一种基于单次加样的连接环化单链核酸的方法与流程

技术特征：
1.一种基于单次加样的连接环化单链核酸的方法，其特征在于，包括：将待连接环化的单链核酸和其他组分一次性混合，以形成环化体系；和将所述环化体系置于连接环化条件，以使所述待连接环化的单链核酸连接环化，其中所述核酸为dna和/或rna，所述其他组分包括热稳定性dna连接酶和/或rna连接酶和可选地反应缓冲液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述连接环化为分子间或分子内的连接环化，所述单链dna的5
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磷酸基团末端的核苷酸序列和3
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羟基基团末端的核苷酸序列互补配对。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述其他组分还包括接头，其中：在所述连接环化为分子内的连接环化的情况下，所述接头与同一条所述单链dna的5
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磷酸基团末端的核苷酸序列和3
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羟基基团末端的核苷酸序列互补配对；在所述连接环化为分子间的连接环化的情况下，所述接头分别与两条所述单链dna中的一者的5
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磷酸基团末端的核苷酸序列和另一者的3
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羟基基团末端的核苷酸序列互补配对。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述连接环化条件包括：变性、复性和反应，其中变性温度为70-80℃℃，复性温度为0-70℃，反应温度为55-70℃，可选地，所述变性持续2-10分钟，所述复性持续2-40分钟，并且所述反应持续30-240分钟。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述复性后、进行所述反应前，不进行将所述其他组分添加至所述环化体系的步骤。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述其他组分中不包括atp，可选地，所述热稳定性dna连接酶和/或rna连接酶为非atp依赖的circligase。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单链dna的长度为50-1000nt，连接环化产物的长度为50-1000nt。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法由自动化操作台实现。9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法在以下中的至少一种中的应用：a.纳米核酸制品的制备；b.分子克隆；和c.疾病诊断。10.根据权利要求9所述的应用，其中所述纳米核酸制品包括包覆有环状核酸分子的磁珠、核酸纳米球、包含环状核酸分子的纳米线、纳米盒和纳米芯片，其中所述核酸为dna和/或rna。

技术总结
本发明提供了一种基于单次加样的连接环化单链核酸的方法，包括：将待连接环化的单链核酸和其他组分一次性混合，以形成环化体系；和将所述环化体系置于连接环化条件，以使所述待连接环化的单链核酸连接环化，其中所述核酸为DNA和/或RNA，所述其他组分包括热稳定性DNA连接酶和/或RNA连接酶和可选地反应缓冲液。该方法一次性添加所有组分形成单链核酸的环化体系，能够提高单链核酸的环化连接效率，并应用于自动化环化单链核酸。用于自动化环化单链核酸。


技术研发人员：蔡梦
受保护的技术使用者：杭州纳博智造科技有限公司
技术研发日：2023.05.16
技术公布日：2023/9/8