抗bcma嵌合抗原受体的用途
相关申请的交叉引用本技术要求2019年11月5日提交的美国临时专利申请号62/931,077、2019年12月6日提交的美国临时专利申请号62/944,938、2019年12月20日提交的美国临时专利申请号62/952,186的权益、2020年5月13日提交的美国临时专利申请号63/024,252和2020年6月10日提交的美国临时专利申请号63/037,471，将其每一个都通过引用以其整体并入本文。序列表本技术通过引用并入以ascii文本文件的形式与本技术一起提交的序列表，其标题为14247-549-228_seq_listing.txt，创建于2020年10月27日，大小为27,620字节。
1.
背景技术：
1.1.技术领域
1.本文提出的公开文本涉及用于治疗b细胞相关病症的方法。更具体地，本公开文本涉及包含抗bcma抗体或其抗原结合片段的改进的嵌合抗原受体(car)和经基因修饰以表达这些car的免疫效应细胞，以及这些组合物用于有效治疗b细胞相关病症的用途。本公开文本还涉及使用包含抗bcma抗体或其抗原结合片段的嵌合抗原受体(car)和经基因修饰以表达这些car的免疫效应细胞治疗b细胞相关病症的方法与基于bcma的治疗方式的组合。1.2.相关技术的描述
2.若干种重要的疾病涉及b淋巴细胞，即b细胞。异常的b细胞生理学还可以导致包括但不限于系统性红斑狼疮(sle)的自身免疫性疾病的发展。b细胞的恶性转化导致癌症，包括但不限于淋巴瘤，例如多发性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤。
3.绝大多数患有包括非霍奇金淋巴瘤(nhl)和多发性骨髓瘤(mm)在内的b细胞恶性肿瘤的患者是造成癌症死亡率的重要促成者。b细胞恶性肿瘤对各种形式的治疗的反应是复杂的。治疗b细胞恶性肿瘤的传统方法(包括化学疗法和放射疗法)由于毒副作用而具有有限的效用。使用抗cd19、抗cd20、抗cd22、抗cd23、抗cd52、抗cd80和抗hla-dr治疗性抗体的免疫疗法取得了有限的成功，部分是由于药代动力学特征不佳、抗体通过血清蛋白酶和肾小球过滤快速消除、以及对肿瘤部位的有限渗透和癌细胞上靶抗原的表达水平。使用表达嵌合抗原受体(car)的经基因修饰的细胞的尝试也取得了有限的成功。此外，在car中使用的给定抗原结合结构域的治疗功效是不可预测的：如果抗原结合结构域结合过强，则car t细胞诱导大量细胞因子释放，从而导致潜在致死的免疫反应，被认为是“细胞因子风暴”，并且如果抗原结合结构域结合太弱，则car t细胞在清除癌细胞方面不会显示出足够的治疗功效。
2.
技术实现要素：
4.本公开文本总体上提供了治疗b细胞相关疾病例如多发性骨髓瘤的改进的方法。
5.在一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表
达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，然后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平大于所述第一水平的30％，并且基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供非car t细胞疗法。在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sbcma的所述第二水平大于所述第一水平的40％，则向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后25-35天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后28-31天测定sbcma的所述第二水平。在更具体的实施方案中，在所述测定sbcma的第二水平之后三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供非car t细胞疗法。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
6.在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用非car t细胞疗法，其中所述患者先前已经被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有大于在所述施用之前从所述受试者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)水平的30％的sbcma水平。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
7.在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)治疗之后被施用非car t细胞疗法的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平，其中所述患者先前已被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中如果所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，则所述患者是对于所述非car t细胞疗法的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述非car t细胞疗法的候选者施用所述非car t细胞治疗。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
8.在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)治疗之后被施用非car t细胞疗法的方法，所述方法包括测定来自所述
患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平，其中所述患者先前已被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中如果所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，则所述患者是对于所述非car t细胞疗法的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述非car t细胞疗法的候选者施用所述非car t细胞治疗。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病为多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
9.在特定实施方案中，其中如果所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的约20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，则所述患者是对于所述非car t细胞疗法的候选者。任选地，所述方法可以进一步包括向对于所述非car t细胞疗法的候选者施用所述非car t细胞疗法。
10.在另一个实施方案中，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，以及测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平；其中如果sbcma的所述水平大于4000ng/l，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在具体实施方案中，在所述施用之后50-70天测定sbcma的所述水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后55-65天测定sbcma的所述水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后58-62天测定sbcma的所述水平。在前述实施方案的具体实施方案中，在所述测定sbcma的水平之后三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供所述非car t细胞疗法。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
11.在另一个实施方案中，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，随后测定来自所述受试者的组织样品中il-6、tnfα或二者的第二水平；其中如果il-6、tnfα或二者的所述第二水平分别不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在具体实施方案中，在所述向所述受试者施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞的当天测定所述第一水平，并且在所述施用之后1-4天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后两天测定所述第二水平。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
12.在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，以及测定来自所述受试者的组织样品中铁蛋白的水平；其中如果铁蛋白的所述水平大于1500皮摩尔/升，则随后向所述受试者提供用于治疗细胞因子释放综合征(crs)的疗法。在某些实施方案中，所述测定是在所述施用之前0-4
天内进行的。在具体实施方案中，所述测定是在所述施用的同一天进行的。在另一个具体实施方案中，用于治疗crs的所述疗法是在所述施用之后0-5天首次向所述受试者提供。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
13.在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％和/或如果所述il-6、tnfα或二者的所述第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在某些实施方案中，如果il-6、tnfα或二者的所述第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平的约80％、90％、95％、100％、110％、120％或150％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
14.在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或如果所述il-6、tnfα或二者的所述第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在某些实施方案中，如果il-6、tnfα或二者的所述第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平的约80％、90％、95％、100％、110％、120％或150％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
15.在某些实施方案中，如果i)sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的约20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，以及ii)如果il-6、tnfα或二者的所述第二水平没有比il-6、tnfα或二者的所述第一水平高约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
16.在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平大于sbcma的所述第一水平的20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％和/或il-6、tnfα或二者的第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供非car t细胞疗法。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
17.在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或il-6、tnfα或二者的第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供非car t细胞疗法。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
18.在某些实施方案中，所述方法包括：(c)确定il-6、tnfα或二者的第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平的约80％、90％、95％、100％、110％、120％或150％，以及(d)基于步骤(c)中的所述确定，随后向所述受试者提供非car t细胞疗法。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
19.在某些实施方案中，所述方法包括：(c)确定sbcma的第二水平大于sbcma的所述第一水平的约20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，并且确定il-6、tnfα或二者的第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平的约80％、90％、95％、100％、110％、120％或150％，以及(d)基于步骤(c)中的所述确定，随后向所述受试者提供非car t细胞疗法。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
20.在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用非car t细胞疗法，其中所述患者先前已经被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有(i)大于在所述施用之前从所述受试者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)水平的30％的sbcma水平和/或(ii)不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平的il-6、tnf
α或二者的水平。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
21.在某些实施方案中，所述方法包括向所述患者施用非car t细胞疗法，其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有(i)大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)的所述第一水平的约20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％的sbcma水平和/或(ii)不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平的约20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％的il-6、tnfα或二者的水平。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
22.在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)治疗之后被施用非car t细胞疗法的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平和/或il-6、tnfα或二者的水平，其中所述患者先前已被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中如果(i)所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，和/或(ii)il-6、tnfα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平，则所述患者是对于所述非car t细胞疗法的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述非car t细胞疗法的候选者施用所述非car t细胞治疗。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
23.在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)治疗之后被施用非car t细胞疗法的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平和/或il-6、tnfα或二者的水平，其中所述患者先前已被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中如果(i)所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，和/或(ii)il-6、tnfα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平，则所述患者是对于所述非car t细胞疗法的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述非car t细胞疗法的候选者施用所述非car t细胞治疗。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
24.在所述方法的某些实施方案中，如果(i)所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的约20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，和/或(ii)il-6、tnfα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者
获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平的约20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，则所述患者是对于所述非car t细胞疗法的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述非car t细胞疗法的候选者施用所述非car t细胞治疗。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
25.在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述组织样品是血液、血浆或血清。在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，由bcma表达细胞引起的所述疾病是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)。在具体实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在其他具体实施方案中，所述高风险多发性骨髓瘤是r-iss iii期疾病和/或以早期复发为特征的疾病(例如，自最后一个治疗方案(如使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和/或地塞米松的最后一个治疗方案)之日起12个月内的疾病进展)。在具体实施方案中，由bcma表达细胞引起的所述疾病是非霍奇金淋巴瘤，并且其中所述非霍奇金淋巴瘤选自：伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，在施用表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的t细胞之前，已针对通过肿瘤的bcma表达评估了患有肿瘤的受试者。
26.在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是t细胞，例如cd4 t细胞、cd8 t细胞或细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、t杀伤细胞或自然杀伤(nk)细胞。在另一个具体实施方案中，以从150x106个细胞至450x106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。
27.在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗cd38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(dpd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(dvd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(ird)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(rvd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(bcd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(crd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(vtd-pace)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松；或下文第5.9节所列的其他治疗
剂中的任一种。在更具体的实施方案中，所述患者在施用car t细胞之前未接受过所述非car t细胞疗法。
28.在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受三个或更多个先前疗法线或一个或多个先前疗法线。在更具体的实施方案中，所述先前疗法线包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗cd38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(dpd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(dvd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(ird)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(rvd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(bcd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(crd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(vtd-pace)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松。在各种更具体的实施方案中，所述受试者已接受二、三、四、五、六、七或更多个所述先前疗法线；不多于三个所述先前疗法线；不多于两个所述先前疗法线；或不多于一个所述先前疗法线。
29.在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，以如下范围内的剂量施用所述免疫细胞：150x106个细胞至450x106个细胞、300x106个细胞至600x106个细胞、350x106个细胞至600x106个细胞、350x106个细胞至550x106个细胞、400x106个细胞至600x106个细胞、150x106个细胞至300x106个细胞或400x106个细胞至500x106个细胞。在一个实施方案中，以如下剂量施用所述免疫细胞：150x106个细胞、约200x106个细胞、约250x106个细胞、约300x106个细胞、约350x106个细胞、约400x106个细胞、约450x106个细胞、约500x106个细胞或约550x106个细胞。在一个实施方案中，以约450x106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。在一些实施方案中，向所述受试者施用一次表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞的输注液。在一些实施方案中，重复施用表达针对bcma的car的免疫细胞(例如，向所述受试者施用第二个剂量的免疫细胞)。
30.在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约550x106个细胞的剂量施用表达针对bcma的car的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用表达针对bcma的car的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x106个细胞至约250x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方
案中，以约350x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用表达针对bcma的car的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约600x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约600x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约350x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约450x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约350x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是t细胞(例如，自体t细胞)。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，正在治疗的受试者经受白细胞单采术程序以收集自体免疫细胞，以用于在其施用至所述受试者之前制造所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，通过静脉内输注施用免疫细胞(例如，t细胞)。
31.在本文公开的任何方面或实施方案的具体实施方案中，在施用表达针对bcma的car的免疫细胞之前，向正在治疗的受试者施用淋巴清除(ld)化学疗法。在具体实施方案中，ld化学疗法包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。在具体实施方案中，ld化学疗法包括氟达拉滨(例如，约30mg/m2用于静脉内施用)和环磷酰胺(例如，约300mg/m2用于静脉内施用)，持续时间为1、2、3、4、5、6或7天(例如，3天)。在其他具体实施方案中，ld化学疗法包括第5.9节中所述的任何化学治疗剂。在具体实施方案中，在施用所述ld化学疗法之后1、2、3、4、5、6或7天(例如，在施用所述ld化学疗法之后2或3天)，向所述受试者施用表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞。在具体实施方案中，在所述ld化学疗法开始之前未接受过任何疗法持续至少或超过1周、至少或超过2周(至少或超过14天)、至少或超过3周、至少或超过4周、至少或超过5周或至少或超过6周。在本文公开的任何实施方案的具体实施方案中，在施用表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞之前，正在治疗的受试者仅接受过单一先前治疗方案。
32.对于任何上述实施方案，所述受试者经受单采术以收集和分离所述免疫细胞，例
如t细胞。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述受试者在所述单采术时展现出：m蛋白(血清蛋白电泳[spep]或尿蛋白电泳[upep])：spep≥0.5g/dl或upep≥200mg/24小时；轻链多发性骨髓瘤，其中血清或尿液中无可测量疾病，且血清无免疫球蛋白轻链≥10mg/dl和异常的血清免疫球蛋白κλ游离轻链比率；和/或东部肿瘤协作组(ecog)体能状态≤1。在更具体的实施方案中，所述受试者在单采术时另外地：接受过至少三个所述先前治疗线，包括使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂(来那度胺或泊马度胺)和抗cd38抗体的先前治疗；除非疾病进展是对治疗线的最佳反应，否则经受过对于所述三个先前治疗线中的每一个的至少2个连续治疗周期；在最近一个先前治疗线的60天时或60天内具有疾病进展的迹象；和/或已实现对至少一个所述先前治疗线的反应(最小反应或更好)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述受试者在所述施用时展现出：m蛋白(血清蛋白电泳[spep]或尿蛋白电泳[upep])：spep≥0.5g/dl或upep≥200mg/24小时；轻链多发性骨髓瘤，其中血清或尿液中无可测量疾病，且血清无免疫球蛋白轻链≥10mg/dl和异常的血清免疫球蛋白κλ游离轻链比率；和/或东部肿瘤协作组(ecog)体能状态≤1。在另一个更具体的实施方案中，所述受试者另外地：仅接受过一个先前抗骨髓瘤治疗方案；具有以下高风险因素：r-iss iii期和早期复发，其定义为(i)如果所述受试者经受过诱导加干细胞移植，则自首次移植之日起不到12个月的疾病进展(pd)；或(ii)如果所述受试者仅接受过诱导，则自最后一个治疗方案之日起《12个月的pd，所述最后一个治疗方案必须至少包括蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和地塞米松。
[0033]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述car包含靶向bcma的抗体或抗体片段。在更具体的实施方案中，所述car包含单链fv抗体片段(scfv)。在更具体的实施方案中，所述car包含bcma02 scfv。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向bcma例如人bcma的鼠单链fv抗体片段。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)的鼠抗bcma scfv、含有cd8α多肽的铰链结构域、cd8α跨膜结构域、cd137(4-1bb)细胞内共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向bcma(例如，人bcma)的鼠scfv，其中所述scfv是seq id no:9的抗bcma02 car的scfv。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体是或包含seq id no:9。在本文任何实施方案的更具体的实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有靶向bcma(例如，人bcma)的鼠单链fv抗体片段。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有结合bcma多肽(例如，人bcma)的鼠抗bcma scfv、包含cd8α多肽的铰链结构域、cd8α跨膜结构域、cd137(4-1bb)细胞内共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体是或包含seq id no:9。
[0034]
在一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平和/或白细胞介素-6
(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或如果所述il-6、tnfα或二者的所述第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。
[0035]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或il-6、tnfα或二者的第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供非car t细胞疗法。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0036]
在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用非car t细胞疗法，其中所述患者先前已经被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有(i)大于在所述施用之前从所述受试者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)水平的30％的sbcma水平和/或(ii)不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平的il-6、tnfα或二者的水平。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0037]
在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)治疗之后被施用非car t细胞疗法的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平和/或il-6、tnfα或二者的水平，其中所述患者先前已被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中如果(i)所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，和/或(ii)il-6、tnfα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平，则所述患者是对于所述非car t细胞疗法的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述非car t细胞疗法的候选者施用所述非car t细胞治疗。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0038]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平，
其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％，则随后向所述受试者施用用于治疗所述疾病的来那度胺。在具体实施方案中，以约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在另一个具体实施方案中，在28天周期的第1-21天以每日约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0039]
在前述实施方案的具体实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤(mm)。在特定实施方案中，所述疾病是复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0040]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％，则随后向所述受试者施用用于治疗所述疾病的泊马度胺。在具体实施方案中，以每日一次约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在另一个具体实施方案中，在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量口服施用所述泊马度胺，直到疾病进展。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在具体实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤(mm)。在特定实施方案中，所述疾病是复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0041]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％，则随后向所述受试者施用用于治疗所述疾病的cc-220。在具体实施方案中，以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述cc-220。在具体实施方案中，在28天周期的第1-21天以每日约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在具体实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤(mm)。在特定实施方案中，所述疾病是复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0042]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％，则随后向所述受试者施用用于治疗所述疾病的cc-220和地塞米松。在具体实施方案中，以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述cc-220。在具体实施方案中，以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量施用地塞米松。在具体实施方案中，在28天周期的第1-21天以每日约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、
0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220。在具体实施方案中，在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)是idecabtagene vicleucel细胞。在具体实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤(mm)。在特定实施方案中，所述疾病是复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0043]
在一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0044]
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0045]
在上述实施方案的具体实施方案中，如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的40％，则向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后25-35天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后28-31天测定sbcma的所述第二水平。在其他具体实施方案中，在所述测定sbcma的所述第二水平之后的三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0046]
在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用第二基于bcma的治疗方式，其中所述患者先前已经被施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性bcma
(sbcma)水平的30％的sbcma水平。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0047]
在另一个方面，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式的治疗之后被施用第二基于bcma的治疗方式的方法，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式，所述方法包括确定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平，其中所述患者先前已被施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式，并且其中如果所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，则所述患者是对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者施用所述第二基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0048]
在另一个方面，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式的治疗之后被施用第二基于bcma的治疗方式的方法，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式，所述方法包括确定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平，其中所述患者先前已被施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式，并且其中如果所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，则所述患者是对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者施用所述第二基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0049]
在特定实施方案中，其中如果所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的约20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，则所述患者是对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者。任选地，所述方法可以进一步包括向对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者施用所述第二基于bcma的治疗方式。
[0050]
在另一个实施方案中，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式，和
(b)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平，其中如果sbcma的所述水平大于4000ng/l，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，在所述施用之后50-70天测定sbcma的所述水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后55-65天测定sbcma的所述水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后58-62天测定sbcma的所述水平。在前述实施方案的具体实施方案中，在所述测定sbcma的水平之后三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供所述第二基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0051]
在另一个实施方案中，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及(c)随后测定来自所述受试者的组织样品中il-6、tnfα或二者的第二水平；其中如果il-6、tnfα或二者的所述第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，在所述向所述受试者施用包括表达针对bcma的car的免疫细胞的所述第一基于bcma的治疗方式的当天测定所述第一水平，并且在所述施用之后1-4天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后两天测定所述第二水平。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0052]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，由bcma表达细胞引起的所述疾病是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)。在具体实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在其他具体实施方案中，所述高风险多发性骨髓瘤是r-iss iii期疾病和/或以早期复发为特征的疾病(例如，自最后一个治疗方案(如使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和/或地塞米松的最后一个治疗方案)之日起12个月内的疾病进展)。在具体实施方案中，由bcma表达细胞引起的所述疾病是非霍奇金淋巴瘤，并且其中所述非霍奇金淋巴瘤选自：伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，在施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式之前，已针对通过肿瘤的bcma表达评估了患有肿瘤的受试者。
[0053]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是t细胞，例如cd4 t细胞、cd8 t细胞或细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、t杀伤细胞或自然杀伤(nk)细胞。在另一个
具体实施方案中，以从150x106个细胞至450x106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。
[0054]
在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受三个或更多个先前疗法线或一个或多个先前疗法线。在更具体的实施方案中，所述先前疗法线包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗cd38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(dpd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(dvd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(ird)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(rvd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(bcd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(crd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(vtd-pace)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松。在各种更具体的实施方案中，所述受试者已接受二、三、四、五、六、七或更多个所述先前疗法线；不多于三个所述先前疗法线；不多于两个所述先前疗法线；或不多于一个所述先前疗法线。
[0055]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，以如下范围内的剂量施用所述免疫细胞：150x106个细胞至450x106个细胞、300x106个细胞至600x106个细胞、350x106个细胞至600x106个细胞、350x106个细胞至550x106个细胞、400x106个细胞至600x106个细胞、150x106个细胞至300x106个细胞或400x106个细胞至500x106个细胞。在一个实施方案中，以如下剂量施用所述免疫细胞：150x106个细胞、约200x106个细胞、约250x106个细胞、约300x106个细胞、约350x106个细胞、约400x106个细胞、约450x106个细胞、约500x106个细胞或约550x106个细胞。在一个实施方案中，以约450x106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。在一些实施方案中，向所述受试者施用一次表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞的输注液。在一些实施方案中，重复施用表达针对bcma的car的免疫细胞(例如，向所述受试者施用第二个剂量的免疫细胞)。
[0056]
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约550x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x106个细胞至约250x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma
的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约600x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约600x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约350x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约450x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约350x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是t细胞(例如，自体t细胞)。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，正在治疗的受试者经受白细胞单采术程序以收集自体免疫细胞，以用于在其施用至所述受试者之前制造所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，通过静脉内输注施用免疫细胞(例如，t细胞)。
[0057]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述car包含靶向bcma的抗体或抗体片段。在更具体的实施方案中，所述car包含单链fv抗体片段(scfv)。在更具体的实施方案中，所述car包含bcma02 scfv。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向bcma例如人bcma的鼠单链fv抗体片段。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)的鼠抗bcma scfv、含有cd8α多肽的铰链结构域、cd8α跨膜结构域、cd137(4-1bb)细胞内共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向bcma(例如，人bcma)的鼠scfv，其中所述scfv是seq id no:9的抗bcma02 car的scfv。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体是或包含seq id no:9。在本文任何实施方案的更具体的实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有靶向bcma(例如，人bcma)的鼠单链fv抗体片段。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有结合bcma多肽(例如，人bcma)的鼠抗bcma scfv、包
含cd8α多肽的铰链结构域、cd8α跨膜结构域、cd137(4-1bb)细胞内共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体是或包含seq id no:9。
[0058]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或如果所述il-6、tnfα或二者的所述第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0059]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或il-6、tnfα或二者的第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0060]
在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用第二基于bcma的治疗方式，其中所述患者先前已经被施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有(i)大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)水平的30％的sbcma水平和/或(ii)不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平的il-6、tnfα或二者的水平。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0061]
在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式的治疗之后被施用第二基于bcma的治疗方式的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平和/或il-6、tnfα或二者的水平，其中所述患者先前已被施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式，其中如果(i)所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，和/或(ii)il-6、tnfα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平，则所述患者是对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者施用所述第二基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式是idecabtagene vicleucel细胞。在特定实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如复发性和难治性多发性骨髓瘤。
[0062]
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括bcma抗体-药物结合物(adc)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)或表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括bcma抗体-药物缀合物(adc)。在具体实施方案中，所述bcma抗体-药物缀合物(adc)包括cc99712或gsk2857916(贝兰他单抗-莫福汀)。在具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)。在具体实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)包括cc-93269、amg 420、jnj-64007957、amg 701、pf-06863135、regn5458、regn5459或tnb-383b。在具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)。在具体实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)包括df3001、afm26、ctx-4419或ctx-8573。在具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在具体实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)包括jcarh125、kite-585、p-bcma-101、lcar-b38m、ct053、抗cd19/bcma car-t细胞和ctx120。
[0063]
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式中的免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
[0064]
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
3.附图说明
[0065]
图1显示了b细胞成熟抗原(bcma)car构建体(抗bcma02 car)的示意图。
[0066]
图2a和图2b显示了bcma02 car t细胞输注后il-6(图2a)和tnf-α(图2b)的曲线。“tnf”＝tnfα，“intlk6”＝白细胞介素-6。无反应者用粗线指示，并且反应者(实现pr或更好反应的患者)用细线指示。在第1-9天、特别是第2天，这两组的倍数变化显著不同(p《.02)。“scr”＝筛查日期。
[0067]
图3显示了对于来自具有功效终点和在两个时间点的可溶性bcma测量结果二者的i期试验的个体(n＝66)，沿着最佳总体反应从输注到第1个月的可溶性bcma减少百分比。
[0068]
图4显示了输注后血清中可溶性bcma水平的曲线。强烈反应者(定义为输注ide-cel后至少18个月内无进展的患者)用粗线指示，在18个月之前进展或死亡的患者用细线指示。在强烈反应者中第2个月的可溶性bcma水平显著较低(p＝.0016)。
[0069]
图5a和图5b显示第7天(图5a)和第1个月(图5b)时sbcma的倍数变化(fc)与总体反应相关。pr，部分反应。
[0070]
图6显示了在输注后第2个月在持久的(无进展存活期≥18个月)和不持久的(pfs《18个月)反应者中的sbcma水平。sbcma水平以ng/l显示。
[0071]
图7a和图7b显示了在输注后第2天在反应者(≥pr)和无反应者(《pr)中il-6(图7a)和tnf-α(图7b)的倍数变化。
[0072]
图8显示了关于无进展存活期(pfs)的部分依赖图。对于归一化il-2图，il-2的归一化量(x轴)以每1x106个car t细胞中的pg/ml显示。对于cd3 、cd8 、car 、cd25 图，x轴显示cd8 car t细胞中cd25阳性细胞的百分比。对于两个图，y轴均显示累积局部作用，存活率变化。
[0073]
图9a和图9b显示了关于无进展存活期(pfs)的选定变量的单变量cox-ph模型森林图(图9a)和关于crs的选定变量的单变量cox-ph模型方框图(图9b)。“pd分泌的il-2”是指药物产品分泌的il-2。
[0074]
图10显示在输注之前在所有可评价的患者中观察到肿瘤bcma表达。每个点代表对于单独患者的百分比和平均强度得分。重叠的点围绕每个强度得分偏移。缩写：bcma，b细胞成熟抗原；ide cel，idecabtagene vicluel；ihc，免疫组织化学；ne，不可评价。
[0075]
图11a-图11d显示较高的bcma受体密度而不是bcma阳性细胞的百分比与较深的肿瘤反应相关。缩写：bcma，b细胞成熟抗原；bor，最佳总体反应；cr，完全反应；hr，危害比；ihc，免疫组织化学；nr，无反应；pfs，无进展存活期；pr，部分反应；r，反应；scr，严格的完全反应；vgpr，非常好的部分反应。
[0076]
图12a和图12b显示了在具有怀疑的抗原损失的患者中的bcma ihc染色和vdj克隆追踪。图12a：来自具有怀疑的抗原损失的患者的bcma ihc染色。图12b：vdj克隆追踪示出了在具有怀疑的抗原损失的多发性骨髓瘤患者中复发时最初和潜在出现的克隆的恢复。缩写：bcma，b细胞成熟抗原；bl，基线；ihc，免疫组织化学；m，月；mrd，微小残留疾病；pd，疾病进展；scrn，筛查；vdj，变量、多样性和接合。
[0077]
图13a-图13c显示输注后细胞因子c
max
的量级与car t细胞激活和扩增以及肿瘤反应有关。图13a：ide cel扩增和收缩的时间过程。图13a(续)：依据临床反应的ide-cle扩增。图13b：依据剂量水平的促炎性细胞因子诱导的量级。图13c：依据临床反应的促炎性细胞因子诱导(c
max
)的量级。缩写：auc，曲线下面积；bl，基线；car，嵌合抗原受体；cmax，最大浓度；crp，c反应蛋白；d，天；ifn，干扰素；il，白细胞介素；m，月；orr，总反应率。
[0078]
图14a-图14c显示输注后细胞因子诱导(细胞因子c
max
)的量级而不是基线水平与
更高级别的crs和研究人员鉴定的nt相关。图14a：促炎性细胞因子诱导的量级和crs级别。图14b：促炎性细胞因子诱导的量级和研究人员鉴定的nt的级别。图14c：基线血管生成素-1和-2水平以及研究人员鉴定的nt的级别。在图14a、图14b和图14c中所示的每个图中，每个带误差条的矩形从左到右按级别为0、级别为1 2级和级别为≥3的顺序显示(每个图中每个级别具有一个带误差条的矩形)。缩写：ang，血管生成素；crp，c反应蛋白；ifn，干扰素；nt，神经毒性；il，白细胞介素。
[0079]
图15a-图15c显示输注后sbcma清除与基线肿瘤负荷或emp受累无关。图15a(上图和下图)：基线sbcma与肿瘤负荷之间的相关性。图15b(上图和下图)：基线sbcma与emp的存在之间的相关性。图15c(上图和下图)：基线sbcma与sbcma清除之间的相关性。缩写：emp，髓外浆细胞瘤；lloq，定量下限；sbcma，可溶性b细胞成熟抗原。
[0080]
图16a-图16c显示在有反应的患者中迅速发生sbcma清除，并且到sbcma反弹的时间与肿瘤反应的深度相关。图16a：通过ide cel输注后的最佳总体反应分层的中值sbcma。图16b：依据最佳总体反应的实现sbcma最低点《lloq的患者的比例。图16c：sbcma反弹至可检测水平的时间。缩写：bl，基线；cr，完全反应；d，天；lloq，定量下限；m，月；npc，正常浆细胞；nr，无反应；pd，疾病进展；pr，部分响应；sbcma，可溶性b细胞成熟抗原；vgpr，非常好的部分反应。
[0081]
图17a和图17b显示sbcma反应轨迹与通过ngs测得的敏感性mrd评估和骨髓瘤疾病负荷的传统血清标记物是一致的。图17a：在无反应者、反应者(进展的)和反应者(持续的)(将反应表征为无反应者(《部分反应)、在数据截止时复发的反应者(反应者，进展的)和在数据截止时仍有反应的反应者(反应者，持续的))中的mrd(如使用下一代测序测定的，以细胞/百万测量)以及sbcma、m蛋白和flc的水平。图17b：可检测的生物标记物。缩写：bl，基线；flc，游离轻链；m，月；mfc；多色流式细胞术；m-prot，单克隆蛋白；mrd，微小残留疾病；ngs，下一代测序；sbcma，可溶性b细胞成熟抗原；nonr，无反应者；r，prog，反应者，进展的；r，ong，反应者，持续的。4.序列标识符的简要说明
[0082]
seq id no:1-3示出了本文所设想的bcma car的示例性轻链cdr序列的氨基酸序列。
[0083]
seq id no:4-6示出了本文所设想的bcma car的示例性重链cdr序列的氨基酸序列。
[0084]
seq id no:7示出了本文所设想的bcma car的示例性轻链序列的氨基酸序列。
[0085]
seq id no:8示出了本文所设想的bcma car的示例性重链序列的氨基酸序列。
[0086]
seq id no:9示出了本文所设想的示例性bcma car的氨基酸序列。
[0087]
seq id no:10示出了编码本文所设想的示例性bcma car的多核苷酸序列。
[0088]
seq id no:11示出了人bcma的氨基酸序列。
[0089]
seq id no:12-22示出了各种接头的氨基酸序列。
[0090]
seq id no:23-35示出了蛋白酶切割位点和自切割多肽切割位点的氨基酸序列。
[0091]
seq id no:36示出了编码bcma car的载体的多核苷酸序列。参见表1。
[0092]
表1：序列表：
5.具体实施方式
5.1.使用可溶性bcma和细胞因子预测car t细胞功效和crs的发展
[0093]
本文提供的公开文本总体上涉及用于治疗b细胞相关病症的改进的组合物和方法。如本文所用，术语“b细胞相关病症”涉及与不适当的b细胞活性和b细胞恶性肿瘤有关的病症。
[0094]
本文提供的特定实施方案涉及使用经基因修饰的免疫效应细胞的b细胞相关病症的改进的过继细胞疗法。基因方法提供了一种增强对癌细胞的免疫识别和消除的潜在手段。一个有希望的策略是将免疫效应细胞基因工程化以表达嵌合抗原受体(car)，其将细胞毒性重定向至癌细胞。然而，用于治疗b细胞障碍的现有过继细胞免疫疗法存在严重损害体
液免疫的风险，因为所述细胞靶向在所有或大多数b细胞上表达的抗原。因此，此类疗法在临床上并不理想，因此本领域仍然需要用于b细胞相关障碍的更有效的疗法，从而避免体液免疫。
[0095]
本文所公开的过继细胞疗法的改进的组合物和方法提供了经基因修饰的免疫效应细胞，其可以容易地扩增、在体内展现出长期持久性并且通过靶向表达b细胞成熟抗原(bcma，也称为cd269或肿瘤坏死因子受体超家族，成员17；tnfrsf17)的b细胞降低对体液免疫的损害。本公开文本还涉及用于使用包含抗bcma抗体或其抗原结合片段的嵌合抗原受体(car)以及经基因修饰以表达这些car的免疫效应细胞与基于bcma的治疗方式的组合治疗b细胞相关病症的方法。本公开文本还涉及用于使用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式和第二基于bcma的治疗方式治疗b细胞相关病症的方法，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。
[0096]
bcma是肿瘤坏死因子受体超家族的成员(参见例如，thompson等人,j.exp.medicine,192(1):129-135,2000，以及mackay等人,annu.rev.immunol,21:231-264,2003)。bcma结合b细胞激活因子(baff)和增殖诱导配体(april)(参见例如，mackay等人,2003以及kalled等人,immunological reviews,204:43-54,2005)。在非恶性细胞中，bcma已被报道为主要在浆细胞和成熟b细胞的子集中表达(参见例如，laabi等人,embo j.,77(1):3897-3904,1992；laabi等人,nucleic acids res.,22(7):1147-1154,,1994；kalled等人,2005；o'connor等人,j.exp.medicine,199(1):91-97,2004；以及ng等人,j.immunol.,73(2):807-817,2004)。缺乏bcma的小鼠是健康的并且具有正常数量的b细胞，但长寿的浆细胞的存活受损(参见例如，o'connor等人,2004；xu等人,mol.cell.biol.,21(12):4067-4074,2001；以及schiemann等人,science,293(5537):2 111-21 14,2001)。多个研究人员已在多发性骨髓瘤细胞和其他淋巴瘤中普遍检测到bcma rna，并且已在来自多发性骨髓瘤患者的浆细胞的表面上检测到bcma蛋白(参见例如，novak等人,blood,103(2):689-694,2004；neri等人,clinical cancer research,73(19):5903-5909,2007；bellucci等人,blood,105(10):3945-3950,2005；以及moreaux等人,blood,703(8):3148-3157,2004)。
[0097]
在施用car t细胞疗法(例如，抗bcma car t细胞疗法)之后可溶性(即非膜结合的)bcma(sbcma)的量可以用于确定受试者是否可以被预期为对car t细胞疗法有适当反应，或者是否应向受试者施用不同的抗癌疗法。在施用car t细胞疗法之后在组织样品(例如，血清、血浆、淋巴或血液)中sbcma水平的更大下降与临床上更有益的结局(例如，非常好的部分反应、完全反应或严格的完全反应)相关。在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，然后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的约30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向
所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平大于所述第一水平的约30％，并且基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供非car t细胞疗法。在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sbcma的所述第二水平大于所述第一水平的40％，则向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sbcma的所述第二水平大于所述第一水平的20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，则向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后25-35天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后23-35、24-35、25-36、25-37、23-35或25-37天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或37天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后28-31天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后26-31、27-31、28-32、28-33、26-31或27-33天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后26、27、28、29、30、31、32或33天测定sbcma的所述第二水平。在更具体的实施方案中，在所述测定sbcma的第二水平之后三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供非car t细胞疗法。
[0098]
在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用非car t细胞疗法，其中所述患者先前已经被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有大于在所述施用之前从所述受试者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)水平的30％的sbcma水平。
[0099]
在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)治疗之后被施用非car t细胞疗法的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平，其中所述患者先前已被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中如果所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，则所述患者是对于所述非car t细胞疗法的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述非car t细胞疗法的候选者施用所述非car t细胞治疗。
[0100]
组织样品(例如，血浆、血清、淋巴或血液)中sbcma的绝对水平也可以用于确定被施用了car t细胞疗法(例如，bcma car t细胞疗法)的人是否将适当地受益于该疗法，或是否应被施用不同的抗癌疗法。因此，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，以及测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平；其中如果sbcma的所述水平大于4000ng/l，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sbcma的所述水平大于约3000ng/l、3500ng/l、4000ng/l、4500ng/l或5000ng/l，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。在具体实施方案中，在所述施用之后50-70天测定sbcma的所述第一水平。在具体实施方案中，在所述施用之后45-70、46-70、47-70、48-70、49-70、50-70、50-71、50-72、50-73或50-75天测定sbcma的所述第一水平。
6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非car t细胞疗法。
[0104]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或il-6、tnfα或二者的第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供非car t细胞疗法。
[0105]
在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用非car t细胞疗法，其中所述患者先前已经被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有(i)大于在所述施用之前从所述受试者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)水平的30％的sbcma水平和/或(ii)不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平的il-6、tnfα或二者的水平。
[0106]
在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)治疗之后被施用非car t细胞疗法的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平和/或il-6、tnfα或二者的水平，其中所述患者先前已被施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，并且其中如果(i)所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，和/或(ii)il-6、tnfα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平，则所述患者是对于所述非car t细胞疗法的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述非car t细胞疗法的候选者施用所述非car t细胞治疗。
[0107]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述car t细胞疗法(例如，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，例如idecabtagene vicleucel细胞)包括细胞群体，所述细胞群体包含约10％、5％、3％、2％或1％激活的car t细胞，例如激活的cd8 car t细胞(cd3 /cd8 /car /cd25 )。
[0108]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述car t细胞疗法(例如，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，例如idecabtagene vicleucel细胞)包括细胞群体，所述细胞群体包含10％、5％、3％、2％或1％的car t细胞(例如，cd4 car t细胞(cd3 /cd4 /car /cd57 ))的衰老群体。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述组织样品是血液、血浆或血清。在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，由bcma表达细胞引起的所述疾病是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)。在具体实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如高风险多
发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在其他具体实施方案中，所述高风险多发性骨髓瘤是r-iss iii期疾病和/或以早期复发为特征的疾病(例如，自最后一个治疗方案(如使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和/或地塞米松的最后一个治疗方案)之日起12个月内的疾病进展)。在具体实施方案中，由bcma表达细胞引起的所述疾病是非霍奇金淋巴瘤，并且其中所述非霍奇金淋巴瘤选自：伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。
[0109]
在一个实施方案中，在施用表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的t细胞之前，已针对通过肿瘤的bcma表达评估了患有肿瘤的受试者。
[0110]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是t细胞，例如cd4 t细胞、cd8 t细胞或细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、t杀伤细胞或自然杀伤(nk)细胞。在另一个具体实施方案中，以从150x106个细胞至450x106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。
[0111]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗cd38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(dpd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(dvd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(ird)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(rvd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(bcd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(crd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(vtd-pace)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松；或下文第5.9节所列的其他治疗剂中的任一种。在更具体的实施方案中，所述患者在施用car t细胞之前未接受过所述非car t细胞疗法。
[0112]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括来那度胺。在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，将所述来那度胺作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方
案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量将所述来那度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-28天以每日一次约10mg的剂量连续施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约10mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每隔一天约15mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约20mg的剂量口服施用所述来那度胺，持续多达12个周期。在某些实施方案中，建议所有患者使用来那度胺维持疗法。在某些实施方案中，来那度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0113]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括泊马度胺。在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，将所述泊马度胺作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量口服施用所述泊马度胺，直到疾病进展。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量将所述泊马度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)，直到疾病进展。在某些实施方案中，建议所有患者使用泊马度胺维持疗法。在某些实施方案中，泊马度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0114]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括cc-220(伊贝度胺(iberdomide)；参见例如，bjorkland,c.c.等人,2019,leukemia,doi:10.1038/s41375-019-0620-8；美国专利号9,828,361)。在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，将所述cc-220作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以口服施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述cc-220施用至受试
者以治疗多发性骨髓瘤(mm)。在某些实施方案中，建议所有患者使用cc-220维持疗法。在某些实施方案中，所述cc-220维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0115]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括cc-220(伊贝度胺)和地塞米松。在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，将所述cc-220和地塞米松作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述cc-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述cc-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述cc-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约40mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以口服施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以口服施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约20-60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220，并且根据需要重复28天周期，并且可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述cc-220和地塞米松施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)。在某些实施方案中，建议所有患者使用cc-220和地塞米松维持疗法。在某些实施方案中，所述cc-220和地塞米松维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0116]
在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受三个或更多个先前疗法线或一个或多个先前疗法线。在更具体的实施方案中，所述先前疗法线包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米
松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗cd38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(dpd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(dvd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(ird)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(rvd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(bcd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(crd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(vtd-pace)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松。在各种更具体的实施方案中，所述受试者已接受二、三、四、五、六、七或更多个所述先前疗法线；不多于三个所述先前疗法线；不多于两个所述先前疗法线；或不多于一个所述先前疗法线。
[0117]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，以如下范围内的剂量施用所述免疫细胞：150x106个细胞至450x106个细胞、300x106个细胞至600x106个细胞、350x106个细胞至600x106个细胞、350x106个细胞至550x106个细胞、400x106个细胞至600x106个细胞、150x106个细胞至300x106个细胞或400x106个细胞至500x106个细胞。在一个实施方案中，以如下剂量施用所述免疫细胞：150x106个细胞、约200x106个细胞、约250x106个细胞、约300x106个细胞、约350x106个细胞、约400x106个细胞、约450x106个细胞、约500x106个细胞或约550x106个细胞。在一个实施方案中，以约450x106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。在一些实施方案中，向所述受试者施用一次表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞的输注液。在一些实施方案中，重复施用表达针对bcma的car的免疫细胞(例如，向所述受试者施用第二个剂量的免疫细胞)。
[0118]
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约550x106个细胞的剂量施用表达针对bcma的car的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用表达针对bcma的car的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x106个细胞至约250x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用表达针对bcma的car的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约600x106个细胞的
剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约600x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约350x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约450x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约350x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是t细胞(例如，自体t细胞)。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，正在治疗的受试者经受白细胞单采术程序以收集自体免疫细胞，以用于在其施用至所述受试者之前制造所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，通过静脉内输注施用免疫细胞(例如，t细胞)。
[0119]
在本文公开的任何方面或实施方案的具体实施方案中，在施用表达针对bcma的car的免疫细胞之前，向正在治疗的受试者施用淋巴清除(ld)化学疗法。在具体实施方案中，ld化学疗法包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。在具体实施方案中，ld化学疗法包括氟达拉滨(例如，约30mg/m2用于静脉内施用)和环磷酰胺(例如，约300mg/m2用于静脉内施用)，持续时间为1、2、3、4、5、6或7天(例如，3天)。在其他具体实施方案中，ld化学疗法包括第5.9节中所述的任何化学治疗剂。在具体实施方案中，在施用所述ld化学疗法之后1、2、3、4、5、6或7天(例如，在施用所述ld化学疗法之后2或3天)，向所述受试者施用表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞。在具体实施方案中，在所述ld化学疗法开始之前未接受过任何疗法持续至少或超过1周、至少或超过2周(至少或超过14天)、至少或超过3周、至少或超过4周、至少或超过5周或至少或超过6周。在本文公开的任何实施方案的具体实施方案中，在施用表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞之前，正在治疗的受试者仅接受过单一先前治疗方案。
[0120]
对于任何上述实施方案，所述受试者经受单采术以收集和分离所述免疫细胞，例如t细胞。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述受试者在所述单采术时展现出：m蛋白(血清蛋白电泳[spep]或尿蛋白电泳[upep])：spep≥0.5g/dl或upep≥200mg/24小时；轻链多发性骨髓瘤，其中血清或尿液中无可测量疾病，且血清无免疫球蛋白轻链≥10mg/dl和异常的血清免疫球蛋白κλ游离轻链比率；和/或东部肿瘤协作组(ecog)体能状态≤1。在更具体的实施方案中，所述受试者在单采术时另外地：接受过至少三个所述先前治疗线，包括
使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂(来那度胺或泊马度胺)和抗cd38抗体的先前治疗；除非疾病进展是对治疗线的最佳反应，否则经受过对于所述三个先前治疗线中的每一个的至少2个连续治疗周期；在最近一个先前治疗线的60天时或60天内具有疾病进展的迹象；和/或已实现对至少一个所述先前治疗线的反应(最小反应或更好)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述受试者在所述施用时展现出：m蛋白(血清蛋白电泳[spep]或尿蛋白电泳[upep])：spep≥0.5g/dl或upep≥200mg/24小时；轻链多发性骨髓瘤，其中血清或尿液中无可测量疾病，且血清无免疫球蛋白轻链≥10mg/dl和异常的血清免疫球蛋白κλ游离轻链比率；和/或东部肿瘤协作组(ecog)体能状态≤1。在另一个更具体的实施方案中，所述受试者另外地：仅接受过一个先前抗骨髓瘤治疗方案；具有以下高风险因素：r-iss iii期和早期复发，其定义为(i)如果所述受试者经受过诱导加干细胞移植，则自首次移植之日起不到12个月的疾病进展(pd)；或(ii)如果所述受试者仅接受过诱导，则自最后一个治疗方案之日起《12个月的pd，所述最后一个治疗方案必须至少包括蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和地塞米松。
[0121]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述car包含靶向bcma的抗体或抗体片段。在更具体的实施方案中，所述car包含单链fv抗体片段(scfv)。在更具体的实施方案中，所述car包含bcma02 scfv。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向bcma例如bcma的鼠单链fv抗体片段。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)的鼠抗bcma scfv、含有cd8α多肽的铰链结构域、cd8α跨膜结构域、cd137(4-1bb)细胞内共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向bcma(例如，bcma)的鼠scfv，其中所述scfv是seq id no:9的抗bcma02 car的scfv。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体是或包含seq id no:9。在本文任何实施方案的更具体的实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有靶向bcma(例如，bcma)的鼠单链fv抗体片段。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有结合bcma多肽(例如，bcma)的鼠抗bcma scfv、包含cd8α多肽的铰链结构域、cd8α跨膜结构域、cd137(4-1bb)细胞内共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体是或包含seq id no:9。
[0122]
在其他实施方案中，将本文所设想的经基因修饰的免疫效应细胞施用至患有b细胞相关病症(例如与b细胞相关的自身免疫性疾病或b细胞恶性肿瘤)的患者。
[0123]
在施用car t细胞疗法(例如，抗bcma car t细胞疗法)之后可溶性(即非膜结合的)bcma(sbcma)的量可以用于确定受试者是否可以被预期为对car t细胞疗法有适当反应，或者是否应向受试者施用不同的抗癌疗法。在施用car t细胞疗法之后在组织样品(例如，血清、血浆、淋巴或血液)中sbcma水平的更大下降与临床上更有益的结局(例如，非常好的部分反应、完全反应或严格的完全反应)相关。在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方
式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平；其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的约30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式；并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0124]
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平；其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的约30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式；并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0125]
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平；其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的约20％、25％或30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式；并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0126]
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平；其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的约20％、25％或30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式；并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0127]
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)
的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平；其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的约30％、35％、40％、45％或50％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式；并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。
[0128]
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平；其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的约30％、35％、40％、45％或50％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式；并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0129]
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平；其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的约30％、35％、40％、45％或50％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式；并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0130]
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平大于所述第一水平的约30％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式；其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0131]
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的
治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平大于所述第一水平的约30％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式；其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0132]
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平大于所述第一水平的约20％、25％或30％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式；其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0133]
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平大于所述第一水平的约20％、25％或30％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式；其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0134]
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平大于所述第一水平的约30％、35％、40％、45％或50％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式；其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0135]
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma的第二水平大于所述第
一水平的约30％、35％、40％、45％或50％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式；其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0136]
在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sbcma的所述第二水平大于所述第一水平的40％，则向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式。
[0137]
在上述任一实施方案的实施方案中，在所述施用之后25-35天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后23-35、24-35、25-36、25-37、23-35或25-37天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或37天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后28-31天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后26-31、27-31、28-32、28-33、26-31或27-33天测定sbcma的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后26、27、28、29、30、31、32或33天测定sbcma的所述第二水平。在更具体的实施方案中，在所述测定sbcma的第二水平之后的三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式。
[0138]
在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用第二基于bcma的治疗方式，其中所述患者先前已经被施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)水平的30％的sbcma水平。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0139]
在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用第二基于bcma的治疗方式，其中所述患者先前已经被施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)水平的30％的sbcma水平。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0140]
在另一个方面，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式的治疗之后被施用第二基于bcma的治疗方式的方法，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式，所述方法包括确定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的
水平，其中所述患者先前已被施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式，并且其中如果所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，则所述患者是对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者施用所述第二基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0141]
在另一个方面，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式的治疗之后被施用第二基于bcma的治疗方式的方法，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式，所述方法包括确定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平，其中所述患者先前已被施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式，并且其中如果所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，则所述患者是对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者施用所述第二基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0142]
组织样品(例如，血浆、血清、淋巴或血液)中sbcma的绝对水平也可以用于确定被施用了car t细胞疗法(例如，bcma car t细胞疗法)的人是否将适当地受益于该疗法，或是否应被施用不同的抗癌疗法。因此，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式，以及测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平；其中如果sbcma的所述水平大于4000ng/l，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0143]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式，以及测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平；其中如果sbcma的所述水平大于4000ng/l，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0144]
在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sbcma的所述水平大于约3000ng/l、3500ng/l、4000ng/l、4500ng/l或5000ng/l，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，在所述施用之后50-70天测定sbcma的所述第一水平。在具体实施方案中，在所述施用之后45-70、46-70、47-70、48-70、49-70、50-70、50-71、50-72、50-73或50-75天测定sbcma的所述第一水平。在特定实施例中，在所述施用之后50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70天测定sbcma的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后55-65天测定sbcma的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后50-65、51-65、52-65、53-65、54-65、55-64、55-63、55-62或55-61天测定sbcma的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65天测定sbcma的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后58-62天测定sbcma的所述水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后53-62、54-62、55-62、56-62、57-62、58-68、58-67、58-66、58-65、58-64或58-63天测定sbcma的所述水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后58、59、60、61或62天测定sbcma的所述水平。在前述实施方案的具体实施方案中，在所述测定sbcma的第一水平之后三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供所述第二基于bcma的治疗方式。
[0145]
某些细胞因子(例如，白细胞介素-6(il-6)和/或肿瘤坏死因子α(tnfα))的水平也可以用于确定施用了car t细胞疗法(例如，bcma car t细胞疗法)的人是否将适当地受益于该疗法，或者是否应被施用不同的抗癌疗法。因此，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中il-6、tnfα或二者的第二水平；其中如果il-6、tnfα或二者的所述第二水平分别不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0146]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中il-6、tnfα或二者的第二水平；其中如果il-6、tnfα或二者的所述第二水平分别不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0147]
在某些实施方案中，在所述向所述受试者施用包括表达针对bcma的car的免疫细
胞的所述第一基于bcma的治疗方式的当天测定所述第一水平，并且在所述施用之后1-4天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后一天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后两天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后三天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后四天测定所述第二水平。
[0148]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，以及测定来自所述受试者的组织样品中铁蛋白的水平；其中如果铁蛋白的所述水平大于1500皮摩尔/升，则随后向所述受试者提供用于治疗细胞因子释放综合征(crs)的疗法。在某些实施方案中，所述测定是在所述施用之前0-4天内进行的。在具体实施方案中，所述测定是在所述施用的同一天进行的。在另一个具体实施方案中，用于治疗crs的所述疗法是在所述施用之后0-5天首次向所述受试者提供。
[0149]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或如果所述il-6、tnfα或二者的所述第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0150]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第二水平，其中如果sbcma的所述第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或如果所述il-6、tnfα或二者的所述第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于bcma的治疗方式，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0151]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性
bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或il-6、tnfα或二者的第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0152]
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的第一水平和/或白细胞介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnfα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sbcma的第二水平大于sbcma的所述第一水平的30％和/或il-6、tnfα或二者的第二水平不大于il-6、tnfα或二者的所述第一水平；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0153]
在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用第二基于bcma的治疗方式，其中所述患者先前已经被施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有(i)大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)水平的30％的sbcma水平和/或(ii)不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平的il-6、tnfα或二者的水平。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0154]
在另一个方面，本文提供了一种治疗由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用第二基于bcma的治疗方式，其中所述患者先前已经被施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于bcma的治疗方式，其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有(i)大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性bcma(sbcma)水平的30％的sbcma水平和/或(ii)不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平的il-6、tnfα或二者的水平。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是
idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0155]
在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式的治疗之后被施用第二基于bcma的治疗方式的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平和/或il-6、tnfα或二者的水平，其中所述患者先前已被施用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式，其中如果(i)所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，和/或(ii)il-6、tnfα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平，则所述患者是对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者施用所述第二基于bcma的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0156]
在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由b细胞成熟因子(bcma)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的第一基于bcma的治疗方式的治疗之后被施用第二基于bcma的治疗方式的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性bcma(sbcma)的水平和/或il-6、tnfα或二者的水平，其中所述患者先前已被施用包括idecabtagene vicleucel细胞的所述第一基于bcma的治疗方式，其中如果(i)所述组织样品中的sbcma水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sbcma水平的30％，和/或(ii)il-6、tnfα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的il-6、tnfα或二者的水平，则所述患者是对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者，并且其中所述第一基于bcma的治疗方式和所述第二基于bcma的治疗方式是不同的基于bcma的治疗方式。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于bcma的治疗方式的候选者施用所述第二基于bcma的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
[0157]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述car t细胞疗法(例如，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，例如idecabtagene vicleucel细胞)包括细胞群体，所述细胞群体包含约10％、5％、3％、2％或1％激活的car t细胞，例如激活的cd8 car t细胞(cd3 /cd8 /car /cd25 )。
[0158]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述car t细胞疗法(例如，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，例如idecabtagene vicleucel细胞)包括细胞群体，所述细胞群体包含10％、5％、3％、2％或1％的car t细胞(例如，cd4 car t细胞(cd3 /cd4 /car /cd57 ))的衰老群体。在上述任何方面或实施方案
的具体实施方案中，所述组织样品是血液、血浆或血清。在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，由bcma表达细胞引起的所述疾病是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)。在具体实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在其他具体实施方案中，所述高风险多发性骨髓瘤是r-iss iii期疾病和/或以早期复发为特征的疾病(例如，自最后一个治疗方案(如使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和/或地塞米松的最后一个治疗方案)之日起12个月内的疾病进展)。在具体实施方案中，由bcma表达细胞引起的所述疾病是非霍奇金淋巴瘤，并且其中所述非霍奇金淋巴瘤选自：伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。
[0159]
在一个实施方案中，在施用表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的t细胞之前，已针对通过肿瘤的bcma表达评估了患有肿瘤的受试者。
[0160]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是t细胞，例如cd4 t细胞、cd8 t细胞或细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、t杀伤细胞或自然杀伤(nk)细胞。在另一个具体实施方案中，以从150x106个细胞至450x106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。
[0161]
通常，基于bcma的治疗方式是指靶向bcma和/或bcma表达细胞(例如，在细胞表面上bcma表达细胞)的治疗方式。例如，所述基于bcma的治疗方式(例如，所述第一基于bcma的治疗方式或所述第二基于bcma的治疗方式)可以是bcma抗体-药物结合物(adc)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)或表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括bcma抗体-药物结合物(adc)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)或表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括bcma抗体-药物缀合物(adc)、双特异性t细胞衔接器(bite)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)或表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，其中所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)与包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式不同。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式是bcma抗体-药物结合物(adc)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)或表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式选自bcma抗体-药物结合物(adc)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)和表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式是bcma抗体-药物缀合物(adc)、双特异性t细胞衔接器(bite)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)或表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免
疫细胞(bcma car t细胞)，其中所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)与包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式不同。在某些实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式选自bcma抗体-药物缀合物(adc)、双特异性t细胞衔接器(bite)、靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)和表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，其中所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)与包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式不同。在更具体的实施方案中，在施用所述第一基于bcma的治疗方式之前，所述患者未接受过所述第二基于bcma的治疗方式。
[0162]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括cc99712、gsk2857916(贝兰他单抗-莫福汀)、cc-93269、amg 420、jnj-64007957、amg 701、pf-06863135、regn5458、regn5459、tnb-383b、df3001、afm26、ctx-4419、ctx-8573、jcarh125、kite-585、p-bcma-101、lcar-b38m、ct053、anti-cd19/bcma car-t细胞(hrain biotechnology)或ctx120。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式是cc99712、gsk2857916(贝兰他单抗-莫福汀)、cc-93269、amg 420、jnj-64007957、amg 701、pf-06863135、regn5458、regn5459、tnb-383b、df3001、afm26、ctx-4419、ctx-8573、jcarh125、kite-585、p-bcma-101、lcar-b38m、ct053、anti-cd19/bcma car-t细胞(hrain biotechnology)或ctx120。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式由以下组成：cc99712、gsk2857916(贝兰他单抗-莫福汀)、cc-93269、amg 420、jnj-64007957、amg 701、pf-06863135、regn5458、regn5459、tnb-383b、df3001、afm26、ctx-4419、ctx-8573、jcarh125、kite-585、p-bcma-101、lcar-b38m、ct053、anti-cd19/bcma car-t细胞(hrain biotechnology)或ctx120。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式选自cc99712、gsk2857916(贝兰他单抗-莫福汀)、cc-93269、amg 420、jnj-64007957、amg 701、pf-06863135、regn5458、regn5459、tnb-383b、df3001、afm26、ctx-4419、ctx-8573、jcarh125、kite-585、p-bcma-101、lcar-b38m、ct053、anti-cd19/bcma car-t细胞(hrain biotechnology)和ctx120。
[0163]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括bcma抗体-药物缀合物(adc)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式是bcma抗体-药物缀合物(adc)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式由bcma抗体-药物缀合物(adc)组成。在某些实施方案中，所述bcma抗体-药物缀合物(adc)包括cc99712或gsk2857916(贝兰他单抗-莫福汀)。在某些实施方案中，所述bcma抗体-药物缀合物(adc)是cc99712或gsk2857916(贝兰他单抗-莫福汀)。在某些实施方案中，所述bcma抗体-药物缀合物(adc)由cc99712或gsk2857916(贝兰他单抗-莫福汀)组成。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后立即施用所述bcma抗体-药物缀合物(adc)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后1周、2周、3周或4周施用所述bcma抗体-药物缀合物(adc)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述bcma抗体-药物缀合物(adc)。在某些实施方案中，所述bcma抗体-药物缀合物(adc)应在充分的骨髓恢复时或从施用所述第一基于
bcma的治疗方式之后90天(例如，在施用ide-cel之后90天)开始，以较晚者为准。
[0164]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式是靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式由靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)组成。在某些实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)包括cc-93269、amg 420、jnj-64007957、amg 701、pf-06863135、regn5458、regn5459或tnb-383b。在某些实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)是cc-93269、amg 420、jnj-64007957、amg 701、pf-06863135、regn5458、regn5459或tnb-383b。在某些实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)由cc-93269、amg 420、jnj-64007957、amg 701、pf-06863135、regn5458、regn5459或tnb-383b组成。在某些实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的双特异性t细胞衔接器(bite)选自cc-93269、amg 420、jnj-64007957、amg 701、pf-06863135、regn5458、regn5459和tnb-383b。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后立即施用所述双特异性t细胞衔接器(bite)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后1周、2周、3周或4周施用所述双特异性t细胞衔接器(bite)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述双特异性t细胞衔接器(bite)。在某些实施方案中，所述双特异性t细胞衔接器(bite)应在充分的骨髓恢复时或从施用所述第一基于bcma的治疗方式之后90天(例如，在施用ide-cel之后90天)开始，以较晚者为准。
[0165]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式是靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式由靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)组成。在某些实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)包括df3001、afm26、ctx-4419或ctx-8573。在某些实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)是df3001、afm26、ctx-4419或ctx-8573。在某些实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)由df3001、afm26、ctx-4419或ctx-8573组成。在某些实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)选自df3001、afm26、ctx-4419和ctx-8573。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后立即施用靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后1周、2周、3周或4周施用靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)。在某些实施方案中，靶向b细胞成熟抗原(bcma)的自然杀伤(nk)细胞衔接器(nkce)应在充分的骨髓恢复时或在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后90天(例如，在
施用ide-cel之后90天)开始，以较晚者为准。
[0166]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，其中所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)与包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式不同。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式是表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式是表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，其中所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)与包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式不同。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式由表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)组成。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式由表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)组成，其中所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)与包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式不同。在某些实施方案中，表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)包括jcarh125、kite-585、p-bcma-101、lcar-b38m、ct053、抗cd19/bcma car-t细胞(hrain biotechnology)和ctx120。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后立即施用所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后1周、2周、3周或4周施用所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)。在某些实施方案中，所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)应在充分的骨髓恢复时或在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后90天(例如，在施用ide-cel之后90天)开始，以较晚者为准。
[0167]
在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后立即施用所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，其中所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)与包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式不同。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后1周、2周、3周或4周施用所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，其中所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)与包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式不同。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，其中所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免
疫细胞(bcma car t细胞)与包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式不同。在特定实施方案中，所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)应在充分的骨髓恢复时或在施用所述第一基于bcma的治疗方式之后90天(例如，在施用ide-cel之后90天)开始，以较晚者为准，其中所述表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)与包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式不同。
[0168]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，包括表达针对bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)的所述第一基于bcma的治疗方式中的免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
[0169]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述第二基于bcma的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。
[0170]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是t细胞，例如cd4 t细胞、cd8 t细胞或细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、t杀伤细胞或自然杀伤(nk)细胞。在另一个具体实施方案中，以从150x106个细胞至450x106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。
[0171]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗cd38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(dpd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(dvd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(ird)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(rvd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(bcd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(crd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(vtd-pace)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松；或下文第5.9节所列的其他治疗剂中的任一种。在更具体的实施方案中，所述患者在施用car t细胞之前未接受过所述非car t细胞疗法。
[0172]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括来那度胺。在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，将所述来那度胺作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用
包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量将所述来那度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-28天以每日一次约10mg的剂量连续施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约10mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每隔一天约15mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约20mg的剂量口服施用所述来那度胺，持续多达12个周期。在某些实施方案中，建议所有患者使用来那度胺维持疗法。在某些实施方案中，来那度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0173]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括泊马度胺。在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，将所述泊马度胺作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量口服施用所述泊马度胺，直到疾病进展。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量将所述泊马度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)，直到疾病进展。在某些实施方案中，建议所有患者使用泊马度胺维持疗法。在某些实施方案中，泊马度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0174]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括cc-220(伊贝度胺(iberdomide)；参见例如，bjorkland,c.c.等人,2019,leukemia,doi:10.1038/s41375-019-0620-8；美国专利号9,828,361)。在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，将所述cc-220作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、
1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以口服施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述cc-220施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)。在某些实施方案中，建议所有患者使用cc-220维持疗法。在某些实施方案中，所述cc-220维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0175]
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非car t细胞疗法包括cc-220(伊贝度胺)和地塞米松。在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，将所述cc-220和地塞米松作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述cc-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述cc-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述cc-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约40mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以口服施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以口服施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约20-60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220，并且根据需要重复28天周期，并且可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述cc-220和地塞米松施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)。在某些实施方案中，建议所有患者使用cc-220和地塞米松维持疗法。在某些实施方案中，所述cc-220
和地塞米松维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0176]
在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受三个或更多个先前疗法线或一个或多个先前疗法线。在更具体的实施方案中，所述先前疗法线包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗cd38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(dpd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(dvd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(ird)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(rvd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(bcd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(crd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(vtd-pace)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松。在各种更具体的实施方案中，所述受试者已接受二、三、四、五、六、七或更多个所述先前疗法线；不多于三个所述先前疗法线；不多于两个所述先前疗法线；或不多于一个所述先前疗法线。
[0177]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，以如下范围内的剂量施用所述免疫细胞：150x106个细胞至450x106个细胞、300x106个细胞至600x106个细胞、350x106个细胞至600x106个细胞、350x106个细胞至550x106个细胞、400x106个细胞至600x106个细胞、150x106个细胞至300x106个细胞或400x106个细胞至500x106个细胞。在一个实施方案中，以如下剂量施用所述免疫细胞：150x106个细胞、约200x106个细胞、约250x106个细胞、约300x106个细胞、约350x106个细胞、约400x106个细胞、约450x106个细胞、约500x106个细胞或约550x106个细胞。在一个实施方案中，以约450x106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。在一些实施方案中，向所述受试者施用一次表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞的输注液。在一些实施方案中，重复施用表达针对bcma的car的免疫细胞(例如，向所述受试者施用第二个剂量的免疫细胞)。
[0178]
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约550x106个细胞的剂量施用表达针对bcma的car的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用表达针对bcma的car的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x106个细胞至约250x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细
胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用表达针对bcma的car的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x106个细胞至约600x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约600x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约350x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约450x106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约350x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约至约450x106个细胞的剂量施用所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是t细胞(例如，自体t细胞)。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，正在治疗的受试者经受白细胞单采术程序以收集自体免疫细胞，以用于在其施用至所述受试者之前制造所述表达针对bcma的car的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，通过静脉内输注施用免疫细胞(例如，t细胞)。
[0179]
在本文公开的任何方面或实施方案的具体实施方案中，在施用表达针对bcma的car的免疫细胞之前，向正在治疗的受试者施用淋巴清除(ld)化学疗法。在具体实施方案中，ld化学疗法包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。在具体实施方案中，ld化学疗法包括氟达拉滨(例如，约30mg/m2用于静脉内施用)和环磷酰胺(例如，约300mg/m2用于静脉内施用)，持续时间为1、2、3、4、5、6或7天(例如，3天)。在其他具体实施方案中，ld化学疗法包括第5.9节中所述的任何化学治疗剂。在具体实施方案中，在施用所述ld化学疗法之后1、2、3、4、5、6或7天(例如，在施用所述ld化学疗法之后2或3天)，向所述受试者施用表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞。在具体实施方案中，在所述ld化学疗法开始之前未接受过任何疗法持续至少或超过1周、至少或超过2周(至少或超过14天)、至少或超过3周、至少或超过4周、至少或超过5周或至少或超过6周。在本文公开的任何实施方案的具体实施方案中，在施用表达针对b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞之前，正在治疗的受试者仅接受过单一先前治疗方案。
[0180]
对于任何上述实施方案，所述受试者经受单采术以收集和分离所述免疫细胞，例如t细胞。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述受试者在所述单采术时展现出：m蛋
白(血清蛋白电泳[spep]或尿蛋白电泳[upep])：spep≥0.5g/dl或upep≥200mg/24小时；轻链多发性骨髓瘤，其中血清或尿液中无可测量疾病，且血清无免疫球蛋白轻链≥10mg/dl和异常的血清免疫球蛋白κλ游离轻链比率；和/或东部肿瘤协作组(ecog)体能状态≤1。在更具体的实施方案中，所述受试者在单采术时另外地：接受过至少三个所述先前治疗线，包括使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂(来那度胺或泊马度胺)和抗cd38抗体的先前治疗；除非疾病进展是对治疗线的最佳反应，否则经受过对于所述三个先前治疗线中的每一个的至少2个连续治疗周期；在最近一个先前治疗线的60天时或60天内具有疾病进展的迹象；和/或已实现对至少一个所述先前治疗线的反应(最小反应或更好)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述受试者在所述施用时展现出：m蛋白(血清蛋白电泳[spep]或尿蛋白电泳[upep])：spep≥0.5g/dl或upep≥200mg/24小时；轻链多发性骨髓瘤，其中血清或尿液中无可测量疾病，且血清无免疫球蛋白轻链≥10mg/dl和异常的血清免疫球蛋白κλ游离轻链比率；和/或东部肿瘤协作组(ecog)体能状态≤1。在另一个更具体的实施方案中，所述受试者另外地：仅接受过一个先前抗骨髓瘤治疗方案；具有以下高风险因素：r-iss iii期和早期复发，其定义为(i)如果所述受试者经受过诱导加干细胞移植，则自首次移植之日起不到12个月的疾病进展(pd)；或(ii)如果所述受试者仅接受过诱导，则自最后一个治疗方案之日起《12个月的pd，所述最后一个治疗方案必须至少包括蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和地塞米松。
[0181]
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述car包含靶向bcma的抗体或抗体片段。在更具体的实施方案中，所述car包含单链fv抗体片段(scfv)。在更具体的实施方案中，所述car包含bcma02 scfv。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向bcma例如bcma的鼠单链fv抗体片段。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)的鼠抗bcma scfv、含有cd8α多肽的铰链结构域、cd8α跨膜结构域、cd137(4-1bb)细胞内共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向bcma(例如，bcma)的鼠scfv，其中所述scfv是seq id no:9的抗bcma02 car的scfv。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体是或包含seq id no:9。在本文任何实施方案的更具体的实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有靶向bcma(例如，bcma)的鼠单链fv抗体片段。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有结合bcma多肽(例如，bcma)的鼠抗bcma scfv、包含cd8α多肽的铰链结构域、cd8α跨膜结构域、cd137(4-1bb)细胞内共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体是或包含seq id no:9。
[0182]
在其他实施方案中，将本文所设想的经基因修饰的免疫效应细胞施用至患有b细胞相关病症(例如与b细胞相关的自身免疫性疾病或b细胞恶性肿瘤)的患者。
[0183]
除非特别指出相反的情况，否则本文提供的主题的实践采用本领域技术范围内的化学、生物化学、有机化学、分子生物学、微生物学、重组dna技术、遗传学、免疫学和细胞生物学的常规方法，为了说明的目的在下文中描述了其中许多方法。此类技术在文献中有充分的解释。参见例如，sambrook等人,molecular cloning:a laboratory manual(第3版,
2001)；sambrook等人,molecular cloning:a laboratory manual(2nd edition,1989)；maniatis等人,molecular cloning:a laboratory manual(1982)；ausubel等人,current protocols in molecular biology(john wiley and sons,2008年7月更新)；short protocols in molecular biology:a compendium of methods from current protocols in molecular biology,greene pub.associates and wiley-interscience；glover,dna cloning:apractical approach,第i和ii卷(irl press,oxford,1985)；anand,techniques for the analysis of complex genomes,(academic press,new york,1992)；transcription and translation(b.hames和s.higgins编辑,1984)；perbal,a practical guide to molecular cloning(1984)；harlow和lane,antibodies,(cold spring harbor laboratory press,coldspring harbor,n.y.,1998)current protocols in immunology q.e.coligan,a.m.kruisbeek,d.h.margulies,e.m.shevach and w.strober编辑,1991)；annual review of immunology；以及在诸如advances in immunology的杂志中的专题论文。5.2.定义
[0184]
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开文本所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。虽然在本公开文本的实践或测试中可以使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的任何方法和材料，但本文描述了组合物、方法和材料的优选实施方案。出于本公开文本的目的，以下术语定义如下。
[0185]
冠词“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述”在本文中用于指代所述冠词的一个或超过一个(即，至少一个/一种或一个/一种或多个/多种)语法对象。举例来说，“一个/一种要素”意指一个/一种要素或一个/一种或多个/多种要素。
[0186]
替代方案(例如，“或”)的使用应当理解为意指替代方案之一、两者或其任何组合。
[0187]
术语“和/或”应理解为意指替代方案中的任一个或两个。
[0188]
如本文所用，术语“约”或“大约”是指与参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度相比，变化多达15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度。在一个实施方案中，术语“约”或“大约”是指参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度
±
15％、
±
10％、
±
9％、
±
8％、
±
7％、
±
6％、
±
5％、
±
4％、
±
3％、
±
2％或
±
1％的数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度的范围。
[0189]
在整个本说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”将被理解为暗示包括所述的步骤或要素或者步骤或要素的组，但不排除任何其他步骤或要素或者步骤或要素的组。“由
……
组成”意味着包括并限于在词组“由
……
组成”之后的任何内容。因此，词组“由
……
组成”指示，所列出的要素是必需的或强制性的，并且不可以存在任何其他要素。“基本上由
……
组成”意味着包括所述词组后所列出的任何要素，并且限于不会干扰或促进本公开文本针对所列出的要素详细说明的活性或作用的其他要素。因此，词组“基本上由
……
组成”表示所列要素是必需的或强制性的，但不存在对所列要素的活动或行动有重大影响的其他要素。
[0190]
在整个本说明书中对“一个实施方案”、“实施方案”、“特定实施方案”、“相关实施方案”、“特定实施方案”、“另外的实施方案”或“其他实施方案”或其组合的提及意指结合实
施方案描述的特定特征、结构或特征被包括在本文提供的公开文本的至少一个实施方案中。因此，在整个本说明书中各处出现的上述词组不一定都指的是相同的实施方案。此外，特定特征、结构或特性可以在一个或多个实施方案中以任何合适的方式组合。还应理解，在一个实施方案中对特征的肯定的叙述充当在特定实施方案中排除所述特征的基础。5.3.嵌合抗原受体
[0191]
在各种实施方案中，提供了将免疫效应细胞的细胞毒性重定向至b细胞的基因工程化受体。这些基因工程化受体在本文中称为嵌合抗原受体(car)。car是这样的分子，其将基于抗体的对所需抗原(例如，bcma)的特异性与t细胞受体激活细胞内结构域组合在一起以生成展现出特异性抗bcma细胞免疫活性的嵌合蛋白。如本文所用，术语“嵌合的”形容由来自不同来源的不同蛋白质或dna的部分组成。
[0192]
本文所设想的car包含与bcma结合的细胞外结构域(也称为结合结构域或抗原特异性结合结构域)、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。car的抗bcma抗原结合结构域与靶细胞表面上的bcma接合导致car的聚集，并向含car的细胞递送激活刺激。car的主要特征是其重定向免疫效应细胞特异性从而触发增殖、细胞因子产生、吞噬或分子产生的能力，所述分子可以利用单克隆抗体、可溶性配体或细胞特异性共受体的细胞特异性靶向能力以非主要组织相容性(mhc)依赖性方式介导靶抗原表达细胞的细胞死亡。
[0193]
在各种实施方案中，car包含含有鼠抗bcma(例如，人bcma)特异性结合结构域的细胞外结合结构域；跨膜结构域；一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域；和初级信号传导结构域。
[0194]
在特定实施方案中，car包含含有鼠抗bcma(例如，人bcma)抗体或其抗原结合片段的细胞外结合结构域；一个或多个铰链结构域或间隔子结构域；跨膜结构域；一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域；和初级信号传导结构域。5.3.1.结合结构域
[0195]
在特定实施方案中，本文所设想的car包含细胞外结合结构域，所述细胞外结合结构域含有与在b细胞上表达的人bcma多肽特异性结合的鼠抗bcma抗体或其抗原结合片段。如本文所用，术语“结合结构域”、“细胞外结构域”、“细胞外结合结构域”、“抗原特异性结合结构域”和“细胞外抗原特异性结合结构域”可互换使用，并且提供了car与目的靶抗原例如bcma特异性结合的能力。所述结合结构域可以源自天然、合成、半合成或重组来源。
[0196]
如本文所用的术语“特异性结合亲和力”或“特异性地结合”或“特异性结合的”或“特异性结合”或“特异性地靶向”描述了抗bcma抗体或其抗原结合片段(或包含所述抗体或其抗原结合片段的car)以比背景结合更大的结合亲和力与bcma结合。结合结构域(或包含结合结构域的car或含有结合结构域的融合蛋白)与bcma“特异性地结合”，条件是其以例如大于或等于约105m-1
的亲和力或ka(即特定结合相互作用的平衡缔合常数，单位为1/m)与bcma结合或缔合。在某些实施方案中，结合结构域(或其融合蛋白)以如下ka与靶标结合：大于或等于约106m-1
、107m-1
、108m-1
、109m-1
、10
10
m-1
、10
11
m-1
、10
12
m-1
或10
13
m-1
。“高亲和力”结合结构域(或其单链融合蛋白)是指具有如下ka的那些结合结构域：至少107m-1
、至少108m-1
、至少109m-1
、至少10
10
m-1
、至少10
11
m-1
、至少10
12
m-1
、至少10
13
m-1
或更大。
[0197]
可替代地，亲和力可以被定义为特定结合相互作用的平衡解离常数(kd)，单位为m(例如，10-5
m至10-13
m或更小)。根据本公开文本的结合结构域多肽和car蛋白的亲和力可以
使用常规技术容易地测定，例如通过竞争elisa(酶联免疫吸附测定)、或通过结合缔合、或使用标记配体的置换测定、或使用表面等离子体共振设备(如可从新泽西州皮斯卡塔韦的biacore，inc.获得的biacore t100)或光学生物传感器技术(如可分别从corning和perkin elmer获得的epic系统或enspire)(也参见例如，scatchard等人(1949)ann.n.y.acad.sci.51:660；和美国专利号5,283,173；5,468,614或等同物)。
[0198]
在一个实施方案中，特异性结合的亲和力是背景结合的约2倍、背景结合的约5倍、背景结合的约10倍、背景结合的约20倍、背景结合的约50倍、背景结合的约100倍、或背景结合的约1000倍或更大。
[0199]
在特定实施方案中，car的细胞外结合结构域包含抗体或其抗原结合片段。“抗体”是指结合剂，其是至少包含轻链或重链免疫球蛋白可变区的多肽，其特异性地识别并结合抗原(如肽、脂质、多糖或含有抗原决定簇(如由免疫细胞识别的那些)的核酸)的表位。
[0200]“抗原(ag)”是指可以刺激动物中的抗体产生或t细胞应答的化合物、组合物或物质，包括注射或吸收至动物体内的组合物(如包含癌症特异性蛋白质的组合物)。抗原与特异性体液或细胞免疫的产物反应，所述产物包括由异源抗原(如所公开的抗原)诱导的那些。在特定实施方案中，靶抗原是bcma多肽的表位。
[0201]“表位”或“抗原决定簇”是指抗原中与结合剂结合的区域。表位既可以由连续氨基酸形成，也可以由通过蛋白质三级折叠而并列的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位典型地在暴露于变性溶剂时得以保持而通过三级折叠形成的表位典型地在用变性溶剂处理时丧失。表位通常包括独特空间构象中的至少3个，并且更通常至少5、约9或约8-10个氨基酸。
[0202]
抗体包括其抗原结合片段，如骆驼ig、ig nar、fab片段、fab'片段、f(ab)'2片段、f(ab)'3片段、fv、单链fv蛋白(“scfv”)、双scfv、(scfv)2、微型抗体、双抗体、三抗体、四抗体、二硫键稳定化fv蛋白(“dsfv”)以及单结构域抗体(sdab，纳米抗体)和全长抗体中负责抗原结合的部分。所述术语还包括基因工程化形式，如嵌合抗体(例如，人源化鼠抗体)、异缀合抗体(如双特异性抗体)及其抗原结合片段。还参见pierce catalog和handbook,1994-1995(pierce chemical co.,rockford,il)；kuby,j.,immunology,第3版,w.h.freeman&co.,new york,1997。
[0203]
如技术人员所理解并如本文其他地方所述，完整抗体包括两条重链和两条轻链。每条重链由一个可变区和第一、第二和第三恒定区组成，而每个轻链由一个可变区和一个恒定区组成。哺乳动物的重链被分类为α、δ、ε、γ和μ。哺乳动物的轻链被分类为λ或κ。包含α、δ、ε、γ和μ重链的免疫球蛋白被分类为免疫球蛋白(ig)a、igd、ige、igg和igm。完整抗体形成“y”形。y的茎由结合在一起的两条重链的第二恒定区和第三恒定区(以及对于ige和igm，第四恒定区)组成，并且在铰链中形成二硫键(链间)。重链γ、α和δ具有由三个串联(在一条线中)ig结构域构成的恒定区，和用于增加柔性的铰链区；重链μ和ε具有由四个免疫球蛋白结构域构成的恒定区。第二恒定区和第三恒定区分别称为“ch2结构域”和“结构ch3域”。y的每个臂包括与单个轻链的可变区和恒定区结合的单个重链的可变区和第一恒定区。轻链和重链的可变区负责抗原结合。
[0204]
轻链可变区和重链可变区含有被三个高变区(也称为“互补决定区”或“cdr”)打断的“框架”区。cdr可以通过常规方法定义或鉴定，如通过根据kabat等人所述的序列(wu,tt
和kabat,e.a.,j exp med.132(2):211-50,(1970)；borden,p.和kabat e.a.,pnas,84:2440-2443(1987))；(参见，kabat等人,sequences of proteins of immunological interest,u.s.department of health and human services,1991，将其通过引用并入于此)，或通过根据chothia等人所述的结构(chothia,c.和lesk,a.m.,j mol.biol.,196(4):901-917(1987)，chothia,c.等人,nature,342:877-883(1989))。
[0205]
不同轻链或重链的框架区的序列在物种(如人)内相对保守。抗体的框架区(即组成性轻链和重链的组合框架区)用于在三维空间中定位和对齐cdr。cdr主要负责与抗原表位的结合。每条链的cdr通常称为cdr1、cdr2和cdr3，从n末端开始依次编号，并且通常还由特定cdr所在的链来鉴定。因此，位于抗体的重链的可变结构域中的cdr被称为cdrh1、cdrh2和cdrh3，而位于抗体的轻链可变结构域中的cdr被称为cdrl1、cdrl2和cdrl3。具有不同特异性(即对于不同抗原的不同结合位点)的抗体具有不同的cdr。尽管不同的抗体之间cdr不同，但cdr内仅有限数量的氨基酸位置直接参与抗原结合。cdr内的这些位置称为特异性决定残基(sdr)。适用于构建本文所设想的人源化bcma car的轻链cdr的说明性例子包括但不限于seq id no:1-3中所述的cdr序列。适用于构建本文所设想的人源化bcma car的重链cdr的说明性例子包括但不限于seq id no:4-6中所述的cdr序列。
[0206]
对“v
h”的提及或“vh”是指免疫球蛋白重链的可变区，包括抗体的可变区、fv、scfv、dsfv、fab或如本文所公开的其他抗体片段。对“v
l”的提及或“vl”是指免疫球蛋白轻链的可变区，包括抗体的可变区、fv、scfv、dsfv、fab或如本文所公开的其他抗体片段。
[0207]“单克隆抗体”是由b淋巴细胞的单个克隆或由已转染了单抗体的轻链和重链基因的细胞产生的抗体。单克隆抗体通过本领域技术人员已知的方法产生，例如通过由骨髓瘤细胞与免疫脾细胞的融合物制备杂交抗体形成细胞产生的。单克隆抗体包括人源化单克隆抗体。
[0208]“嵌合抗体”具有来自一个物种(如人)的框架残基以及来自另一个物种(如小鼠)的cdr(其通常赋予抗原结合)。在特定实施方案中，本文所设想的car包含作为嵌合抗体或其抗原结合片段的抗原特异性结合结构域。
[0209]“人源化”抗体是免疫球蛋白，其包含人框架区和来自非人(例如小鼠、大鼠或合成)免疫球蛋白的一个或多个cdr。提供cdr的非人免疫球蛋白被称为“供体”，并且提供框架的人免疫球蛋白被称为“受体”。
[0210]
在特定实施方案中，鼠抗bcma(例如，人bcma)抗体或其抗原结合片段包括但不限于骆驼ig(骆驼抗体(vhh))、ig nar、fab片段、fab'片段、f(ab)'2片段、f(ab)'3片段、fv、单链fv抗体(“scfv”)、双scfv、(scfv)2、微型抗体、双抗体、三抗体、四抗体、二硫键稳定化fv蛋白(“dsfv”)和单结构域抗体(sdab，纳米抗体)。
[0211]
如本文所用的“骆驼ig”或“骆驼vhh”是指重链抗体的最小已知抗原结合单元(koch-nolte等人,faseb j.,21:3490-3498(2007))。“重链抗体”或“骆驼抗体”是指含有两个vh结构域且无轻链的抗体(riechmann l.等人,j.immunol.methods231:25
–
38(1999)；wo 94/04678；wo 94/25591；美国专利号6,005,079)。
[0212]“免疫球蛋白新抗原受体”的“ignar”是指来自鲨鱼免疫组库的一类抗体，其由一个可变新抗原受体(vnar)结构域和五个恒定新抗原受体(cnar)结构域的同二聚体组成。ignar代表最小的已知基于免疫球蛋白的蛋白质支架中的一些，并且是高度稳定的并具有
高效结合特征。固有稳定性可以归因于(i)潜在的ig支架，与在小鼠抗体中发现的常规抗体vh和vl结构域相比，其呈现大量带电的且亲水性的表面暴露残基；和(ii)在互补决定区(cdr)环中的稳定结构特征，包括环间二硫桥和环内氢键的模式。
[0213]
对抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段，称为“fab”片段，其各自具有单一抗原结合位点；和残余“fc”片段，其名称反映其易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生f(ab')2片段，所述f(ab')2片段具有两个抗原组合位点并且仍然能够交联抗原。
[0214]“fv”是含有完整抗原结合位点的最小抗体片段。在一个实施方案中，双链fv种类由紧密非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在单链fv(scfv)种类中，一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域可以通过柔性肽接头共价连接，使得轻链和重链可以以类似于双链fv种类中的“二聚体”结构缔合。在这种构型中，每个可变结构域的三个高变区(hvr)相互作用以定义vh-vl二聚体的表面上的抗原结合位点。这六个hvr共同赋予抗体的抗原结合特异性。然而，甚至单个可变结构域(或仅包含三个对抗原具有特异性的hvr的一半fv)也具有识别和结合抗原的能力，但其亲和力低于整个结合位点。
[0215]
fab片段含有重链和轻链可变结构域，并且还含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(ch1)。fab
′
片段与fab片段的不同之处在于重链ch1结构域的羧基末端处添加几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。fab'-sh是本文中fab'的名称，其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离巯基。f(ab')2抗体片段最初是作为fab'片段对产生的，它们之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
[0216]
术语“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，所述片段包含在同一多肽链中连接至轻链可变结构域(vl)的重链可变结构域(vh)(vh-vl)。通过使用过短而不允许在同一条链上的两个结构域之间配对的接头，迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。双抗体可以是二价的或双特异性的。以下文献中对双抗体进行了更全面的描述：例如，ep 404,097；wo 1993/01161；hudson等人,nat.med.9:129-134(2003)；以及hollinger等人,pnas usa 90:6444-6448(1993)。hudson等人,nat.med.9:129-134(2003)中还描述了三抗体和四抗体。
[0217]“单结构域抗体”或“sdab”或“纳米抗体”是指由抗体重链可变区(vh结构域)或抗体轻链可变区(vl结构域)组成的抗体片段(holt,l.等人,2003,trends in biotechnology,21(11):484-490)。
[0218]“单链fv”或“scfv”抗体片段包含抗体的vh和vl结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中并且以任一取向存在(例如，vl-vh或vh-vl)。通常，scfv多肽进一步包含vh与vl结构域之间的多肽接头，其使得scfv能形成抗原结合的所需结构。关于scfv的综述，参见例如，pluckth
ü
n,在the pharmacology of monoclonal antibodies,第113卷,rosenburg和moore编辑,(springer-verlag,new york,1994),第269-315页中。
[0219]
在某些实施方案中，本文所设想的car包含作为鼠scfv的抗原特异性结合结构域。单链抗体可以从对于所需靶标具有特异性的杂交瘤的v区基因克隆。此类交瘤的产生已成为常规。可用于克隆可变区重链(vh)和可变区轻链(vl)的技术已描述于例如orlandi等人,pnas,1989；86:3833-3837中。
[0220]
在特定实施方案中，所述抗原特异性结合结构域是结合人bcma多肽的鼠scfv。适
用于构建本文所设想的bcma car的可变重链的说明性例子包括但不限于seq id no:8中所示的氨基酸序列。适用于构建本文所设想的bcma car的可变轻链的说明性例子包括但不限于seq id no:7中所示的氨基酸序列。
[0221]
本文提供的bcma特异性结合结构域还包含一、二、三、四、五或六个cdr。此类cdr可以是非人cdr或从轻链的cdrl1、cdrl2和cdrl3以及重链的cdrh1、cdrh2和cdrh3中选择的改变的非人cdr。在某些实施方案中，bcma特异性结合结构域包含(a)含有轻链cdrl1、轻链cdrl2和轻链cdrl3的轻链可变区，以及(b)含有重链cdrh 1、重链cdrh 2和重链cdrh 3的重链可变区。5.3.2.接头
[0222]
在某些实施方案中，本文所设想的car可以包含各种结构域之间的接头残基，例如为了分子的适当间距和构象而添加的接头残基。在特定实施方案中，所述接头是可变区连接序列。“可变区连接序列”是连接vh和v
l
结构域的氨基酸序列，并且提供与两个子结合结构域的相互作用相容的间隔子功能，使得所得的多肽保持对于与包含相同轻链和重链可变区的抗体的靶分子相同的靶分子的特异性结合亲和力。本文所设想的car可以包含一、二、三、四或五个或更多个接头。在特定实施方案中，接头的长度是约1至约25个氨基酸、约5至约20个氨基酸或约10至约20个氨基酸或任何介于中间长度的氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个或更多个氨基酸。
[0223]
接头的说明性例子包括甘氨酸聚合物(g)n；甘氨酸-丝氨酸聚合物(g
1-5s1-5
)n，其中n是至少一、二、三、四或五的整数；甘氨酸-丙氨酸聚合物；丙氨酸-丝氨酸聚合物；以及本领域已知的其他柔性接头。甘氨酸和甘氨酸-丝氨酸聚合物是相对非结构化的，因此可以充当融合蛋白(如本文所述的car)的结构域之间的中性系链。甘氨酸接近的空间甚至比丙氨酸显著大，并且比侧链较长的残基受到的限制小得多(参见scheraga,rev.computational chem.11173-142(1992))。普通熟练技术人员将认识到，在特定实施方案中car的设计可以包括全部或部分柔性的接头，使得所述接头可以包括柔性接头以及赋予较低柔性结构以提供所需car结构的一个或多个部分。
[0224]
其他示例性接头包括但不限于以下氨基酸序列：ggg；dgggs(seq id no:12)；tgekp(seq id no:13)(参见例如，liu等人,pnas 5525-5530(1997))；ggrr(seq id no:14)(pomerantz等人1995,同上)；(ggggs)n，其中n＝1、2、3、4或5，并且其中ggggs被标识为seq id no:15(kim等人,pnas 93,1156-1160(1996.)；egkssgsgseskvd(seq id no:16)(chaudhary等人,1990,proc.natl.acad.sci.u.s.a.87:1066-1070)；kesgsvsseqlaqfrsld(seq id no:17)(bird等人,1988,science242:423-426)；ggrrgggs(seq id no:18)；lrqrdgerp(seq id no:19)；lrqkdgggserp(seq id no:20)；lrqkd(gggs)2erp(seq id no:21)。可替代地，可以使用能够对dna结合位点和肽本身二者进行建模的计算机程序(desjarlais和berg,pnas 90:2256-2260(1993),pnas 91:11099-11103(1994))或通过噬菌体展示方法合理地设计柔性接头。在一个实施方案中，所述接头包含以下氨基酸序列：gstsgsgkpgsgegstkg(seq id no:22)(cooper等人,blood,101(4):1637-1644(2003))。5.3.3.间隔子结构域
[0225]
在特定实施方案中，在car的结合结构域之后是一个或多个“间隔子结构域”，其是
指这样的区域，所述区域使抗原结合结构域远离效应细胞表面以实现适当的细胞/细胞接触、抗原结合和激活(patel等人,gene therapy,1999；6:412-419)。间隔子结构域可以源自天然、合成、半合成或重组来源。在某些实施方案中，间隔子结构域是免疫球蛋白的一部分，包括但不限于一个或多个重链恒定区，例如，ch2和ch3。所述间隔子结构域可以包含天然存在的免疫球蛋白铰链区或改变的免疫球蛋白铰链区的氨基酸序列。
[0226]
在一个实施方案中，间隔子结构域包含igg1或igg4的ch2和ch3结构域。5.3.4.铰链结构域
[0227]
在car的结合结构域之后通常是一个或多个“铰链结构域”，其在将抗原结合结构域远离效应细胞表面定位以实现适当的细胞/细胞接触、抗原结合和激活中起作用。car通常在结合结构域与跨膜结构域(tm)之间包含一个或多个铰链结构域。所述铰链结构域可以源自天然、合成、半合成或重组来源。所述铰链结构域可以包含天然存在的免疫球蛋白铰链区或改变的免疫球蛋白铰链区的氨基酸序列。
[0228]“改变的铰链区”是指(a)具有高达30％氨基酸变化的天然存在的铰链区(例如，高达25％、20％、15％、10％或5％的氨基酸取代或缺失)，(b)具有高达30％氨基酸变化(例如，高达25％、20％、15％、10％或5％氨基酸取代或缺失)的长度为至少10个氨基酸(例如，至少12、13、14或15个氨基酸)的天然存在的铰链区的一部分，或(c)包含核心铰链区的天然存在的铰链区的一部分(其长度可以是4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个，或至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸)。在某些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白铰链区中的一个或多个半胱氨酸残基可以被一个或多个其他氨基酸残基(例如，一个或多个丝氨酸残基)取代。改变的免疫球蛋白铰链区可以可替代地或另外地由另一个氨基酸残基(例如，丝氨酸残基)取代野生型免疫球蛋白铰链区的脯氨酸残基。
[0229]
适用于本文所述的car的其他说明性铰链结构域包括源自1型膜蛋白(如cd8α、cd4、cd28和cd7)的细胞外区域的铰链区，其可能是来自这些分子的野生型铰链区或可以是经改变的。在另一个实施方案中，所述铰链结构域包含cd8α铰链区。5.3.5.跨膜结构域
[0230]
跨膜(tm)结构域是car的一部分，其融合了细胞外结合部分和细胞内信号传导结构域，并将car锚定到免疫效应细胞的质膜上。所述tm结构域可以源自天然、合成、半合成或重组来源。所述tm结构域可以源自以下项(即，包含以下项的至少一个或多个跨膜区)：t细胞受体的α、β或ζ链、cd3ε、cd3ζ、cd4、cd5、cd8α、cd9、cd16、cd22、cd27、cd28、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、cd152、cd154和pd-1。在特定实施方案中，所述tm结构域是合成的并且主要包含疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。
[0231]
在一个实施方案中，本文所设想的car包含源自cd8α的tm结构域。在另一个实施方案中，本文所设想的car包含源自cd8α的tm结构域以及连接tm结构域和car的细胞内信号传导结构域的短寡肽或多肽接头，优选地其长度在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸之间。基于甘氨酸-丝氨酸的接头提供了特别合适的接头。5.3.6.细胞内信号传导结构域
[0232]
在特定实施方案中，本文所设想的car包含细胞内信号传导结构域。“细胞内信号传导结构域”是指car的一部分，其参与将有效bcma car与人bcma多肽结合的信息转导至免疫效应细胞内部，以引发效应细胞功能，例如激活、细胞因子产生、增殖和细胞毒性活性，包
括向car结合的靶细胞释放细胞毒性因子或使用抗原与细胞外car结构域结合引发的其他细胞应答。
[0233]
术语“效应子功能”是指免疫效应细胞的特化功能。t细胞的效应子功能例如可以是溶细胞活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。因此，术语“细胞内信号传导结构域”是指蛋白质中转导效应子功能信号并引导细胞执行特化功能的部分。虽然通常可以采用完整的细胞内信号传导结构域，但是在多种情况下不需要使用整个结构域。就使用细胞内信号传导结构域的截短部分而言，这样的截短部分可以用于代替整个结构域，只要它转导效应子功能信号即可。术语细胞内信号传导结构域意在包括细胞内信号传导结构域中足以转导效应子功能信号的任何截短部分。
[0234]
已知仅通过tcr产生的信号不足以完全激活t细胞，并且还需要次级或共刺激信号。因此，t细胞激活可以说是由两类不同的细胞内信号传导结构域介导的：通过tcr(例如，tcr/cd3复合物)启动抗原依赖性初级激活的初级信号传导结构域和以非抗原依赖性方式作用以提供次级或共刺激信号的共刺激信号传导结构域。在某些实施方案中，本文所设想的car包含细胞内信号传导结构域，其含有一个或多个“共刺激信号传导结构域”和“初级信号传导结构域”[0235]
初级信号传导结构域以刺激方式或以抑制方式调节tcr复合物的初级激活。以刺激方式起作用的初级信号传导结构域可以含有信号传导基序(其被称为免疫受体酪氨酸激活基序或itam)。
[0236]
本文所提供的主题中特别使用的含有itam的初级信号传导结构域的例子包括源自tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd3ζ、cd22、cd79a、cd79b和cd66d的那些。在特定实施方案中，car包含cd3ζ初级信号传导结构域和一个或多个共刺激信号传导结构域。所述细胞内初级信号传导结构域和共刺激信号传导结构域可以以任何顺序串联连接至跨膜结构域的羧基末端。
[0237]
本文所设想的car包含一个或多个共刺激信号传导结构域，以增强表达car受体的t细胞的功效和扩增。如本文所用，术语“共刺激信号传导结构域”或“共刺激结构域”是指共刺激分子的细胞内信号传导结构域。共刺激分子是除了抗原受体或fc受体之外的细胞表面分子，其在结合抗原时提供t淋巴细胞的有效激活和功能所需的第二信号。此类共刺激分子的说明性例子包括card11、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54(icam)、cd83、cd134(ox40)、cd137(4-1bb)、cd150(slamf1)、cd152(ctla4)、cd223(lag3)、cd270(hvem)、cd273(pd-l2)、cd274(pd-l1)、cd278(icos)、dap10、lat、nkd2c slp76、trim和zap70。在一个实施方案中，car包含选自cd28、cd137和cd134的一个或多个共刺激信号传导结构域以及cd3ζ初级信号传导结构域。
[0238]
在另一个实施方案中，car包含cd28和cd137共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。
[0239]
在又另一个实施方案中，car包含cd28和cd134共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。
[0240]
在一个实施方案中，car包含cd137和cd134共刺激信号传导结构域和cd3ζ初级信号传导结构域。
[0241]
在特定实施方案中，本文所设想的car包含与在b细胞上表达的bcma多肽(例如，在
人b细胞上表达的人bcma)特异性结合的鼠抗bcma抗体或其抗原结合片段。
[0242]
在一个实施方案中，car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)鼠抗bcma scfv；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：t细胞受体的α、β或ζ链、cd3ε、cd3ζ、cd4、cd5、cd8α、cd9、cd 16、cd22、cd27、cd28、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd 134、cd137、cd152、cd 154和pd1；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：card11、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54(icam)、cd83、cd134(ox40)、cd137(4-1bb)、cd150(slamf1)、cd152(ctla4)、cd223(lag3)、cd270(hvem)、cd273(pd-l2)、cd274(pd-l1)、cd278(icos)、dap10、lat、nkd2c slp76、trim和zap70；以及来自tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd3ζ、cd22、cd79a、cd79b和cd66d的初级信号传导结构域。
[0243]
在一个实施方案中，car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)鼠抗bcma scfv；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：t细胞受体的α、β或ζ链、cd3ε、cd3ζ、cd4、cd5、cd8α、cd9、cd 16、cd22、cd27、cd28、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd 134、cd137、cd152、cd 154和pd1；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：card11、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54(icam)、cd83、cd134(ox40)、cd137(4-1bb)、cd150(slamf1)、cd152(ctla4)、cd223(lag3)、cd270(hvem)、cd273(pd-l2)、cd274(pd-l1)、cd278(icos)、dap10、lat、nkd2c slp76、trim和zap70；以及来自选自以下的多肽的一个或多个初级信号传导结构域：tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd3ζ、cd22、cd79a、cd79b和cd66d。
[0244]
在一个实施方案中，car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)鼠抗bcma scfv；选自以下的铰链结构域：igg1铰链/ch2/ch3、igg4铰链/ch2/ch3和cd8α铰链；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：t细胞受体的α、β或ζ链、cd3ε、cd3ζ、cd4、cd5、cd8α、cd9、cd 16、cd22、cd27、cd28、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd 134、cd137、cd152、cd 154和pd1；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：card11、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54(icam)、cd83、cd134(ox40)、cd137(4-1bb)、cd150(slamf1)、cd152(ctla4)、cd223(lag3)、cd270(hvem)、cd273(pd-l2)、cd274(pd-l1)、cd278(icos)、dap10、lat、nkd2c slp76、trim和zap70；以及来自tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd3ζ、cd22、cd79a、cd79b和cd66d的初级信号传导结构域。
[0245]
在一个实施方案中，car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)鼠抗bcma scfv；选自以下的铰链结构域：igg1铰链/ch2/ch3、igg4铰链/ch2/ch3和cd8α铰链；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：t细胞受体的α、β或ζ链、cd3ε、cd3ζ、cd4、cd5、cd8α、cd9、cd 16、cd22、cd27、cd28、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd 134、cd137、cd152、cd 154和pd1；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：card11、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54(icam)、cd83、cd134(ox40)、cd137(4-1bb)、cd150(slamf1)、cd152(ctla4)、cd223(lag3)、cd270(hvem)、cd273(pd-l2)、cd274(pd-l1)、cd278(icos)、dap10、lat、nkd2c slp76、trim和zap70；以及来自选自以下的多肽的一个或多个初级信号传导结构域：tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd3ζ、cd22、cd79a、cd79b和cd66d。
[0246]
在一个实施方案中，car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)鼠抗bcma scfv；选自以下的铰链结构域：igg1铰链/ch2/ch3、igg4铰链/ch2/ch3和cd8α铰链；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：t细胞受体的α、β或ζ链、cd3ε、cd3ζ、cd4、cd5、cd8α、cd9、cd 16、cd22、
cd27、cd28、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd 134、cd137、cd152、cd 154和pd1；将tm结构域连接至car的细胞内信号传导结构域的短寡肽或多肽接头，优选地长度在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸之间；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：card11、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54(icam)、cd83、cd134(ox40)、cd137(4-1bb)、cd150(slamf1)、cd152(ctla4)、cd223(lag3)、cd270(hvem)、cd273(pd-l2)、cd274(pd-l1)、cd278(icos)、dap10、lat、nkd2c slp76、trim和zap70；以及来自tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd3ζ、cd22、cd79a、cd79b和cd66d的初级信号传导结构域。
[0247]
在一个实施方案中，car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)鼠抗bcma scfv；选自以下的铰链结构域：igg1铰链/ch2/ch3、igg4铰链/ch2/ch3和cd8α铰链；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：t细胞受体的α、β或ζ链、cd3ε、cd3ζ、cd4、cd5、cd8α、cd9、cd 16、cd22、cd27、cd28、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd 134、cd137、cd152、cd 154和pd1；将tm结构域连接至car的细胞内信号传导结构域的短寡肽或多肽接头，优选地长度在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸之间；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：card11、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54(icam)、cd83、cd134(ox40)、cd137(4-1bb)、cd150(slamf1)、cd152(ctla4)、cd223(lag3)、cd270(hvem)、cd273(pd-l2)、cd274(pd-l1)、cd278(icos)、dap10、lat、nkd2c slp76、trim和zap70；以及来自选自以下的多肽的一个或多个初级信号传导结构域：tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd3ζ、cd22、cd79a、cd79b和cd66d。
[0248]
在特定实施方案中，car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)的鼠抗bcma scfv；含有igg1铰链/ch2/ch3多肽和cd8α多肽的铰链结构域；含有约3至约10个氨基酸的多肽接头的cd8α跨膜结构域；cd137细胞内共刺激信号传导结构域；以及cd3ζ初级信号传导结构域。
[0249]
在特定实施方案中，car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)的鼠抗bcma scfv；含有cd8α多肽的铰链结构域；含有约3至约10个氨基酸的多肽接头的cd8α跨膜结构域；cd134细胞内共刺激信号传导结构域；以及cd3ζ初级信号传导结构域。
[0250]
在特定实施方案中，car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)的鼠抗bcma scfv；含有cd8α多肽的铰链结构域；含有约3至约10个氨基酸的多肽接头的cd8α跨膜结构域；cd28细胞内共刺激信号传导结构域；以及cd3ζ初级信号传导结构域。
[0251]
在特定实施方案中，car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)的鼠抗bcma scfv；含有cd8α多肽的铰链结构域；cd8α跨膜结构域；cd137(4-1bb)细胞内共刺激信号传导结构域；以及cd3ζ初级信号传导结构域。
[0252]
此外，与未修饰的t细胞或经修饰以表达其他car的t细胞相比，本文所设想的car的设计使得表达所述car的t细胞具有更好的扩增、长期持久性和可耐受的细胞毒性特性。5.4.多肽
[0253]
本公开文本部分地设想了car多肽及其片段、包含所述多肽及其片段的细胞和组合物以及表达多肽的载体。在特定实施方案中，提供了一种包含如seq id no:9中所示的一个或多个car的多肽。
[0254]
除非有相反规定，否则“多肽”、“多肽片段”、“肽”和“蛋白质”可以互换使用，并且
根据即作为氨基酸序列的常规意义来使用。多肽不限于特定长度，例如，它们可以包含全长蛋白质序列或全长蛋白质的片段，并且可以包括所述多肽的翻译后修饰(例如糖基化、乙酰化、磷酸化等)以及本领域已知的其他修饰(天然存在的和非天然存在的修饰)。在各种实施方案中，本文所设想的car多肽包含蛋白质的n末端的信号(或先导)序列，其在共翻译或翻译后指导蛋白质的转移。本文所公开的car中有用的合适的信号序列的说明性例子包括但不限于igg1重链信号序列和cd8α信号序列。多肽可以使用各种熟知的重组和/或合成技术中的任一种来制备。本文所设想的多肽特别地涵盖本公开文本的car，或具有如本文所公开的car的一个或多个氨基酸的缺失、添加和/或取代的序列。
[0255]
如本文所使用的“分离的肽”或“分离的多肽”等是指在体外从细胞环境以及从与细胞的其他组分的缔合中分离和/或纯化肽或多肽分子，即其与体内物质无显著缔合。类似地，“分离的细胞”是指已从体内组织或器官获得的且基本上不含细胞外基质的细胞。
[0256]
多肽包括“多肽变体”。多肽变体可以在一个或多个取代、缺失、添加和/或插入方面不同于天然存在的多肽。此类变体可以是天然存在的或者可以是合成产生的，例如通过修饰上述一个或多个多肽序列产生。例如，在特定实施方案中，可以期望通过将一个或多个取代、缺失、添加和/或插入引入至car多肽的结合结构域、铰链、tm结构域、共刺激信号传导结构域或初级信号传导结构域中来改进car的结合亲和力和/或其他生物特性。在某些实施方案中，此类多肽包括与其具有至少约65％、70％、75％、85％、90％、95％、98％或99％氨基酸同一性的多肽。
[0257]
多肽包括“多肽片段”。多肽片段是指具有天然存在的或重组产生的多肽的氨基末端缺失、羧基末端缺失和/或内部缺失或取代的多肽，其可以是单体或多聚体。在某些实施方案中，多肽片段可以包含长度为至少5至约500个氨基酸的氨基酸链。应理解，在某些实施方案中，片段是至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、150、200、250、300、350、400或450个氨基酸。特别有用的多肽片段包括功能结构域，包括抗原结合结构域或抗体片段。在鼠抗bcma(例如，人bcma)抗体的情况下，有用的片段包括但不限于：重链或轻链的cdr区、cdr3区；重链或轻链的可变区；抗体链或可变区的一部分，其包含两个cdr；等等。
[0258]
所述多肽也可以在框内融合或者为了方便合成、纯化或鉴定所述多肽或为了增强所述多肽与固体支持物的结合而与接头或其他序列(例如，聚his)缀合。
[0259]
如上所述，本公开文本的多肽可以以多种方式改变，包括氨基酸取代、缺失、截短和插入。用于此类操作的方法在本领域中是熟知的。例如，参考多肽的氨基酸序列变体可以通过dna中的突变来制备。用于诱变和核苷酸序列改变的方法在本领域是熟知的。参见例如，kunkel(1985,proc.natl.acad.sci.usa.82:488-492)、kunkel等人,(1987,methods in enzymol,154:367-382)、美国专利号4,873,192、watson,j.d.等人,(molecular biology of the gene,第四版,benjamin/cummings,menlo park,calif.,1987)以及其中引用的参考文献。关于不影响目的蛋白质的生物活性的适当氨基酸取代的指导可以在dayhoff等人,(1978)atlas of protein sequence and structure(natl.biomed.res.found.,washington,d.c.)的模型中找到。
[0260]
在某些实施方案中，变体将含有保守取代。“保守取代”是这样的取代，其中氨基酸
被具有类似特性的另一种氨基酸取代，使得肽化学领域的技术人员可以期望所述多肽的二级结构和亲水性质基本不变。可以对本公开文本的多核苷酸和多肽的结构进行修饰，并且仍然获得编码具有所需特征的变体或衍生多肽的功能分子。当需要改变多肽的氨基酸序列以产生等效的或甚至改进的变体多肽时，例如，本领域技术人员可以改变编码dna序列的一个或多个密码子(例如，根据表2)。表2-氨基酸密码子
[0261]
使用本领域熟知的计算机程序(如dnastar
tm
软件)，可以找到确定在不消除生物活性的情况下哪些氨基酸残基可以被取代、插入或缺失的指导。优选地，本文所公开的蛋白质变体中的氨基酸变化是保守氨基酸变化，即类似带电或不带电氨基酸的取代。保守氨基酸变化涉及与其侧链相关的氨基酸家族中的一个氨基酸的取代。天然存在的氨基酸通常分为四个家族：酸性(天冬氨酸、谷氨酸)、碱性(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、非极性(丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)和不带电的极性(甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)氨基酸。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有时被共同分类为芳族氨基酸。在肽或蛋白质中，氨基酸的合适保守取代是本领域技术人员已知的，并且通常可以在不改变所得分子的生物活性的情况下进行。本领域技术人员认识到，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代不会显著改变生物活性(参见例如，watson等人molecular biology of the gene,第4版,1987,the benjamin/cummings pub.co.,第224页)。示例性保守取代描述于美国临时专利申请号61/241,647中，将其公开内容通过引用并入本文。
[0262]
在进行此类改变时，可以考虑氨基酸的亲水性指数。本领域通常理解亲水性氨基酸指数在赋予蛋白质的交互生物功能方面的重要性(kyte和doolittle，1982，通过引用并入本文)。每种氨基酸都根据其疏水性和电荷特征被分配亲水性指数(kyte和doolittle，1982)。这些值是：异亮氨酸( 4.5)；缬氨酸( 4.2)；亮氨酸( 3.8)；苯丙氨酸( 2.8)；半胱氨酸/半胱氨酸( 2.5)；甲硫氨酸( 1.9)；丙氨酸( 1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；以及精氨酸(-4.5)。
[0263]
本领域已知某些氨基酸可以被具有相似亲水性指数或得分的其他氨基酸取代，并且仍导致具有相似生物活性的蛋白质，即仍获得生物学功能上等同的蛋白质。在进行此类改变时，优选亲水性指数在
±
2内的氨基酸、特别优选在
±
1内的氨基酸、以及甚至更特别优选在
±
0.5内的氨基酸的取代。在本领域中还应理解，可以基于亲水性有效地进行类似氨基酸的取代。
[0264]
如在美国专利号4,554,101中详述的，已将以下亲水性值分配给氨基酸残基：精氨酸( 3.0)；赖氨酸( 3.0)；天冬氨酸( 3.0
±
1)；谷氨酸( 3.0
±
1)；丝氨酸( 0.3)；天冬酰胺( 0.2)；谷氨酰胺( 0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5
±
1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。应理解，氨基酸可以被另一种具有类似亲水性值的氨基酸取代，并且仍然获得生物等效的、特别是免疫等效的蛋白质。在此类改变中，优选亲水性值在
±
2内的氨基酸、特别优选在
±
1内的氨基酸、以及甚至更特别优选在
±
0.5内的氨基酸的取代。
[0265]
如上所述，氨基酸取代可以基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如，它们的疏水性、亲水性、电荷、大小等。
[0266]
多肽变体进一步包括糖基化形式、与其他分子的聚集缀合物以及与不相关化学部分的共价缀合物(例如，聚乙二醇化分子)。如本领域所知，共价变体可以通过将功能性连接至在氨基酸链中或在n或c末端残基处发现的基团来制备。变体还包括等位基因变体、物种变体和突变蛋白。不影响蛋白质的功能活性的区域的截短或缺失也是变体。
[0267]
在一个实施方案中，当需要表达两个或更多个多肽时，编码它们的多核苷酸序列可以通过如本文别处所讨论的ires序列隔开。在另一个实施方案中，两个或更多个多肽可以表达为包含一个或多个自切割多肽序列的融合蛋白。
[0268]
本文所公开的多肽包括融合多肽。在某些实施方案中，提供了融合多肽(例如，car)和编码融合多肽的多核苷酸。融合多肽和融合蛋白是指具有至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个或更多个多肽区段的多肽。融合多肽通常从c末端连接至n末端，但它们也可以从c末端连接至c末端、从n末端连接至n末端或从n末端连接至c末端。所述融合蛋白的多肽可以是任何顺序或指定顺序。融合多肽或融合蛋白还可以包含经保守修饰的变体、多态性变体、等位基因、突变体、子序列和种间同源物，只要保留所述融合多肽的所需转录活性即可。融合多肽可以通过化学合成方法或通过两个部分之间的化学连接产生，或者通常可以使用其他标准技术制备。如本文其他地方所讨论的，构成融合多肽的连接的dna序列可操作地连接至合适的转录或翻译控制元件。
[0269]
在一个实施方案中，融合配偶体包含有助于以高于天然重组蛋白的产量表达所述
蛋白质的序列(表达增强子)。可以选择其他融合配偶体以增加蛋白质的溶解性或使所述蛋白质能够被靶向至所需的细胞内隔室或促进融合蛋白通过细胞膜的运输。
[0270]
融合多肽可以进一步包含本文所述的多肽结构域的每一个之间的多肽切割信号。此外，多肽位点可以被置于任何接头肽序列中。示例性多肽切割信号包括多肽切割识别位点，如蛋白酶切割位点、核酸酶切割位点(例如，罕见的限制酶识别位点、自切割核酶识别位点)和自切割病毒寡肽(参见defelipe和ryan,2004.traffic,5(8)；616-26)。
[0271]
合适的蛋白酶切割位点和自切割肽是技术人员已知的(参见例如，ryan等人,1997.j.gener.virol.78,699-722；scymczak等人(2004)nature biotech.5,589-594)。示例性蛋白酶切割位点包括但不限于马铃薯y病毒属nia蛋白酶(例如，烟草蚀刻病毒蛋白酶)、马铃薯y病毒属hc蛋白酶、马铃薯y病毒属p1(p35)蛋白酶、byovirus nia蛋白酶、byovirus rna-2编码的蛋白酶、口蹄疫病毒l蛋白酶、肠道病毒2a蛋白酶、鼻病毒2a蛋白酶、小rna病毒3c蛋白酶、豇豆花叶病毒组24k蛋白酶、线虫传多面体病毒属24k蛋白酶、rtsv(东格鲁球状病毒)3c样蛋白酶、pyvf(欧洲防风草变黄斑点病毒)3c样蛋白酶、肝素、凝血酶、因子xa和肠激酶的切割位点。在一个实施方案中，由于其高切割严格性，tev(烟草蚀刻病毒)蛋白酶切割位点是优选的，例如exxyxq(g/s)(seq id no:23)，例如enlyfqg(seq id no:24)和enlyfqs(seq id no:25)，其中x表示任何氨基酸(通过tev的切割发生在q与g或q与s之间)。
[0272]
在特定实施方案中，自切割肽包括从马铃薯y病毒属和心病毒属2a肽、fmdv(口蹄疫病病毒)、马鼻炎a病毒、thosea asigna病毒和猪捷申病毒获得的那些多肽序列。
[0273]
在某些实施方案中，自切割多肽位点包含2a或2a样位点、序列或结构域(donnelly等人,2001.j.gen.virol.82:1027-1041)。表3：示例性2a位点包括以下序列：seq id no:26llnfdllklagdvesnpgpseq id no:27tlnfdllklagdvesnpgpseq id no:28llklagdvesnpgpseq id no:29nfdllklagdvesnpgpseq id no:30qllnfdllklagdvesnpgpseq id no:31apvkqtlnfdllklagdvesnpgpseq id no:32vtellyrmkraetycprpllaihptearhkqkivapvkqtseq id no:33lnfdllklagdvesnpgpseq id no:34llaihptearhkqkivapvkqtlnfdllklagdvesnpgpseq id no:35earhkqkivapvkqtlnfdllklagdvesnpgp
[0274]
在某些实施方案中，本文所设想的多肽包括car多肽。5.5.多核苷酸
[0275]
在某些实施方案中，提供了编码一个或多个car多肽的多核苷酸，例如seq id no:10。如本文所用，术语“多核苷酸”或“核酸”是指信使rna(mrna)、rna、基因组rna(grna)、正链rna(rna( ))、负链rna(rna(-))、基因组dna(gdna)、互补dna(cdna)或重组dna。多核苷酸包括单链和双链多核苷酸。优选地，本文所公开的多核苷酸包括与本文所述的任何参考序列具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、
99％或100％序列同一性的多核苷酸或变体(参见例如，序列表)，典型地其中所述变体保持所述参考序列的至少一种生物活性。在各种说明性实施方案中，本公开文本部分地设想了包含表达载体、病毒载体和转移质粒的多核苷酸以及包含其的组合物和细胞。
[0276]
在特定实施方案中，本公开文本提供了如下多核苷酸，其编码多肽的至少约5、10、25、50、100、150、200、250、300、350、400、500、1000、1250、1500、1750或2000个或更多个连续氨基酸残基以及所有中间长度。可以容易地理解，“中间长度”在本文中意指引用值之间的任何长度，如6、7、8、9等；101、102、103等；151、152、153等；201、202、203等。
[0277]
如本文所使用的，术语“多核苷酸变体”和“变体”等是指展示出与参考多核苷酸序列的基本序列同一性的多核苷酸，或在下文定义的严格条件下与参考序列杂交的多核苷酸。这些术语包括如下多核苷酸，其中已经添加或缺失一个或多个核苷酸，或一个或多个核苷酸被与参考多核苷酸相比不同的核苷酸替代。在这一方面，在本领域中很好地理解，可以对参考多核苷酸进行包括突变、添加、缺失和取代的某些改变，由此改变的多核苷酸保留参考多核苷酸的生物功能或活性。
[0278]
如本文所用的陈述“序列同一性”或例如包括“与
……
50％相同的序列”是指在比较窗口内序列在核苷酸对核苷酸的基础上或在氨基酸对氨基酸的基础上相同的程度。因此，可以通过以下方法计算“序列同一性的分比”：在比较窗口内比较两个最佳比对的序列，确定两个序列中出现相同的核酸碱基(例如，a、t、c、g、i)或相同的氨基酸残基(例如，ala、pro、ser、thr、gly、val、leu、ile、phe、tyr、trp、lys、arg、his、asp、glu、asn、cys和met)的位置的数量以得出匹配的位置的数量，使匹配的位置的数量除以比较窗口中的位置总数(即窗口大小)，并且将结果乘以100以得出序列同一性的百分比。包括核苷酸和多肽，其与本文所述的任何参考序列具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性，典型地其中所述多肽变体保持所述参考多肽的至少一种生物活性。
[0279]
用于描述两个或更多个多核苷酸或多肽之间序列关系的术语包括“参考序列”、“比较窗口”、“序列同一性”、“序列同一性的百分比”和“基本同一性”。“参考序列”的长度是至少12，但通常15至18个，并且通常至少25个单体单元，包括核苷酸和氨基酸残基。因为两个多核苷酸可以各自包含(1)这两个核苷酸之间相似的序列(即，仅完整多核苷酸序列的一部分)，以及(2)这两个多核苷酸之间不同的序列，两个(或更多个)多核苷酸之间的序列比较通常通过在“比较窗口”内比较这两个多核苷酸的序列来进行以鉴定和比较具有序列相似性的局部区域。“比较窗口”是指至少6个(通常约50至约100、更通常约100至约150个)连续位置的概念区段，其中在两个序列最佳比对之后将序列与相同数量的连续位置的参考序列进行比较。比较窗口可以包含与参考序列(不包括添加或缺失)相比约20％或更少的添加或缺失(即空位)，以进行两个序列的最佳比对。可以通过以下方式进行序列的最佳比对以比对比较窗口：算法的计算机化实现(美国威斯康星州麦迪逊科学大道575号的genetics computer group，威斯康星州遗传学软件包7.0版中的gap、bestfit、fasta和tfasta)或检查和由所选择的各种方法中的任一种产生的最佳比对(即，在比较窗口内产生最高同源性百分比)。还可以参考blast程序家族，例如像altschul等人,1997,nucl.acids res.25:3389所披露的。序列分析的详细讨论可以在ausubel等人,current protocols in molecular biology,john wiley&sons inc,1994-1998,第15章第19.3单元中找到。
[0280]
如本文所用，“分离的多核苷酸”是指已经从天然存在的状态中其两侧的序列纯化的多核苷酸，例如已从序列移取的dna片段，所述序列通常与所述片段相邻。“分离的多核苷酸”也指互补dna(cdna)、重组dna或自然界中不存在的且已经由人手工制备的其他多核苷酸。
[0281]
描述多核苷酸方向的术语包括：5’(通常多核苷酸的末端具有游离磷酸基团)和3’(通常多核苷酸的末端具有游离羟基(oh)基团)。多核苷酸序列可以在5’至3’方向或3’至5’方向上进行注释。对于dna和mrna，5’至3’链被称为“有义”、“正”或“编码”链，因为其序列与前信使(前mrna)的序列相同[但rna中的尿嘧啶(u)代替dna中的胸腺嘧啶(t)]。对于dna和mrna，由rna聚合酶转录的互补3’至5’链被称为“模板”、“反义”、“负”或“非编码”链。如本文所用，术语“反向”是指以3’至5’方向书写的5’至3’序列或以5’至3’方向书写的3’至5’序列。
[0282]
术语“互补的”和“互补性”是指与碱基配对规则相关的多核苷酸(即核苷酸序列)。例如，dna序列5'a g t c a t g 3’的互补链是3't c a g t a c 5’。后一个序列通常被写成5’端在左边且3’端在右边的反向互补体：5’c a t g a c t 3’。与其反向互补体相等的序列称为回文序列。互补性可以是“部分的”，即根据碱基配对规则，只有一部分核酸的碱基是匹配的。或者，核酸之间可以存在“完整”或“完全”互补性。
[0283]
此外，本领域普通技术人员将理解，由于遗传密码的简并性，因此存在许多编码一个多肽或其变体片段的核苷酸序列，如本文所述。其中一些多核苷酸与任何天然基因的核苷酸序列具有最小的同源性。尽管如此，由于密码子使用的差异而变化的多核苷酸是本公开文本特别考虑的，例如被优化用于人和/或灵长类密码子选择的多核苷酸。此外，还可以使用包含本文提供的多核苷酸序列的基因的等位基因。等位基因是内源基因，其由于一个或多个突变(如核苷酸的缺失、添加和/或取代)而改变。
[0284]
如本文所用的术语“核酸盒”是指载体内的基因序列，其可以表达rna，随后表达蛋白质。所述核酸盒包含目的基因，例如car。所述核酸盒在载体内在位置和顺序上的取向使得所述盒中的核酸可以转录成rna，并且在必要时翻译成蛋白质或多肽，进行对于在转化的细胞中的活性所需的适当翻译后修饰，并通过靶向至适当的细胞内隔室或分泌至细胞外隔室中而转运至用于生物活性的适当隔室。优选地，所述盒使其3’和5’端适合于准备插入载体中，例如，其在两端具有限制性内切核酸酶位点。在一个实施方案中，所述核酸盒含有用于治疗b细胞恶性肿瘤的嵌合抗原受体的序列。所述盒可以被移取并作为单个单元插入质粒或病毒载体中。
[0285]
在特定实施方案中，多核苷酸包含至少一个目的多核苷酸。如本文所用，术语“目的多核苷酸”是指插入期望表达的表达载体中的编码多肽(即，目的多肽)的多核苷酸。载体可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个目的多核苷酸。在某些实施方案中，所述目的多核苷酸编码在治疗或预防疾病或障碍中提供治疗效果的多肽。目的多核苷酸和由其编码的多肽包括编码野生型多肽及其功能变体和片段的多核苷酸。在特定实施方案中，功能变体与相应野生型参考多核苷酸或多肽序列具有至少80％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在某些实施方案中，功能变体或片段具有相应野生型多肽的生物活性的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。
[0286]
在一个实施方案中，所述目的多核苷酸不编码多肽，而是充当转录mirna、sirna或
shrna、核酶或其他抑制性rna的模板。在各种其他实施方案中，多核苷酸包含编码car的目的多核苷酸和一个或多个另外的目的多核苷酸，包括但不限于抑制性核酸序列，其包括但不限于：sirna、mirna、shrna和核酶。
[0287]
如本文所用，术语“sirna”或“短干扰rna”是指短多核苷酸序列，其介导动物中的序列特异性转录后基因沉默、翻译抑制、转录抑制或表观遗传rnai的过程(zamore等人,2000,cell,101,25-33；fire等人,1998,nature,391,806；hamilton等人,1999,science,286,950-951；lin等人,1999,nature,402,128-129；sharp,1999,genes&dev.,13,139-141；以及strauss,1999,science,286,886)。在某些实施方案中，sirna包含具有相同数量的核苷的第一链和第二链；然而，所述第一链和所述第二链是偏离的，使得第一链和第二链上的两个末端核苷不与互补链上的残基配对。在某些情况下，未配对的两个核苷是胸苷残基。sirna应包含与靶基因具有足够同源性的区域，并且就核苷酸而言具有足够的长度，使得sirna或其片段能够介导靶基因的下调。因此，sirna包含至少部分与靶rna互补的区域。在sirna与靶标之间不一定存在完全互补性，但对应关系必须足以使sirna或其切割产物能够指导序列特异性沉默，如通过rnai切割靶rna。在反义链中，与靶标链的互补性或同源性程度是最关键的。虽然特别是在反义链中通常需要完全互补性，但一些实施方案包括一个或多个，但优选10、8、6、5、4、3、2个或更少的关于靶rna的错配。错配在末端区域中最耐受，并且如果存在错配，则优选在一个或多个末端区域中，例如在5'和/或3'端的6、5、4或3个核苷酸内。有义链只需与反义链充分互补即可维持分子的整体双链特征。
[0288]
此外，sirna可以进行修饰或者包含核苷类似物。sirna的单链区域可以进行修饰或者包含核苷类似物，例如发夹结构的一个或多个未配对区域(例如连接两个互补区域的区域)可以具有修饰或核苷类似物。用于例如针对外切核酸酶稳定sirna的一个或多个3’端或5’端或者有利于反义sirna药剂进入risc中的修饰也是有用的。修饰可以包括c3(或c6、c7、c12)氨基接头、硫醇接头、羧基接头、非核苷酸间隔子(c3、c6、c9、c12、无碱基(abasic)、三甘醇、六乙二醇)、特殊生物素或者呈亚磷酰胺形式且具有另一个dmt保护的羟基基团的荧光素试剂，以允许在rna合成过程中进行多重偶联。sirna的每条链的长度可以等于或小于30、25、24、23、22、21或20个核苷酸。所述链的长度优选至少19个核苷酸。例如，每条链的长度可以在21与25个核苷酸之间。优选的sirna具有17、18、19、29、21、22、23、24或25个核苷酸对的双链区域，以及2-3个核苷酸的一个或多个突出端，优选具有2-3个核苷酸的一个或两个3’突出端。
[0289]
如本文所用，术语“mirna”或“微小rna”是指20-22个核苷酸的小非编码rna，通常是从约70个核苷酸的折回rna前体结构(称为前mirna)切除的。根据mirna与靶标之间的互补性程度，mirna以两种方式之一负调节其靶标。首先，与蛋白质编码mrna序列完全或接近完全互补的mirna诱导rna介导的干扰(rnai)途径。mirna通过与其mrna靶标的3’非翻译区(utr)内的不完全互补位点结合来发挥其调节作用，通过与用于rnai途径的复合物类似或可能相同的risc复合物明显地在翻译水平上抑制靶基因转录后表达。与翻译控制一致，使用这种机制的mirna降低了其靶基因的蛋白质水平，但这些基因的mrna水平仅受到最小程度的影响。mirna包括天然存在的mirna以及能够特异性靶向任何mrna序列的人工设计的mirna。例如，在一个实施方案中，技术人员可以设计表达为人mirna(例如，mir-30或mir-21)初级转录物的短发夹rna构建体。这种设计在发夹构建体中添加了drosha加工位点，并
且已被证明极大地提高敲低效率(pusch等人，2004)。发夹茎由22nt的dsrna(例如，反义与所需靶标具有完全互补性)和来自人mir的15-19nt环组成。当与不含微小rna的常规shrna设计相比时，在发夹的一侧或两侧添加mir环和mir30侧接序列导致表达的发夹的drosha和dicer加工的大于10倍增加。增加的drosha和dicer加工转化为更大的sirna/mirna产生和更大的表达的发夹的效力。
[0290]
如本文所用，术语“shrna”或“短发夹rna”是指由单个自互补rna链形成的双链结构。含有与靶基因的编码或非编码序列的一部分相同的核苷酸序列的shrna构建物优先用于抑制。具有相对于靶序列的插入、缺失和单点突变的rna序列也被发现对抑制有效。在抑制性rna与靶基因的部分之间大于90％序列同一性或甚至100％序列同一性是优选的。在某些优选实施方案中，shrna的双链体形成部分的长度是至少20、21或22个核苷酸，例如，大小对应于由dicer依赖性切割产生的rna产物。在某些实施方案中，shrna构建体的长度是至少25、50、100、200、300或400个碱基。在某些实施方案中，shrna构建体的长度是400-800个碱基。shrna构建体对环序列和环大小的变化具有高度耐受性。
[0291]
如本文所用，术语“核酶”是指能够位点特异性切割靶mrna的催化活性rna分子。已经描述了若干种亚型，例如锤头状和发夹状核酶。通过在非催化碱基处用脱氧核糖核苷酸取代核糖核苷酸可以提高核酶的催化活性和稳定性。虽然在位点特异性识别序列处切割mrna的核酶可以用于破坏特定的mrna，但优选使用锤头状核酶。锤头状核酶在与靶mrna形成互补碱基对的侧接区域所决定的位置处切割mrna。唯一的要求是靶mrna具有以下两个碱基的序列：5
′‑
ug-3
′
。锤头状核酶的构建和产生是本领域中熟知的。
[0292]
在某些实施方案中，包含sirna、mirna、shrna或核酶的目的多核苷酸的递送方法包括一个或多个调节序列，例如像强组成型pol iii，例如人u6 snrna启动子、小鼠u6 snrna启动子、人和小鼠h1 rna启动子以及人trna val启动子、或如本文其他地方所述的强组成型pol ii启动子。
[0293]
本文所公开的多核苷酸，无论编码序列本身的长度如何，都可以与如本文其他地方所公开或本领域已知的其他dna序列组合，如启动子和/或增强子、非翻译区(utr)、信号序列、kozak序列、聚腺苷酸化信号、另外的限制酶位点、多克隆位点、内部核糖体进入位点(ires)、重组酶识别位点(例如，loxp、frt和att位点)、终止密码子、转录终止信号和编码自切割多肽、表位标签的多核苷酸，使得其总长度可以相当大地变化。因此设想可以使用几乎任何长度的多核苷酸片段，且总长度优选地受到在预期重组dna方案中制备和使用的容易程度的限制。
[0294]
可以使用本领域已知和可用的各种完善技术中的任一种来制备、操纵和/或表达多核苷酸。为了表达所需的多肽，可以将编码所述多肽的核苷酸序列插入适当的载体中。载体的例子是质粒、自主复制序列和转座因子。另外的示例性载体包括但不限于质粒、噬菌体、粘粒、人工染色体(如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1衍生人工染色体(pac))、噬菌体(如λ噬菌体或m13噬菌体)和动物病毒。可用作载体的动物病毒类别的例子包括但不限于逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(例如，单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒和乳多空病毒(例如，sv40)。表达载体的例子是用于在哺乳动物细胞中表达的pclneo载体(promega)；用于慢病毒在哺乳动物细胞中介导的基因转移和表达的plenti4/v5-dest
tm
、plenti6/v5-dest
tm
和plenti6.2/v5-gw/lacz
(invitrogen)。在特定实施方案中，本文公开的嵌合蛋白的编码序列可以连接至此类表达载体中，以在哺乳动物细胞中表达嵌合蛋白。
[0295]
在一个实施方案中，本文所设想的编码car的载体包含seq id no:36中所示的多核苷酸序列。
[0296]
在特定实施方案中，所述载体是附加型载体或维持在染色体外的载体。如本文所用，术语“附加型”是指能够复制而不整合到宿主的染色体dna中且不从分裂的宿主细胞逐渐丢失的载体，也意味着所述载体在染色体外或附加地复制。所述载体被工程化为含有从淋巴营养性疱疹病毒或γ疱疹病毒、腺病毒、sv40、牛乳头瘤病毒或酵母的dna复制起点或“ori”，特别是对应于ebv的orip的淋巴营养性疱疹病毒或γ疱疹病毒的复制起点的编码序列。在特定方面，所述淋巴营养性疱疹病毒可以是爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、卡波西氏肉瘤疱疹病毒(kshv)、松鼠猴属疱疹病毒(hs)或马立克氏病病毒(mdv)。爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)和卡波西氏肉瘤疱疹病毒(kshv)也是γ疱疹病毒的例子。通常，宿主细胞包含激活复制的病毒复制反式激活蛋白。
[0297]
表达载体中存在的“控制元件”或“调节序列”是指载体的那些非翻译区—复制起点、选择盒、启动子、增强子、翻译起始信号(shine-dalgarno序列或kozak序列)内含子、聚腺苷酸化序列、5’和3'非翻译区—与宿主细胞蛋白质相互作用以进行转录和翻译。此类元件的强度和特异性可以变化。根据所使用的载体系统和宿主，可以使用任何数量的合适的转录和翻译元件，包括遍在启动子和诱导型启动子。
[0298]
在特定实施方案中，用于本文使用的载体包括但不限于表达载体和病毒载体，将包括外源、内源或异源控制序列，如启动子和/或增强子。“内源”控制序列是在基因组中与给定基因天然连接的序列。“外源”控制序列是指如下序列，其通过遗传操纵(即分子生物学技术)与基因并置，使得该基因的转录由连接的增强子/启动子指导。“异源”控制序列是来自不同物种而不是经基因操纵的细胞的外源序列。
[0299]
如本文所用的术语“启动子”是指rna聚合酶所结合的多核苷酸(dna或rna)的识别位点。rna聚合酶启动并转录与启动子可操作地连接的多核苷酸。在特定实施方案中，在哺乳动物细胞中起作用的启动子包括位于转录起始位点上游约25至30个碱基处富含at的区域和/或在转录起点上游70至80个碱基处发现的另一个序列，即其中n可以是任何核苷酸的cncaat区域。
[0300]
术语“增强子”是指dna区段，其含有能够提供增强的转录的序列并且在一些情况下可以独立于其相对于另一控制序列的方向发挥功能。增强子可以与启动子和/或其他增强子元件协同或累加地发挥功能。术语“启动子/增强子”是指含有能够既提供启动子功能又提供增强子功能的序列的dna区段。
[0301]
术语“可操作地连接”是指一种并置，其中所述组分处于允许它们以其预期方式发挥功能的关系中。在一个实施方案中，所述术语是指核酸表达控制序列(如启动子和/或增强子)与第二多核苷酸序列(例如，目的多核苷酸)之间的功能连接，其中表达控制序列指导对应于所述第二序列的核酸的转录。
[0302]
如本文所用，术语“组成性表达控制序列”是指持续或连续允许转录可操作连接的序列的启动子、增强子或启动子/增强子。组成性表达控制序列可以是允许在各种细胞和组织类型中表达的“遍在”启动子、增强子或启动子/增强子，或允许在有限的多种细胞和组织
类型中表达的分别为“细胞特异性”、“细胞类型特异性”、“细胞谱系特异性”或“组织特异性”的启动子、增强子或启动子/增强子。
[0303]
适于在本文提供的特定实施方案中使用的说明性遍在表达控制序列包括但不限于巨细胞病毒(cmv)即刻早期启动子、病毒猿猴病毒40(sv40)(例如，早期或晚期)、莫洛尼鼠白血病病毒(momlv)ltr启动子、劳斯肉瘤病毒(rsv)ltr、单纯疱疹病毒(hsv)(胸苷激酶)启动子、来自牛痘病毒的h5、p7.5和p11启动子、延长因子1-α(ef1a)启动子、早期生长应答因子1(egr1)、铁蛋白h(ferh)、铁蛋白l(ferl)、甘油醛3-磷酸脱氢酶(gapdh)、真核翻译起始因子4a1(eif4a1)、热休克70kda蛋白5(hspa5)、热休克蛋白90kdaβ成员1(hsp90b1)、热休克蛋白70kda(hsp70)、β-驱动蛋白(β-kin)、人rosa 26基因座(irions等人,nature biotechnology 25,1477-1482(2007))、泛素c启动子(ubc)、磷酸甘油酸激酶-1(pgk)启动子、巨细胞病毒增强子/鸡β-肌动蛋白(cag)启动子、β-肌动蛋白启动子以及骨髓增生性肉瘤病毒增强子、阴性对照区缺失的、dl587rev引物结合位点取代的(mnd)启动子(challita等人,j virol.69(2):748-55(1995))。
[0304]
在一个实施方案中，本公开文本的载体包含mnd启动子。
[0305]
在一个实施方案中，本公开文本的载体包含含有人ef1a基因的第一内含子的ef1a启动子。
[0306]
在一个实施方案中，本公开文本的载体包含缺乏人ef1a基因的第一内含子的ef1a启动子。
[0307]
在特定实施方案中，可能需要从t细胞特异性启动子表达包含car的多核苷酸。
[0308]
如本文所用，“条件性表达”可以指任何类型的条件性表达，包括但不限于诱导性表达；抑制性表达；在具有特定生理、生物或疾病状态等的细胞或组织中的表达。此定义并不旨在排除细胞类型或组织特异性表达。某些实施方案提供目的多核苷酸的条件性表达，例如通过以下方法控制表达：使细胞、组织、生物体等经受引起所述多核苷酸表达或引起由目的多核苷酸编码的多核苷酸的表达增加或减少的处理或条件。
[0309]
诱导型启动子/系统的例子包括但不限于类固醇诱导型启动子(如编码糖皮质激素或雌激素受体的基因的启动子(可通过相应的激素处理诱导))、金属硫蛋白(metallothionine)启动子(可通过各种重金属处理诱导)、mx-1启动子(可通过干扰素诱导)、“geneswitch”米非司酮可调节系统(sirin等人,2003,gene,323:67)、cumate诱导型基因开关(wo 2002/088346)、四环素依赖性调节系统等。
[0310]
条件性表达也可以通过使用位点特异性dna重组酶来实现。根据某些实施方案，所述载体包含用于由位点特异性重组酶介导的重组的至少一个(通常两个)位点。如本文所用，术语“重组酶”或“位点特异性重组酶”包括参与涉及一个或多个(例如，二、三、四、五、七、十、十二、十五、二十、三十、五十等)重组位点的重组反应的分割或整合蛋白质、酶、辅因子或相关蛋白质，它们可以是野生型蛋白质(参见landy,current opinion in biotechnology 3:699-707(1993))或其突变体、衍生物(例如，含有重组蛋白序列或其片段的融合蛋白)、片段和变体。适于在本文中使用的重组酶的说明性例子包括但不限于：cre、int、ihf、xis、flp、fis、hin、gin、φc31、cin、tn3解离酶、tndx、xerc、xerd、tnpx、hjc、gin、spcce1和para。
[0311]
所述载体可以包含用于各种位点特异性重组酶中的任一种的一个或多个重组位
点。应理解，用于位点特异性重组酶的靶位点是除整合载体(例如逆转录病毒载体或慢病毒载体)所需的任何位点之外的。如本文所用，术语“重组序列”、“重组位点”或“位点特异性重组位点”是指重组酶识别并结合的特定核酸序列。
[0312]
例如，cre重组酶的一个重组位点是包含34个碱基对的序列的loxp，所述序列包含位于8个碱基对的核心序列的两侧的两个13个碱基对的反向重复序列(充当重组酶结合位点)(参见sauer,b.,current opinion in biotechnology 5:521-527(1994)的图1)。其他示例性loxp位点包括但不限于：lox511(hoess等人,1996；bethke和sauer,1997)、lox5171(lee和saito,1998)、lox2272(lee和saito,1998)、m2(langer等人,2002)、lox71(albert等人,1995)和lox66(albert等人,1995)。
[0313]
用于flp重组酶的合适识别位点包括但不限于：frt(mcleod等人,1996)、f1,f2,f3(schlake和bode,1994)、f4,f5(schlake和bode,1994)、frt(le)(senecoff等人,1988)、frt(re)(senecoff等人,1988)。
[0314]
识别序列的其他例子是attb、attp、attl和attr序列，它们由重组酶λ整合酶(例如，phi-c31)识别。ssr仅介导异型位点attb(长度34bp)与attp(长度39bp)之间的重组(groth等人,2000)。分别针对噬菌体整合酶在细菌基因组和噬菌体基因组上的附接位点命名的attb和attp二者均含有可能被同二聚体结合的不完全反向重复序列(groth等人，2000)。产物位点attl和attr对进一步介导的重组有效地呈惰性(belteki等人，2003)，从而使反应不可逆。对于催化插入，已发现携带attb的dna插入基因组attp位点比attp位点插入基因组attb位点更容易(thyagarajan等人,2001；belteki等人,2003)。因此，典型的策略通过同源重组将携带attp的“对接位点”定位到定义的基因座，然后其与携带attb的传入序列搭档用于插入。
[0315]
如本文所用，“内部核糖体进入位点”或“ires”是指促进内部核糖体直接进入顺反子(蛋白质编码区)的起始密码子(如atg)从而导致基因的非帽依赖性翻译的元件。参见例如，jackson等人,1990.trends biochem sci 15(12):477-83)以及jackson和kaminski.1995.rna 1(10):985-1000。在特定实施方案中，本文所设想的载体包括编码一个或多个多肽的一个或多个目的多核苷酸。在特定实施方案中，为了实现多个多肽中的每一个的有效翻译，所述多核苷酸序列可以由一个或多个ires序列或编码自切割多肽的多核苷酸序列隔开。
[0316]
如本文所用，术语“kozak序列”是指短核苷酸序列，其极大地促进mrna与核糖体的小亚单位的初始结合并增加翻译。共有kozak序列是(gcc)rccatgg，其中r是嘌呤(a或g)(kozak,1986.cell.44(2):283-92以及kozak,1987.nucleic acids res.15(20):8125-48)。在特定实施方案中，本文所设想的载体包含具有共有kozak序列且编码所需多肽(例如，car)的多核苷酸。
[0317]
在一些实施方案中，多核苷酸或含有所述多核苷酸的细胞利用自杀基因(包括诱导型自杀基因)以降低直接毒性和/或不受控制的增殖的风险。在具体的方面，所述自杀基因对含有所述多核苷酸或细胞的宿主没有免疫原性。可以使用的自杀基因的特定例子是胱天蛋白酶-9或胱天蛋白酶-8或胞嘧啶脱氨酶。胱天蛋白酶-9可以使用特异性二聚化学诱导物(cid)激活。
[0318]
在某些实施方案中，载体包含导致本公开文本的免疫效应细胞(例如，t细胞)在体
内易于被阴性选择的基因片段。“阴性选择”意指输注的细胞可以由于个体体内条件的改变而被消除。阴性可选择表型可以由赋予对所施用的药剂(例如，化合物)的敏感性的基因的插入而产生。阴性可选择基因是本领域已知的并且尤其包括以下：单纯疱疹病毒i型胸苷激酶(hsv-i tk)基因(wigler等人,cell 11:223,1977)，其赋予更昔洛韦敏感性；细胞次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(hprt)基因；细胞腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(aprt)基因；以及细菌胞嘧啶脱氨酶(mullen等人,proc.natl.acad.sci.usa.89:33(1992))。
[0319]
在一些实施方案中，经基因修饰的免疫效应细胞(如t细胞)包含进一步含有阳性标记物的多核苷酸，所述阳性标记物使得能够在体外选择具有阴性可选择表型的细胞。所述阳性可选择标记物可以是基因，其在被引入宿主细胞中后表达显性表型，从而允许对携带所述基因的细胞进行阳性选择。这种类型的基因是本领域中已知的，并且尤其包括赋予对潮霉素b耐药性的潮霉素b磷酸转移酶基因(hph)、来自tn5的编码对抗生素g418耐药性的氨基糖苷磷酸转移酶基因(neo或aph)、二氢叶酸还原酶(dhfr)基因、腺苷脱氨酶基因(ada)和多药耐药性(mdr)基因。
[0320]
优选地，所述阳性可选择标记物和所述阴性可选择元件被连接，使得阴性可选择元件的丢失一定也伴随阳性可选择标记物的丢失。甚至更优选地，所述阳性可选择标记物和所述阴性可选择标记物被融合，使得一个标记物的丢失导致另一个标记物的丢失。融合多核苷酸的例子是潮霉素磷酸转移酶-胸苷激酶融合基因(hytk)，所述融合多核苷酸产生多肽作为表达产物，所述多肽赋予上述所需的阳性选择和阴性选择特征。该基因的表达产生多肽，其赋予对于体外阳性选择的潮霉素b耐药性以及对于体内阴性选择的更昔洛韦敏感性。参见lupton s.d.等人,mol.and cell.biology 1 1:3374-3378,1991。此外，在某些实施方案中，编码嵌合受体的多核苷酸位于含有融合基因的逆转录病毒载体中，特别是赋予对于体外阳性选择的潮霉素b耐药性以及对于体内阴性选择的更昔洛韦敏感性的那些，例如在lupton,s.d.等人(1991),同上中所述的hytk逆转录病毒载体。还参见s.d.lupton的pct us91/08442和pct/us94/05601出版物，其描述了通过融合显性阳性可选择标记物与阴性可选择标记物获得的双功能性可选择融合基因的使用。
[0321]
阳性可选择标记物可以例如源自选自hph、nco和gpt的基因获得，并且可阴性选择标记物可以例如源自选自胞嘧啶脱氨酶、hsv-i tk、vzv tk、hprt、aprt和gpt的基因。在具体实施方案中，标记物是双功能性可选择融合基因，其中阳性可选择标记物源自hph或neo，并且阴性可选择标记物源自胞嘧啶脱氨酶或tk基因或可选择标记物。
[0322]
病毒载体
[0323]
在特定实施方案中，将细胞(例如，免疫效应细胞)用编码car的逆转录病毒载体(例如，慢病毒载体)转导。例如，用编码car的载体转导免疫效应细胞，所述car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)的鼠抗bcma抗体或其抗原结合片段，以及cd3ζ、cd28、4-1bb、ox40的细胞内信号传导结构域或其任何组合。因此，这些转导的细胞可以引发car介导的细胞毒性应答。
[0324]
逆转录病毒是用于基因递送的常用工具(miller,2000,nature.357:455-460)。在特定实施方案中，逆转录病毒用于将编码嵌合抗原受体(car)的多核苷酸递送至细胞。如本文所用，术语“逆转录病毒”是指将其基因组rna逆转录成线性双链dna拷贝并随后将其基因组dna共价整合至宿主基因组中的rna病毒。在病毒被整合至宿主基因组中后，将其称为“前
病毒”。前病毒充当rna聚合酶ii的模板，并且指导rna分子的表达，所述rna分子编码产生新病毒颗粒所需的结构蛋白和酶。
[0325]
适于在特定实施方案中使用的说明性逆转录病毒包括但不限于：莫洛尼鼠白血病病毒(mmulv)、莫洛尼鼠肉瘤病毒(momsv)、哈维鼠肉瘤病毒(hamusv)、鼠乳腺肿瘤病毒(mumtv)、长臂猿白血病病毒(galv)、猫白血病病毒(flv)、泡沫病毒属、弗云德鼠白血病病毒、鼠干细胞病毒(mscv)和劳斯肉瘤病毒(rsv)以及慢病毒。
[0326]
如本文所用，术语“慢病毒”是指复杂的逆转录病毒的组(或属)。说明性慢病毒包括但不限于：hiv(人类免疫缺陷病毒；包括hiv 1型和hiv 2型)；梅迪维斯纳病毒(vmv)病毒；山羊关节炎脑炎病毒(caev)；马传染性贫血病毒(eiav)；猫免疫缺陷病毒(fiv)；牛免疫缺陷病毒(biv)；和猿猴免疫缺陷病毒(siv)。在一个实施方案中，利用基于hiv的载体骨架(即，hiv顺式作用序列元件)。在特定实施方案中，慢病毒用于将包含car的多核苷酸递送至细胞。
[0327]
逆转录病毒载体和更特别地慢病毒载体可以用于实施本文公开的特定实施方案。因此，如本文所用的术语“逆转录病毒”或“逆转录病毒载体”意在分别包括“慢病毒”和“慢病毒载体”。
[0328]
术语“载体”在本文中用于指能够转移或转运另一种核酸分子的核酸分子。转移的核酸通常与载体核酸分子连接，例如插入所述载体核酸分子中。载体可以包含引导细胞中自主复制的序列，或者可以包括足以允许整合到宿主细胞dna中的序列。有用的载体包括例如质粒(例如，dna质粒或rna质粒)、转座子、粘粒、细菌人工染色体和病毒载体。有用的病毒载体包括例如复制缺陷型逆转录病毒和慢病毒。
[0329]
如本领域技术人员将清楚，术语“病毒载体”广泛用于指代包括典型地促进核酸分子的转移或整合至细胞的基因组中的病毒来源的核酸元件的核酸分子(例如，转移质粒)，或者指代介导核酸转移的病毒颗粒。病毒颗粒将典型地包括各种病毒组分，并且有时还包括除了一种或多种核酸以外的宿主细胞组分。
[0330]
术语病毒载体可以指能够将核酸转移到细胞中的病毒或病毒颗粒，或者指转移的核酸本身。病毒载体和转移质粒含有主要源自病毒的结构性和/或功能性遗传元件。术语“逆转录病毒载体”是指含有主要源自逆转录病毒的结构性和功能性遗传元件或其部分的病毒载体或质粒。术语“慢病毒载体”是指含有主要源自慢病毒的结构性和功能性遗传元件或其部分(包括ltr)的病毒载体或质粒。术语“杂交载体”是指同时含有逆转录病毒(例如，慢病毒)序列和非慢病毒序列的载体、ltr或其他核酸。在一个实施方案中，杂交载体是指包含用于逆转录、复制、整合和/或包装的逆转录病毒(例如，慢病毒)序列的载体或转移质粒。
[0331]
在特定实施方案中，术语“慢病毒载体”和“慢病毒表达载体”可以用于指慢病毒转移质粒和/或感染性慢病毒颗粒。在本文提及元件如克隆位点、启动子、调节元件、异源核酸等的情况下，应理解，这些元件的序列以rna形式存在于本公开文本的慢病毒颗粒中，并且以dna形式存在于本公开文本的dna质粒中。
[0332]
在前病毒的每一端都是称为“长末端重复序列”或“ltr”的结构。术语“长末端重复序列(ltr)”是指位于逆转录病毒dna两端的碱基对的结构域，在其自然序列的上下文中，其是同向重复序列并且含有u3、r和u5区域。ltr通常为逆转录病毒基因的表达(如基因转录物的促进、启动和聚腺苷酸化)和病毒复制提供功能基础。ltr含有许多调节信号，包括转录控
制元件、聚腺苷酸化信号以及病毒基因组复制和整合所需的序列。病毒ltr分为称为u3、r和u5的三个区域。u3区域含有增强子和启动子元件。u5区域是引物结合位点与r区域之间的序列，并且含有聚腺苷酸化序列。r(重复)区域两侧是u3和u5区域。ltr由u3、r和u5区域构成，并且同时出现在病毒基因组的5'和3'端。与5'ltr相邻的是基因组逆转录所需的序列(trna引物结合位点)和将病毒rna有效包装至颗粒中所需的序列(psi位点)。
[0333]
如本文所用，术语“包装信号”或“包装序列”是指位于逆转录病毒基因组内的序列，所述序列是将病毒rna插入病毒衣壳或颗粒中所需的，参见例如，clever等人,1995.j.of virology,第69卷,第4期；第2101-2109页。一些逆转录病毒载体使用对于病毒基因组衣壳化所需的最小包装信号(也称为psi[ψ]序列)。因此，如本文所用，术语“包装序列”、“包装信号”、“psi”和符号“ψ”是在提及在病毒颗粒形成期间对于逆转录病毒rna链的衣壳化所需的非编码序列时使用的。
[0334]
在各个实施方案中，载体包含经修饰的5’ltr和/或3’ltr。ltr中的一个或两个可以包含一个或多个修饰，包括但不限于一个或多个缺失、插入或取代。通常对3’ltr进行修饰以通过赋予病毒复制缺陷来提高慢病毒或逆转录病毒系统的安全性。如本文所用，术语“复制缺陷”是指不能完全、有效复制从而不产生感染性病毒体的病毒(例如，复制缺陷慢病毒子代)。术语“具有复制能力”是指能够复制使得病毒的病毒复制能够产生感染性病毒体的野生型病毒或突变体病毒(例如，具有复制能力的慢病毒子代)。
[0335]“自失活”(sin)载体是指复制缺陷型载体，例如逆转录病毒或慢病毒载体，其中右(3’)ltr增强子启动子区域即u3区域已被修饰(例如，通过缺失或取代)为防止病毒在第一轮病毒复制后转录。这是因为在病毒复制过程中，右(3’)ltr u3区域被用作左(5’)ltr u3区域的模板，因此，在没有u3增强子启动子的情况下无法产生病毒转录物。在另一个实施方案中，修饰3’ltr使得例如用理想的聚(a)序列替代u5区域。应注意，本文还包括对ltr的修饰，如对3’ltr、5’ltr或3’和5’ltr的修饰。
[0336]
通过用异源启动子替代5’ltr的u3区域来驱动在产生病毒颗粒期间病毒基因组的转录，从而提供另外的安全性增强。可以使用的异源启动子的例子包括例如病毒猿猴病毒40(sv40)(例如，早期或晚期)、巨细胞病毒(cmv)(例如，即刻早期)、莫洛尼鼠白血病病毒(momlv)、罗斯肉瘤病毒(rsv)和单纯疱疹病毒(hsv)(胸苷激酶)启动子。典型的启动子能够以非tat依赖性方式驱动高水平的转录。由于病毒产生系统中没有完整的u3序列，因此这种替代降低了重组产生具有复制能力的病毒的可能性。在某些实施方案中，所述异源启动子在控制病毒基因组转录方式方面具有另外的优点。例如，所述异源启动子可以是诱导型的，使得只有当存在诱导因子时，才会发生病毒基因组的全部或部分转录。诱导因子包括但不限于一种或多种化合物或培养宿主细胞的生理条件(如温度或ph值)。
[0337]
在一些实施方案中，病毒载体包含tar元件。术语“tar”是指位于慢病毒(例如，hiv)ltr的r区域中的“反式激活应答”基因元件。该元件与慢病毒反式激活剂(tat)基因元件相互作用以增强病毒复制。然而，在其中5’ltr的u3区域被异源启动子替代的实施方案中不需要该元件。
[0338]“r区域”是指逆转录病毒ltr内的区域，其从加帽基团的起点(即转录的起点)开始并紧接在聚a束的起点之前结束。r区域也被定义为在两侧侧接u3和u5区域。r区域在逆转录过程中发挥作用，允许将新生dna从基因组的一端转移到另一端。
[0339]
如本文所用，术语“flap元件”是指如下核酸，所述核酸的序列包含逆转录病毒(例如，hiv-1或hiv-2)的中央聚嘌呤束和中央终止序列(cppt和cts)。合适的flap元件描述于美国专利号6,682,907和zennou等人,2000,cell,101:173中。在hiv-1逆转录过程中，正链dna在中央聚嘌呤束(cppt)处的中央起始和在中央终止序列(cts)处的中央终止导致三链dna结构的形成：hiv-1中央dna flap。在不希望受到任何理论的约束的情况下，dna flap可以用作慢病毒基因组核输入的顺式活性决定子，和/或可以增加病毒的滴度。在特定实方案中，逆转录病毒或慢病毒载体骨架包含在载体中目的异源基因的上游或下游的一个或多个flap元件。例如，在特定实施方案中，转移质粒包含flap元件。在一个实施方案中，载体包含从hiv-1分离的flap元件。
[0340]
在一个实施方案中，逆转录病毒或慢病毒转移载体包含一个或多个输出元件。术语“输出元件”是指顺式作用的转录后调节元件，其调节rna转录物从细胞核到细胞的细胞质的转运。rna输出元件的例子包括但不限于人类免疫缺陷病毒(hiv)rev应答元件(rre)(参见例如，cullen等人,1991.j.virol.65:1053；以及cullen等人,1991.cell58:423)和乙型肝炎病毒转录后调节元件(hpre)。通常，rna输出元件位于基因的3’utr内，并且可以作为一个或多个拷贝插入。
[0341]
在特定实施方案中，通过将转录后调节元件、有效的聚腺苷酸化位点和任选地转录终止信号掺入载体中来增加病毒载体中异源序列的表达。多种转录后调节元件可以增加在蛋白质水平下的异源核酸表达，例如，土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(wpre；zufferey等人,1999,j.virol.,73:2886)；乙型肝炎病毒(hpre)中存在的转录后调节元件(huang等人,mol.cell.biol.,5:3864)；等等(liu等人,1995,genes dev.,9:1766)。在特定实施方案中，载体可以包含转录后调节元件，如wpre或hpre。
[0342]
在特定实施方案中，载体缺乏或不包含转录后调节元件(pte)，如wpre或hpre，因为在一些情况下这些元件增加细胞转化的风险和/或不会明显或显著地增加mrna转录物的量或增加mrna稳定性。因此，在一些实施方案中，载体缺乏或不包含pte。在其他实施方案中，由于附加的安全性衡量，载体缺乏或不包含wpre或hpre。
[0343]
指导异源核酸转录物的有效终止和聚腺苷酸化的元件增加异源基因表达。转录终止信号通常被发现于聚腺苷酸化信号的下游。在特定实施方案中，载体包含编码待表达的多肽的多核苷酸的3
′
端的聚腺苷酸化序列。如本文所用的术语“聚a位点”或“聚a序列”表示指导通过rna聚合酶ii得到的新生rna转录物的终止和聚腺苷酸化的dna序列。聚腺苷酸化序列可以通过在编码序列的3
′
端添加聚a尾来促进mrna稳定性，从而有助于提高翻译效率。由于缺乏聚a尾的转录物不稳定且可快速降解，因此需要对重组转录物进行有效的聚腺苷酸化。可以在本文中的载体中使用的聚a信号的说明性例子包括理想的聚a序列(例如，aataaa、attaaa、agtaaa)、牛生长激素聚a序列(bghpa)、兔β-珠蛋白聚a序列(rβgpa)或本领域已知的另一合适的异源或内源聚a序列。
[0344]
在某些实施方案中，逆转录病毒或慢病毒载体进一步包含一个或多个绝缘子元件。绝缘子元件可以有助于保护慢病毒表达的序列(例如治疗性多肽)免受整合位点效应的影响，所述整合位点效应可能是由基因组dna中存在的顺式作用元件介导的并导致转移序列的解除调节的表达(即位置效应；参见例如，burgess-beusse等人,2002,proc.natl.acad.sci.,usa,99:16433；以及zhan等人,2001,hum.genet.,109:471)。在一些
实施方案中，转移载体包含在3
′
ltr处的一个或多个绝缘子元件，并且在前病毒整合到宿主基因组中后，通过复制3
′
ltr，前病毒在5
′
ltr或3
′
ltr处均包含一个或多个绝缘子。用于本文使用的合适的绝缘子包括但不限于鸡β-珠蛋白绝缘子(参见chung等人,1993.cell 74:505；chung等人,1997.pnas 94:575；以及bell等人,1999.cell 98:387，将其通过引用并入本文)。绝缘子元件的例子包括但不限于来自β-珠蛋白基因座的绝缘子，如鸡hs4。
[0345]
根据某些特定实施方案，大多数或所有病毒载体骨架序列源自慢病毒，例如hiv-1。然而，应理解，可以使用许多不同来源的逆转录病毒和/或慢病毒序列，或者可以在不损害转移载体执行本文所述功能的能力的情况下容纳某些慢病毒序列中的组合的且大量的取代和改变。此外，各种慢病毒载体是本领域中已知的，参见naldini等人,(1996a、1996b和1998)；zufferey等人,(1997)；dull等人,1998,美国专利号6,013,516；以及5,994,136，其中许多可以适合于产生本公开文本的病毒载体或转移质粒。
[0346]
在各种实施方案中，本文所述的载体可以包含可操作地连接至编码car多肽的多核苷酸的启动子。所述载体可以具有一个或多个ltr，其中任一ltr包含一个或多个修饰，如一个或多个核苷酸取代、添加或缺失。所述载体可以进一步包含用于提高转导效率(例如，cppt/flap)、病毒包装(例如，psi(ψ)包装信号，rre)的一个或多个辅助元件和/或增加治疗性基因表达的其他元件(例如，聚(a)序列)，并且可以任选地包含wpre或hpre。
[0347]
在特定实施方案中，所述转移载体包含左(5’)逆转录病毒ltr；中央聚嘌呤束/dna flap(cppt/flap)；逆转录病毒输出元件；在t细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的car多肽的多核苷酸；和右(3’)逆转录病毒ltr；以及任选地wpre或hpre。
[0348]
在特定实施方案中，所述转移载体包含左(5’)逆转录病毒ltr；逆转录病毒输出元件；在t细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的car多肽的多核苷酸；右(3’)逆转录病毒ltr；和聚(a)序列；以及任选地wpre或hpre。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种慢病毒载体，其包含：左(5’)ltr；cppt/flap；rre；在t细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的car多肽的多核苷酸；右(3’)ltr；和聚腺苷酸化序列；以及任选地wpre或hpre。
[0349]
在特定实施方案中，本文提供了一种慢病毒载体，其包含：左(5’)hiv-1ltr；psi(ψ)包装信号；cppt/flap；rre；在t细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的car多肽的多核苷酸；右(3’)自失活(sin)hiv-1ltr；和兔β-珠蛋白聚腺苷酸化序列；以及任选地wpre或hpre。
[0350]
在另一个实施方案中，本文提供了一种载体，其包含：至少一个ltr；中央聚嘌呤束/dna flap(cppt/flap)；逆转录病毒输出元件；和在t细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的car多肽的多核苷酸；以及任选地wpre或hpre。
[0351]
在特定实施方案中，本文提供了一种载体，其包含至少一个ltr；cppt/flap；rre；在t细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的car多肽的多核苷酸；和聚腺苷酸化序列；以及任选地wpre或hpre。
[0352]
在特定实施方案中，本文提供了至少一个sin hiv-1ltr；psi(ψ)包装信号；cppt/flap；rre；在t细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的car多肽的多核苷酸；和兔β-珠蛋白聚腺苷酸化序列；以及任选地wpre或hpre。
[0353]
在各种实施方案中，所述载体是整合病毒载体。
[0354]
在各种其他实施方案中，所述载体是附加型或非整合病毒载体。
[0355]
在各种实施方案中，本文所设想的载体包含非整合或整合缺陷型逆转录病毒。在一个实施方案中，“整合缺陷型”逆转录病毒或慢病毒是指具有缺乏将病毒基因组整合到宿主细胞基因组中的能力的整合酶的逆转录病毒或慢病毒。在各种实施方案中，所述整合酶蛋白发生突变以特异性地降低其整合酶活性。无整合能力的慢病毒载体是通过修饰编码整合酶蛋白的pol基因从而产生编码整合缺陷型整合酶的突变pol基因而获得的。此类无整合能力的病毒载体描述于专利申请wo 2006/010834中，将其通过引用以其整体并入本文。
[0356]
适于降低整合酶活性的hiv-1pol基因中的说明性突变包括但不限于：h12n、h12c、h16c、h16v、s81 r、d41a、k42a、h51a、q53c、d55v、d64e、d64v、e69a、k71a、e85a、e87a、d116n、d1161、d116a、n120g、n1201、n120e、e152g、e152a、d35e、k156e、k156a、e157a、k159e、k159a、k160a、r166a、d167a、e170a、h171a、k173a、k186q、k186t、k188t、e198a、r199c、r199t、r199a、d202a、k211a、q214l、q216l、q221 l、w235f、w235e、k236s、k236a、k246a、g247w、d253a、r262a、r263a和k264h。
[0357]
适于降低整合酶活性的hiv-1pol基因中的说明性突变包括但不限于：d64e、d64v、e92k、d116n、d1161、d116a、n120g、n1201、n120e、e152g、e152a、d35e、k156e、k156a、e157a、k159e、k159a、w235f和w235e。
[0358]
在特定实施方案中，整合酶包含d64、d116或e152中一个或多个氨基酸的突变。在一个实施方案中，整合酶包含氨基酸d64、d116和e152中的突变。在特定实施方案中，缺陷型hiv-1整合酶包含d64v突变。
[0359]“宿主细胞”包括在体内、离体或体外用本文公开的重组载体或多核苷酸电穿孔、转染、感染或转导的细胞。宿主细胞可以包括包装细胞、生产细胞和用病毒载体感染的细胞。在特定实施方案中，向需要疗法的受试者施用感染了本文所公开的病毒载体的宿主细胞。在某些实施方案中，术语“靶细胞”与宿主细胞可互换使用，并且是指所需细胞类型的转染、感染或转导的细胞。在特定实施方案中，所述靶细胞是t细胞。
[0360]
为了获得合理的病毒滴度，通常需要大规模生产病毒颗粒。病毒颗粒是通过将转移载体转染至包含病毒结构和/或辅助基因(例如gag、pol、env、tat、rev、vif、vpr、vpu、vpx或nef基因或其他逆转录病毒基因)的包装细胞系中而产生的。
[0361]
如本文所用，术语“包装载体”是指缺乏包装信号且包含编码一、二、三、四或更多个病毒结构和/或辅助基因的多核苷酸的表达载体或病毒载体。通常，所述包装载体被包含在包装细胞中，并经由转染、转导或感染被引入细胞中。用于转染、转导或感染的方法是本领域技术人员熟知的。本文公开的逆转录病毒/慢病毒转移载体可以经由转染、转导或感染被引入包装细胞系中，以产生生产细胞或细胞系。本文公开的包装载体可以通过标准方法(包括例如磷酸钙转染、脂质转染或电穿孔)被引入人细胞或细胞系中。在一些实施方案中，所述包装载体与显性可选择标记物(如新霉素、潮霉素、嘌呤霉素、杀稻瘟菌素(blastocidin)、博来霉素(zeocin)、胸苷激酶、dhfr、gln合成酶或ada)一起被引入细胞中，然后在适当药物的存在下进行选择并分离克隆。可选择标记基因可以与由包装载体编码的基因例如通过ires或自切割病毒肽物理连接。
[0362]
病毒包膜蛋白(env)决定了最终可被由所述细胞系产生的重组逆转录病毒感染并转化的宿主细胞的范围。在慢病毒(如hiv-1、hiv-2、siv、fiv和eiv)的情况下，env蛋白包括
gp41和gp120。优选地，如前所述，本文所公开的包装细胞表达的病毒env蛋白在来自病毒gag和pol基因的单独载体上编码。
[0363]
本文可以采用的逆转录病毒来源的env基因的例子包括但不限于：mlv包膜、10a1包膜、baev、felv-b、rd114、ssav、埃博拉病毒、仙台病毒、fpv(鸡瘟病毒)和流感病毒包膜。同样地，可以使用编码来自以下病毒的包膜的基因：rna病毒(例如，小rna病毒科、杯状病毒科、星状病毒科、披膜病毒科、黄病毒科、冠状病毒科、副粘病毒科、弹状病毒科、丝状病毒科、正粘病毒科、布尼亚病毒科、沙粒病毒科、呼肠孤病毒科、双rna病毒科、逆转录病毒科的rna病毒家族)以及dna病毒(嗜肝dna病毒科、圆环病毒科、细小病毒科、乳多空病毒科、腺病毒科、疱疹病毒科、痘病毒科(poxyiridae)和虹彩病毒科的家族)。代表性的例子包括felv、vee、hfvw、wdsv、sfv、狂犬病病毒、alv、biv、blv、ebv、caev、snv、chtlv、stlv、mpmv、smrv、rav、fusv、mh2、aev、amv、ct10和eiav。
[0364]
在其他实施方案中，用于假型化与本公开文本相关的病毒的包膜蛋白包括但不限于来自以下病毒的任一种：甲型流感(如h1n1、h1n2、h3n2和h5n1(禽流感))、乙型流感、丙型流感病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、轮状病毒、诺沃克病毒组的任何病毒、肠道腺病毒、细小病毒、登革热病毒、猴痘、单股负链病毒(mononegavirale)、狂犬病病毒属如狂犬病病毒、拉各斯蝙蝠病毒、莫科拉病毒、杜文黑基病毒(duvenhage virus)、欧洲蝙蝠病毒1和2以及澳大利亚蝙蝠病毒、暂时热病毒、水泡病毒属、水泡性口炎病毒(vsv)、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒1型和2型、水痘带状疱疹、巨细胞病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、人疱疹病毒(hhv)、人疱疹病毒6型和8型)、人类免疫缺陷病毒(hiv)、乳头瘤病毒、鼠γ疱疹病毒、沙粒病毒(如阿根廷出血热病毒、玻利维亚出血热病毒、萨比亚相关出血热病毒、委内瑞拉出血热病毒、拉沙热病毒、马丘波病毒、淋巴细胞性脉络丛膜脑膜炎病毒(lcmv))、布尼亚病毒科(如克里米亚-刚果出血热病毒、汉坦病毒、引起出血热伴随肾综合征的病毒、里夫特裂谷热病毒)、丝状病毒科(丝状病毒)(包括埃博拉出血热和马尔堡出血热)、黄病毒科(包括kaysanur forest病病毒、鄂木斯克出血热病毒、引起蜱传脑炎的病毒)和副粘病毒科(如亨德拉病毒和尼帕病毒)、大天花和小天花(天花)、甲病毒属(如委内瑞拉马脑炎病毒、东部马脑炎病毒、西部马脑炎病毒、sars相关冠状病毒(sars cov)、西尼罗河病毒和任何引起脑炎的病毒)。
[0365]
在一个实施方案中，本文提供了产生用vsv-g糖蛋白假型化的重组逆转录病毒(例如慢病毒)的包装细胞。
[0366]
如本文所用的术语“假型”或“假型化”是指这样的病毒，其病毒包膜蛋白已被具有优选特征的另一种病毒的病毒包膜蛋白取代。例如，hiv可以用水泡性口炎病毒g蛋白(vsv-g)包膜蛋白假型化，这允许hiv感染更广泛范围的细胞，因为hiv包膜蛋白(由env基因编码)通常将病毒靶向至cd4 呈递细胞。在一个实施方案中，慢病毒包膜蛋白用vsv-g假型化。在一个实施方案中，本文提供了产生用vsv-g包膜糖蛋白假型化的重组逆转录病毒(例如，慢病毒)的包装细胞。
[0367]
如本文所用，术语“包装细胞系”是在提及不含有包装信号但稳定或瞬时表达对于正确包装病毒颗粒所需的病毒结构蛋白和复制酶(例如，gag、pol和env)的细胞系时使用的。可以使用任何合适的细胞系来制备与本公开文本相关的包装细胞。通常，所述细胞是哺乳动物细胞。在特定实施方案中，用于产生包装细胞系的细胞是人细胞。可使用的合适细胞
系包括例如cho细胞、bhk细胞、mdck细胞、c3h 10t1/2细胞、fly细胞、psi-2细胞、bosc 23细胞、pa317细胞、wehi细胞、cos细胞、bsc 1细胞、bsc40细胞、bmt 10细胞、vero细胞、w138细胞、mrc5细胞、a549细胞、ht1080细胞、293细胞、293t细胞、b-50细胞、3t3细胞、nih3t3细胞、hepg2细胞、saos-2细胞、huh7细胞、hela细胞、w163细胞、211细胞和211a细胞。在特定实施方案中，所述包装细胞示293细胞、293t细胞或a549细胞。在另一个具体实施方案中，所述细胞是a549细胞。
[0368]
如本文所用，术语“生产细胞系”是指能够产生重组逆转录病毒颗粒的细胞系，其包含包装细胞系和含有包装信号的转移载体构建体。可以使用常规技术进行感染性病毒颗粒和病毒原液的生产。制备病毒原液的方法是本领域中已知的，并且由例如y.soneoka等人(1995)nucl.acids res.23:628-633和n.r.landau等人(1992)j.virol.66:5110-5113说明。可以使用常规技术从包装细胞收集感染性病毒颗粒。例如，如本领域中所知，可以通过细胞裂解或收集细胞培养物的上清液来收集感染性颗粒。任选地，如果需要，可以纯化收集的病毒颗粒。合适的纯化技术是本领域技术人员熟知的。
[0369]
使用逆转录病毒或慢病毒载体通过病毒感染而非转染递送一个或多个基因或其他多核苷酸序列被称为“转导”。在一个实施方案中，通过感染和前病毒整合将逆转录病毒载体转导至细胞中。在某些实施方案中，如果靶细胞(例如，t细胞)包含使用病毒或逆转录病毒载体通过感染递送至所述细胞的基因或其他多核苷酸序列，则所述靶细胞被“转导”。在特定实施方案中，转导的细胞包含在其细胞基因组中通过逆转录病毒或慢病毒载体递送的一个或多个基因或其他多核苷酸序列。
[0370]
在特定实施方案中，向受试者施用用如本文所公开的表达一个或多个多肽的病毒载体转导的宿主细胞，以治疗和/或预防b细胞恶性肿瘤。关于在基因疗法中使用病毒载体(其可以根据本文中的某些实施方案使用)的其他方法可以在以下文献中找到：例如kay,m.a.(1997)chest 111(6supp.):138s-142s；ferry,n.和heard,j.m.(1998)hum.gene ther.9:1975-81；shiratory,y.等人(1999)liver 19:265-74；oka,k.等人(2000)curr.opin.lipidol.11:179-86；thule,p.m.和liu,j.m.(2000)gene ther.7:1744-52；yang,n.s.(1992)crit.rev.biotechnol.12:335-56；alt,m.(1995)j.hepatol.23:746-58；brody,s.l.和crystal,r.g.(1994)ann.n.y.acad.sci.716:90-101；strayer,d.s.(1999)expert opin.investig.drugs 8:2159-2172；smith-arica,j.r.和bartlett,j.s.(2001)curr.cardiol.rep.3:43-49；以及lee,h.c.等人(2000)nature 408:483-8。5.6.经基因修饰的细胞
[0371]
在特定实施方案中，本文公开了经基因修饰以表达本文所设想的car的细胞，其用于治疗b细胞相关病症。如本文所用，术语“基因工程化”或“基因修饰”是指向细胞中的总遗传物质中添加呈dna或rna的形式的额外的遗传物质。术语“经基因修饰的细胞”、“经修饰的细胞”和“重定向细胞”可互换使用。如本文所用，术语“基因疗法”是指将呈dna或rna形式的额外遗传物质引入细胞中的总遗传物质中，所述额外遗传物质恢复、纠正或修饰基因的表达或者是为了表达治疗性多肽，例如car。
[0372]
在特定实施方案中，本文所设想的car被引入免疫效应细胞中并在其中表达，以将其特异性重定向至目的靶抗原，例如bcma多肽。“免疫效应细胞”是免疫系统中具有一个或多个效应子功能(例如，细胞毒性细胞杀伤活性、细胞因子的分泌、adcc和/或cdc的诱导)的
任何细胞。
[0373]
本公开文本的免疫效应细胞可以是自体(autologous/autogeneic)(“自身”)或非自体(“非自身”，例如同种异体、同基因或异基因)。
[0374]
如本文所用的“自体”是指来自同一受试者的细胞。
[0375]
如本文所用的“同种异体”是指同一物种的细胞，其与所比较的细胞在基因上不同。
[0376]
如本文所用的“同基因”是指不同受试者的细胞，其与所比较的细胞在基因上相同。
[0377]
如本文所用的“异基因”是指与所比较的细胞属于不同物种的细胞。在某些实施方案中，本公开文本的细胞是同种异体的。
[0378]
与本文所设想的car一起使用的说明性免疫效应细胞包括t淋巴细胞。术语“t细胞”或“t淋巴细胞”是本领域公认的并且旨在包括胸腺细胞、未成熟t淋巴细胞、成熟t淋巴细胞、静息t淋巴细胞或激活的t淋巴细胞。t细胞可以是辅助性t(th)细胞，例如辅助性t1(th1)细胞或辅助性t2(th2)细胞。所述t细胞可以是辅助性t细胞(htl；cd4
t细胞)cd4
t细胞、细胞毒性t细胞(ctl；cd8
t细胞)、cd4
cd8
t细胞、cd4-cd8
‑ t细胞或t细胞的任何其他子集。适合于在特定实施方案中使用的其他说明性t细胞群体包括幼稚t细胞和记忆t细胞。
[0379]
如本领域技术人员所理解的，其他细胞也可以用作具有如本文所述car的免疫效应细胞。特别地，免疫效应细胞还包括nk细胞、nkt细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞。免疫效应细胞还包括效应细胞的祖细胞，其中此类祖细胞可以在体内或体外被诱导分化为免疫效应细胞。因此，在特定实施方案中，免疫效应细胞包括免疫效应细胞的祖细胞，如源自脐血、骨髓或动员的外周血的cd34 细胞群体内含有的造血干细胞(hsc)，其在受试者中施用后分化为成熟免疫效应细胞或可以在体外被诱导分化为成熟免疫效应细胞。
[0380]
如本文所用，经基因工程化以含有bcma特异性car的免疫效应细胞可以被称为“bcma特异性重定向免疫效应细胞”[0381]
如本文所用的术语“cd34
细胞”是指在其细胞表面上表达cd34蛋白的细胞。如本文所用的“cd34”是指通常充当细胞间粘附因子并参与t细胞进入淋巴结的细胞表面糖蛋白(例如，唾液粘蛋白)。cd34细胞群体含有造血干细胞(hsc)，其在施用至患者后分化并有助于所有造血谱系，包括t细胞、nk细胞、nkt细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞/巨噬细胞谱系的细胞。
[0382]
在某些实施方案中，本文提供了用于制备表达本文所设想的car的免疫效应细胞的方法。在一个实施方案中，所述方法包括转染或转导从个体分离的免疫效应细胞，使得所述免疫效应细胞表达一个或多个如本文所述的car。在某些实施方案中，所述免疫效应细胞从个体分离并且是经基因修饰的，而无需在体外进一步操纵。然后，此类细胞可以直接重新施用至所述个体。在其他实施方案中，首先在体外激活并刺激所述免疫效应细胞以增殖，然后进行基因修饰以表达car。在这一方面，所述免疫效应细胞可以在被基因修饰(即，被转导或转染以表达本文所设想的car)之前和/或之后进行培养。
[0383]
在特定实施方案中，在体外操纵或基因修饰本文所述的免疫效应细胞之前，从受试者获得细胞来源。在特定实施方案中，经car修饰的免疫效应细胞包含t细胞。t细胞可以
从多种来源获得，包括但不限于外周血单个核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。在某些实施方案中，可以使用本领域技术人员已知的任何数量的技术(如沉淀，例如ficoll
tm
分离)从在受试者中收集的血液单位获得t细胞。在一个实施方案中，来自个体的循环血液的细胞是通过单采术获得的。单采术产物通常含有淋巴细胞，包括t细胞、单核细胞、粒细胞、b细胞、其他有核白细胞、红细胞和血小板。在一个实施方案中，可以洗涤通过单采术收集的细胞以去除血浆级分并将细胞置于适当的缓冲液或培养基中用于后续处理。可以用pbs或用缺乏钙、镁和大多数(如果不是全部的话)二价阳离子的另一种合适的溶液洗涤细胞。如本领域普通技术人员所理解的，洗涤步骤可以通过本领域技术人员已知的方法完成，如通过使用半自动化流通式离心机完成。例如，cobe 2991细胞处理器、baxter cytomate等。在洗涤后，可以将细胞重悬于各种生物相容性缓冲液或其他含有或不含缓冲液的盐水溶液中。在某些实施方案中，可以在细胞直接重悬培养基中去除单采术样品的不希望的组分。
[0384]
在某些实施方案中，通过裂解红细胞并耗尽单核细胞(例如通过percoll
tm
梯度离心)，从外周血单个核细胞(pbmc)分离t细胞。可以通过阳性或阴性选择技术进一步分离表达以下一种或多种标记物的特定t细胞亚群：cd3、cd28、cd4、cd8、cd45ra和cd45ro。在一个实施方案中，通过阳性或阴性选择技术进一步分离表达cd3、cd28、cd4、cd8、cd45ra和cd45ro的特定t细胞亚群。例如，可以使用针对对于阴性选择细胞而言独特的表面标记的抗体组合实现通过阴性选择对t细胞群的富集。本文使用的一种方法是经由使用针对阴性选择的细胞上存在的细胞表面标记物的单克隆抗体混合物(cocktail)的阴性磁性免疫粘附或流式细胞术进行细胞分选和/或选择。例如，为了通过阴性选择富集cd4
细胞，单克隆抗体混合物通常包括针对cd14、cd20、cd11b、cd16、hla-dr和cd8的抗体。流式细胞术和细胞分选也可以用于分离目的细胞群体，以用于根据本公开文本使用。
[0385]
pbmc可以使用本文所设想的方法直接进行基因修饰以表达car。在某些实施方案中，在分离pbmc后，进一步分离t淋巴细胞，并且在某些实施方案中，细胞毒性和辅助性t淋巴细胞二者可以在基因修饰和/或扩增之前或之后被分选为幼稚、记忆和效应t细胞亚群。
[0386]
可以通过使用标准方法获得cd8 细胞。在一些实施方案中，通过鉴定与每种类型cd8
细胞相关的细胞表面抗原，cd8
细胞被进一步分选为幼稚、中央记忆和效应细胞。
[0387]
在某些实施方案中，幼稚cd8
t淋巴细胞的特征在于幼稚t细胞的表型标记物(包括cd62l、ccr7、cd28、cd3、cd 127和cd45ra)的表达。
[0388]
在特定实施方案中，记忆t细胞存在于cd8
外周血淋巴细胞的cd62l
和cd62l-两个子集中。在用抗cd8和抗cd62l抗体染色后，将pbmc分选为cd62l-cd8
和cd62l
cd8
级分。在一些实施方案中，中央记忆t细胞的表型标记物的表达包括cd45ro、cd62l、ccr7、cd28、cd3和cd127，并且对颗粒酶b呈阴性。在一些实施方案中，中央记忆t细胞是cd45ro
、cd62l
、cd8
t细胞。
[0389]
在一些实施方案中，效应t细胞对cd62l、ccr7、cd28和cd127呈阴性，并且对颗粒酶b和穿孔素呈阳性。
[0390]
在某些实施方案中，cd4
t细胞被进一步分选为亚群。例如，可以通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群将cd4 t辅助细胞分选为幼稚、中枢记忆和效应细胞。cd4
淋巴细胞可以通过标准方法获得。在一些实施方案中，幼稚cd4
t淋巴细胞是cd45ro-、cd45ra
、
cd62l
、cd4
t细胞。在一些实施方案中，中央记忆cd4
细胞呈cd62l阳性且cd45ro阳性。在一些实施方案中，效应cd4
细胞呈cd62l和cd45ro阴性。
[0391]
所述免疫效应细胞(如t细胞)可以在使用已知方法分离后进行基因修饰，或者所述免疫效应细胞可以在进行基因修饰之前在体外激活和扩增(或在祖细胞的情况下分化)。在特定实施方案中，所述免疫效应细胞(如t细胞)用本文所设想的嵌合抗原受体进行基因修饰(例如，用包含编码car的核酸的病毒载体转导)，然后在体外激活并扩增。在各种实施方案中，可以使用例如以下文献中所述的方法，在基因修饰以表达car之前或之后激活和扩增t细胞：美国专利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；以及美国专利申请公开号20060121005。
[0392]
通常，所述t细胞通过与表面接触来扩增，所述表面附接有刺激cd3 tcr复合物相关信号的药剂和刺激t细胞表面上的共刺激分子的配体。可以刺激t细胞群体，通过与固定在表面上的抗cd3抗体或其抗原结合片段或抗cd2抗体接触，或者通过与蛋白激酶c激活剂(例如，苔藓抑素)结合钙离子载体接触。还设想了在t细胞表面上辅助分子的共刺激。
[0393]
在特定实施方案中，在含有适当细胞因子(如il-2、il-7和/或il-15)的培养基中，使pbmc或分离的t细胞与通常附接至珠粒或其他表面的刺激剂和共刺激剂(如抗cd3和抗cd28抗体)接触。为了刺激cd4
t细胞或cd8
t细胞的增殖，抗cd3抗体和抗cd28抗体。抗cd28抗体的例子包括9.3、b-t3、xr-cd28(diacione，法国贝桑松)，其可以如本领域中常见的其他方法使用(berg等人,transplant proc.30(8):3975-3977,1998；haanen等人,j.exp.med.190(9):13191328,1999；garland等人,j.immunol meth.227(1-2):53-63,1999)。附接至同一珠粒上的抗cd3抗体和抗cd28抗体充当“替代”抗原呈递细胞(apc)。在其他实施方案中，可以使用诸如us 6040177、us 5827642和wo2012129514中所述的那些的方法激活和刺激所述t细胞以与饲养细胞以及合适的抗体和细胞因子一起增殖。
[0394]
在其他实施方案中，通过以下方法制备人工apc(aapc)：将k562、u937、721.221、t2和c1r细胞工程化以指导多种共刺激分子和细胞因子的稳定表达和分泌。在特定实施方案中，k32或u32 aapc用于指导一个或多个基于抗体的刺激分子在aapc细胞表面上的展示。aapc上各种基因组合的表达能够精确确定人t细胞激活需求，使得aapc可以针对具有特定生长需求和不同功能的t细胞亚群的最佳繁殖来定制。与使用天然apc形成对照，aapc支持功能性人cd8 t细胞的离体生长和长期扩增，而无需添加外源细胞因子。可以通过表达多种共刺激分子的aapc来扩增t细胞群体，所述共刺激分子包括但不限于cd137l(4-1bbl)、cd134l(ox40l)和/或cd80或cd86。最后，aapc为扩增经基因修饰的t细胞和维持cd8 t细胞上的cd28表达提供了有效的平台。将提供于wo 03/057171和us 2003/0147869中的aapc通过引用以其整体并入于此。
[0395]
在一个实施方案中，用根据本公开文本的核酸构建体转导cd34
细胞。在某些实施方案中，在向受试者(通常为最初从中分离所述细胞的受试者)施用之后，所述转导的cd34
细胞在体内分化为成熟免疫效应细胞。在另一个实施方案中，在暴露于如本文所述的car之前或用如本文所述的car进行基因修饰之后，可以根据先前所述的方法(asheuer等人,2004,pnas 101(10):3557-3562；imren等人,2004)在体外用以下一种或多种细胞因子刺激cd34
细胞：flt-3配体(flt3)、干细胞因子(scf)、巨核细胞生长和分化因子(tpo)、il-3和
il-6。
[0396]
在某些实施方案中，本文提供了一种用于治疗癌症的经修饰的免疫效应细胞群体，所述经修饰的免疫效应细胞包含如本文所公开的car。例如，经修饰的免疫效应细胞群体是从获得自被诊断患有本文所述的b细胞恶性肿瘤的患者(自体供体)的外周血单个核细胞(pbmc)制备的。pbmc形成异质性t淋巴细胞群体，其可以是cd4
、cd8
或cd4
和cd8
。
[0397]
pbmc还可以包括其他细胞毒性淋巴细胞，如nk细胞或nkt细胞。携带本文所设想的car编码序列的表达载体可以被引入人供体t细胞、nk细胞或nkt细胞群体中。携带表达载体的成功转导的t细胞可以使用流式细胞术进行分选以分离cd3阳性t细胞，并且随后进一步繁殖以增加这些表达car蛋白的t细胞的数量，以及使用抗cd3抗体和或抗cd28抗体和il-2或如本文其他地方所述的本领域中已知的任何其他方法进行细胞激活。使用标准程序低温保存表达car蛋白的t细胞以供储存和/或准备用于人受试者。在一个实施方案中，t细胞的体外转导、培养和/或扩增是在不存在非人动物衍生产品(如胎牛血清和牛胎儿血清)的情况下进行的。由于异质性pbmc群体是经基因修饰的，因此所得的转导的细胞是包含本文所设想的bcma靶向car的异质性经修饰的细胞的群体。
[0398]
在其他实施方案中，可以使用一、二、三、四、五或更多个不同表达载体的混合物对免疫效应细胞的供体群体进行基因修饰，其中每个载体编码如本文所设想的不同嵌合抗原受体蛋白。所得的经修饰的免疫效应细胞形成经修饰的细胞的混合群体，其中一部分经修饰的细胞表达多于一种不同的car蛋白。
[0399]
在一个实施方案中，本文提供了一种储存靶向bcma蛋白的表达经基因修饰的鼠、人或人源化car蛋白表达免疫效应细胞的方法，所述方法包括低温保存所述免疫效应细胞，使得细胞在解冻后保持活力。表达car蛋白的免疫效应细胞的级分可以通过本领域已知的方法进行低温保存，以提供此类细胞的长期来源以用于未来治疗患有b细胞相关病症的患者。当需要时，低温保存的转化的免疫效应细胞可以解冻、生长和扩增，以获得更多此类细胞。
[0400]
如本文所用，“低温保存”是指通过冷却至零下温度如(通常)77k或-196℃(液氮的沸点)来低温保存细胞。低温保护剂通常在零下温度下使用，以防止细胞因低温冷冻或升温至室温而受损。低温保护剂和最佳冷却速度可以保护免于细胞损伤。可使用的低温保护剂包括但不限于二甲基亚砜(dmso)(lovelock和bishop,nature,1959；183:1394-1395；ashwood-smith,nature,1961；190:1204-1205)、甘油、聚乙烯吡咯烷酮(rinfret,ann.n.y.acad.sci.,1960；85:576)和聚乙二醇(sloviter和ravdin,nature,1962；196:48)。优选的冷却速度是1℃至3℃/分钟。在至少两小时后，t细胞已达到-80℃的温度，并且可以直接放入液氮中(-196℃)中以用于长期储存，如在长期低温储存容器中长期储存。5.7.t细胞制造过程
[0401]
通过本文所设想的方法制造的t细胞提供改进的过继免疫疗法组合物。在不希望受任何特定理论约束的情况下，认为通过本文所设想的方法制造的t细胞组合物具有优异的特性，包括增加的存活率、在相对无分化的情况下的扩增以及体内持久性。在一个实施方案中，制造t细胞的方法包括使细胞与调节pi3k细胞信号传导途径的一种或多种药剂接触。在一个实施方案中，制造t细胞的方法包括使细胞与调节pi3k/akt/mtor细胞信号传导途径的一种或多种药剂接触。在各种实施方案中，所述t细胞可以从任何来源获得，并且在制造
过程的激活和/或扩增阶段与药剂接触。所得的t细胞组合物富含发育有效的t细胞，所述t细胞具有增殖的能力并且表达以下一种或多种生物标记物：cd62l、ccr7、cd28、cd27、cd122、cd127、cd197和cd38。在一个实施方案中，已用一种或多种pi3k抑制剂处理的包含t细胞的细胞群体针对共表达一种或多种或全部以下生物标记物的cd8 t细胞群体进行富集：cd62l、cd127、cd197和cd38。
[0402]
在一个实施方案中，制造了包含维持的增殖水平和减少的分化的经修饰的t细胞。在特定实施方案中，通过在一个或多个刺激信号和作为pi3k细胞信号传导途径的抑制剂的药剂的存在下刺激t细胞激活和增殖来制造t细胞。
[0403]
然后可以修饰所述t细胞以表达抗bcma car。在一个实施方案中，通过用包含本文所设想的抗bcma car的病毒载体转导所述t细胞来修饰所述t细胞。在特定实施方案中，在存在pi3k细胞信号传导途径的抑制剂的情况下刺激和激活之前修饰所述t细胞。在另一个实施方案中，在存在pi3k细胞信号传导途径的抑制剂的情况下刺激和激活t细胞之后修饰所述t细胞。在特定实施方案中，在存在pi3k细胞信号传导途径的抑制剂的情况下刺激和激活的12小时、24小时、36小时或48小时内修饰所述t细胞。
[0404]
在t细胞被激活之后，培养所述细胞以增殖。t细胞可以培养至少1、2、3、4、5、6或7天，至少2周，至少1、2、3、4、5或6个月或更长时间，并进行1、2、3、4、5、6、7、8、9或10轮或更多轮扩增。
[0405]
在各种实施方案中，在pi3k途径的一种或多种抑制剂的存在下制造t细胞组合物。所述抑制剂可以靶向所述途径中的一种或多种活性或单一活性。在不希望受任何特定理论约束的情况下，可以设想在制造过程的刺激、激活和/或扩增阶段中用一种或多种pi3k途径抑制剂处理t细胞或使之与t细胞接触优先地增加年轻t细胞，从而产生优异的治疗性t细胞组合物。
[0406]
在特定实施方案中，提供了一种用于增加表达工程化t细胞受体的t细胞的增殖的方法。此类方法可以包括例如从受试者收获t细胞来源、在pi3k途径的一种或多种抑制剂的存在下刺激和激活t细胞、修饰所述t细胞以表达抗bcma car(例如，抗bcma02car)以及在培养物中扩增所述t细胞。
[0407]
在特定实施方案中，一种用于产生针对以下一种或多种生物标记物的表达进行富集的t细胞群体的方法：cd62l、ccr7、cd28、cd27、cd122、cd127、cd197和cd38。在一个实施方案中，年轻t细胞包含以下一种或多种或全部生物标记物：cd62l、cd127、cd197和cd38。在一个实施方案中，提供了缺乏cd57、cd244、cd160、pd-1、ctla4、tim3和lag3的表达的年轻t细胞。如本文其他地方所讨论的，年轻t细胞生物标记物的表达水平与分化程度更高的t细胞或免疫效应细胞群体中此类标记物的表达水平相关。
[0408]
在一个实施方案中，外周血单个核细胞(pbmc)用作本文所设想的t细胞制造方法中t细胞的来源。pbmc形成异质性t淋巴细胞群体，其可以是cd4
、cd8
、或cd4
和cd8
，并且可以包括其他单个核细胞，如单核细胞、b细胞、nk细胞和nkt细胞。包含编码本文所设想的工程化tcr或car的多核苷酸的表达载体可以被引入人供体t细胞、nk细胞或nkt细胞群体中。携带表达载体的成功转导的t细胞可以使用流式细胞术进行分选以分离cd3阳性t细胞，并且随后进一步繁殖以增加经修饰的t细胞的数量，以及使用抗cd3抗体和或抗cd28抗体和il-2、il-7和/或il-15或如本文其他地方所述的本领域中已知的任何其他方法进行细胞激
活。
[0409]
本文所设想的制造方法可以进一步包括低温保存经修饰的t细胞，以用于储存和/或制备以供在人受试者中使用。低温保存t细胞，使得所述细胞在解冻后保持活力。当需要时，低温保存的转化的免疫效应细胞可以解冻、生长和扩增，以获得更多此类细胞。如本文所用，“低温保存”是指通过冷却至零下温度如(通常)77k或-196℃(液氮的沸点)来低温保存细胞。低温保护剂通常在零下温度下使用，以防止细胞因低温冷冻或升温至室温而受损。低温保护剂和最佳冷却速度可以保护免于细胞损伤。可使用的低温保护剂包括但不限于二甲基亚砜(dmso)(lovelock和bishop,nature,1959；183:1394-1395；ashwood-smith,nature,1961；190:1204-1205)、甘油、聚乙烯吡咯烷酮(rinfret,ann.n.y.acad.sci.,1960；85:576)和聚乙二醇(sloviter和ravdin,nature,1962；196:48)。优选的冷却速度是1℃至3℃/分钟。在至少两小时后，t细胞已达到-80℃的温度，并且可以直接放入液氮中(-196℃)中以用于长期储存，如在长期低温储存容器中长期储存。5.8.t细胞
[0410]
本公开文本设想了改进的car t细胞组合物的制造。用于car t细胞产生的t细胞可以是自体(autologous/autogeneic)(“自身”)或非自体(“非自身”，例如同种异体、同基因或异基因)。在某些实施方案中，所述t细胞是从哺乳动物受试者获得的。在更具体的实施方案中，所述t细胞是从灵长类受试者获得的。在优选的实施方案中，所述t细胞是从人受试者获得的。
[0411]
t细胞可以从多种来源获得，包括但不限于外周血单个核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。在某些实施方案中，可以使用本领域技术人员已知的任何数量的技术(如沉淀，例如ficoll
tm
分离)从在受试者中收集的血液单位获得t细胞。在一个实施方案中，来自个体的循环血液的细胞是通过单采术获得的。单采术产物通常含有淋巴细胞，包括t细胞、单核细胞、粒细胞、b细胞、其他有核白细胞、红细胞和血小板。在一个实施方案中，可以洗涤通过单采术收集的细胞以去除血浆级分并将细胞置于适当的缓冲液或培养基中用于后续处理。可以用pbs或用缺乏钙、镁和大多数(如果不是全部的话)二价阳离子的另一种合适的溶液洗涤细胞。如本领域普通技术人员所理解的，洗涤步骤可以通过本领域技术人员已知的方法完成，如通过使用半自动化流通式离心机完成。例如，cobe 2991细胞处理器、baxter cytomate等。在洗涤后，可以将细胞重悬于各种生物相容性缓冲液或其他含有或不含缓冲液的盐水溶液中。在某些实施方案中，可以在细胞直接重悬培养基中去除单采术样品的不希望的组分。
[0412]
在特定实施方案中，在本文所设想的制造方法中使用包含t细胞的细胞群体，例如pbmc。在其他实施方案中，在本文所设想的制造方法中使用分离或纯化的t细胞群体。可以通过裂解红细胞并耗尽单核细胞(例如通过percoll
tm
梯度离心)，从外周血单个核细胞(pbmc)分离细胞。在一些实施方案中，在分离pbmc后，细胞毒性和辅助性t淋巴细胞二者可以在激活、扩增和/或基因修饰之前或之后被分选为幼稚、记忆和效应t细胞亚群。
[0413]
可以通过阳性或阴性选择技术进一步分离表达以下一种或多种标记物的特定t细胞亚群：cd3、cd4、cd8、cd28、cd45ra、cd45ro、cd62、cd127和hla-dr。在一个实施方案中，通过阳性或阴性选择技术进一步分离表达选自以下的一种或多种标记物的特定t细胞亚群：(i)cd62l、ccr7、cd28、cd27、cd122、cd127、cd197；或(ii)cd38或cd62l、cd127、cd197和
cd38。在各种实施方案中，制造的t细胞组合物不表达或基本上不表达以下一种或多种标记物：cd57、cd244、cd160、pd-1、ctla4、tim3和lag3。
[0414]
在一个实施方案中，与未使用pi3k抑制剂的情况下激活和扩增的t细胞群体相比，选自cd62l、cd127、cd197和cd38的一种或多种标记物的表达增加至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍或更多倍。
[0415]
在一个实施方案中，与在使用pi3k抑制剂的情况下激活和扩增的t细胞群体相比，选自cd57、cd244、cd160、pd-1、ctla4、tim3和lag3的一种或多种标记物的表达降低至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍或更多倍。
[0416]
在一个实施方案中，本文所设想的制造方法增加包含幼稚或发育有效的t细胞的一种或多种标记物的car t细胞的数量。不希望受任何特定理论的约束，本发明者认为用一种或多种pi3k抑制剂处理包含t细胞的细胞群体导致发育有效的t细胞的扩增的增加，并且提供了与现有的car t细胞疗法相比更稳健且有效的过继car t细胞免疫疗法。
[0417]
使用本文所设想的方法制造的t细胞中增加的幼稚或发育有效的t细胞的标记物的例子包括但不限于cd62l、cd127、cd197和cd38。在特定实施方案中，幼稚t细胞不表达或基本上不表达以下一种或多种标记物：cd57、cd244、cd160、pd-1、btla、cd45ra、ctla4、tim3和lag3。
[0418]
关于t细胞，根据所采用的条件，由本文所设想的各种扩增方法产生的t细胞群体可以具有多种特定表型特性。在各种实施方案中，扩增的t细胞群体包含以下一种或多种表型标记物：cd62l、cd127、cd197、cd38和hla-dr。
[0419]
在一个实施方案中，此类表型标记物包括cd62l、cd127、cd197和cd38中的一种或多种或全部的增强的表达。在特定实施方案中，对特征在于幼稚t细胞的表型标记物(包括cd62l、cd127、cd197和cd38)的表达的cd8
t淋巴细胞进行扩增。
[0420]
在特定实施方案中，对特征在于中央记忆t细胞的表型标记物(包括cd45ro、cd62l、cd127、cd197和cd38)的表达且对颗粒酶b呈阴性的t细胞进行扩增。在一些实施方案中，所述中央记忆t细胞是cd45ro
、cd62l
、cd8
t细胞。
[0421]
在某些实施方案中，对特征在于幼稚cd4
细胞的表型标记物(包括cd62l)的表达且对cd45ra和/或cd45ro的表达呈阴性的cd4
t淋巴细胞进行扩增。在一些实施方案中，cd4
细胞的特征在于中央记忆cd4
细胞的表型标记物的表达，包括cd62l和cd45ro阳性。在一些实施方案中，效应cd4
细胞呈cd62l阳性且cd45ro阴性。
[0422]
在某些实施方案中，从个体分离t细胞，并且在体外激活并刺激所述t细胞以增殖，然后进行基因修饰以表达抗bcma car。在这一方面，所述t细胞可以在被基因修饰(即，被转导或转染以表达本文所设想的抗bcma car)之前和/或之后进行培养。5.8.1.激活和扩增
[0423]
为了获得足够治疗剂量的t细胞组合物，t细胞通常经受一轮或多轮刺激、激活和/或扩增。通常可以使用如以下专利中所述的方法激活和扩增t细胞：例如，美国专利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；和6,867,
041，将其每一个都通过引用以其整体并入本文。经修饰以表达抗bcma car的t细胞可以在修饰所述t细胞之前和/或之后被激活和扩增。此外，t细胞可以在激活和/或扩增之前、期间和/或之后与调节pi3k细胞信号传导途径的一种或多种药剂接触。在一个实施方案中，通过本文所设想的方法制造的t细胞经历一轮、两轮、三轮、四轮或五轮或更多轮激活和扩增，其中每轮激活和扩增可以包括调节pi3k细胞信号传导途径的一种或多种药剂。
[0424]
在一个实施方案中，共刺激配体呈现在抗原呈递细胞(例如，aapc、树突状细胞、b细胞等)上，所述共刺激配体特异性地结合t细胞上的同源共刺激分子从而提供信号，所述信号以及由例如tcr/cd3复合物的结合所提供的初级信号介导所需的t细胞应答。合适的共刺激配体包括但不限于cd7、b7-1(cd80)、b7-2(cd86)、pd-l1、pd-l2、4-1bbl、ox40l、诱导型共刺激配体(icos-l)、细胞间粘附分子(icam)、cd30l、cd40、cd70、cd83、hla-g、mica、micb、hvem、淋巴毒素β受体、ilt3、ilt4、结合toll配体受体的激动剂或抗体以及与b7-h3特异性地结合的配体。
[0425]
在特定实施方案中，共刺激配体包括与t细胞上存在的共刺激分子特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述共刺激分子包括但不限于cd27、cd28、4-ibb、ox40、cd30、cd40、pd-1、1cos、淋巴细胞功能相关抗原1(lfa-1)、cd7、light、nkg2c、b7-h3和与cd83特异性结合的配体。
[0426]
合适的共刺激配体进一步包括靶抗原，其可以以可溶性形式提供或在apc或aapc上表达，且结合在经修饰的t细胞上表达的工程化tcr或car。
[0427]
在各种实施方案中，本文所设想的用于制造t细胞的方法包括激活包含t细胞的细胞群体并扩增t细胞群体。t细胞激活可以通过以下方法实现：提供通过t细胞tcr/cd3复合物或经由cd2表面蛋白的初级刺激信号，并且提供通过辅助分子例如cd28的次级共刺激信号。
[0428]
可以通过使t细胞与合适的cd3结合剂(例如，cd3配体或抗cd3单克隆抗体)接触来刺激tcr/cd3复合物。cd3抗体的说明性例子包括但不限于okt3、g19-4、bc3和64.1。
[0429]
在另一个实施方案中，cd2结合剂可以用于向t细胞提供初级刺激信号。cd2结合剂的说明性例子包括但不限于cd2配体和抗cd2抗体，例如t11.3抗体与t11.1或t11.2抗体的组合(meuer,s.c.等人(1984)cell 36:897-906)和9.6抗体(其与ti 1.1识别相同的表位)与9-1抗体(yang,s.y.等人(1986)j.immunol.137:1097-1100)的组合。也可以使用与上述任何抗体结合相同表位的其他抗体。可以通过本文其他地方所公开的标准技术制备和鉴定另外的抗体或抗体的组合。
[0430]
除了通过tcr/cd3复合物或经由cd2提供的初级刺激信号外，诱导t细胞应答还需要次级共刺激信号。在特定实施方案中，cd28结合剂可以用于提供共刺激信号。cd28结合剂的说明性例子包括但不限于：天然cd28配体，例如对于cd28的天然配体(例如，b7蛋白质家族的成员，如b7-1(cd80)和b7-2(cd86))；以及能够交联cd28分子的抗cd28单克隆抗体或其片段，例如单克隆抗体9.3、b-t3、xr-cd28、kolt-2、15e8、248.23.2和ex5.3d10。
[0431]
在一个实施方案中，提供初级刺激信号的分子(例如通过tcr/cd3复合物或cd2提供刺激的分子)以及共刺激分子与同一表面偶联。
[0432]
在某些实施方案中，提供刺激和共刺激信号的结合剂定位在细胞的表面。这可以通过以下方法实现：用编码呈适合于其在细胞表面表达的形式的所述结合剂的核酸转导细
胞，或可替代地将结合剂偶联至细胞表面。
[0433]
在另一个实施方案中，提供初级刺激信号的分子(例如，通过tcr/cd3复合物或cd2提供刺激的分子)以及共刺激分子展示在抗原呈递细胞上。
[0434]
在一个实施方案中，提供初级刺激信号的分子(例如通过tcr/cd3复合物或cd2提供刺激的分子)以及共刺激分子提供于单独的表面。
[0435]
在特定实施方案中，提供刺激和共刺激信号的结合剂中的一种是可溶的(在溶液中提供)，而另一种药剂提供在一个或多个表面上。
[0436]
在特定实施方案中，提供刺激和共刺激信号的结合剂均以可溶性形式提供(在溶液中提供)。
[0437]
在各种实施方案中，本文所设想的用于制造t细胞的方法包括用抗cd3抗体和抗cd28抗体激活t细胞。
[0438]
通过本文所设想的方法制造的t细胞组合物包含在抑制pi3k细胞信号传导途径的一种或多种药剂的存在下激活和/或扩增的t细胞。经修饰以表达抗bcma car的t细胞可以在修饰所述t细胞之前和/或之后被激活和扩增。在特定实施方案中，激活t细胞群体，对其进行修饰以表达抗bcma car，然后培养以进行扩增。
[0439]
在一个实施方案中，通过本文所设想的方法制造的t细胞包括增加数量的t细胞，所述t细胞表达指示高增殖潜能和自我更新能力的标记物，但不表达或基本上不表达检测不到的t细胞分化标记物。这些t细胞可以以稳健的方式被反复激活和扩增，从而提供改进的治疗性t细胞组合物。
[0440]
在一个实施方案中，与未使用pi3k抑制剂的情况下激活和扩增的t细胞群体相比，在抑制pi3k细胞信号传导途径的一种或多种药剂的存在下激活和扩增的t细胞群体被扩增至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍、至少50倍、至少100倍、至少250倍、至少500倍、至少1000倍或更多倍。
[0441]
在一个实施方案中，与未使用pi3k抑制剂的情况下激活和扩增的t细胞群体相比，在抑制pi3k细胞信号传导途径的一种或多种药剂的存在下激活和扩增的特征在于年轻t细胞的标记物的表达的t细胞群体被扩增至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍、至少50倍、至少100倍、至少250倍、至少500倍、至少1000倍或更多倍。
[0442]
在一个实施方案中，扩增通过本文所设想的方法激活的t细胞进一步包括将包含t细胞的细胞群体培养若干个小时(约3小时)至约7天至约28天或其间的任何小时整数值。在另一个实施方案中，可以将t细胞组合物培养14天。在特定实施方案中，将t细胞培养约21天。在另一个实施方案中，将t细胞组合物培养约2-3天。还可能需要几个循环的刺激/激活/扩增，使得t细胞的培养时间可以是60天或更多天。
[0443]
在特定实施方案中，适合于t细胞培养的条件包括合适的培养基(例如，最低基础培养基或rpmi培养基1640或x-vivo 15(lonza))以及对于增殖和活力所需的一种或多种因子，包括但不限于血清(例如，胎牛或人血清)、白细胞介素-2(il-2)、胰岛素、ifn-γ、il-4、il-7、il-21、gm-csf、il-10、il-12、il-15、tgfβ和tnf-α或本领域技术人员已知的适合于细胞生长的任何其他添加剂。
[0444]
细胞培养基的其他说明性例子包括但不限于rpmi 1640、click、aim-v、dmem、mem、
a-mem、f-12、x-vivo 15和x-vivo 20、optimizer，其添加有氨基酸、丙酮酸钠和维生素，无血清或补充有适当量的血清(或血浆)或一组限定的激素和/或足够用于t细胞生长和扩增的量的一种或多种细胞因子。
[0445]
用于t细胞扩增的其他添加剂的说明性例子包括但不限于表面活性剂、血浆制品(piasmanate)、ph缓冲液(如hepes)和还原剂(如n-乙酰半胱氨酸和2-巯基乙醇)。
[0446]
抗生素(例如，青霉素和链霉素)仅包括在实验培养物中，而不在待输注至受试者体内的细胞培养物中。将靶细胞维持在支持生长所必需的条件(例如，适当的温度(例如，37℃)和大气(例如，空气加5％c02))下。
[0447]
在特定实施方案中，在含有适当细胞因子(如il-2、il-7和/或il-15)的培养基中，使pbmc或分离的t细胞与通常附接至珠粒或其他表面的刺激剂和共刺激剂(如抗cd3和抗cd28抗体)接触。
[0448]
在其他实施方案中，可以通过以下方法制备人工apc(aapc)：将k562、u937、721.221、t2和c1r细胞工程化以指导多种共刺激分子和细胞因子的稳定表达和分泌。在特定实施方案中，k32或u32 aapc用于指导一个或多个基于抗体的刺激分子在aapc细胞表面上的展示。可以通过表达多种共刺激分子的aapc来扩增t细胞群体，所述共刺激分子包括但不限于cd137l(4-1bbl)、cd134l(ox40l)和/或cd80或cd86。最后，aapc为扩增经基因修饰的t细胞和维持cd8 t细胞上的cd28表达提供了有效的平台。将提供于wo 03/057171和us 2003/0147869中的aapc通过引用以其整体并入于此。5.8.2.药剂
[0449]
在各种实施方案中，提供了一种制造t细胞的方法，所述方法扩增未分化或发育有效的t细胞，其包括使t细胞与调节细胞中pi3k途径的药剂接触。在各种实施方案中，提供了一种制造t细胞的方法，所述方法扩增未分化或发育有效的t细胞，其包括使t细胞与调节细胞中pi3k/akt/mtor途径的药剂接触。可以在激活和扩增之前、期间和/或之后接触所述细胞。所述t细胞组合物保持足够的t细胞效力，使得它们可以经历多轮扩增而不会显著增加分化。
[0450]
如本文所用，术语“调节”、“调节物”或“调节剂”或类似术语是指药剂引发细胞信号传导途径的变化的能力。调节物可以增加或减少途径组分的量、活性，或者增加或减少细胞信号传导途径的所需效果或输出。在一个实施方案中，所述调节物是抑制剂。在另一个实施方案中，所述调节物是激活剂。
[0451]“药剂”是指用于调节pi3k/akt/mtor途径的化合物、小分子，例如有机小分子、核酸、多肽、或其片段、异构体、变体、类似物或衍生物。
[0452]“小分子”是指分子量小于约5kd、小于约4kd、小于约3kd、小于约2kd、小于约1kd或小于约.5kd的组合物。小分子可以包括核酸、肽、多肽、拟肽、类肽、碳水化合物、脂质、其组分或其他有机或无机分子。化学和/或生物混合物(如真菌、细菌或藻类提取物)的文库在本领域中是已知的，并且可以用本公开文本的任何测定进行筛选。用于合成分子文库的方法是本领域中已知的(参见例如，carell等人,1994a；carell等人,1994b；cho等人,1993；dewitt等人,1993；gallop等人,1994；zuckermann等人,1994)。
[0453]“类似物”是指与具有本公开文本的所需活性的化合物、核苷酸、蛋白质或多肽或化合物具有一种或多种类似或相同的活性或功能但不必一定包含与优选实施方案的序列
或结构类似或相同的序列或结构的小有机化合物、核苷酸、蛋白质或多肽。
[0454]“衍生物”是指化合物、蛋白质或多肽，其包含已通过引入氨基酸残基取代、缺失或添加而改变的亲本蛋白质或多肽的氨基酸序列，或已通过引入核苷酸取代或缺失、添加或突变而修饰的核酸或核苷酸。衍生核酸、核苷酸、蛋白质或多肽与亲本多肽具有类似或相同的功能。
[0455]
在各种实施方案中，调节pi3k途径的药剂激活所述途径的组分。“激活剂”或“激动剂”是指促进、增加或诱导pi3k/akt/mtor途径中分子(包括但不限于抑制pi3k的一种或多种活性的分子)的一种或多种活性的药剂。
[0456]
在各种实施方案中，调节pi3k途径的药剂抑制所述途径的组分。“抑制剂”或“拮抗剂”是指抑制、减少或降低pi3k途径中分子(包括但不限于pi3k)的一种或多种活性的药剂。在一个实施方案中，所述抑制剂是双分子抑制剂。在特定实施方案中，所述抑制剂可以抑制具有相同或基本上类似活性的一类分子(泛抑制剂)，或可以特异性地抑制分子的活性(选择性或特异性抑制剂)。抑制也可以是不可逆的或可逆的。
[0457]
在一个实施方案中，所述抑制剂具有至少1nm、至少2nm、至少5nm、至少10nm、至少50nm、至少100nm、至少200nm、至少500nm、至少1μm、至少10μm、至少50μm或至少100μm的ic50。ic50测定可以使用本领域已知的任何常规技术来实现。例如，ic50可以通过在所研究的一系列浓度的抑制剂的存在下测量给定酶的活性来确定。然后将实验获得的酶活性值针对所使用的抑制剂浓度来绘图。将显示出50％酶活性的抑制剂浓度(与不存在任何抑制剂的情况下的活性相比)作为“ic50”值。类似地，其他抑制浓度可以通过活性的适当确定来定义。
[0458]
在各种实施方案中，用以下浓度的一种或多种pi3k途径调节物接触或处理或培养t细胞：至少1nm、至少2nm、至少5nm、至少10nm、至少50nm、至少100nm、至少200nm、至少500nm、至少1μm、至少10μm、至少50μm、至少100μm或至少1m。
[0459]
在特定实施方案中，用一种或多种pi3k途径调节物接触或处理或培养t细胞，持续至少12小时、18小时，至少1、2、3、4、5、6或7天，至少2周，至少1、2、3、4、5或6个月或更长时间，并进行1、2、3、4、5、6、7、8、9或10轮或更多轮扩增。5.8.3.pi3k/akt/mtor途径
[0460]
磷脂酰肌醇-3激酶/akt/哺乳动物雷帕霉素靶标途径充当将生长因子信号传导与细胞增殖、分化、代谢和存活整合在一起的通道。pi3k是高度保守的细胞内脂质激酶家族。ia类pi3k被生长因子受体酪氨酸激酶(rtk)直接激活或通过与衔接分子的胰岛素受体底物家族相互作用激活。这种活性导致丝氨酸/苏氨酸激酶akt的调节剂即磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸酯(pip3)的产生。mtor经由2个不同的复合物通过典型的pi3k途径发挥作用，每个复合物的特征在于赋予不同活性的不同结合配偶体。mtorc1(mtor与pras40、raptor和mlst8/gbl复合)充当pi3k/akt信号传导的下游效应物，将生长因子信号与蛋白质翻译、细胞生长、增殖和存活联系起来。mtorc2(mtor与rictor、msin1、protor和mlst8复合)充当akt的上游激活剂。
[0461]
在生长因子受体介导的pi3k激活后，akt通过其普列克底物蛋白同源结构域与pip3的相互作用被招募到膜上，从而暴露其激活环并通过组成性活性磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(pdk1)实现在苏氨酸308(thr308)处的磷酸化。为了最大程度的激活，akt也在其c末
端疏水性基序的丝氨酸473(ser473)处被mtorc2磷酸化。dna-pk和hsp也已显示出在akt活性的调节中是重要的。akt通过tsc2的抑制性磷酸化激活mtorc1，所述tsc2与tsc1一起通过抑制mtorc1的正调节剂rheb gtp酶来负调节mtorc1。mtorc1具有2种明确的底物，p70s6k(以下称为s6k1)和4e-bp1，这两种底物都极为重要地调节蛋白质合成。因此，mtorc1是pi3k的重要下游效应物，这将生长因子信号传导与蛋白质翻译和细胞增殖联系起来。5.8.4.pi3k抑制剂
[0462]
如本文所用，术语“pi3k抑制剂”是指结合并抑制pi3k的至少一种活性的核酸、肽、化合物或有机小分子。pi3k蛋白可以分为三类，1类pi3k、2类pi3k和3类pi3k。1类pi3k作为由四个p110催化亚基(p110α、p110β、p110δ和p110γ)之一和两个调节亚基家族之一组成的异二聚体存在。在特定实施方案中，本公开文本的pi3k抑制剂靶向1类pi3k抑制剂。在一个实施方案中，pi3k抑制剂将显示出对于1类pi3k抑制剂的一个或多个同种型的选择性(即，对于p110α、p110β、p110δ和p110γ或者p110α、p110β、p110δ和p110γ中的一个或多个的选择性)。在另一个方面，pi3k抑制剂将不会显示出同种型选择性，并且被视为“泛pi3k抑制剂”。在一个实施方案中，pi3k抑制剂将与atp竞争结合pi3k催化结构域。
[0463]
在某些实施方案中，pi3k抑制剂可以例如靶向pi3k以及pi3k-akt-mtor途径中的另外的蛋白质。在特定实施方案中，同时靶向mtor和pi3k的pi3k抑制剂可以被称为mtor抑制剂或pi3k抑制剂。仅靶向pi3k的pi3k抑制剂可以被称为选择性pi3k抑制剂。在一个实施方案中，选择性pi3k抑制剂可以被理解为是指这样的药剂，其对pi3k展现出的50％抑制浓度比所述抑制剂对mtor和/或所述途径中的其他蛋白质的ic50低至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少50倍、至少100倍、至少1000倍或更多倍。
[0464]
在特定实施方案中，示例性pi3k抑制剂抑制pi3k，其中ic50(抑制所述活性的50％时的浓度)为约200nm或更低，优选约100nm或更低，甚至更优选约60nm或更低，约25nm、约10nm、约5nm、约1nm、100μm、50μm、25μm、10μm、1μm或更低。在一个实施方案中，pi3k抑制剂抑制pi3k，其中ic50为从约2nm至约100nm、更优选从约2nm至约50nm、甚至更优选从约2nm至约15nm。
[0465]
适合于在本文所设想的t细胞制造方法中使用的pi3k抑制剂的说明性例子包括但不限于bkm120(1类pi3k抑制剂，novartis)、xl147(1类pi3k抑制剂，exelixis)、(泛pi3k抑制剂，glaxosmithkline)和px-866(1类pi3k抑制剂；p110α、p110β和p110γ同种型，oncothyreon)。
[0466]
选择性pi3k抑制剂的其他说明性例子包括但不限于byl719、gsk2636771、tgx-221、as25242、cal-101、zstk474和ipi-145。
[0467]
泛pi3k抑制剂的其他说明性例子包括但不限于bez235、ly294002、gsk1059615、tg100713和gdc-0941。5.8.5.akt抑制剂
[0468]
如本文所用，术语“akt抑制剂”是指抑制akt的至少一种活性的核酸、肽、化合物或有机小分子。akt抑制剂可以分为若干类，包括基于脂质的抑制剂(例如，靶向akt的普列克底物蛋白同源结构域的抑制剂，其阻止akt定位于质膜)、atp竞争性抑制剂和变构抑制剂。在一个实施方案中，akt抑制剂通过与akt催化位点结合而起作用。在特定实施方案中，akt抑制剂通过抑制下游akt靶标(如mtor)的磷酸化而起作用。在另一个实施方案中，通过抑制
例如akt的dna-pk激活、akt的pdk-1激活和/或akt的mtorc2激活，从而抑制输入信号激活akt，最终抑制akt活性。
[0469]
akt抑制剂可以靶向所有三种akt同种型，即akt1、akt2、akt3，或者可以是同种型选择性的，并且仅靶向一种或两种akt同种型。在一个实施方案中，akt抑制剂可以靶向akt以及pi3k-akt-mtor途径中的另外的蛋白质。仅靶向akt的akt抑制剂可以被称为选择性akt抑制剂。在一个实施方案中，选择性akt抑制剂可以被理解为是指这样的药剂，其对akt展现出的50％抑制浓度比所述抑制剂对所述途径中的其他蛋白质的ic50低至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少50倍、至少100倍、至少1000倍或更多倍。
[0470]
在特定实施方案中，示例性akt抑制剂抑制akt，其中ic50(抑制所述活性的50％时的浓度)为约200nm或更低，优选约100nm或更低，甚至更优选约60nm或更低，约25nm、约10nm、约5nm、约1nm、100μm、50μm、25μm、10μm、1μm或更低。在一个实施方案中，akt抑制剂抑制akt，其中ic50为从约2nm至约100nm、更优选从约2nm至约50nm、甚至更优选从约2nm至约15nm。
[0471]
用于与基于奥瑞他汀(auristatin)的抗体-药物缀合物组合使用的akt抑制剂的说明性例子包括例如哌立福新(keryx)、mk2206(merck)、vqd-002(vioquest)、xl418(exelixis)、gsk690693、gdc-0068和px316(prolx pharmaceuticals)。
[0472]
选择性akt1抑制剂的说明性非限制性例子是a-674563。
[0473]
选择性akt2抑制剂的说明性非限制性例子是cct128930。
[0474]
在特定实施方案中，akt抑制剂抑制akt的dna-pk激活、akt的pdk-1激活、akt的mtorc2激活或akt的hsp激活。
[0475]
dna-pk抑制剂的说明性例子包括但不限于nu7441、pi-103、nu7026、pik-75和pp-121。5.8.6.mtor抑制剂
[0476]
术语“mtor抑制剂”或“抑制mtor的药剂”是指抑制mtor蛋白的至少一种活性(例如像其至少一种底物(例如，p70s6激酶1、4e-bp1、akt/pkb和eef2)上的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性)的核酸、肽、化合物或有机小分子。mtor抑制剂能够直接结合并抑制mtorc1、mtorc2或同时结合并抑制mtorc1和mtorc2。
[0477]
mtorc1和/或mtorc2活性的抑制可以通过pi3k/akt/mtor途径的信号转导的降低来测定。可以利用多种读出来建立这种信号传导途径的输出的减少。一些非限制性示例性读出包括(1)akt在包括但不限于5473和t308的残基处的磷酸化的减少；(2)akt的激活的减少，如例如通过包括但不限于fox01/o3a t24/32、gsk3a/β；s21/9和tsc2t1462的akt底物的磷酸化的降低所证明；(3)mtor下游的包括但不限于核糖体s6s240/244、70s6k t389和4ebp1 t37/46的信号传导分子的磷酸化的减少；以及(4)对癌细胞增殖的抑制。
[0478]
在一个实施方案中，所述mtor抑制剂是活性位点抑制剂。这些是与mtor的atp结合位点(也称为atp结合袋)结合并同时抑制mtorc1和mtorc2的催化活性的mtor抑制剂。适合于在本文所设想的t细胞制造方法中使用的一类活性位点抑制剂是同时靶向并直接抑制pi3k和mtor的双特异性抑制剂。双特异性抑制剂同时结合mtor的atp结合位点和pi3k。此类抑制剂的说明性例子包括但不限于：咪唑并喹唑啉、渥曼青霉素、ly294002、pi-103(cayman chemical)、sf1126(semafore)、bgt226(novartis)、xl765(exelixis)和nvp-bez235
(novartis)。
[0479]
适合于在本文所设想的方法中使用的另一类mtor活性位点抑制剂相对于一种或多种i型磷脂酰肌醇3-激酶(例如，pi3激酶α、β、γ或δ)选择性地抑制mtorc1和mtorc2活性。这些活性位点抑制剂与mtor的活性位点结合，但不与pi3k结合。此类抑制剂的说明性例子包括但不限于：吡唑并嘧啶、torin1(guertin和sabatini)、pp242(2-(4-氨基-1-异丙基-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-1h-吲哚-5-醇)、pp30、ku-0063794、way-600(wyeth)、way-687(wyeth)、way-354(wyeth)和azd8055(liu等人,nature review,8,627-644,2009)。
[0480]
在一个实施方案中，选择性mtor抑制剂是指这样的药剂，其对mtorc1和/或mtorc2展现出的50％抑制浓度(ic50)比所述抑制剂对一种、两种、三种或更多种i型pi3激酶或所有i型pi3激酶的ic50低至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少1000倍或更多倍。
[0481]
用于在本公开文本中使用的另一类mtor抑制剂在本文中称为“雷帕霉素类似物(rapalogs)”。如本文所用，术语“雷帕霉素类似物”是指与mtor frb结构域(fkbp雷帕霉素结合结构域)特异性结合、在结构上与雷帕霉素相关且保留mtor抑制特性的化合物。术语雷帕霉素类似物不包括雷帕霉素。雷帕霉素类似物包括雷帕霉素的酯、醚、肟、腙和羟胺，以及其中雷帕霉素核心结构上的官能团已通过例如还原或氧化进行修饰的化合物。此类化合物的药学上可接受的盐也被认为是雷帕霉素衍生物。适合于在本文所设想的方法中使用的雷帕霉素类似物的例示性例子包括但不限于替西罗莫司(cc1779)、依维莫司(rad001)、地弗莫司(ap23573)、azd8055(astrazeneca)和osi-027(osi)。
[0482]
在一个实施方案中，所述药剂是mtor抑制剂雷帕霉素(西罗莫司)。
[0483]
在特定实施方案中，用于在本文中使用的示例性mtor抑制剂抑制mtorc1、mtorc2或同时抑制mtorc1和mtorc2，其中ic50(抑制所述活性的50％时的浓度)为约200nm或更低，优选约100nm或更低，甚至更优选约60nm或更低，约25nm、约10nm、约5nm、约1nm、100μm、50μm、25μm、10μm、1μm或更低。在一个方面，用于在本文中使用的mtor抑制剂抑制mtorc1、mtorc2或同时抑制mtorc1和mtorc2，其中ic50为从约2nm至约100nm、更优选从约2nm至约50nm、甚至更优选从约2nm至约15nm。
[0484]
在一个实施方案中，示例性mtor抑制剂抑制pi3k和mtorc1或mtorc2或同时抑制mtorc1和mtorc2以及pi3k，其中ic50(抑制所述活性的50％时的浓度)为约200nm或更低，优选约100nm或更低，甚至更优选约60nm或更低，约25nm、约10nm、约5nm、约1nm、100μm、50μm、25μm、10μm、1μm或更低。在一个方面，用于在本文中使用的mtor抑制剂抑制pi3k和mtorc1或mtorc2或同时抑制mtorc1和mtorc2以及pi3k，其中ic50为从约2nm至约100nm、更优选从约2nm至约50nm、甚至更优选从约2nm至约15nm。
[0485]
适合于在本文所设想的特定实施方案中使用的mtor抑制剂的其他说明性例子包括但不限于azd8055、ink128、雷帕霉素、pf-04691502和依维莫司。
[0486]
mtor已显示出对生理底物蛋白质p70 s6核糖体蛋白激酶i(p70s6k1)和eif4e结合蛋白1(4ebp1)具有稳健且特异性的催化活性，如在蛋白质印迹中通过磷酸化特异性抗体测定的。
[0487]
在一个实施方案中，pi3k/akt/mtor途径的抑制剂是选自以下的s6激酶抑制剂：bi-d1870、h89、pf-4708671、fmk和at7867。5.9.组合物和配制品
10
11
/患者)范围内的较低数量的细胞。car表达细胞组合物可以以在这些范围内的剂量多次施用。对于接受疗法的患者，这些细胞可以是同种异体、同基因、异基因或自体的。如果需要，所述治疗还可以包括施用如本文所述的有丝分裂原(例如，pha)或淋巴因子、细胞因子和/或趋化因子(例如，ifn-γ、il-2、il-12、tnf-α、il-18和tnf-β、gm-csf、il-4、il-13、flt3-l、rantes、mip1α等)以增强免疫应答的诱导。
[0494]
通常，包含如本文所述激活和扩增的细胞的组合物可以用于治疗和预防免疫功能低下的个体中出现的疾病。特别地，包含本文所设想的经car修饰的t细胞的组合物用于治疗b细胞恶性肿瘤。本公开文本的经car修饰的t细胞可以单独施用，或作为与载体、稀释剂、赋形剂和/或其他组分(如il-2或其他细胞因子或细胞群体)组合的药物组合物施用。在特定实施方案中，本文所设想的药物组合物包含与一种或多种药学上或生理学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合的一定量的经基因修饰的t细胞。
[0495]
包含表达car的免疫效应细胞群体(如t细胞)的本公开文本的药物组合物可以包含缓冲液，如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；碳水化合物，如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇；蛋白质；多肽或氨基酸，如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂，如edta或谷胱甘肽；助剂(例如，氢氧化铝)；和防腐剂。在某些方面，本公开文本的组合物被配制用于肠胃外施用，例如血管内(静脉内或动脉内)、腹膜内或肌肉内施用。
[0496]
液体药物组合物，无论它们是溶液、悬浮液还是其他类似形式，均可包括以下中的一种或多种：无菌稀释剂(例如注射用水、盐水溶液，优选生理盐水、林格氏溶液、等渗氯化钠)，固定油(例如可用作溶剂或悬浮介质的合成甘油单酯或甘油二酯)，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其他溶剂；抗细菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲液，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的药剂，例如氯化钠或右旋糖。可以将肠胃外制剂封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。可注射药物组合物优选是无菌的。
[0497]
在特定实施方案中，本文所设想的组合物包含单独的或与一种或多种治疗剂组合的有效量的表达car的免疫效应细胞。因此，表达car的免疫效应细胞组合物可以单独地施用或与其他已知癌症治疗(如放射疗法、化学疗法、移植、免疫疗法、激素疗法、光动力疗法等)组合施用。所述组合物也可以与抗生素组合施用。此类治疗剂可以在本领域中作为用于如本文所述的特定疾病状态(如特定癌症)的标准治疗被接受。所设想的示例性治疗剂包括细胞因子、生长因子、类固醇、nsaid、dmard、抗炎药、化学治疗剂、放射治疗剂、治疗性抗体或其他活性剂和辅助剂。
[0498]
在某些实施方案中，本文所公开的包含表达car的免疫效应细胞的组合物可以与任何数量的化学治疗剂(例如，抗癌剂)组合施用至受试者。在某些实施方案中，在施用car t细胞疗法(例如，bcma car t细胞疗法)之后将化学治疗剂(例如，抗癌剂)施用至受试者，条件是出现了在本文其他地方所述的表明car t细胞疗法对受试者没有治疗益处的某些情况。化学治疗剂的说明性例子包括烷化剂，如噻替哌和环磷酰胺(cytoxan
tm
)；烷基磺酸盐，如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，如苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲蜜胺恢复；氮芥，如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥(mechlorethamine)、盐酸氧化氮芥、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇、
泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀；硝基脲，如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，如阿克拉霉素、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素(cactinomycin)、卡奇霉素、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、道诺霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-l-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星、链黑菌素、链脲佐菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-fu)；叶酸类似物，如二甲叶酸、甲氨喋呤、喋罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、伊诺他滨、氟尿苷、5-fu；雄激素，如卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺素，如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群；伊达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺；地美可辛；亚丝醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；硝基可润；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙酰肼；丙卡巴肼；雷佐生；西索菲兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2
”‑
三氯三乙胺；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加胞嘧啶(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“阿糖胞苷”)；环磷酰胺；噻替哌；紫杉烷，例如紫杉醇(bristol-myers squibb oncology，新泽西州普林斯顿)和多烯紫杉醇(rhone-poulenc rohrer，法国安东尼)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，如顺铂和卡铂；长春花碱；铂；依托泊苷(vp-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素c；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维苯；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；cpt-11；拓扑异构酶抑制剂rfs 2000；二氟甲基鸟氨酸(dmfo)；视黄酸衍生物，如targretin
tm
(蓓萨罗丁)、panretin
tm
(阿利维a酸)；ontak
tm
(地尼白介素)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；卡培他滨；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。该定义中还包括用于调节或抑制对癌症的激素作用的抗激素剂，诸如抗雌激素，包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制芳香酶的4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、凯奥昔芬(keoxifene)、ly117018、奥那司酮和托瑞米芬(fareston)；和抗雄激素，如氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
[0499]
在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，可以将如本文所公开的包含表达car的免疫效应细胞(例如，表达靶向bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，例如idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞)的组合物与作为维持疗法的来那度胺组合施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那
度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量将所述来那度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-28天以每日一次约10mg的剂量连续施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约10mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每隔一天约15mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约20mg的剂量口服施用所述来那度胺，持续多达12个周期。在某些实施方案中，建议所有患者使用来那度胺维持疗法。在某些实施方案中，来那度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0500]
在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，可以将如本文所公开的包含表达car的免疫效应细胞(例如，表达靶向bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，例如idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞)的组合物与作为维持疗法的泊马度胺组合施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量口服施用所述泊马度胺，直到疾病进展。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量将所述泊马度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)，直到疾病进展。在某些实施方案中，建议所有患者使用泊马度胺维持疗法。在某些实施方案中，泊马度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0501]
在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，可以将如本文所公开的包含表达car的免疫效应细胞(例如，表达靶向bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，例如idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞)的组合物与作为维持疗法的cc-220(伊贝度胺)组合施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以口服施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220，并且根据
需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述cc-220施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)。在某些实施方案中，建议所有患者使用cc-220维持疗法。在某些实施方案中，所述cc-220维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0502]
在某些实施方案中，在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后，可以将如本文所公开的包含表达car的免疫效应细胞(例如，表达靶向bcma的嵌合抗原受体(car)的免疫细胞(bcma car t细胞)，例如idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞)的组合物与作为维持疗法的cc-220(伊贝度胺)和地塞米松组合施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述cc-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述cc-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述cc-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达car的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约40mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以口服施用所述cc-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以口服施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约20-60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述cc-220，并且根据需要重复28天周期，并且可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述cc-220和地塞米松施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(mm)。在某些实施方案中，建议所有患者使用cc-220和地塞米松维持疗法。在某些实施方案中，所述cc-220和地塞米松维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
[0503]
多种其他治疗剂可以与本文所述的组合物组合使用。在一个实施方案中，将包含表达car的免疫效应细胞的组合物与抗炎剂一起施用。抗炎剂或抗炎药包括但不限于类固
醇和糖皮质激素(包括倍他米松、布地奈德、地塞米松、醋酸氢化可的松、氢化可的松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙、泼尼松、曲安奈德)、非甾体抗炎药(nsaid)(包括阿司匹林、布洛芬、萘普生、甲氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、来氟米特)、抗tnf药物、环磷酰胺和霉酚酸酯。
[0504]
其他示例性nsaid选自布洛芬、萘普生、萘普生钠、cox-2抑制剂(如(罗非昔布)和(塞来昔布))以及唾液酸盐。示例性镇痛剂选自对乙酰氨基酚、羟考酮、曲马多和盐酸丙氧芬。示例性糖皮质激素选自可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙和泼尼松。示例性生物反应调节剂包括针对细胞表面标记物(例如，cd4、cd5等)的分子、细胞因子抑制剂(如tnf拮抗剂(例如，依那西普阿达木单抗和英夫利昔单抗)、趋化因子抑制剂和粘附分子抑制剂。所述生物反应调节剂包括单克隆抗体和重组形式的分子。示例性dmard包括硫唑嘌呤、环磷酰胺、环孢霉素、甲氨蝶呤、青霉胺、来氟米特、柳氮磺胺吡啶、羟基氯喹、gold(口服(金诺芬)和肌肉内)和米诺环素。
[0505]
适合于与本文所设想的经car修饰的t细胞组合的治疗性抗体的说明性例子包括但不限于巴维昔单抗、贝伐单抗(安维汀)、比伐珠单抗、博纳吐单抗、可那木单抗、达雷木单抗、度戈妥珠单抗、达西组单抗、达雷妥尤单抗、埃罗妥珠单抗(huluc63)、吉妥珠单抗、替伊莫单抗、雷英妥昔单抗、奥英妥珠单抗、洛沃妥珠单抗、卢卡木单抗、米拉组单抗、帕克莫单抗、奥卡妥珠单抗、奥法木单抗、利妥昔单抗、司妥昔单抗、替妥木单抗和乌妥昔单抗。
[0506]
针对pd-1或pd-l1和/或ctla-4的抗体可以与本文所公开的car t细胞(例如，bcma car t细胞，例如表达包含bcma-2单链fv片段的嵌合抗原受体的car t细胞，例如idecabtagene vicluel细胞)组合使用。在特定实施方案中，所述pd-1抗体选自：纳武单抗、派姆单抗和匹地利珠单抗。在特定实施方案中，所述pd-l1抗体选自：阿特朱单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗和bms-986559。在特定实施方案中，所述ctla-4抗体选自伊匹单抗和曲美木单抗。
[0507]
在某些实施方案中，将本文所述的组合物与细胞因子组合施用。如本文所用的“细胞因子”意指由一个细胞群释放的作为细胞间介体作用于另一种细胞的蛋白质的通用术语。此类细胞因子的例子是淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子包括生长激素，如人生长激素、n-甲硫氨酰基人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，如卵泡刺激素(fsh)、甲状腺刺激素(tsh)和黄体化激素(lh)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；泌乳素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子-α和-β；缪勒抑制物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整合素；血小板生成素(tpo)；神经生长因子，如ngf-β；血小板生长因子；转化生长因子(tgf)，如tgf-α和tgf-β；胰岛素样生长因子-i和-ii；促红细胞生成素(epo)；骨诱导因子；干扰素，如干扰素-α、-β和-γ；集落刺激因子(csf)，如巨噬细胞-csf(m-csf)；粒细胞-巨噬细胞-csf(gm-csf)；和粒细胞-csf(g-csf)；白介素(il)，如il-1、il-1α、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-7、il-8、il-9、il-10、il-11、il-12、il-15、il-21；肿瘤坏死因子，如tnf-α或tnf-β；以及其他多肽因子，包括lif和kit配体(kl)。如本文所用，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质，以及天然序列细胞因子的生物活性等同物。
[0508]
在某些实施方案中，将本文所述的组合物与用于治疗细胞因子释放综合征(crs)
的疗法组合施用。crs是可能在施用某些生物治疗剂(例如表达嵌合抗原受体的t细胞或nk细胞(car t细胞或car nk细胞)，例如bcma car t细胞)后发生的全身性炎性免疫应答。如下所示，crs可以与细胞因子风暴区别开，细胞因子风暴是具有类似临床表型和生物标记物特征的病症。在crs中t细胞在识别肿瘤抗原时被激活，而在细胞因子风暴中免疫系统的激活与肿瘤靶向无关；在crs中il-6是关键介导物，因此可以使用抗il-6或抗il-6受体(il-6r)抑制剂缓解症状，而在细胞因子风暴中肿瘤坏死因子α(tnfα)和干扰素γ(ifnγ)是关键介导物，并且可以施用抗炎疗法(例如，皮质类固醇)缓解症状。抗il-6受体(il-6r)抗体(如托珠单抗)可以用于管理crs，任选地使用支持性护理。抗il-6抗体(如司妥昔单抗)可以另外地或可替代地用于管理crs，任选地使用支持性护理。如果输注了car t细胞或car nk细胞的患者显示出1级、2级、3级或4级crs中的任一种，但通常保留更高级别(例如3级或4级)，则可以使用il-6阻断(例如，使用抗il-6r抗体或抗il-6抗体)。可以施用皮质类固醇以管理伴随crs或由crs引起的神经毒性，或将皮质类固醇施用至用il-6阻断治疗的患者，但通常不用作crs的一线治疗。用于管理crs的其他方式描述于例如shimabukuro-vornhagen等人,“cytokine release syndrome,”j.immunother.cancer 6:56(2018)中。
[0509]
表4：可以使用penn分级量表对crs分级：
[0510]
表5：也可以通过ctcae(美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准)v4.0对crs分级：
[0511]
表6：也可以通过lee等人(“current concepts in the diagnosis and management of cytokine release syndrome,”blood,2014,124:188
–
195)的系统对crs分级：
[0512]
在特定实施方案中，组合物包含本文所设想的在如本文所公开的pi3k抑制剂的存在下培养并表达以下一种或多种标记物的car t细胞：cd3、cd4、cd8、cd28、cd45ra、cd45ro、cd62、cd127和hla-dr，其可以通过阳性或阴性选择技术进一步分离。在一个实施方案中，组合物包含表达选自以下的一种或多种标记物的特定t细胞亚群：cd62l、ccr7、cd28、cd27、cd122、cd127、cd197；和cd38或cd62l、cd127、cd197和cd38，其通过阳性或阴性选择技术进一步分离。在各种实施方案中，组合物不表达或基本上不表达以下一种或多种标记物：cd57、cd244、cd160、pd-1、ctla4、tim3和lag3。
[0513]
在一个实施方案中，与未使用pi3k抑制剂的情况下激活和扩增的t细胞群体相比，选自cd62l、cd127、cd197和cd38的一种或多种标记物的表达增加至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍或更多倍。
[0514]
在一个实施方案中，与在使用pi3k抑制剂的情况下激活和扩增的t细胞群体相比，选自cd57、cd244、cd160、pd-1、ctla4、tim3和lag3的一种或多种标记物的表达降低至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍或更多倍。5.10.治疗方法
[0515]
本文所设想的经基因修饰的免疫效应细胞提供了用于治疗b细胞相关病症的过继免疫疗法的改进的方法，所述b细胞相关病症包括但不限于免疫调节病症和血液恶性肿瘤。5.10.1.一般实施方案
[0516]
在特定实施方案中，通过用本文所设想的car对初级免疫效应细胞进行基因修饰，将初级免疫效应细胞的特异性重定向至b细胞。在各种实施方案中，使用病毒载体用编码car的特定多核苷酸对免疫效应细胞进行基因修饰，所述car包含结合bcma多肽(例如，人bcma多肽)的鼠抗bcma抗原结合结构域；铰链结构域；跨膜(tm)结构域；短的寡肽或多肽接头，其将tm结构域与car的细胞内信号传导结构域连接；和一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域；以及初级信号传导结构域。
[0517]
在一个实施方案中，包括一种类型的细胞疗法，其中t细胞经基因修饰以表达靶向表达bcma的b细胞的car。在另一个实施方案中，在il-2和pi3k抑制剂的存在下培养所述抗bcma car t细胞，以增加car t细胞的治疗特性和持久性。然后将所述car t细胞输注至有需要的接受者。输注的细胞能够杀伤所述接受者中的致病b细胞。与抗体疗法不同，car t细胞能够在体内复制，从而产生长期持久性，从而导致持续的癌症疗法。
[0518]
在一个实施方案中，所述car t细胞可以在体内经历稳健的t细胞扩增，并且可以持续延长的时间。在另一个实施方案中，所述car t细胞进化为特异性记忆t细胞，其可以被重新激活以抑制任何另外的肿瘤形成或生长。
[0519]
在特定实施方案中，包含含有本文所设想的car的免疫效应细胞的组合物用于治疗与异常b细胞活性相关的病症。
[0520]
可以使用包含本文所设想的car的免疫效应细胞来治疗、预防或改善的病症的说明性例子包括但不限于：系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、重症肌无力、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜、抗磷脂综合征、恰加斯病、格雷夫病、韦格纳肉芽肿、结节性多动脉炎、舍格伦综合征、寻常天疱疮、硬皮病、多发性硬化、抗磷脂综合征、anca相关性血管炎、古德帕斯丘病(goodpasture's disease)、川崎病和快速进展性肾小球性肾炎。
[0521]
经修饰的免疫效应细胞也可以用于浆细胞障碍，如重链疾病、原发性或免疫细胞相关淀粉样变性和意义未明的单克隆丙种球蛋白病(mgus)。
[0522]
如本文所用，“b细胞恶性肿瘤”是指在如下文讨论的b细胞(一种免疫系统细胞类型)中形成的一种类型的癌症。
[0523]
在特定实施方案中，包含本文所设想的经car修饰的t细胞的组合物用于治疗血液恶性肿瘤，包括但不限于b细胞恶性肿瘤，例如像多发性骨髓瘤(mm)和非霍奇金淋巴瘤(nhl)。
[0524]
多发性骨髓瘤是成熟浆细胞形态的b细胞恶性肿瘤，其特征在于这些细胞类型的单个克隆的致瘤性转化。这些浆细胞在骨髓(bm)中增殖，并且可能侵袭邻近的骨骼切有时甚至侵袭血液。多发性骨髓瘤的变体形式包括显性多发性骨髓瘤、冒烟型多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、非分泌性骨髓瘤、igd骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、骨孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤(参见例如，braunwald等人(编辑),harrison’s principles of internal medicine,第15版(mcgraw-hill 2001))。
[0525]
多发性骨髓瘤的分期如下：表7：durie-salmon mm分期标准
表8：国际分期系统mm分期标准
[0526]
非霍奇金淋巴瘤包括一大类淋巴细胞(白细胞)的癌症。非霍奇金淋巴瘤可以发生在任何年龄，并且通常以淋巴结比正常值大、发热和体重减轻为特征。有许多不同类型的非霍奇金淋巴瘤。例如，非霍奇金淋巴瘤可以分为侵袭性(快速生长)和惰性(缓慢生长)类型。尽管非霍奇金淋巴瘤可以源自b细胞和t细胞，如本文所用，术语“非霍奇金淋巴瘤”和“b细胞非霍奇金淋巴瘤”可以互换使用。b细胞非霍奇金淋巴瘤(nhl)包括伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在骨髓或干细胞移植之后发生的淋巴瘤通常是b细胞非霍奇金淋巴瘤。
[0527]
慢性淋巴细胞白血病(cll)是惰性(缓慢生长)癌症，其导致称为b淋巴细胞或b细胞的不成熟白细胞的缓慢增加。癌细胞通过血液和骨髓传播，并且影响淋巴结或其他器官，如肝脏和脾脏。cll最终导致骨髓衰竭。有时，在所述疾病的后期，所述疾病被称为小淋巴细胞淋巴瘤。
[0528]
在特定实施方案中，提供了包括向有需要的患者单独地或与一种或多种治疗剂组合施用治疗有效量的本文所设想的表达car的免疫效应细胞或包含其的组合物的方法。在某些实施方案中，本公开文本的细胞用于治疗有风险患上与异常b细胞活性或b细胞恶性肿瘤相关的病症的患者。因此，在某些实施方案中，本文提供了用于治疗或预防与异常b细胞活性或b细胞恶性肿瘤相关的病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所设想的经car修饰的细胞。
[0529]
如本文所用，术语“个体”和“受试者”通常可互换使用并且是指展现出可使用本文其他地方所公开的基因疗法载体、基于细胞的治疗剂和方法治疗的疾病、障碍或病症的症状的任何动物。在具体实施方案中，受试者包括展现出可使用本文其他地方所公开的基因疗法载体、基于细胞的治疗剂和方法治疗的造血系统的疾病、障碍或病症(例如，b细胞恶性肿瘤)的症状的任何动物。合适的受试者(例如，患者)包括实验动物(如小鼠、大鼠、兔子或豚鼠)、农场动物和家养动物或宠物(如猫或狗)。包括非人灵长类动物并且优选人患者。典型的受试者包括患有b细胞恶性肿瘤、被诊断患有b细胞恶性肿瘤、或有风险患有b细胞恶性肿瘤的人患者。
[0530]
如本文所用，术语“患者”是指已被诊断患有可使用本文其他地方所公开的基因疗法载体、基于细胞的治疗剂和方法治疗的特定疾病、障碍或病症的症状的受试者。
[0531]
如本文所用，“治疗”(“treatment”或“treating”)包括对疾病或病理状态的症状或病理学的任何有益或期望的作用，并且甚至可以包括正在治疗的疾病或病症的一种或多种可测量标记物的最小降低。治疗可以任选地包括降低或改善所述疾病或病症的症状，或者延迟所述疾病或病症的进展。“治疗”不一定指示所述疾病或病症或其相关症状的完全根除或治愈。
[0532]
如本文所用，“预防”和类似词语如“预防”(“prevented”、“preventing”)等表示用于预防、抑制疾病或病症的发生或复发或者降低所述疾病或病症的发生或复发的可能性的方法。其还指延迟疾病或病症的发作或复发，或者延迟疾病或病症的症状的发生或复发。如本文所用，“预防”和类似词语还包括在所述疾病或病症的发作或复发之前降低疾病或病症的强度、影响、症状和/或负荷。
[0533]“增强”或“促进”或“增加”或“扩增”通常是指本文所设想的组合物(例如，编码car的经基因修饰的t细胞或载体)产生、引发或引起与由媒介物或对照分子/组合物引起的反应相比更大的生理反应(即下游效应)。可测量的生理反应可以包括t细胞扩增、激活、持久性的增加和/或癌细胞杀伤能力的增加，以及从本领域的理解和本文的描述中看出的。“增加”或“增强”的量通常是“统计学上显著的”量，并且可以包括由媒介物或对照组合物产生的反应的1.1、1.2、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30倍或更多倍(例如，500、1000倍)(包括其间和高于1的所有整数和小数点，例如，1.5、1.6、1.7、1.8等)的增加。
[0534]“减少”或“降低”或“减轻”或“减小”或“减弱”通常是指本文所设想的组合物产生、引发或引起与由媒介物或对照分子/组合物引起的反应相比较小的生理反应(即下游效应)的能力。“减少”或“减小”的量通常是“统计学上显著的”量，并且可以包括由媒介物、对照组合物产生的反应或在特定细胞谱系中的反应的1.1、1.2、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30倍或更多倍(例如，500、1000倍)(包括其间和高于1的所有整数和小数点，例如，1.5、1.6、1.7、1.8等)的减少。
[0535]“维持(maintain)”或“保持”或“维持(maintenance)”或“无变化”或“基本不变”或“基本不减少”通常是指本文所设想的组合物在细胞中产生、引发或引起与由媒介物、对照分子/组合物引起的反应或在特定细胞谱系中的反应相比基本相似的生理反应(即下游效应)的能力。可比较的反应是与参考反应没有显著差异或可测量的差异的反应。
[0536]
在一个实施方案中，治疗有需要的受试者中的b细胞相关病症的方法包括施用有效量(例如，治疗有效量)的包含本文所设想的经基因修饰的免疫效应细胞的组合物。施用的量和频率将根据诸如以下的因素来确定：患者的状况，以及患者疾病的类型和严重程度，但适当剂量可通过临床试验来确定。
[0537]
在一个实施方案中，施用于受试者的组合物中t细胞的量是至少0.1x105个细胞、至少0.5x105个细胞、至少1x105个细胞、至少5x105个细胞、至少1x106个细胞、至少0.5x107个细胞、至少1x107个细胞、至少0.5x108个细胞、至少1x108个细胞、至少0.5x109个细胞、至少1x10
9个细胞
、至少2x109个细胞、至少3x109个细胞、至少4x109个细胞、至少5x109个细胞或至少1x10
10
个细胞。在特定实施方案中，向受试者施用约1x107个car t细胞至约1x109个car t细胞、约2x107个car t细胞至约0.9x109个car t细胞、约3x107个car t细胞至约0.8x109个car t细胞、约4x107个car t细胞至约0.7x109个car t细胞、约5x107个car t细胞至约0.6x109个car t细胞或约5x107个car t细胞至约0.5x109个car t细胞。
[0538]
在一个实施方案中，施用于受试者的组合物中t细胞的量是至少0.1x104个细胞/kg体重、至少0.5x104个细胞/kg体重、至少1x10
4个细胞
/kg体重、至少5x104个细胞/kg体重、至少1x105个细胞/kg体重、至少0.5x106个细胞/kg体重、至少1x106个细胞/kg体重、至少0.5x107个细胞/kg体重、至少1x107个细胞/kg体重、至少0.5x108个细胞/kg体重、至少1x108个细胞/kg体重、至少2x108个细胞/kg体重、至少3x108个细胞/kg体重、至少4x108个细胞/kg体重、至少5x108个细胞/kg体重或至少1x109个细胞/kg体重。在特定实施方案中，向受试者施用约1x106个car t细胞/kg体重至约1x108个car t细胞/kg体重、约2x106个car t细胞/kg体重至约0.9x108个car t细胞/kg体重、约3x106个car t细胞/kg体重至约0.8x108个car t细胞/kg体重、约4x106个car t细胞/kg体重至约0.7x108个car t细胞/kg体重、约5x106个car t细胞/kg体重至约0.6x108个car t细胞/kg体重或约5x106个car t细胞/kg体重至约0.5x108个car t细胞/kg体重。
[0539]
本领域普通技术人员将认识到，可能需要多次施用本公开文本的组合物以实现所需的疗法。例如，组合物可以在1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年、2年、5年、10年或更长时间的时间跨度内施用1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次或更多次。
[0540]
在某些实施方案中，可能需要向受试者施用激活的免疫效应细胞，然后重新抽取血液(或进行单采术)，根据本公开文本激活来自所述血液的免疫效应细胞，并向所述患者再输注这些激活和扩增的免疫效应细胞。此过程可以每几周进行多次。在某些实施方案中，可以从10cc至400cc的抽取血液激活免疫效应细胞。在某些实施方案中，从20cc、30cc、40cc、50cc、60cc、70cc、80cc、90cc、100cc、150cc、200cc、250cc、300cc、350cc或400cc或更多的抽取血液激活免疫效应细胞。不受理论限制，使用这种多次抽血/多次再输注方案可以有助于筛选出特定免疫效应细胞群体。
[0541]
本文所设想的组合物的施用可以任何便捷方式来实施，包括通过气溶胶吸入、注射、摄入、输液、植入或移植来实施。在一个实施方案中，通过肠胃外施用组合物。如本文所
用的短语“肠胃外的施用”和“肠胃外地施用”是指除肠内和局部施用以外的施用方式，通常通过注射并且包括但不限于血管内、静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、肿瘤内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、以及胸骨内注射和输注。在一个实施方案中，通过直接注射至肿瘤、淋巴结或感染部位向受试者施用本文所设想的组合物。
[0542]
在一个实施方案中，向有需要的受试者施用有效量的组合物以增加所述受试者中对b细胞相关病症的细胞免疫应答。所述免疫应答可以包括由能够杀伤感染的细胞的细胞毒性t细胞介导的细胞免疫应答、调节性t细胞和辅助性t细胞应答。也可以诱导体液免疫应答，其主要由能够激活b细胞从而导致抗体产生的辅助性t细胞介导。多种技术可以用于分析由本公开文本的组合物诱导的免疫应答的类型，所述技术在本领域中有充分描述；例如current protocols in immunology,由john e.coligan,ada m.kruisbeek,david h.margulies,ethan m.shevach,warren strober编辑(2001)john wiley&sons,ny,n.y.。
[0543]
在t细胞介导的杀伤的情况下，car配体结合启动了向所述t细胞的car信号传导，从而激活多种t细胞信号传导途径，其诱导t细胞产生或释放能够通过多种机制诱导靶细胞凋亡的蛋白质。这些t细胞介导的机制包括(但不限于)细胞内细胞毒性颗粒从所述t细胞转移到靶细胞、t细胞分泌可直接地(或经由招募其他杀伤效应细胞间接地)诱导靶细胞杀伤的促炎性细胞因子、以及t细胞表面的死亡受体配体(例如fasl)的上调，所述死亡受体配体在与靶细胞上其同源死亡受体(例如fas)结合后诱导靶细胞凋亡。
[0544]
在一个实施方案中，本文提供了一种治疗被诊断患有b细胞相关病症的受试者的方法，所述方法包括从被诊断患有表达bcma的b细胞相关病症的受试者移取免疫效应细胞、用包含编码如本文所设想的car的核酸的载体对所述免疫效应细胞进行基因修饰从而产生经修饰的免疫效应细胞群体、以及将所述经修饰的免疫效应细胞群体施用至同一受试者。在特定实施方案中，所述免疫效应细胞包括t细胞。
[0545]
在某些实施方案中，本文还提供了用于在受试者中刺激免疫效应细胞介导的对靶细胞群体的免疫调节剂反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用表达编码car分子的核酸构建体的免疫效应细胞群体的步骤。
[0546]
用于施用本文所述的细胞组合物的方法包括如下任何方法，所述方法有效地导致离体再引入直接在所述受试者中表达本公开文本的car的经基因修饰的免疫效应细胞，或者再引入免疫效应细胞的经基因修饰的祖细胞，其在引入受试者中后分化为表达car的成熟免疫效应细胞。一种方法包括用根据本公开文本的核酸构建体离体转导外周血t细胞，并将转导的细胞返回至所述受试者中。
[0547]
将本说明书中引用的所有出版物、专利申请和已发布的专利通过引用以其整体并入于此，其程度如同特别且单独地指出通过引用并入每个单独的出版物、专利申请或已发布的专利。
[0548]
尽管出于清楚理解的目的已经通过说明和实施例详细地描述了前述发明，但是根据本发明的传授内容，本领域普通技术人员将容易清楚的是，可以在不脱离所附权利要求的精神或范围的情况下对其进行某些改变和修改。仅通过说明的方式而不是通过限制的方式，提供以下实施例。本领域技术人员将容易认识到多种非关键参数，可以改变或修改这些参数以产生本质上相似的结果。
6.实施例6.1.实施例1：bcma car的构建
[0549]
含有抗bcma scfv抗体的car被设计为含有与抗bmca scfv可操作地连接的mnd启动子、来自cd8α的铰链和跨膜结构域以及cd137共刺激结构域、然后是cd3ζ链的细胞内信号传导结构域。参见例如图1。还参见国际专利号wo 2016/094304，将其通过引用以其整体并入本文，特别地并入了bcma car及其特征的公开内容。图1所示的bcma car包含用于在免疫效应细胞上表面表达的cd8α信号肽(sp)序列。示例性bcma car的多核苷酸序列如seq id no:10(抗bcma02 car的多核苷酸序列)中所示；bcma car的示例性多肽序列如seq id no:9(抗bcma02-car的多肽序列)中所示；并且示例性car构建体的载体位置示于图1。表9显示了如图1所示的包含bcma car构建体的bcma car慢病毒载体的各种核苷酸区段的身份、genbank参考(在适用的情况下)、来源名称和引用。表9.
6.2.实施例2：ide-cel治疗中的生物标记物
[0550]
1期临床试验是用富含自体t淋巴细胞的群体idecabtagene vicluel(ide-cel)进行的，所述富含自体t淋巴细胞的群体包含用编码靶向人bcma的car的抗b细胞成熟抗原(bcma)嵌合抗原受体(car)(抗bcma02 car，如上所述)慢病毒载体转导的细胞。本研究是一项开放标签、多中心1期剂量递增和扩展研究，其用于确定ide-cel在患有复发和难治性多发性骨髓瘤(rrmm)的受试者中的安全性和有效性，其中每个受试者已接受过≥3个先前疗法线，包括来那度胺、pi(蛋白酶体抑制剂)和/或抗cd38抗体。所述研究纳入了33名受试者，其中不考虑bcma表达水平。在car t细胞施用之前第-5、-4和-3天，受试者用30mg/m2氟达拉
滨和300mg/m2阿糖胞苷进行淋巴细胞清除。将ide-cel以50x105个细胞、150x105个细胞、450x105个细胞和800x105个细胞的剂量量施用。在ide-cel施用后第一周内，监测受试者的细胞因子应答综合征(crs)的发展。在ide-cel施用后第1个月评估功效，然后每月评估持续至少18个月。
[0551]
对在复发性/难治性多发性骨髓瘤中的ide-cel的试验中从33名患者收集的数据进行回顾性分析，并且在随后2期ide-cel试验(nct03361748)中在128名患者的较大群组中对结果进行定性验证。在第0天(施用日)评估受试者血清中可溶性bcma(sbcma)的量，以及受试者血浆中il-6、tnfα和铁蛋白的量。在ide-cel输注后第1、2、3、4、7、9、11、14、21天和第1个月评估受试者血浆中的il-6、tnfα和铁蛋白含量，并在输注ide-cel后第2、4、7、9、11、14、21天和第1、2、3、4、6个月以及随后以三个月间隔评估受试者血清中的sbcma。
[0552]
对于所有输注后样品收集，计算相对于ide-cel输注日的il-6和tnf的倍数变化。在未实现部分反应(pr)或更好反应的患者中，在第1、2、7和9天il-6的倍数变化显著较低(p《0.01)(图2a)。在未实现pr或更好反应的患者中，在第2、7和9天tnf的倍数变化显著较低(p《0.02)(图2b)。
[0553]
对于所有输注后样品收集，计算相对于输注日的可溶性bcma的倍数变化。在第7、9、11、14、21天、第1个月和第2个月，与保持疾病稳定或进展的患者相比，未能实现pr或更好反应的受试者显示出可溶性bcma的显著较少的降低(1期研究中，p《0.03)。特别地，与实现pr或更好反应的受试者相比，在ide-cel施用之后展示疾病进展或疾病稳定的受试者在第1个月显示出sbcma的显著较少的降低(图3；wilcoxon auc＝.01，1期试验的p＝.00013，2期试验的p＝9.43x10-8
，且在第1个月无反应者的中值可溶性bcma降低％为6.8％，相比之下，pr或更好反应者的中值可溶性bcma降低％为96.9％)。
[0554]
三十三名受试者中有七名维持了至少18个月的无进展存活期。这七名受试者在第2个月时的可溶性bcma浓度明显低于群组中的其他受试者(p＝0.0016，图4)。6.3.实施例3：ide-cel治疗中的生物标记物
[0555]
ide-cel在复发性/难治性多发性骨髓瘤(mm)的i期临床试验中已显示出有前景的功效[客观反应率，85％；中值无进展存活期(pfs)为11.8个月(95％ci 6.2，17.8)；反应的中值持续时间为10.9个月(95％ci 7.2至不可估计)]，但一部分入选患者对ide-cel无反应，并且反应持续时间因反应者而异(raje等人,n.engl.j.med.2019,380:1726-1737)。为了深入了解这一观察结果，对来自i期研究的33名患者进行了回顾性分析。
[0556]
在用ide-cel输注之前和之后通过elisa测量血液中十种免疫相关因子(gmcsf、ifn-γ、il-10、il-1β、il-2、il-6、il-8、mcp-1、tnf-α)和可溶性bcma的浓度，以及通过流式细胞术和luminex测量290种ide-cel car t细胞药物产品属性。使用单变量和多变量(随机森林)方法评估绝对浓度和相对于基线的倍数变化与总体和长期反应的相关性。
[0557]
结果：可溶性bcma的输注前(即基线)水平与m蛋白水平可测量的20/33名患者中的血清单克隆蛋白(m蛋白)水平显著相关(ρ＝.49；p＝0.03)且与具有可测量水平的23/33名患者中的所涉及的游离轻链(flc)的浓度显著相关(ρ＝.59；p＝0.005)。这些结果表明，sbcma与现有的肿瘤负荷量度一致，并且可在所有患者中进行评估(而m蛋白和flc不是在所有患者中都可以评估)，并且是一种用于监测反应和复发的有吸引力的潜在泛患者生物标记物。对实现部分反应(pr)或更好反应的患者中的可溶性bcma水平的调查证实，可溶性
bcma水平早在输注后七天就相对于无反应者(nr)显著降低(对于≥pr，中值降低50％，相比之下，对于nr，中值增加27％，p＝0.02)(图5a)。在输注后第1个月可溶性bcma水平的减少最大(图5b)。在输注之后一个月可溶性bcma的倍数变化将实现pr或更好反应的患者与未实现pr或更好反应的患者分层(p＝0.0001)(图5b)。保持对ide-cel的反应≥18个月的患者(即持久反应者/m18 r)在第2个月时经历了更大深度的可溶性bcma清除(对于持久反应者/m18 r的中值浓度为1835ng/l，相比之下，对于非持久反应者/m18 nr的中值浓度为6299ng/l，p＝0.002)(图6)。特别地，在第2个月，持久反应者相比于非持久反应者具有显著较低的sbcma水平(图6)。因此，输注后2个月缺乏sbcma清除回顾性地确定了患者具有早期进展的风险。
[0558]
在对ide-cel有反应的具有pr或更好反应的患者中，输注后第1-9天血液中il-6和tnf-α的诱导也显著较高(例如，在第2天，对于≥pr，il-6中值倍数变化增加为2.9，相比之下，对于nr为0.7，p＝0.00，如图7a所示；并且在第2天，对于pr相比于nr，tnf-α中值倍数变化增加为约2个对数倍数变化，p＝0.006，如图7b所示)，这与活性炎性应答(即，由t细胞激活诱导的细胞因子应答)和较高水平的car t扩增是一致的。参见图2a-图2b。
[0559]
与较长无进展存活期(pfs)相关的若干个car t细胞药物产品协变量包括：(1)较高的il-2和tnf-α产生(p＝0.03)；(2)激活的cd8-car t细胞的降低的组成(cd3 /cd8 /car /cd25 ；p＝0.015)；以及(3)cd4-car t细胞中降低的衰老群体(cd3 /cd4 /car /cd57 ；p＝0.05)。在ide-cel药物产品中，较长的pfs与cd4 car t细胞中cd57(衰老的标记物)的较低表达和cd8 car t细胞中cd25(激活的标记物)的较低表达相关。
[0560]
对33名接受≥150
×
106个car t的患者进行存活率和安全性相关性分析。从基于最终ide-cel药物产品的多变量分析生成部分依赖性和局部效应图。较长的pfs与由car t细胞产生的增加的il-2和cd8 car t细胞中的较低cd25阳性相关(图8)。较长的pfs与ide-cel的较高剂量相关(数据未显示)。
[0561]
基于最终ide-cel药物产品进行单变量分析。使用单变量和多变量(随机森林)模型将患者反应与绝对浓度以及免疫相关因子和药物产品属性相对于基线的倍数变化相关联。图9a显示，随着cd8 car t细胞中cd25(激活的标记物)表达的降低，pfs越长。特别地，cd3 、cd8 、car 、cd25 细胞的危害比(hr)是1.0396(p＝0.041)。cd3 、cd8 、car 、cd25 细胞子集代表激活的cd8 car t细胞。图9b显示，较高剂量的car t细胞和car t细胞产生的增加的il-2与细胞因子释放综合征(crs)的较高可能性相关。
[0562]
结论：临床试验的结果表明，可溶性bcma可以作为多发性骨髓瘤的肿瘤负荷和反应评估的通用替代物。临床试验的生物标记物分析确定了与对ide-cel的反应相关的候选药物产品属性和可溶性因子。本文提供的数据表明，可溶性bcma的变化与对ide-cel的早期和持久反应相关。值得注意的是，如在输注之后2个月测定的可溶性bcma的清除深度与长期反应密切相关，可能允许在骨髓瘤进展的标准标记物出现之前鉴定出有进展风险的患者。sbcma表达的快速和显著降低可能是对ide-cel的早期和持久反应的稳健的生物标记物。此外，在输注后2个月缺乏sbcma清除可能优于用于鉴定有进展风险的患者的骨髓瘤反应的标准标记物(如m蛋白和flc)。
[0563]
血液中药物产品属性和蛋白质浓度的测量提供了对ide-cel的反应的有用关联，并且使用随机(存活)森林鉴定更重要的候选属性并生成假设以用于在更大的群组中验证
(例如，bb2121在患有复发性和难治性多发性骨髓瘤的受试者中的功效和安全性研究(karmma研究)，nct03361748)。与增加的功能性细胞因子表达和降低的激活和衰老t细胞标记物二者均相关的ide-cel药物产品属性也与较长的pfs相关。观察到在无反应患者中缺乏输注后il-6和tnf-α的诱导，这与这些患者也经历了较低水平的car t扩增的观察结果(raje等人,n engl j med.2019,380:1726-1737)是一致的。6.4实施例4：用ide-cel治疗后在患有复发性和难治性多发性骨髓瘤的患者中的肿瘤细胞bcma表达
[0564]
用idecabtagene vicleucel(ide-cel；bb2121)治疗患有复发性和难治性多发性骨髓瘤(rrmm)的患者已经在这些患者中产生了频繁且深度的反应，但在初始反应之后也观察到无反应和疾病进展(pd)。在患有b细胞恶性肿瘤、尤其是急性淋巴细胞白血病的患者中，已经以相对较高频率报告了由cd19抗原丢失介导的对cd19定向的car t细胞的获得性抗性。b细胞成熟抗原(bcma)是肿瘤坏死因子受体超家族的成员，其在多发性骨髓瘤细胞上几乎普遍表达，而在浆细胞和一些成熟b细胞上的正常表达受到限制。虽然在已经施用了bcma定向的car t细胞的患者中已报告了bcma抗原丢失的轶事案例，但尚未报告过bcma抗原丢失作为逃逸机制(即获得性抗性)的总体频率。idecabtagene-vicluel(ide-cel，bb2121)是一种bcma定向的嵌合抗原受体(car)t细胞疗法，其在2期karmma研究中治疗的患有复发性和难治性多发性骨髓瘤(rrmm)的患者中显示出深度且持久的反应。总反应率为73％，且完全反应率为33％。然而，一些患者并没有出现深度反应，或在对ide-cel初始反应后进展。为了深入了解疾病进展(pd)时的肿瘤bcma表达，在2期karmma研究(nct03361748)中对使用ide-cel治疗的患者进行初步分析的基础上，对评价肿瘤bcma表达的直接和间接数据进行了分析。特别地，在karmma试验中对治疗前cd138 骨髓浆细胞上的bcma表达以及与对ide-cel的反应的相关性进行评估。此外，进行了在ide-cel治疗的患者中进展时的cd138 骨髓浆细胞上的bcma抗原表达和可溶性bcma(sbcma)水平。
[0565]
方法：使用针对细胞内bcma表位的单克隆抗体，通过免疫组织化学(ihc)评估福尔马林固定石蜡包埋脱钙骨髓活检(bmb)中肿瘤相关bcma表达。通过ihc在ide-cel输注前收集的骨髓活检中评估bcma表达。由训练有素的病理学家评价活检内表达bcma的cd138 细胞的分数和bcma的平均染色强度。≥3％的cd138 细胞(指示肿瘤)需要对bcma表达进行评分。手动对骨髓活检内cd138 细胞中的bcma 细胞百分比和平均表达进行评分，并在0、1、2、3 等级上确定平均bcma强度。通过流式细胞术鉴定骨髓(bm)抽吸物中肿瘤细胞表面bcma表达。在从新鲜骨髓抽吸物分离的骨髓单个核细胞中检测bcma受体密度，并通过流式细胞术进行分析。使用quantibrite beads
tm
(bd biosciences)对bcma受体密度进行定量，并对骨髓抽吸物内的恶性浆细胞进行评分。在血液中评估代表来自bcma表达细胞的分泌性蛋白的可溶性bcma(sbcma)。通过免疫测定(luminex，目录号lxsahm-01)在从外周血分离的血清中评价sbcma。定量下限(lloq)为4.4ng/ml，并且是用于不可检测的sbcma水平的阈值。低于lloq的值估算为2.2ng/ml。通过基于下一代测序(ngs)的方法(adaptive)评价微小残留疾病(mrd)。使用国际骨髓瘤工作组标准评估肿瘤反应。
[0566]
结果：在输注之前在所有可评价的患者中均观察到肿瘤bcma表达(参见图10)。在ide-cel输注(n＝128)之前，所有接受治疗的具有可评价bmb的患者(112/112)均通过ihc显示出在cd138 肿瘤细胞上的bcma表达(两名患者因在骨髓活检中对于实现对bcma评分不充
足的(≤1％)cd138 细胞％而无法评价(ne))。79％(n＝88/112)的患者在其治疗前的骨髓活检中存在的所有恶性浆细胞上表达bcma(图10)。在79％(88/112)患者中，100％的cd138 细胞表达bcma，并具有不同水平的染色强度(1 至3 )；并且只有3名患者显示出在50％的cd138 细胞(指示恶性浆细胞)上的bcma表达。在患者群组中观察到一系列bcma染色强度。
[0567]
较高的bcma受体密度而非较高的bcma阳性细胞百分比与更深的肿瘤反应相关(参见图11a-图11d)。特别地，较高的基线bcma受体密度与更深的肿瘤反应相关，但在反应组中观察到明显的重叠。在基线检查时评价bcma受体表面密度与bor和pfs的相关性。根据这些数据，未观察到表达bcma的骨髓瘤细胞的百分比(bcma ％)与肿瘤反应或反应深度之间的明确关联(参见图11a和图11b，其分别显示在反应者和无反应者中通过ihc测得的bcma ％和依据最佳总体反应(bor)的通过ihc获得的bcma ％)。与无反应者相比，对于具有非常好的部分应答(vgpr)或完全反应/严格的完全反应(cr/scr)的患者观察到bcma受体密度的统计上显著的差异(图11c)。在图11d中，显示了相对于受体密度低于中值的那些患者，受体密度高于中值的患者的pfs事件的危害比(hr)。未观察到基线bcma受体密度与无进展存活期之间的统计上显著的关联(图11d)。
[0568]
大多数复发的患者患有表达bcma的肿瘤(参见表10和表11)。bcma在大多数(15/16)进展时的可评价骨髓活检中表达。一名具有部分反应的最佳总体反应的患者在进展中显示出抗原丢失的可能迹象。输注后3个月或复发时，bcma表达或bcma阳性细胞百分比的上调或下调的趋势不一致。
[0569]
表10：具有部分反应的bor的进展患者中的bcma表达。
[0570]
在表10中总结的结果中，对于来自最初有反应的患者的可获得的肿瘤活检，通过ihc评价了bcma表达细胞的频率。报告了来自单独患者数据的bcma 细胞的百分比。ne表明存在太少的cd138 (≤1％)而不能说明bcma染色的缺乏。对于第3个月访视的pd表明在第3个月时患者进展。第3个月样品是进展样品，并且记录在进展列中。表10中的缩写如下：bcma，b细胞成熟抗原；bor，最佳总体反应；ihc，免疫组织化学；ne，不可评价；pd，疾病进展。
[0571]
表11：具有vgpr或更好的bor的进展患者中的bcma表达。
*存在很少cd138 细胞；然而，全部呈bcma阳性，导致将样品解释为bcma 。
[0572]
在表11中总结的结果中，对于来自最初有反应的患者的可获得的肿瘤活检，通过ihc评价了bcma表达细胞的频率。报告了来自单独患者数据的bcma 细胞的百分比。nd表明活检样品无法用于测试。ne表明存在太少的(≤1％)cd138 细胞而不能说明bcma染色的缺乏。表11中的缩写如下：bcma，b细胞成熟抗原；bor，最佳总体反应；ihc，免疫组织化学；nd，未进行；ne，不可评价；vgpr，非常好的部分反应。
[0573]
bcma表达细胞百分比或bcma染色的平均强度没有阈值，这将依据总体反应(反应者相比于无反应者)或最佳总体反应(bor)对患者进行分层。在具有纵向bmb样品的可评价患者中，在输注后1个月或pd时未观察到bcma受体水平的显著调节。
[0574]
表12：sbcma的系列分析表明96％的患者在复发时与持续的肿瘤bcma表达一致的升高的sbcma水平。时间点无反应者反应者总计筛查，n3390123《lloq,n(％)000pd,n274471《lloq,n(％)02(4.5)2(2.8)》lloq,n(％)2742(95.5)69(97.2)
[0575]
表12中总结的结果表明，大多数患者(96％)在复发时具有增加的sbcma水平(参见表12)。研究中报告的使用ide-cel的功效量度包括orr为73.4％、中值反应持续时间为10.6个月和中值pfs为8.6个月。在100％(27/27)的可评价的无反应者(原发性抗性)和在初始反应之后证实的pd时95.5％(42/44)的可评价患者(获得性抗性)中可测量到超过无mm的健康患者中那些的水平下的sbcma。这些数据间接表明，几乎所有患者在pd时bcma表达仍存在于肿瘤细胞上。支持这一假设的是，pd时具有可评价bmb的94％(15/16)患者仍然通过ihc显示出表达bcma的cd138 细胞(参见表10和表11)。
[0576]
表12的结果还表明，患者在基线时表达可检测的sbcma，并且2名患者在进展时显示出不可检测的sbcma。表12中的缩写如下：bcma，b细胞成熟抗原；lloq，定量下限；pd，疾病进展；sbcma，可溶性b细胞成熟抗原。
[0577]
sbcma水平是一种易于获取的肿瘤bcma表达的血清生物标记物，观察到其在3名患者中在临床进展迹象时低于或接近lloq，这与bcma抗原丢失一致(参见表13)。
[0578]
表13. 3名显示出抗原丢失迹象的复发患者的总结。*《lloq的值估算为0.5
×
lloq(lloq＝4.4ng/ml)。
[0579]
表13中的缩写如下：bcma，b细胞成熟抗原；ihc，免疫组织化学；lloq，定量下限；na，不可用；pd，疾病进展；pr，部分反应；sbcma，可溶性b细胞成熟抗原；sd，病情稳定；vgpr，非常好的部分反应。
[0580]
在用ide-cel治疗的rrmm群体中很少观察到在进展时bcma丢失的迹象，这发生在4％的患者中(n＝3/71)。在pd时在4％(3/71)的患者中观察到一个或多个bcma抗原丢失指示物。一名患者显示出不可检测的sbcma和阴性bmb-bcma染色，1名患者具有不可检测的sbcma和无可用的bmb，并且1名患者具有阴性bmb-bcma染色和低水平的sbcma(5ng/ml)。在这些病例中的一个病例中，随后鉴定出肿瘤bcma表达的基因组丢失。图12显示了具有疑似抗原丢失的患者中的bcma ihc染色(图12a)和vdj克隆追踪(图12b)。bcma ihc显示出这些患者中在疾病进展时肿瘤bcma表达的可能丢失，这进一步得到在进展时的低sbcma水平的支持(图12a)。vdj克隆追踪示出了在具有怀疑的抗原损失的多发性骨髓瘤患者中复发时最初和潜在出现的克隆的恢复(图12b)。对ngs mrd结果的探索性分析使得能够追踪显性基线mrd克隆，其基于变量、多样性和接合序列随时间而存在。显性基线mrd克隆在进展时仍然存在。此外，观察到在基线时以低频率存在的不同克隆的扩增。
[0581]
结论：本研究中输注了ide-cel的所有可评价患者在治疗前患有表达bcma的肿瘤。大多数患者在100％的恶性浆细胞上表达bcma。bcma表达水平与肿瘤反应的深度呈正相关，但较低的bcma表达并不妨碍患者实现深度临床反应。bcma抗原丢失的迹象很少见(4％的患者)，并且未显现出是先前接受过3个或更多个先前疗法线的rrmm患者中复发的主要机制。
[0582]
总之，这些数据表明，肿瘤bcma表达的丢失可能只是ide-cel疗法后在患者中的一种不常见的逃逸机制，并且表明可以依序向rrmm患者施用另外的bcma靶向方式，特别是如本文所评估的未展现出这种肿瘤bcma表达丢失的患者中。
[0583]
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[0590]
sanchez e.et al.,br.j.haematol.,2012,158(6):727-738.6.5实施例5：基线和用ide-cel治疗后与安全性和功效相关的药效学生物标记物
[0591]
为了深入了解基线和ide-cel治疗后与安全性和功效相关的药效学生物标记物，在2期karmma研究(nct03361748)中对用ide-cel治疗的患者(n＝128)初步分析的基础上进
行分析。尽管有多种经批准的疗法，但多发性骨髓瘤仍然无法治愈，并且患者面临持续的复发风险。在2期单臂karmma试验(nct03361748)中，b细胞成熟抗原(bcma)定向的car t细胞疗法idecabtagene vicleucel(ide-cel，bb2121)在三类暴露(免疫调节剂、蛋白体抑制剂和抗cd38抗体)的rrmm患者中显示出良好的益处风险特征。肿瘤反应和ide cel活性的药效学生物标记物包括肿瘤相关可溶性因子、促炎性细胞因子和微小残留疾病(mrd)。与car t细胞激活相关的促炎性细胞因子可以是ide-cel作用机制和安全性事件(如细胞因子释放综合征(crs)和研究人员确定的神经毒性(nt))的潜在指示物。从细胞表面切割的bcma(即可溶性bcma；sbcma)是多发性骨髓瘤中的新型外周可获得的生物标记物，其已显示出用于随时间监测肿瘤反应的效用。mrd是肿瘤负荷的敏感性量度；通过mrd评估获得的肿瘤清除深度可以预测反应持续时间。
[0592]
方法：使用可商购的luminex测定(ampersand biosciences，美国纽约)通过免疫测定在外周血中评价血浆中的25种免疫相关可溶性因子(第1-28天)(gm-csf、颗粒酶a、颗粒酶b、ifnγ、il 10、il 13、il 2、il 4、il 5、il 6、mip 1α、mip 1β、穿孔素、scd137、sfas、sfasl、tnfα、ang 1、ang 2、il 15、il 18、il 2rα、il 7、il 8、rankl)和血清中的sbcma(第1天至疾病进展)的基线和输注后水平。在筛查、基线(第1天)时评价sbcma并且直到疾病进展，并在筛查、基线、第1-6天和第7、9、11、14和21天评价所有其他细胞因子和可溶性因子。将低于定量下限(lloq)的所有浓度估算为lloq/2(例如，sbcma lloq为4.4ng/ml，估算为2.2ng/ml)。在每个临床研究中心当地测量炎症、c反应蛋白和铁蛋白的临床标记物，并将其包括在本分析中。
[0593]
在不知道反应的情况下，通过下一代测序(ngs；adaptive biotechnologies)在基线和输注后固定时间点评价骨髓抽吸物(bma)中的微小残留疾病(mrd)状态，直到进展(即基线、第1个月(m1)、第3个月(m3)、第6个月(m6)、第12个月(m12)、第18个月(m18)和第24个月(m24))。评估每个生物标记物与关键安全性和功效终点之间的相关性。
[0594]
评估每个生物标记物与关键安全性和功效终点之间的相关性。p值基于mann-whitney-wilcoxon检验或kruskal-wallis检验为双侧的。对不同免疫相关可溶性因子提供了使用holm逐步向下bonferroni法的多重性调整的p值。
[0595]
结果：输注后细胞因子c
max
的量级与car t细胞激活和扩增以及肿瘤反应有关(图13a-图13c)。图13a(标题为“ide-cel扩增和收缩的时间过程”)显示了在以150
×
106个细胞(n＝4)、300
×
106个细胞(n＝69)和450
×
106个细胞(n＝54)的剂量施用ide-cel后患者中ide-cel扩增和收缩的时间过程。在所有剂量水平下均观察到car t细胞扩增，并且所述扩增是剂量依赖性。特别地，在第11天观察到car t细胞的中值峰值扩增(图13a，标题为“ide-cel扩增和收缩的时间过程”)。在较高的目标剂量下，中值扩增增加且曲线重叠。依据临床反应评估ide-cel扩增(参见图13a，标题为“依据临床反应的ide-cel扩增”)。反应者被定义为具有部分反应或更好的反应。相对于无反应者，ide-cel扩增(auc
0-28天
，天x拷贝数/μg)在反应者中较高(图13a，标题为“依据临床反应的ide-cel扩增”)。因此，car t细胞(ide-cel)扩增与反应密切相关。
[0596]
评估了依据剂量水平的促炎性细胞因子诱导的量级(参见图13b)。在以150
×
106个细胞(n＝4)、300
×
106个细胞(n＝66)和450
×
106个细胞(n＝54)的剂量施用ide-cel后，
测量促炎性细胞因子il-2、il-6和ifn-γ的水平。在所有剂量水平下均观察到细胞因子诱导，并且所述细胞因子诱导是剂量依赖性的(图13b)。
[0597]
评估依据临床反应的促炎性细胞因子诱导(c
max
)的量级(参见图13c；反应者被定义为具有部分反应或更好的反应)。测量反应者和无反应者中c反应蛋白(crp)、ifn-γ、il-10和il-6的水平。依据总体反应在基线时无细胞因子对患者分层，但与无反应者相比，在反应者中出现显著较高的峰值crp、ifnγ、il-10和il-6水平(图13c)。峰值细胞因子浓度通常在输注后7天内达到；细胞因子cmax通常在450
×
106个car t细胞的目标剂量水平下较高。因此，与无反应者相比，在反应者中的促炎性细胞因子升高程度更高，这与car t细胞激活和扩增是一致的。
[0598]
输注后细胞因子诱导(细胞因子c
max
)的量级而不是基线水平与更高级别的crs和研究人员鉴定的神经毒性(nt)相关(参见图14)。评估了促炎性细胞因子诱导的量级和crs的级别(参见图14a)。测量crp、ifn-γ、il-6和il-8的水平，并且评估患者的细胞因子释放综合征(crs)(级别为0、级别为1 2和级别为≥3示于图14a；在图14a所示的每个图中，每个带误差条的矩形从左到右按级别为0、级别为1 2级和级别为≥3的顺序显示)。在基线时无细胞因子与更高级别的crs在统计学上显著相关(图14a)。随着crs级别增加，观察到crp和细胞因子的子集(即ifn-γ、il-6和il-8)的诱导增加(p《0.05)(图14a)。
[0599]
评估了促炎性细胞因子诱导的量级和研究人员鉴定的nt的级别(参见图14b)。测量铁蛋白、il-10、ifn-γ、il-6和il-8的水平。基线时无细胞因子与更高级别的研究人员鉴定的nt在统计学上显著相关(对于研究人员鉴定的nt，级别为0、级别为1 2和级别为≥3示于图14b；在图14b所示的每个图中，每个带误差条的矩形从左到右按级别为0、级别为1 2级和级别为≥3的顺序显示)。随着研究人员鉴定的nt级别增加，观察到铁蛋白和细胞因子的子集(即il-10、ifn-γ、il-6和il-8)的诱导增加(p《0.05)(图14b)。一般而言，很少观察到更高级别的nt事件；然而，与基线相比，观察到内皮细胞激活更高(血管生成素([ang]-2)增加和内皮细胞稳定降低(减少的ang-1))的趋势(图14c；在图14c所示的每个图中，每个带误差条的矩形从左到右按级别为0、级别为1 2和级别为≥3的顺序显示)。总之，在基线检查时测量的27种因子中，没有一种因子与细胞因子释放综合征(crs)、需要托珠单抗或皮质类固醇的crs或研究人员鉴定的nt终点相关，但在患有crs或具有研究人员鉴定的nt的患者中输注后24小时内，有若干种因子(例如，gm-csf、il-6、ifnγ、il-8、il-10)被诱导至更高水平，并且峰值水平随着crs或研究人员鉴定的nt级别而增加。
[0600]
感染后sbcma清除与基线肿瘤负荷(骨髓中浆细胞的百分比)或髓外浆细胞瘤(emp)受累无关(参见图15)。在具有较高基线肿瘤负荷(≥50％肿瘤负荷，n＝62，中值基线sbcma为386.0ng/ml(第一四分位数(q1)＝269.0ng/ml，第三四分位数(q3)＝696.0ng/ml)，《lloq，n(％)＝0))的患者中与在具有较低基线肿瘤负荷(《50％肿瘤负荷，n＝56，中值基线sbcma为177ng/ml(q1＝57.5ng/ml，q3＝327.0ng/ml)，《lloq，n(％)＝0)的患者中评价基线sbcma水平(图15a，上图，p值《0.0001)。在具有较高基线肿瘤负荷(≥50％肿瘤负荷，n＝62)的患者中，最低点时的中值基线sbcma为2.2ng/ml(q1＝2.2ng/ml，q3＝43.0ng/ml，《lloq，n＝45(59.2％))。在具有较低基线肿瘤负荷(《50％肿瘤负荷，n＝56)的患者中，最低点时的中值基线sbcma为2.2ng/ml(q1＝2.2ng/ml，q3＝11.0ng/ml，《lloq，n＝30(62.5％))。在具有emp受累(emp，n＝48，345.5ng/ml(q1＝195.0ng/ml，q3＝670.0ng/ml)，《lloq，n(％)＝0)
的患者中与在没有emp(无emp，n＝76，中值基线sbcma为238.0ng/ml(q1＝76.0ng/ml，q3＝424.5ng/ml，《lloq，n(％)＝0)的患者中评价基线sbcma水平(图15b，上图，p值＝0.0339)。对于高肿瘤负荷或emp受累，实现sbcma清除的患者的比例没有差异(分别参见图15a和图15b，下图)。
[0601]
基线sbcma值在上四分位数(》75％sbcma)的患者中的一小部分实现sbcma清除(图15c，上图)。通过骨髓中的浆细胞百分比(cd138 ％)确定基线肿瘤负荷。高肿瘤负荷被定义为》50％的骨髓浆细胞受累。特别地，基线sbcma值在上四分位数(》75％sbcma，n＝31)的患者的中值基线sbcma为790.0ng/ml(q1＝657.0ng/ml，q3＝987.0ng/ml，《lloq，n(％)＝0)并且最低点时的中值sbcma为25.0ng/ml(q1＝2.2ng/ml，q3＝507.0ng/ml，《lloq，n(％)＝11(35.5％))。然而，如由sbcma清除所示，35％的此类患者实现了深度反应(图15c，下图)。基线sbcma值《75％sbcma的患者(n＝93)的中值基线sbcma为191.0ng/ml(q1＝73.0ng/ml，q3＝314.0ng/ml，《lloq，n(％)＝0)，并且最低点时的中值sbcma为2.2ng/ml(q1＝2.2ng/ml，q3＝5.9ng/ml，《lloq，n＝64(68.8％))。在有反应的患者中，sbcma清除迅速发生，并且到sbcma反弹的较长时间与肿瘤反应的深度相关(参见图16)。可溶性bcma(sbcma)是外周可获得的生物标记物，其中基线血清水平用mm肿瘤负荷的临床量度追踪，且输注后水平用肿瘤反应追踪。图16a显示了依据ide cel输注后的最佳总体反应分层的中值sbcma(图16a中所示的x轴从基线延伸至第1个月(m1)，以允许更好地观察峰值扩增期间的sbcma动力学；到sbcma反弹》lloq的时间被定义为在sbcma量度》lloq之前的最后一次访视；没有sbcma最低点《lloq的患者输入为零；bl，基线；cr，完全反应；d，天；lloq，定量下限；m，月；npc，正常浆细胞；nr，无反应；pd，疾病进展；pr，部分反应；sbcma，可溶性b细胞成熟抗原；vgpr，非常好的部分反应)。如果无法获得基线sbcma值(n＝4)，则将患者排除在分析之外。
[0602]
中值基线sbcma在ide-cel治疗的患者中为276.0ng/ml并且在反应者中在输注后下降，其中患者在3个月内达到最低点；在反应者中的中值最低点较低(0-28d，通过转基因水平测量)。在有反应的患者中的中值sbcma水平显示出《测定lloq的清除，这表明肿瘤的初始清除。中值sbcma水平《lloq的持续时间与肿瘤反应的深度增加相关。sbcma轨迹表明，肿瘤清除发生在ide-cel输注后的前1-2个月内。依据最佳总体反应的实现sbcma最低点《lloq的患者比例示于图16b。最低点时的sbcma水平≤lloq的患者百分比随着最佳总体反应而增加(63％pr，81％≥vgpr，95％≥cr)(图16b)。因此，达到sbcma最低点《lloq的患者比例与临床反应的深度相关。图16c显示了sbcma反弹至可检测水平的时间。与没有实现≥cr的患者相比，在实现≥cr的患者中观察到的sbcma水平保持≤lloq的持续时间较长(图16c)。因此，随着临床反应的深度和持续时间的增加，在患者中sbcma水平保持《lloq的持续时间延长。
[0603]
sbcma反应轨迹与如通过下一代测序(ngs)和骨髓瘤疾病负荷的传统血清标记物(即m蛋白和flc)评估的敏感性微小残留疾病(mrd)一致(参见图17a-图17b)。在施用了ide-cel的患者中进行mrd和sbcma评估。此外，还测量了骨髓瘤反应的标准标记物(即m蛋白和flc)。图17a显示了在无反应者、反应者(进展的)和反应者(持续的)(将反应表征为无反应者(《部分反应)、在数据截止时复发的反应者(反应者，进展的)和在数据截止时仍有反应的反应者(反应者，持续的))中的mrd(如使用下一代测序测定的，以细胞/百万测量)以及sbcma、m蛋白和flc的水平。如果无法获得基线sbcma值(n＝4)，则将患者排除在分析之外。sbcma和mrd状态显示出依据反应的相似轨迹，并且与疾病的传统生物标记物一致。所有患
者的sbcma都是可评价的(图17b，标题为“可检测的生物标记物”)。可评价的患者的分数表明，sbcma是一种可在高百分比的患者中评价的生物标记物，而肿瘤反应的其他生物标记物(即ngs mrd、多色流式细胞术(mfc)mrd、m蛋白和flc)由于疾病特征和/或技术限制可在一部分患者中评价。
[0604]
结论：所评价的输注前免疫相关可溶性因子不能被鉴定为预测高级别crs或nt。促炎性细胞因子诱导与car t细胞激活和扩增同时发生，并且与较高级别的crs和nt相关。sbcma和mrd是肿瘤负荷的稳健的生物标记物，并且二者在输注之后第一个月内在反应者中被迅速清除。sbcma清除的深度和持续时间分别与临床反应的深度和持续时间相关。sbcma是外周可获得的，可以被频繁监测，并且在高百分比的经ide-cel治疗的患者中可作为用于评估肿瘤负荷和肿瘤反应的随时间而变的通用替代量度进行评价。
[0605]
参考文献：
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[0611]
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