免疫检测用冻干试剂球及其制备方法与流程

本申请涉及检测，具体而言，涉及一种免疫检测用冻干试剂球及其制备方法。

背景技术：

1、相关技术中对样本进行免疫检测时，可以利用微流控检测芯片对样本以及试剂进行定量和混合，并将相应的免疫检测用冻干试剂球配备在微流控检测芯片中，以便于冻干试剂球复溶后，与样本和试剂的混合溶液再次混合为待检测溶液。

2、然而，相关技术中制备的免疫检测用冻干试剂球，存在冻干试剂球内抗体活性低的问题。

技术实现思路

1、本申请的主要目的在于提供一种免疫检测用冻干试剂球及其制备方法，以解决相关技术中的冻干试剂球内抗体活性低的问题。

2、根据本申请的一个方面，提供了一种一种免疫检测用冻干试剂球的制备方法，包括：

3、将特异性抗体、反应增强剂、冻干赋形剂以及表面活性剂混合为混合溶液；

4、将所述混合溶液分散形成多个等体积的液滴，并将各所述液滴冷冻形成冻结体；

5、将所述冻结体冷冻干燥，形成冻干试剂球；

6、其中，所述冻干赋形剂至少包括海藻糖和羟丙基-β-环糊精。

7、在一些实施例中，所述冻干赋形剂中的所述海藻糖的质量体积百分比浓度为2%-5%；和/或，

8、所述冻干赋形剂中的所述羟丙基-β-环糊精的质量体积百分比浓度为0.5%-2%。

9、在一些实施例中，将所述混合溶液分散形成多个等体积的液滴，并将各所述液滴冷冻形成冻结体的步骤包括：

10、将所述混合溶液通过定量滴定装置形成多个等体积的所述液滴；

11、将所述液滴滴入液氮中制备成所述冻结体。

12、在一些实施例中，将所述冻结体冷冻干燥，形成冻干试剂球的步骤包括：

13、在预定真空度p下，使得所述冻结体处于第一预定温度t1内冷冻第一预定时间a1；

14、以预定升温速率v升温至第二预定温度t2，以使所述冻结体内的冰晶升华；

15、以所述预定升温速率v升温至第三预定温度t3，并将所述冻结体干燥第二预定时间a2，形成所述冻干试剂球。

16、在一些实施例中，所述预定真空度p满足关系式：p＜10pa；和/或，

17、所述第一预定温度t1满足关系式： -45℃≤t1≤-35℃；和/或，

18、所述第一预定时间a1满足关系式：2小时≤a1≤4小时；和/或，

19、所述预定升温速率满足关系式5℃/小时≤v≤10℃/小时；和/或，

20、所述第二预定温度t2满足关系式：-15℃≤t2≤-5℃；和/或，

21、所述第三预定温度t3满足关系式：25℃≤t3≤30℃；和/或，

22、所述第二预定时间a2满足关系式4小时≤a2≤8小时。

23、在一些实施例中，所述反应增强剂包括聚乙二醇4000和聚乙二醇6000中的至少一种；和/或，

24、所述表面活性剂包括聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80中的至少一种；和/或，

25、所述特异性抗体包括犬c反应蛋白特异性抗体和猫血清淀粉样蛋白a抗体中的至少一种。

26、在一些实施例中，所述混合溶液中所述特异性抗体的浓度为0.2mg/ml-1.5mg/ml；和/或，

27、所述混合溶液中，所述反应增强剂的质量体积百分比浓度为3%-6%；和/或，

28、所述混合溶液中，所述表面活性剂的质量体积百分比浓度为0.001%-0.005%。

29、在一些实施例中，将所述冻结体冷冻干燥，形成冻干试剂球之后的步骤还包括：

30、在干燥惰性气体环境中，筛选出直径符合预定直径r的所述冻干试剂球。

31、在一些实施例中，所述预定直径r满足关系式：0.5mm≤r≤0.8mm；和/或，

32、所述干燥惰性气体环境中的气体包括氮气、氦气、氖气、氩气、氪气或氙气中的至少一种。

33、另一方面，本申请还提供了一种免疫检测用冻干试剂球，所述免疫检测用冻干试剂球采用所述的免疫检测用冻干试剂球的制备方法制得。

34、在本申请中，由于制备冻干试剂球时，混合溶液的冻干赋形剂中至少具有海藻糖和羟丙基-β-环糊精两种组分，在冷冻干燥冻结体形成冻干试剂球的过程中，海藻糖会在特异性抗体的外周形成玻璃态基质，从而保护特异性抗体，避免冻干试剂球上产生的冰晶直接与抗体接触而破坏抗体。而羟丙基-β-环糊精分子内部形成有疏水性空腔，能够包合住抗体的疏水区域，避免在冷冻干燥阶段抗体的疏水区域发生解折叠，造成抗体失活的问题。同时，羟丙基-β-环糊精分子包合住抗体的疏水区域后，在冷冻干燥过程中，多个抗体相互靠近，能够避免多个抗体的疏水区域之间发生结合，导致抗体失活的问题。即通过海藻糖和羟丙基-β-环糊精两种组分，使得抗体外周包覆有玻璃态基质，提高了冻干试剂球的结构强度，且避免外部物质对抗体造成影响，提高了抗体的活性。同时，羟丙基-β-环糊精包合住抗体的疏水区域，避免疏水区域解折叠或多个疏水区域之间发生结合，从而在一定程度上提高了抗体的活性。

1.一种免疫检测用冻干试剂球的制备方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的免疫检测用冻干试剂球的制备方法，其特征在于，所述冻干赋形剂中的所述海藻糖的质量体积百分比浓度为2%-5%；和/或，

3.根据权利要求1所述的免疫检测用冻干试剂球的制备方法，其特征在于，将所述混合溶液分散形成多个等体积的液滴，并将各所述液滴冷冻形成冻结体的步骤包括：

4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫检测用冻干试剂球的制备方法，其特征在于，将所述冻结体冷冻干燥，形成冻干试剂球的步骤包括：

5.根据权利要求4所述的免疫检测用冻干试剂球的制备方法，其特征在于，所述预定真空度p满足关系式：p＜10pa；和/或，

6.根据权利要求1至3中任一项至所述的免疫检测用冻干试剂球的制备方法，其特征在于，所述反应增强剂包括聚乙二醇4000和聚乙二醇6000中的至少一种；和/或，

7.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫检测用冻干试剂球的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中所述特异性抗体的浓度为0.2mg/ml-1.5mg/ml；和/或，

8.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫检测用冻干试剂球的制备方法，其特征在于，将所述冻结体冷冻干燥，形成冻干试剂球之后的步骤还包括：

9.根据权利要求8所述的免疫检测用冻干试剂球的制备方法，其特征在于，所述预定直径r满足关系式：0.5mm≤r≤0.8mm；和/或，

10.一种免疫检测用冻干试剂球，其特征在于，所述免疫检测用冻干试剂球采用权利要求1至9中任一项所述的免疫检测用冻干试剂球的制备方法制得。