周部和中心部进行同样的检查的反应用板。

8、用于解决技术问题的技术方案

9、解决上述课题的本发明的反应用板组装于生化反应用基体，其特征在于，该反应用板具有：反应区，其供与检体中的被检物质特异性反应的特异性结合物质固定化；流出防止壁，其以包围所述反应区的方式形成，反应区与流出防止壁抵接的部位形成圆角，所述圆角r大于0.10mm。

10、另外，在本发明的反应用板中，优选的是，所述圆角r大于0.12mm。

11、另外，在本发明的反应用板中，优选的是，所述流出防止壁与所述反应区所成的角为91度以上。

12、另外，在本发明的反应用板中，优选的是，所述流出防止壁与所述反应区所成的角为95度至130度。

13、另外，在本发明的反应用板中，优选的是，该反应用板具有流路部，该流路部与所述反应区相连，并且能够防止在搅拌所述反应区内的所述检体等时所述检体等流出，在搅拌后排出所述检体等。

14、另外，在本发明的反应用板中，优选的是，所述流路部具有以从所述反应区上升的方式形成的斜面。

15、另外，在本发明的反应用板中，优选的是，所述流路部从所述反应区形成到所述反应用板的端部，所述流路部的流路的所述端部的宽度方向的长度比所述反应区的宽度方向的长度窄。

16、另外，在本发明的反应用板中，优选的是，所述流路部具备与所述流出防止壁连续的流路壁，所述流路壁沿着所述流路部的流路形成为流线形状。

17、另外，在本发明的反应用板中，优选的是，所述流出防止壁具备朝向所述反应用板的任意端部开口的开口部，所述流路部形成于所述开口部与所述端部之间。

18、另外，在本发明的反应用板中，优选的是，所述流路部的流路壁形成为，以流路的宽度从所述反应区朝向所述端部变窄的方式沿着所述流路呈流线形状弯曲，并且在所述端部侧所述流路的宽度扩大。

19、另外，在本发明的反应用板中，优选的是，在所述反应区的表面具有将所述特异性结合物质固定于所述反应区的涂膜。

20、另外，本发明的反应用板的制造方法中，该反应用板组装于生化反应用基体，其特征在于，该反应用板具有：反应区，其供与检体中的被检物质特异性反应的特异性结合物质固定化；流出防止壁，其以包围所述反应区的方式形成，所述反应区与所述流出防止壁抵接的部位形成圆角r，该圆角r大于0.10mm，在该反应用板中，通过使所述反应用板旋转，将固定化剂涂布于所述反应区，该固定化剂用于将与检体中的被检物质特异性反应的特异性结合物质在所述反应区固定化。

21、发明效果

22、根据本发明，反应用板的反应区与流出防止壁抵接的部位形成规定的圆角r，因此即使在清洗工序时减少清洗次数的情况下，也能够进行可靠的清洗，减少流出防止壁周边的反应区的液体残留，能够实现检查精度的提高。另外，根据本发明，反应用板的将特异性结合物质固定于反应区的涂膜形成为均匀的厚度，因此在反应区的外周部和中心部检测灵敏度恒定，能够实现检查精度的提高。进而，根据本发明，优选的是，由于与反应区连通的流路部的流路为流线形状，因此清洗工序时的清洗变得更可靠，能够实现检查精度的提高。另外，由于流路的端部侧形成为向外侧扩径，因此即使在吸收体的吸液性能降低的情况下，也能够防止液体从流路部流出。