异二聚体蛋白质的制作方法

技术特征：
1.异二聚体蛋白质，其包含包含第一犬igg ch3结构域的第一多肽和包含第二犬igg ch3结构域的第二多肽，其中所述igg选自igg-a、b、c或d，其中a)所述第一犬igg ch3结构域包含在igg-b中的位置428、427、382、383、386的一个或多个处或者在igg-a、c或d中的相应位置处用相反电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在igg-b中的位置420、418、437、467、396、397、429的一个或多个处或者在igg-a、c或d中的相应位置处用相反电荷的氨基酸进行的氨基酸置换或；b)所述第二犬igg ch3结构域包含在igg-b中的429处或者igg-a、c或d中的相应位置处的氨基酸置换并且第一犬igg ch3结构域不包含相应的突变或c)所述第一犬igg ch3结构域包含在igg-b中的387处或者igg-a、c或d中的相应位置处的氨基酸置换并且第二igg ch3结构域不包含相应的突变。2.根据权利要求1所述的异二聚体蛋白质，其中a)所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e428、d427、e382、e383、k386的一个或多个处用相反电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置r420、k418、k437、k467、k396、d397、d429的一个或多个处用相反电荷的氨基酸进行的氨基酸置换或b)所述第二犬igg ch3结构域包含在d429处的氨基酸置换并且第一犬igg ch3结构域不包含相应的突变或c)所述第一犬igg ch3结构域包含在n387处的氨基酸置换并且第二igg ch3结构域不包含相应的突变。3.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。4.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置r420处用带负电荷氨基酸进行的氨基酸置换和在位置k418处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。5.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。6.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。7.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428k处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置k418处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。8.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428k处用带正电荷的氨基酸
进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。9.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428k处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。10.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428k处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置k418处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。11.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e382处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k467处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。12.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e383处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置k396处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。13.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e382处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k418处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。14.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e382处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k418处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。15.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e382处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。16.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e382处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。17.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e383处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k418处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。18.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e383处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k418处用带负电荷的氨基
酸进行的氨基酸置换，和在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。19.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e383处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。20.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e383处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。21.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k418处用带负电荷氨基酸进行的氨基酸置换和在位置k467处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。22.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置r467用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。23.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k418处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置k396处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。24.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置k396处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。25.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置r420处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置k467处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。26.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k396处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，和在位置k467处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。27.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，在位置k418处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置k467处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。28.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在
位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，在位置k418处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在位置k396处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。29.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置e428处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k418处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。30.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置d427处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置k437处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。31.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置k386处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置d397处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换。32.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域不包含氨基酸置换并且所述第二犬igg ch3包含在位置d429处的氨基酸置换。33.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置k386处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域包含在位置d397处用带正电荷的氨基酸进行的氨基酸置换和在d429处的置换。34.根据权利要求1或2所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一犬igg ch3结构域包含在位置n387处用带负电荷的氨基酸进行的氨基酸置换，并且所述第二犬igg ch3结构域不包含氨基酸置换。35.根据前述权利要求所述的异二聚体蛋白质，其中，e428处的置换是e428k、e428r或e428h，d427处的置换是d427k、d427r或d427h，e382处的置换是e382k、e382r或e382h，e383处的置换是e383k、e383r、e383h或e383r，r420处的置换是r420e或r420d，k418处的置换是k418e或k418d，k437处的置换是k437d或k437e，k467处的置换是k467d或k467e，k396处的置换是k396e或k396d，k386处的置换是k386e或k386d，d397处的置换是d397k、d397r或d397h，d429处的置换是d429n，n387处的置换是n387d。36.根据前述权利要求所述的异二聚体蛋白质，其中所述异二聚体蛋白质包含在链1和链2中的氨基酸修饰，如表2中所列。37.根据前述权利要求所述的异二聚体蛋白质，其中所述蛋白质包含在第一犬igg ch3结构域和/或第二犬igg ch3结构域中的一个或多个进一步的氨基酸置换。38.根据前述权利要求中任一项所述的异二聚体蛋白质，其中所述异二聚体蛋白质包含fc区。39.根据前述权利要求中任一项所述的异二聚体蛋白质，其中所述第一多肽是抗体重链或其片段和/或所述第二多肽是抗体重链或其片段。40.根据前述权利要求中任一项所述的异二聚体蛋白质，其中所述异二聚体蛋白质包含第一和第二轻链。41.根据前述权利要求中任一项所述的异二聚体蛋白质，其中所述异二聚体蛋白质是抗体或其片段。
42.根据权利要求41所述的异二聚体蛋白质，其中所述抗体是犬或犬源化抗体或其片段。43.根据权利要求41或42所述的异二聚体蛋白质，其中所述片段是fc受体融合蛋白。44.根据前述权利要求中任一项所述的异二聚体蛋白质，其中所述抗体是多特异性抗体。45.根据权利要求44所述的异二聚体蛋白质，其中所述抗体是双特异性抗体。46.根据前述权利要求所述的异二聚体蛋白质，其包含另外的部分。47.根据权利要求46所述的异二聚体蛋白质，其中所述部分是半衰期延长部分。48.根据权利要求47所述的异二聚体蛋白质，其中所述半衰期延长部分是犬血清白蛋白。49.根据权利要求47所述的异二聚体蛋白质，其中所述部分是细胞毒性部分。50.包含犬igg ch3结构域的多肽，其中所述多肽包含在igg-b中的位置428、427、382、383、420、418、437、467、396、386、387或397中的一个或多个位置处或者在igg-a、c或d的相应位置处用相反电荷的氨基酸进行的氨基酸置换或在d429用n进行的氨基酸置换。51.核酸，其编码权利要求1至48中任一项所述的异二聚体蛋白质或权利要求50所述的多肽。52.载体，其包含权利要求51所述的核酸。53.宿主细胞，其包含权利要求52所述的载体。54.根据权利要求53所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是细菌、哺乳动物或酵母细胞。55.一种用于制备异二聚体蛋白质或多肽的方法，其包括以下步骤：d)用权利要求51的核酸或权利要求52的载体转化宿主细胞；e)培养宿主细胞并表达包含ch3结构域的第一和第二igg多肽和f)从宿主细胞培养物中回收异二聚体蛋白质或多肽。56.药物组合物，其包含权利要求1至49中任一项的异二聚体蛋白质或权利要求50的多肽和药物载体。57.试剂盒，其包含权利要求1至49中任一项的异二聚体蛋白质或权利要求50的多肽以及任选地使用说明书。

技术总结
本发明涉及兽医学中的抗体疗法，特别是全长抗体和抗体片段，通过提供改进用于兽医学的异二聚体抗体的产生的方法以及提供相关产品和用途。和用途。和用途。


技术研发人员：萌
受保护的技术使用者：佩特迈迪有限公司
技术研发日：2021.04.21
技术公布日：2023/2/13