双酶耦合催化富马酸合成L-丙氨酸的方法与流程

技术特征：
1.一种双酶耦合催化富马酸合成l-丙氨酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将大肠埃希氏菌在培养基中培养、发酵后处理得到l-天冬氨酸粗酶液；（2）将产l-天冬氨酸-β-脱羧酶的菌株在培养基中培养培养、发酵后处理得到l-天冬氨酸-β-脱羧酶粗酶液；（3）将所述l-天冬氨酸粗酶液、所述l-天冬氨酸-β-脱羧酶粗酶液加入富马酸的氨溶液进行催化转化，反应完成后将反应液先后经微滤与超滤处理，获得l-丙氨酸。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述的大肠埃希氏菌为artp诱变后高酶活的大肠埃希氏菌。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）或步骤（2）所述的培养基为lb培养基。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）或步骤（2）中所述的处理为经碟片分离提取湿菌泥，之后冷冻破壁处理。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）或步骤（2）中各级种子的接种量体积比为0.5~1.0%。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述的产l-天冬氨酸-β-脱羧酶的菌株为德阿昆哈假单胞菌提取质粒后结合大肠杆菌bl21构建的基因工程菌株。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）或步骤（2）所述的发酵包括如下步骤：将培养的种子液加入发酵培养基中，于150~200rpm，28~37℃，0.6~1.0vvm，罐压0.05~0.08mpa条件下培养18~24小时。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的发酵培养基含有如下组分：蛋白胨12份，酵母粉12份，味精5份，乳糖5份，硫酸镁0.5份，磷酸氢二钾0.25份，甘油1.5份，消泡剂1份以下，余量为水；所述发酵培养基的ph为6.8~8.0。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中所述富马酸的氨溶液的质量浓度为18~24%。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述的催化转化的反应温度为35~45℃，ph为7.5~8.5，于50~100rpm条件下转化65~75小时。

技术总结
本发明提供一种以双菌双酶共同催化富马酸转化生成L-丙氨酸的方法，包括：将大肠埃希氏菌在培养基中培养、发酵后处理得到L-天冬氨酸粗酶液；将产L-天冬氨酸-β-脱羧酶的菌株在培养基中培养培养、发酵后处理得到L-天冬氨酸-β-脱羧酶粗酶液；两种粗酶液加入富马酸的氨溶液进行催化转化，反应完成后将反应液先后经微滤与超滤处理，获得L-丙氨酸。本发明酶法转化过程直接利用游离菌种提供粗酶反应，省去过程中L-天冬氨酸提纯步骤，最终利用膜分离提纯工艺，获取L-丙氨酸。丙氨酸。丙氨酸。


技术研发人员：王伟 司国萍 江珺 尤吉 潘春
受保护的技术使用者：常茂生物化学工程股份有限公司
技术研发日：2022.11.07
技术公布日：2023/2/3