具有作为USP30抑制剂活性的N-氰基吡咯烷类化合物的制作方法

具有作为usp30抑制剂活性的n-氰基吡咯烷类化合物
发明领域
1.本发明涉及一类具有作为去泛素化酶泛素c-末端水解酶30(也称为泛素特异性肽酶30(usp30))的抑制剂的活性的n-氰基吡咯烷类化合物、其用途、其制备方法以及包含所述抑制剂的组合物。这些抑制剂在多种治疗领域，包括涉及线粒体功能障碍的病症、癌症和纤维化。
2.以下引用或依赖的所有文献均通过引用被明确地并入本技术。
3.发明背景
4.泛素是由76个氨基酸组成的小蛋白质，其对于调节细胞中的蛋白质功能是重要的。泛素化和去泛素化是酶促介导的过程，通过该过程泛素共价结合靶蛋白或通过去泛素化酶(dub)从靶蛋白中裂解，其中在人细胞中存在约100种dub，基于序列同源性被分成亚家族。usp家族的特征在于其共有cys和his盒，其包含对它们的dub活性至关重要的cys和his残基。泛素化和去泛素化过程牵涉许多细胞功能的调节，包括细胞周期进程、细胞凋亡、细胞表面受体的修饰、dna转录的调节和dna修复。因此，泛素系统牵涉许多疾病状态(包括炎症、病毒感染、代谢功能障碍、cns病症和肿瘤发生)的发病机理。
5.泛素是线粒体动力学的主要调节剂。线粒体是动态细胞器，其生物发生、融合和裂殖事件通过许多关键因子(例如线粒体融合蛋白)的泛素化由翻译后调节来调节。在人类中，usp30是在线粒体外膜中发现的517个氨基酸的蛋白质(nakamura等人，2008，mol biol 19:1903-11)。它是唯一带有线粒体寻址信号的去泛素化酶，并且已经显示使许多线粒体蛋白去泛素化。已经证明usp30对抗帕金蛋白介导的线粒体自噬，并且usp30活性的降低可以挽救线粒体自噬中帕金蛋白介导的缺陷(bingol等人，2015，nature 510:370-5；gersch等人，2017，nat struct mol biol 24(11)：920-930；cunningham等人，2015，nat cell biol 17(2)：160-169)。usp30失活还可能通过tom蛋白的泛素化可以增加线粒体蛋白输入(jacoupy等人，2019，sci rep 9(1)：11829)。小比例的usp30定位于过氧化物酶体，其通过线粒体和er囊泡的融合产生，usp30潜在地拮抗pex2/过氧化物酶体吞噬途径(riccio等人，2019，j cell biol 218(3)：798-807)。e3 ub连接酶march5和去泛素化酶usp30与移位酶结合并调节线粒体输入，而march5抵抗线粒体输入并指导底物的降解，usp30使底物去泛素化以促进其输入(phu等人，2020，molecular cell 77，1107-1123)。
6.线粒体功能障碍可以被定义为线粒体含量减少(线粒体自噬或线粒体生物发生)，线粒体活性和氧化磷酸化的降低，但也可以被定义为活性氧物质(ros)产生的调节。因此，线粒体功能障碍在极大量的衰老过程和病理学情况中具有作用。
7.例如，帕金森氏病影响全世界约1000万人(帕金森氏病基金会)(parkinson’s disease foundation)，其特征在于黑质中多巴胺能神经元的丧失。pd潜在的确切机制尚不清楚；然而，线粒体功能障碍日益被认为是pd中多巴胺能神经元易感性的关键决定因素，并且是家族性和散发性疾病以及毒素诱导的帕金森综合征的特征。帕金蛋白是牵涉早发性pd的许多蛋白质之一。虽然大部分pd病例与α-突触核蛋白中的缺陷有关，但10％的帕金森病病例与特定的基因缺陷有关，其中之一存在于泛素e3连接酶帕金蛋白中。帕金蛋白和蛋白
激酶pten诱导的推定激酶1(pink1)协作使受损线粒体的线粒体膜蛋白泛素化，导致线粒体自噬。线粒体自噬失调导致氧化性应激增加，这已被描述为pd的特征。因此，usp30的抑制可能是治疗pd的潜在策略。例如，通过抑制usp30可以治疗补偿具有导致活性降低的帕金蛋白突变的pd患者。
8.据报道，usp30的耗尽增强线粒体的线粒体自噬清除，并且还增强帕金蛋白诱导的细胞死亡。还显示usp30以独立于帕金蛋白过表达的方式调节bax/bak依赖性细胞凋亡。usp30的耗尽使癌细胞对bh-3模拟物如abt-737敏感，而不需要帕金蛋白过表达。因此，已经证明了usp30的抗细胞凋亡作用，因此usp30是抗癌疗法的潜在靶标。
9.在批准蛋白酶体抑制剂硼替佐米用于治疗多发性骨髓瘤后，泛素-蛋白酶体系统作为治疗癌症的靶标获得了关注。用硼替佐米的延长治疗受到其相关毒性和耐药性的限制。然而，预测靶向蛋白酶体的泛素-蛋白酶体途径上游的特定方面(例如dub)的治疗策略被更好地耐受(bedford等人，2011，nature rev 10:29-46)。
10.纤维化疾病，包括肾、肝和肺纤维化是发病率和死亡率的主要原因，并且可以影响所有组织和器官系统。纤维化被视为对组织或器官的急性或慢性应激的结果，其特征在于胞外基质沉积、血管/小管/导管/气道开放性降低和功能受损，最终导致器官衰竭。许多纤维化病症由生活方式或环境因素促进；然而，一部分纤维化病症可以通过基因触发物引发，或者实际上被认为是特发性的(即无已知的原因)。某些纤维化疾病，如特发性肺纤维化(ipf)可以用非特异性激酶抑制剂(尼达尼布)或没有充分表征的作用机制的药物(吡非尼酮)治疗。用于器官纤维化(例如肾或肝纤维化)的其他治疗减轻了对器官本身的压力(例如用于肝硬化的β阻断剂、用于慢性肾病的血管紧张素受体阻断剂)。注意生活方式因素(例如葡萄糖和饮食控制)也可能影响疾病的过程和严重程度。
11.线粒体功能障碍牵涉许多纤维化疾病，功能障碍的氧化性应激下游是关键的致病介体，并行atp产生减少。在临床前模型中，线粒体自噬途径的破坏(通过帕金蛋白或pink1的突变或敲除)加剧肺纤维化和肾纤维化，存在氧化性应激增加的证据。
12.kurita等人，2017，respiratory research 18:114公开了促纤维化肌成纤维细胞累积是ipf中纤维化重塑的关键过程。据说近期的发现显示自噬/线粒体自噬(溶酶体降解机制的一部分)参与ipf发病机制，并且线粒体自噬通过调节线粒体活性氧物质(ros)介导的血小板衍生生长因子受体(pdgfr)活化而与成肌纤维细胞分化有关。kurita的结果提示，吡非尼酮诱导park2介导的线粒体自噬，并且还在线粒体自噬不足的情况下抑制肺纤维化发展，这可以至少部分地解释ipf治疗的抗纤维化机制。
13.williams等人，2015，pharmacol res.12月；102：264-269讨论了pink 1-帕金蛋白介导的自噬通过经由线粒体自噬去除受损的线粒体在保护免受酒精和对乙酰氨基酚诱导的肝损伤中的作用。它提示usp8的药理学稳定化或usp15和usp30的失活可能是上调帕金蛋白诱导的线粒体自噬的潜在治疗靶标，并进而保护免受药物诱导的肝损伤。然而，注意到dub受到转录和翻译后调节，这可能使得用于靶向这些特定酶的药物开发具有挑战性，此外，显示磷酸化泛素对dub具有抗性。作者得出结论，上调pink1稳定化或激酶活性可能是比抑制dub更有效的靶标。
14.williams等人，2015，biomolecules 5，2619-2642和williams等人，2015，am j physiol gastrointest liver physiol 309：g324
–
g340综述了参与调节肝脏中线粒体稳
态的机制以及这些机制如何保护免受酒精诱导的肝脏疾病。
15.luciani等人，2020，nat.commun.11，970报道了终末分化细胞中线粒网状结构的失调导致广谱的疾病，包括甲基丙二酸血症(mma)。mma是由线粒体甲基丙二酰辅酶a变位酶(mmut)缺乏导致的最常见遗传性代谢病症之一。mmut缺乏诱导代谢和线粒体改变，其因pink1/帕金蛋白介导的线粒体自噬的异常而加剧，导致功能失调的线粒体的累积，其触发上皮应激和最终细胞损伤。表明原发性mmut缺乏症、患病的线粒体、线粒体自噬功能障碍和上皮应激之间的相关联，并提供了mma的潜在治疗前景。
16.kluge等人，bioorganic&medicinal chemistry letters，2018，282655-2659报道了usp30的选择性抑制剂加速线粒体自噬。
17.在pct申请wo 2016/046530(us 15/513125、us 15/894025、us 16/448066)、wo 2016/156816(us 15/558632、us 16/297937、us 16/419558、us 16/419747、us 16/788446)、wo 2017/009650(us 15/738900)、wo 2017/093718(us 15/776149)、wo 2017/103614(us 15/781615)、wo 2017/149313(us 16/078518)、wo 2017/109488(us 16/060299)、wo 2017/141036(us 16/070936)、wo 2017/163078(us 16/087515)、wo 2017/158381(us 16/080229)、wo 2017/158388(us 16/080506)、wo 2018/065768(us 16/336685)、wo 2018/060742(us 16/336202)、wo 2018/060689(us 16/334836)、wo 2018/060691(us 16/336363)、wo 2018/220355(us 16/615040)、wo 2018/234755(us 16/615709)、wo 2020/212350、wo 2020/212351，wo 2021/043870和pct/ep2021/064166中公开了作为去泛素化酶抑制剂的多个系列的n-氰基取代的杂环的衍生物，上示文献各自通过引用被明确地并入本技术。pct申请wo 2019/171042(us 16/977019)公开了n-氰基吡咯烷类化合物作为usp30抑制剂用于治疗纤维化疾病的用途，该文献通过引用明确地并入本技术。
18.falgueyret等人，2001，j.med.chem.44，94-104和pct申请wo 01/77073涉及氰基吡咯烷类化合物作为组织蛋白酶k和l的抑制剂，其在治疗骨质疏松症和其它骨吸收相关病症中具有潜在的用途。pct申请wo 2015/179190涉及n-酰基乙醇胺水解酸酰胺酶抑制剂，其在治疗溃疡性结肠炎和克罗恩病中具有潜在用途。pct申请wo 2013/030218涉及作为泛素特异性蛋白酶如usp7的抑制剂的喹唑啉-4-酮化合物，其在治疗癌症、神经变性疾病、炎性病症和病毒感染中具有潜在用途。pct申请wo 2015/017502和wo 2016/019237涉及布鲁顿(bruton)酪氨酸激酶的抑制剂，其在治疗疾病例如自身免疫疾病、炎性疾病和癌症中具有潜在用途。pct申请wo 2009/026197、wo 2009/129365、wo 2009/129370和wo 2009/129371涉及作为组织蛋白酶c抑制剂的氰基吡咯烷类化合物，其在治疗copd中具有潜在用途。美国专利申请us 2008/0300268涉及作为酪氨酸激酶受体pdgfr的抑制剂的聚芳族化合物。pct申请wo 2019/222468、wo 2019/071073、wo 2020/036940和wo 2020/072964、rusilowicz-jones等人，2020，biorxiv 2020.04.16.044206(2020年4月20日)和tsefou等人，biorxiv2021.02.02.429344(2021年2月2日)涉及作为usp30抑制剂的包含氰胺的化合物。yue等人，2014，cell research，24，482-496，涉及作为诱导线粒体融合的usp30抑制剂的双萜类衍生物15-氧代螺内酯(spiramilactone)。
19.pct申请wo 2015/183987涉及包含去泛素化酶抑制剂和人血清白蛋白的药物组合物，其用于治疗癌症、纤维化、自身免疫疾病或病症、炎性疾病或病症、神经变性疾病或病症或感染的方法中。应注意，据说去泛素化酶，包括uchl5/uch37、usp4、usp9x、usp11和usp15
与tgf-β信号传导途径的调节有关，该途径的破坏引起神经变性和纤维化疾病、自身免疫功能障碍和癌症。
20.pct申请wo 2006/067165涉及使用二氢吲哚酮激酶抑制剂治疗纤维化疾病的方法。pct申请wo 2007/119214涉及使用内皮素受体拮抗剂治疗早期肺纤维化的方法。pct申请wo 2012/170290涉及使用thc酸治疗纤维化疾病的方法。pct申请wo 2018/213150涉及在治疗涉及线粒体缺陷的病症中具有潜在效用的磺酰胺usp30抑制剂。larson-casey等人，2016，immunity 44，582-596涉及巨噬细胞akt1激酶介导的线粒体自噬、细胞凋亡抵抗和肺纤维化。tang等人，2015，kidney diseases 1，71-79综述了线粒体自噬在肾脏病理生理学中的潜在作用。
21.需要用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症和纤维化以及与其相关的各种症状和病症的安全、可替代和/或改进的方法和组合物。虽然不希望受任何特定理论或机制的束缚，但认为本发明的化合物起到抑制酶usp30的作用，其进而上调帕金蛋白诱导的线粒体自噬。
22.急性肾损伤(aki)被定义为在7天或更短时间内发生的肾功能的突然降低，基于血清肌酐(scr)增加和排尿量减少将损伤的严重程度分级，如肾脏疾病改善全球结局(kdigo)(kidney disease improving global outcomes(kdigo))指南中所述。每年约1330万人中发生aki，其中85％生活在发展中国家，并且认为每年造成约170万死亡(mehta等人，2015，lancet 385(9987)：2616-2643)。aki更可能导致永久性肾损伤(即慢性肾病，ckd)，并且还可能导致对非肾器官的损伤。aki是一个重要的公共健康问题，特别是当考虑发生偶发ckd、进行性ckd、终末期肾病和心血管事件的患者的绝对数量时。发现aki在因covid-19住院的患者中普遍存在，并且与住院死亡率密切相关，据报道线粒体损伤和功能障碍是潜在的病理生理机制和治疗靶点(kellum等人，nephrol dial transplant(2020)35：1652
–
1662)。
23.aki和ckd被视为相同疾病谱上的连续体(chawla等人，2017，nat rev nephrol 13(4)：241-257)。接受冠状动脉旁路移植术(cabg)的患者处于肾损伤的高风险中。在开发用于治疗和/或预防aki的药物产品方面存在明显未满足的医疗需求。
24.肾脏是高代谢需求的部位，在体内证明具有高线粒体自噬率(mcwilliams等人，2018，cell metab 27(2)：439-449e435)。肾近端小管上皮细胞(rptec)，一种对溶质/离子交换具有显著atp需求的细胞类型，富含线粒体并且是肾急性肾损伤(aki)的主要效应器细胞。线粒体功能障碍牵涉aki/ckd机制，二者均通过来自临床前aki和ckd模型的多线证据以及还通过证明患者活检中的异常线粒体表型的数据得以证实(emma等人，2016，nat rev nephrol 12(5)：267-280；eirin等人，2017，handb exp pharmacol 240：229-250)。此外，原发性线粒体疾病通常表现为melas/midd患者中的肾脏症状，例如局灶节段性肾小球硬化症(kawakami等人，2015，j am soc nephrol 26(5)：1040-1052)，以及还表现为辅酶q缺陷患者中的原发性肾小管病变。mtdna中的突变可以引起母性遗传的肾小管间质性疾病(connor等人，2017，plos genet 13(3)：e1006620)。
25.关于肾损伤中的线粒体质量控制(tang等人，2018，autophagy 14(5)：880-897)证明，在pink1 ko和park2 ko二者小鼠中，缺血性aki后肾损伤加剧，这提示pink1/帕金蛋白介导的线粒体自噬在肾中iri后起保护作用。此外，帕金蛋白/pink1线粒体自噬保护免于顺铂诱导的肾损伤(wang等人，2018，cell death dis 9(11)：1113)。有限的ckd模型可用于线
粒体自噬研究，纤维化中线粒体质量控制的支持性证据来自对纤维化肺病症如copd和ipf的研究。帕金蛋白敲除动物显示响应于博来霉素的加剧肺纤维化(kobayashi等人，2016，j immunol，197:504-516)。类似地，来自帕金蛋白敲除(ko)动物的气道上皮细胞显示对香烟烟雾的加剧纤维化和衰老反应(araya等人，2019，autophagy 15(3)：510-526)。
26.临床前模型通过其模拟与人类状况一致的纤维化病理学(例如胶原沉积)的能力可用于研究潜在的新型治疗剂。临床前模型可以是毒素介导的(例如用于肺和皮肤纤维化的博来霉素)、外科手术的(例如缺血/再灌注损伤模型和用于急性肾小管间质纤维化的单侧输尿管阻塞模型)和遗传的(例如用于糖尿病肾病的糖尿病(db/db)小鼠)。例如，先前针对指定的ipf治疗(尼达尼布和吡非尼酮)给出的两个实例在博来霉素肺纤维化模型中显示出功效。
27.因此，需要作为用于治疗或预防其中适应抑制usp30的病症的usp30抑制剂的化合物。特别地，需要具有合适的和/或改善的性质以便使针对目标疾病的功效最大化的usp30抑制剂。
28.发明概述
29.本发明涉及式(i)的化合物，其选自式(i)(i)和式(i)(ii)：
[0030][0031]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0032]
r1选自(c
1-c4)烷基，(c
1-c4)氟烷基和ch2och3；
[0033]
r2选自(c
1-c4)烷基，cf3和环丙基；以及
[0034]
r3，r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0035]
本发明还涉及式(i)化合物的用途，特别是其在治疗涉及线粒体功能障碍的病症、癌症和纤维化中的用途，还涉及其制备方法和包含所述化合物的药物组合物。
[0036]
发明详述
[0037]
本发明涉及usp30抑制剂，其具有合适的和/或改善的特性以便使针对靶疾病的功效最大化。这些特性包括例如效价、选择性、物理化学性质、adme(吸收、分布、代谢和排泄)特性，包括pk(药代动力学)特征和安全性特征。
[0038]
通常期望使在相关测定法中药物分子针对靶酶的效价最大化，以便降低被施用于患者的有效/功效剂量。可使用本技术中所述的体外生化荧光偏振(fp)测定法测试本发明化合物的usp30亲和力。
[0039]
usp30是位于线粒体外膜中的跨膜蛋白，线粒体是存在于细胞内的产生能量的细胞器。因此，能够在体外证明细胞活性是有利的，因为这是许多组分之一，其可以指示在其生理环境(即其中usp30抑制剂化合物能够穿透细胞)中接合靶标的更大能力。本技术中所
述的usp30细胞蛋白质印迹(wb)测定法旨在使用不可逆活性探针监测usp30活性来测试化合物在细胞中针对usp30的活性。类似于细胞蛋白质印迹测定法，可以在来自给予化合物的动物的脑或肾组织样品中进行靶标接合评估(离体)。
[0040]
为了将靶标结合知识扩展到下游药效学，可以进行tom20(线粒体外膜蛋白)泛素化的评估。
[0041]
通常，重要的是药物对其所期望的靶酶具有尽可能的选择性；另外的活性引起副作用的可能性。许多dub的确切生理作用尚未完全确定，然而，无论这些dub可能起什么作用或可能不起什么作用，确保任何药物对未知生理功能的相关机制靶标具有选择性是合理的药物化学方案。可以用于筛选本发明化合物的dub酶的代表性实例是uchl1、uchl3、uchl5、yod1、senp2、senp6、trabid、bap1、cezanne、mindy2/fam63b、otu1、otud3、otud5、otud6a、otud6b、otub1/ubch5b、otub2、cyld、vcpip、amsh-lp、josd1、josd2、usp1/uaf1、usp2、usp4、usp5、usp6、usp7、usp8、usp9x、usp10、usp11、usp12/uaf1、usp13、usp14、usp15、usp16、usp19、usp20、usp21、usp22、usp24、usp25、usp28、usp32、usp34、usp35、usp36、usp45、usp46/uaf1、usp47和usp48。优选地，本发明的化合物相对于这些dub酶中的一种或多种对usp30具有良好的选择性。
[0042]
除了相对于其他dub酶的选择性之外，重要的是药物对其他靶标具有低亲和力，并且可以针对靶标组进行药理学谱分析以评估潜在的脱靶效应的可能性并使潜在的脱靶效应最小化。可以用于筛选本发明化合物的靶标的实例是产业标准eurofins-cerep safetyscreen44组的那些，其包括44个靶标作为gpcr受体、转运蛋白、离子通道、核受体以及激酶和非激酶的代表性选择。优选地，本发明的化合物对该筛选组的靶标具有无意义的亲和力。可以用于筛选本发明化合物的靶标的其他实例是thermo fisher selectscreen激酶谱分析组的激酶，其包括39个靶标作为激酶的代表性选择。优选地，本发明的化合物对该筛选组的靶标具有无意义的亲和力。另外，可以用于筛选本发明化合物的特定酶类的实例是组织蛋白酶(例如组织蛋白酶a、b、c、h、k、l、l2、s、v和z)。优选地，本发明的化合物相对于这些酶中的一种或多种对usp30具有良好的选择性。
[0043]
还需要具有有利的药代动力学特性使得它们适合于口服的化合物。口服的药物应具有良好的生物利用度；这是容易穿过胃肠(gi)道并且在其从gi道穿过进入体循环时不经受广泛代谢的能力。一旦药物进入体循环，则代谢速率在决定药物在体内的停留时间方面也是重要的。
[0044]
因此，显然有利的是，药物分子具有能够容易地穿过胃肠道并且在体内仅缓慢代谢的特性。caco-2测定法是用于预测给定分子穿过胃肠道的能力的广泛被接受的模型。药物分子的大部分代谢通常发生在肝脏中，并且使用全细胞肝细胞(动物或人)的体外测定法是用于测量给定分子对肝脏中代谢的敏感性的广泛被接受的方法。这类测定法旨在从肝细胞计算的清除率值预测体内清除率。
[0045]
预测具有良好的caco-2通量并且对肝细胞稳定的化合物具有良好的口服生物利用度(通过胃肠道的良好吸收和当化合物通过肝脏时对化合物的最小提取)和在体内的长停留时间，其足以使药物有效。
[0046]
化合物的溶解度是在体循环中达到预期药理学反应所需药物浓度的重要因素。低水溶性是新化学实体的制剂开发遇到的问题，并且为了被吸收，药物必须以溶液形式存在
于吸收部位。化合物的动力学溶解度可以使用比浊溶解度测定法测量，其产生的数据也可以与caco-2渗透性数据结合使用以预测剂量依赖性人肠吸收。
[0047]
可以使用指示化合物的暴露曲线的标准测定法测量的其他参数包括例如血浆稳定性(半衰期测量)、血液auc、c
max
、c
min
和t
max
值。
[0048]
cns病症(包括阿尔茨海默病、帕金森病和本技术中所述的其他病症)的治疗需要药物分子靶向脑，这需要充分穿透血脑屏障。因此，需要具有有效血脑渗透特性并在脑中提供合适停留时间以有效的usp30抑制剂。化合物可以穿过血脑屏障的概率可以通过使用mdr1-mdck细胞单层(用mdr-1转染的马丁-达比(madin-darby)犬肾细胞，导致人外排转运蛋白p-糖蛋白过表达)的体外通量测定法测量。另外，还可以使用体内动物模型直接在脑和血浆中测量暴露。
[0049]
还需要具有有利的安全性特征的化合物，可以通过各种标准的体外和体内方法测量安全性特征。可以使用细胞毒性反筛选通过响应于线粒体活性的刃天青(alamarblue
tm
)对试卤灵的荧光检测测定在特定细胞系(例如hct116)中的抗增殖/细胞毒性作用。
[0050]
还可以进行毒理学和安全性研究以鉴定不良效应的潜在靶器官并定义治疗指数以设定临床试验中的初始起始剂量。监管要求通常需要在至少两种实验室动物物种中进行研究，一种为啮齿动物(大鼠或小鼠)，且一种为非啮齿动物(兔、狗、非人灵长类动物或其他合适的物种)。
[0051]
可以使用细菌逆向突变测定法(ames试验)，通常通过使用细菌菌株鼠伤寒沙门氏菌(salmonella typhimurium)，评估本发明化合物的致突变特性，鼠伤寒沙门氏菌为用于氨基酸组氨酸生物合成的突变体。
[0052]
可以使用小核测定法通过评估小核的存在来确定化合物是否具有遗传毒性。小核可以包含由dna断裂(断裂剂)产生的染色体片段或通过有丝分裂器的破坏(致非整倍原)产生的全染色体。
[0053]
herg预测测定法提供关于测试化合物与钾通道的可能结合和超声心动图上电位qt延长的有价值的信息。herg电流的抑制引起qt间隔延长，导致潜在致命的室性快速型心律失常(尖端扭转型室性心动过速)。典型地，可以从自动化膜片钳测定平台产生测定数据。
[0054]
因此，本发明涉及usp30抑制剂，其具有合适的和/或改善的特性以便使针对目标靶疾病的功效最大化。这类特性包括例如效价、选择性、物理化学性质、adme(吸收、分布、代谢和排泄)性质，包括pk(药代动力学)特征和安全性特征。
[0055]
已发现本发明的化合物表现出一种或多种如上所鉴定的特性，它们是显著的和令人意外的。例如，如在本技术中所述的生化试验中所测量的，本发明的实施例1-12对usp30高度有效。相对于其他dub和组织蛋白酶，本发明的所有这些实施例(1-12)对usp30明显更具选择性。
[0056]
本发明化合物的显著和预料不到的特性使得它们特别适用于治疗和/或预防与usp30活性相关的疾病。
[0057]
根据第一方面，本发明提供式(i)的化合物，其选自式(i)(i)和式(i)(ii)：
[0058][0059]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0060]
r1选自(c
1-c4)烷基，(c
1-c4)氟烷基和ch2och3；
[0061]
r2选自(c
1-c4)烷基，cf3和环丙基；以及
[0062]
r3，r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0063]
式(i)的化合物以具有所示绝对立体化学的单一立体异构体存在。
[0064]
烷基基团可以是直链或支链的并且含有1-4个碳原子。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和仲丁基。
[0065]
卤素意指氟、氯、溴或碘，尤其氟或氯。氟烷基可以包含一个或多个氟取代基。实例是氟甲基、二氟甲基和三氟甲基。
[0066]
除非另有说明，否则术语取代意指被一个或多个定义的基团取代。在基团可以选自多于一个替代选项的情况下，所选择的基团可以相同或不同。术语“独立地”意指如果多于一个取代基选自多于一个可能的取代基，那些取代基可以相同或不同。
[0067]
式(i)化合物的优选实施方案定义如下。
[0068]
优选，r1选自甲基，ch2f，chf2，cf3和ch2och3。
[0069]
更优选，r1选自甲基，ch2f和ch2och3。
[0070]
最优选，r1选自甲基和ch2och3。
[0071]
优选，r2选自甲基，cf3和环丙基。
[0072]
最优选，r2选自甲基和环丙基。
[0073]
优选，r3选自氢，氯和氟。
[0074]
更优选，r3选自氢和氟。
[0075]
最优选，r3是氢。
[0076]
优选，r4和r5各自独立地选自氢和氟。
[0077]
最优选，r4和r5各是氢。
[0078]
根据本发明的一方面，式(i)的化合物具有式(i)(i)：
[0079]
[0080]
根据本发明的另一方面，式(i)的化合物具有式(i)(ii)：
[0081][0082]
根据本发明的第一优选方面是式(ia)(i)的化合物：
[0083][0084]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0085]
r1选自(c
1-c4)烷基，(c
1-c4)氟烷基和ch2och3；
[0086]
r2选自(c
1-c4)烷基，cf3和环丙基；以及
[0087]
r3，r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0088]
式(ia)(i)的化合物的优选实施方案定义如下。
[0089]
优选，r1选自甲基，ch2f，chf2，cf3和ch2och3。
[0090]
更优选，r1选自甲基，ch2f和ch2och3。
[0091]
最优选，r1选自甲基和ch2och3。
[0092]
优选，r2选自甲基，cf3和环丙基。
[0093]
最优选，r2选自甲基和环丙基。
[0094]
优选，r3选自氢，氯和氟。
[0095]
更优选，r3选自氢和氟。
[0096]
最优选，r3是氢。
[0097]
优选，r4和r5各自独立地选自氢和氟。
[0098]
最优选，r4和r5各是氢。
[0099]
本发明的式(ia)(i)的优选化合物选自：
[0100]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0101]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0102]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(氟甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0103]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰
胺；
[0104]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0105]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0106]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；以及
[0107]
5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0108]
或其药学上可接受的盐。
[0109]
本发明的式(ia)(i)的最优选的化合物选自：
[0110]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；以及
[0111]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0112]
或其药学上可接受的盐。
[0113]
根据本发明的第二优选方面是式(ib)(i)的化合物：
[0114][0115]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0116]
r1选自(c
1-c4)烷基，(c
1-c4)氟烷基和ch2och3；
[0117]
r2选自(c
1-c4)烷基，cf3和环丙基；以及
[0118]
r3，r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0119]
式(ib)(i)的化合物的优选实施方案定义如下。
[0120]
优选，r1选自甲基，ch2f，chf2，cf3和ch2och3。
[0121]
更优选，r1选自甲基，ch2f和ch2och3。
[0122]
最优选，r1是ch2och3。
[0123]
优选，r2选自甲基，cf3和环丙基。
[0124]
最优选，r2是甲基。
[0125]
优选，r3选自氢，氯和氟。
[0126]
更优选，r3选自氢和氟。
[0127]
最优选，r3是氢。
[0128]
优选，r4和r5各自独立地选自氢和氟。
[0129]
最优选，r4和r5各是氢。
[0130]
本发明的式(ib)(i)的优选化合物选自：
[0131]
4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；以及
[0132]
4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0133]
或其药学上可接受的盐。
[0134]
根据本发明的第三优选方面是式(ia)(ii)的化合物：
[0135][0136]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0137]
r1选自(c
1-c4)烷基，(c
1-c4)氟烷基和ch2och3；
[0138]
r2选自(c
1-c4)烷基，cf3和环丙基；以及
[0139]
r3，r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0140]
式(ia)(ii)的化合物的优选实施方案定义如下。
[0141]
优选，r1选自甲基，ch2f，chf2，cf3和ch2och3。
[0142]
更优选，r1选自甲基，ch2f和ch2och3。
[0143]
最优选，r1选自甲基和ch2och3。
[0144]
优选，r2选自甲基，cf3和环丙基。
[0145]
最优选，r2选自甲基和环丙基。
[0146]
优选，r3选自氢，氯和氟。
[0147]
更优选，r3选自氢和氟。
[0148]
最优选，r3是氢。
[0149]
优选，r4和r5各自独立地选自氢和氟。
[0150]
最优选，r4和r5各是氢。
[0151]
本发明的式(ia)(ii)的优选化合物选自：
[0152]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0153]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0154]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0155]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0156]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0157]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁
唑-2-甲酰胺；
[0158]
5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；以及
[0159]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(氟甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0160]
或其药学上可接受的盐。
[0161]
根据本发明的第四优选方面是式(ib)(ii)的化合物：
[0162][0163]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0164]
r1选自(c
1-c4)烷基，(c
1-c4)氟烷基和ch2och3；
[0165]
r2选自(c
1-c4)烷基，cf3和环丙基；以及
[0166]
r3、r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0167]
式(ib)(ii)的化合物的优选实施方案定义如下。
[0168]
优选，r1选自甲基，ch2f，chf2，cf3和ch2och3。
[0169]
更优选，r1选自甲基，ch2f和ch2och3。
[0170]
最优选，r1是ch2och3。
[0171]
优选，r2选自甲基，cf3和环丙基。
[0172]
最优选，r2是甲基。
[0173]
优选，r3选自氢，氯和氟。
[0174]
更优选，r3选自氢和氟。
[0175]
最优选，r3是氢。
[0176]
优选，r4和r5各自独立地选自氢和氟。
[0177]
最优选，r4和r5各是氢。
[0178]
本发明的式(ib)(ii)的优选化合物选自：
[0179]
4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；以及
[0180]
4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0181]
或其药学上可接受的盐。
[0182]
式(i)的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱式盐(包括二盐)。
[0183]
合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。实例包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、海苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、磷酸氢盐、羟乙基磺酸盐、d-乳酸盐和l-乳酸盐、苹果酸盐、马来酸
盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、棕榈酸盐、磷酸盐、糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐硫酸盐、d-酒石酸盐和l-酒石酸盐和甲苯磺酸盐。
[0184]
合适的碱盐由形成无毒性盐的碱形成。实例包括铝盐、铵盐、精氨酸盐、n,n'-二苄基乙二胺盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐和锌盐。
[0185]
关于合适盐的综述，参见stahl和wermuth，handbook of pharmaceutical salts：properties，selection，and use，wiley-vch，weinheim，德国(2002)。
[0186]
可以通过将式(i)化合物的溶液和所需的酸或碱(视情况而定)混合在一起，容易地制备式(i)的化合物的药学上可接受的盐。盐可以从溶液中沉淀并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂回收盐。
[0187]
根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括水合物和溶剂化物，其中结晶的溶剂可以是同位素取代的，例如d2o、丙酮-d6、dmso-d6。
[0188]
此外，在本发明的范围内的是笼形包合物、药物-宿主包合复合物，其中与上述溶剂化物相反，药物和宿主以非化学计量的量存在。关于此类复合物的综述，参见haleblian的j.pharm sci，64(8)，1269-1288(1975年8月)。
[0189]
下文所有对式(i)的化合物的提及包括对其盐的提及以及对式(i)化合物及其盐的溶剂化物和笼形包合物的提及。
[0190]
本发明包括如上文所定义的式(i)化合物的所有多晶型物。
[0191]
此外，在本发明的范围内的是式(i)化合物的所谓的“前药”。因此，本身几乎没有或没有药理学活性的式(i)化合物的某些衍生物在被施用到身体内或身体上后代谢时，可以产生具有期望的活性的式(i)的化合物。此类衍生物被称为“前药”。
[0192]
可以例如通过用例如h bundgaard的“design of prodrugs”(elsevier，1985)中所述的本领域技术人员已知为“前-部分”的某些部分替代式(i)化合物中存在的适当官能团，制备根据本发明的前药。
[0193]
最终，式(i)的某些化合物本身可以用作式(i)的其他化合物的前药。
[0194]
包含氮原子的式(i)化合物的某些衍生物还可以形成相应的n-氧化物，并且此类化合物也在本发明的范围内。
[0195]
式(i)的化合物的所有互变异构形式包括在本发明的范围内。
[0196]
用于制备/分离单个对映异构体的常规技术包括从合适的光学纯前体手性合成或使用例如手性高效液相色谱法(hplc)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。或者，可以使外消旋体(或外消旋前体)与合适的光学活性化合物(例如醇)反应，或者在式(i)化合物含有酸性或碱性部分的情况下，与碱或酸(例如1-苯基乙胺或酒石酸)反应。可以通过色谱法和/或分级结晶分离所得的非对映异构体混合物，并通过本领域技术人员众所周知的方法将非对映异构体之一或二者转化为相应的纯对映异构体。可以使用色谱法(典型地为hplc)在不对称树脂上以对映异构体富集的形式获得本发明的手性化合物(及其手性前体)，流动相由烃(典型地为庚烷或己烷)组成，其含有0-50％体积的丙-2-醇(典型地为2％至20％)和0-5％体积的烷基胺(典型地为0.1％二乙胺)。浓缩洗脱液得到富集的混合物。本发明包括式(i)化合物的所有晶体形式，包括其外消旋体和外消旋混合物(聚集体)。立体异构聚集体可以通过本领域技术人员已知的常规技术分离-参见，例如，e.l.eliel和
s.h.wilen的"stereochemistry of organic compounds"(wiley，new york，1994)。
[0197]
式(i)的化合物在被r1取代的吡咯烷环的碳原子上包含两个手性中心，且酰胺和所述立体中心可以(r)或(s)构型存在。根据iupac命名法，立体异构体的绝对构型(r)和(s)的指定取决于取代基的性质和顺位规则程序的应用。因此，式(i)的化合物可以以四种立体异构形式存在。
[0198]
本发明的式(i)的化合物作为单一立体异构体存在。酰胺取代基的吡咯烷碳原子作为(r)-立体中心存在，而r1基团的吡咯烷碳原子的指定取决于取代基的性质。式(i)的化合物作为单一立体异构体分离，并且可以以至少60％，优选至少80％，更优选至少90％，更优选至少95％，例如96％、97％、98％、99％或100％的立体异构体过量存在。
[0199]
在r1取代基本身内另外的手性中心可以存在于式(i)的化合物中。包括在本发明范围内的是式(i)的化合物的所有此类立体异构体形式。
[0200]
本发明还包括式(i)化合物的所有药学上可接受的同位素变体。同位素变体被定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数但原子质量不同于通常在自然界中发现的原子质量的原子替代的变体。
[0201]
适合包含在本发明化合物中的同位素的实例包括如下原子的同位素：氢，例如2h和3h；碳，如
13
c和
14
c；氮，如
15
n；氧，例如
17
o和
18
o；磷，如
32
p；硫，如
35
s；氟，如
18
f；以及氯，如
36
cl。
[0202]
用同位素如氘取代本发明的化合物可以提供由更大的代谢稳定性引起的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求，因此在一些情况下可能是优选的。
[0203]
式(i)化合物的某些同位素变体，例如掺入放射性同位素的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究。放射性同位素氚和
14
c由于其易于掺入和现成的检测手段而特别适用于此目的。
[0204]
通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实施例和制备例中描述的那些类似的方法，使用合适试剂的适当同位素变化形式，制备式(i)化合物的同位素变体。
[0205]
式(i)的化合物是去泛素化酶usp30的抑制剂。
[0206]
根据另一方面，本发明提供如本技术中所定义的式(i)化合物、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其用作药物。
[0207]
根据另一方面，本发明提供在哺乳动物中治疗或预防其中已知或可显示usp30的抑制产生有益效果的病症或病况的方法，其包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的如本技术中所定义的式(i)的化合物、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0208]
根据另一方面，本发明提供如本技术中所定义的式(i)化合物、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防其中已知或可显示usp30的抑制产生有益效果的病症或病况的药物中的用途。药物的制备尤其可以包括式(i)化合物或其盐的化学合成，或制备包含所述化合物或盐的组合物或制剂，或包含所述化合物的任何药物的包装。
[0209]
根据另一方面，本发明提供在患者中抑制usp30的方法，其包括向该患者施用治疗有效量的本技术中所定义的式(i)化合物、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药
学上可接受的盐。
[0210]
受益于usp30活性的病症或病况选自涉及线粒体功能障碍的病症、癌症和纤维化。
[0211]
在本发明所有方面的一个优选实施方案中，受益于usp30活性的病症或病况为涉及线粒体功能障碍的病况。
[0212]
线粒体功能障碍由线粒体缺陷引起，线粒体是除红细胞外的每个身体细胞中存在的特化区室。当线粒体失效时，在细胞内产生越来越少的能量，并且随后将发生细胞损伤或甚至细胞死亡。如果该过程在整个身体中重复，则发生这种情况的受试者的生命严重受损。线粒体疾病最常出现在非常需要能量的器官中，例如脑、心脏、肝脏、骨骼肌、肾脏以及内分泌和呼吸系统。
[0213]
涉及线粒体功能障碍的病症可以选自涉及线粒体自噬缺陷的病症，涉及线粒体dna突变的病症，涉及线粒体氧化性应激的病症，涉及线粒体膜电位、线粒体生物发生缺陷的病症，涉及线粒体形状或形态缺陷的病症，以及涉及溶酶体贮积缺陷的病症。
[0214]
特别地，涉及线粒体功能障碍的病症可以选自神经变性疾病；多发性硬化(ms)；线粒体脑病乳酸酸中毒和中风样发作(melas)综合征；母系遗传性糖尿病和耳聋(midd)；莱伯(leber)遗传性视神经病(lhon)；癌症(包括例如乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、睾丸癌、头颈癌、胰腺癌、脑癌、黑素瘤、骨癌或组织器官的其他癌症和血细胞的癌症，如淋巴瘤和白血病、多发性骨髓瘤、转移癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、鼻咽癌、结肠直肠癌和非小细胞肺癌)；神经病、共济失调、色素性视网膜炎、母系遗传性利氏综合征(narp-mils)；丹农(danon)病；糖尿病；糖尿病肾病；代谢紊乱；心力衰竭；导致心肌梗塞的缺血性心脏病；精神疾病，例如精神分裂症；多发性硫酸酯酶缺乏症(msd)；粘脂病ii(ml ii)；粘脂病iii(ml iii)；粘脂病iv(ml iv)；gm1-神经节苷脂贮积病(gm1)；神经元蜡样质脂褐质沉积病(ncl1)；阿尔佩斯(alpers)病；巴尔特(barth)综合征；β-氧化缺陷；肉碱-酰基-肉碱缺乏病；肉碱缺乏病；肌酸缺失综合征；辅酶q10缺乏症；复合物i缺乏症；复合物ii缺乏症；复合物iii缺乏症；复合物iv缺乏症；复合物v缺乏症；cox缺乏症；慢性进行性外侧眼肌麻痹(cpeo)；cpt i缺乏症；cpt ii缺乏症；戊二酸尿症ii型；基-塞二氏(kearns-sayre)综合征；乳酸酸中毒；长链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症(lchad)；利氏病或综合征；利氏综合征法国加拿大(lsfc)变体；致死性婴儿心肌病(lic)；勒夫特(luft)病；中链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症(mcad)；肌阵挛型癫痫和破碎红纤维(merrf)综合征；线粒体细胞病；线粒体隐性共济失调综合征；线粒体dna缺失性综合征；肌神经管肠疾病和脑病；皮尔逊(pearson)综合征；丙酮酸脱氢酶缺乏症；丙酮酸羧化酶缺乏症；polg突变；中/短链3-羟基酰基辅酶a脱氢酶(m/schad)缺乏症；极长链酰基辅酶a脱氢酶(vlcad)缺乏症；过氧化物酶体失调；甲基丙二酸血症；甲羟戊酸激酶缺乏症；认知功能和肌肉强度的年龄依赖性下降；以及与神经变性和神经精神病症有关的认知受损。
[0215]
涉及线粒体功能障碍的病症可以是cns病症，例如神经变性疾病。
[0216]
神经变性疾病包括但不限于帕金森病、阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化(als)、亨廷顿病、缺血、中风、路易体痴呆、多系统萎缩(msa)、进行性核上性麻痹(psp)、皮质基底变性(cbd)和额颞痴呆。
[0217]
特别地，本发明的化合物可用于治疗或预防帕金森病，包括但不限于与α-突触核蛋白、帕金蛋白、pink1、gba和lrrk2中的突变相关的pd，以及常染色体隐性遗传性青少年型
帕金森病(ar-jp)或早发型帕金森病(eopd)，其中帕金蛋白或pink1发生突变、截断或缺失。
[0218]
特别地，本发明的化合物可用于治疗与神经变性疾病和神经精神疾病相关的认知缺损，包括例如与阿尔茨海默病和帕金森病相关的认知缺损、ad和pd的临床前或前驱形式、亨廷顿病、路易体病痴呆、与精神分裂症、情绪障碍、双相性情感障碍和重度抑郁症相关的认知缺损。
[0219]
当用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症时，如本技术中所述的本发明的化合物或其药物组合物可以与一种或多种另外的药剂组合。所述化合物可以与一种或多种另外的药剂组合，所述另外的药剂选自左旋多巴、多巴胺激动剂、单胺加氧酶(mao)b抑制剂、儿茶酚o-甲基转移酶(comt)抑制剂、抗胆碱能药物、利鲁唑、金刚烷胺、胆碱酯酶抑制剂、美金刚、丁苯那嗪、抗精神病药、地西泮、氯硝西泮、抗抑郁药和抗惊厥药。所述化合物可以与减少/去除神经变性疾病中的致病性蛋白质聚集体的药剂组合，例如减少/去除帕金森病、多系统萎缩或路易体痴呆中的α-突触核蛋白的药剂；减少/去除阿尔茨海默病或进行性核上性麻痹中的tau的药剂；减少/去除als或额颞痴呆中的tdp-43的药剂。
[0220]
本发明所有方面的另一个优选实施方案中，受益于usp30活性的病症或病况为癌症。癌症可能与线粒体功能障碍关联。优选的癌症包括例如乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、睾丸癌、头颈癌、胰腺癌、脑癌、黑素瘤、骨癌或组织器官的其他癌症和血细胞的癌症，如淋巴瘤和白血病、多发性骨髓瘤、转移癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因(ewing)肉瘤、鼻咽癌、结肠直肠癌、结肠直肠癌和非小细胞肺癌。
[0221]
特别地，本发明的化合物可用于治疗或预防其中凋亡途径失调的癌症，更特别地，本发明的化合物可用于治疗或预防其中bcl-2家族的蛋白质突变或过表达或表达不足的癌症。
[0222]
纤维化是指在创伤、炎症、组织修复、免疫反应、细胞增生和瘤形成之后发生的细胞外基质成分的累积。可以用本发明的化合物和组合物治疗的纤维化病症尤其包括与主要器官疾病相关的纤维化/纤维化病症，例如间质性肺病(ild)、肝硬化、非酒精性脂肪肝病(nafld)和非酒精性脂肪性肝炎(nash)(肝纤维化)、肾病(肾纤维化)、急性肾损伤(aki)、急性肾病(akd)、慢性肾病(ckd)、延迟的肾移植功能、心脏或血管疾病(心脏纤维化)和眼病；纤维增生性疾病，例如全身性和局部硬皮病、瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕、动脉粥样硬化、再狭窄和杜普伊特伦(dupuytren)挛缩；与创伤相关的瘢痕形成，例如手术并发症、化疗剂药物诱导的纤维化(例如博来霉素诱导的纤维化)、辐射诱导的纤维化、意外受伤和烧伤)；腹膜后纤维化(奥蒙德(ormond)病)；以及通常在肾移植后接受腹膜透析的患者的腹膜纤维化/腹膜瘢痕形成。参见，例如，wynn等人，2004，nat rev immunol.august；4(8)：583
–
594。因此，本发明涉及治疗或预防与主要器官(包括例如肺、肝、肾、心脏、皮肤、眼、胃肠道、腹膜和骨髓)的纤维化/纤维化病症和/或与其相关的纤维化/纤维化病症以及本技术中所述的其他疾病/病症的方法，以及用于所述方法中的化合物和组合物。
[0223]
所述化合物可以与用作肾病治疗的药剂组合，所述药剂包括抗糖尿病药、心血管疾病药剂和靶向疾病相关途径如氧化性应激(包括但不限于nrf2/keap-1途径)和抗凋亡途径(包括但不限于抗p53药剂)的新型药剂。
[0224]
间质性肺病(ild)包括其中肺部炎症和纤维化是病理学的最终常见途径的病症，例如结节病、矽肺、药物反应、感染和胶原血管疾病，如类风湿性关节炎和系统性硬化症(硬
皮病)。肺的纤维化病症包括例如肺纤维化、特发性肺纤维化(ipf)、常见间质性肺炎(uip)、间质性肺病、隐原性纤维化肺泡炎(cfa)、闭塞性细支气管炎和支气管扩张。
[0225]
特发性肺纤维化(ipf)是最常见的ild类型，并且尚无已知的原因。
[0226]
所述化合物可以与治疗ipf和潜在地治疗ild的药剂组合，所述药剂包括尼达尼布(nintedanib)和吡非尼酮。
[0227]
肝硬化具有与ild相似的原因，并且包括例如与病毒性肝炎、血吸虫病和慢性酒精中毒相关的肝硬化。
[0228]
肾病可能与糖尿病相关，还可能与高血压疾病相关，糖尿病可以损伤肾脏并使肾脏结疤，导致功能的进行性丧失。肾纤维化可以发生在肾病的任何阶段，从损伤后急性肾病(akd)和慢性肾病(ckd)(例如偶发性ckd和进行性ckd)到终末期肾病(esrd)。肾纤维化可以作为心血管疾病如高血压或糖尿病的结果而发生，这两者都对肾功能造成巨大的应变，这促进了纤维化反应。然而，肾纤维化也可以是特发性的(没有已知原因)，并且某些遗传性线粒体疾病也呈现肾纤维化表现和相关症状。
[0229]
心脏病可导致瘢痕组织，其可损害心脏泵送的能力。
[0230]
眼病包括例如黄斑变性以及视网膜和玻璃体视网膜病，其可损害视力。
[0231]
在一个优选的实施方案中，本发明涉及特发性肺纤维化(ipf)的治疗或预防。
[0232]
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及肾纤维化的治疗或预防。
[0233]
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及治疗或预防急性肾损伤(aki)，特别是在高风险患者中。实例包括手术后aki，例如器官移植，例如由缺血再灌注损伤、移植物功能延迟导致；肿瘤学，如由化疗引起的aki；造影剂诱导的肾病，如直接肾小管细胞毒性、血液动力学缺血和渗透效应；急性间质性肾炎，例如由药物或感染引起；由阻塞例如肾结石引起的aki；以及covid-19诱导的aki。特定的高风险患者亚组是经历心脏手术(例如冠状动脉旁路移植和/或瓣膜手术)的那些。存在aki的确定静态风险因素，例如年龄65岁或更大、胰岛素依赖性糖尿病、ckd(估计肾小球滤过率[egfr]小于60ml/min/1.73m2的成人处于特别风险中)、心力衰竭、肝病、aki病史。
[0234]
在另一个优选的实施方案中，发明涉及治疗或预防源自这种aki的急性肾病(akd)或慢性肾病(ckd)，包括例如肾小管间质纤维化和糖尿病肾病。
[0235]
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及肝病的治疗或预防，肝病包括例如nafld、nash、肝硬化、门静脉高压症、急性肝衰竭和肝细胞癌。nafld和nash等肝病可能与代谢综合征和ii型糖尿病等各种代谢疾病有关，其也会增加各种糖尿病相关病理状况，包括糖尿病视网膜病变和周围神经病变的风险。
[0236]
当被用于治疗或预防涉及肝病和代谢功能障碍的病症时，本技术中所述的本发明化合物或其药物组合物可与一种或多种其他药剂组合，包括二甲双胍、磺酰脲类、dpp-4抑制剂、glp-1激动剂、ppar激动剂、sglt2抑制剂、血管紧张素转换酶(ace)抑制剂和血管紧张素ii受体阻滞剂(arb)。
[0237]
利氏综合征是一种罕见的遗传性神经代谢疾病，其影响中枢神经系统。这种进行性疾病开始于三个月至两岁的婴儿。很少发生在青少年和成年人身上。利氏综合征可由编码线粒体蛋白的核dna中的突变、线粒体dna中的突变(母性遗传的利氏综合征-mils)或由位于x染色体短臂上的称为丙酮酸脱氢酶的酶的缺陷(x-连锁利氏综合征)引起。利氏综合
征的症状通常进展迅速。最早的迹象可能是吸吮能力差，以及头部控制和运动技能的丧失。这些症状可能伴有食欲不振、呕吐、易怒、持续哭泣和癫痫发作。随着病症的进展，症状还可能包括全身无力、肌张力缺乏和乳酸性酸中毒发作，这可导致呼吸和肾功能受损。
[0238]
在母系遗传性利氏综合征(mils)中，线粒体dna中的基因突变(以》90％的高比例)干扰在运动移动中起作用的脑区域中运行细胞的能量来源。线粒体dna中的基因突变导致这些细胞中能量的慢性缺乏，这进而影响中枢神经系统并引起运动功能的进行性变性。当线粒体dna中引起mils的基因突变不充分(小于90％)时，该病症被称为神经病性共济失调和视网膜色素变性(narp)。还存在一种形式的利氏病(称为x-连锁型利氏病)，其为产生对细胞代谢重要的另一组物质的基因突变的结果。存在利氏综合征的另一种变体，其被称为法国加拿大变体，其特征在于称为lrpprc的基因中的突变。类似的神经学症状表现为利氏综合征的那些症状，不过，在法国加拿大变体中通常也观察到肝脏脂肪变性。
[0239]
在一个优选的实施方案中，本发明涉及利氏综合征或利氏病的治疗或预防，包括例如x-连锁型利氏病、利氏综合征法国加拿大变体和/或与利氏病相关的症状。
[0240]
所述化合物可与可用作线粒体疾病治疗的新药剂组合，所述新药剂包括但不限于烟酰胺核苷。
[0241]
提及“治疗”包括暂时或永久改善、缓解症状、消除症状原因的手段。本发明的化合物可用于治疗人和其他哺乳动物的本技术中所公开的疾病。
[0242]
在另一个实施方案中，本发明包括本技术中所公开的疾病的预防性疗法，并且包括预防或减缓所述病症或病况的症状出现的手段。本发明的化合物可用于预防人和其他哺乳动物的本技术中所公开的疾病。
[0243]
需要治疗或预防的患者可以是例如患有所述病症或处于患有所述病症的风险中的人或其他哺乳动物。
[0244]
根据另一方面，本发明提供药物组合物，其包含如本技术中所定义的式(i)的化合物或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，以及药学上可接受的稀释剂或载体。
[0245]
本发明的药物组合物包含与任何药学上可接受的载体、助剂或介质组合的任何本发明的化合物。药学上可接受的载体的实例是本领域技术人员已知的，并且包括但不限于防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、矫味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂，这取决于施用模式和剂型的特性。组合物可以是例如片剂、胶囊、粉末、颗粒、酏剂、锭剂、栓剂、糖浆和液体制剂(包括混悬液和溶液)的形式。在本发明的上下文中，术语“药物组合物”意指包含活性剂并且另外包含一种或多种药学上可接受的载体的组合物。根据施用模式和剂型的特性的不同，组合物可以进一步包含选自例如稀释剂、助剂、赋形剂、介质、防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、矫味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂的成分。
[0246]
如本技术中所述的本发明的化合物或其药物组合物可以单独使用或与一种或多种另外的药剂组合使用。化合物可以与另外的抗肿瘤治疗剂组合，例如化疗药或其他调节蛋白的抑制剂。在一个实施方案中，另外的抗肿瘤治疗剂为bh-3模拟物。在另一个实施方案中，bh-3模拟物可以选自但不限于abt-737、abt-199、abt-263和奥巴克拉中的一种或多种。在另一个实施方案中，另外的抗肿瘤剂为化疗剂。化疗剂可以选自但不限于奥拉帕利、丝裂霉素c、顺铂、卡铂、奥沙利铂、电离辐射(ir)、喜树碱、伊立替康、托泊替康、替莫唑胺、紫杉
烷、5-氟嘧啶、吉西他滨和多柔比星。
[0247]
为了治疗或预防纤维化疾病，例如，如本技术中所述的本发明的化合物或其药物组合物可以单独使用或与一种或多种选自抗胆碱能药物、β-2模拟物、类固醇、pde-iv抑制剂、p38 map激酶抑制剂、nk1拮抗剂、ltd4拮抗剂、egfr抑制剂和内皮素拮抗剂的另外的药剂组合使用。
[0248]
特别地，如本技术中所述的本发明的化合物或其药物组合物可以单独使用或与一种或多种选择的另外的药剂组合使用，所述另外的药剂选自：常规免疫抑制药物，如皮质类固醇、免疫抑制剂或细胞毒性剂，或抗纤维化药物，如吡非尼酮或非特异性激酶抑制剂(例如尼达尼布)。
[0249]
本发明的药物组合物可以以任何适当有效的方式施用，例如口服、肠胃外、局部、吸入、鼻内、直肠、阴道内、眼部和耳部。适于递送本发明化合物的药物组合物及其制备方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。此类组合物及其制备方法可以在例如"remington's pharmaceutical sciences"，第19版(mack publishing company，1995)中找到。
[0250]
口服
[0251]
本发明的化合物可以通过口服。口服可以包括吞咽，使得化合物进入胃肠道，或者可以采用口腔或舌下施用，通过口腔或舌下施用，化合物直接从口腔进入血流。
[0252]
适于口服的制剂包括固体制剂，例如片剂，含有颗粒、液体或粉末的胶囊，锭剂(包括液体填充的)，咀嚼物，多颗粒和纳米粒，凝胶，膜(包括粘膜粘附剂)，阴道栓，喷雾剂和液体制剂。
[0253]
液体制剂包括混悬液、溶液、糖浆和酏剂。此类制剂可用作软胶囊或硬胶囊中的填充剂，并且典型地包含载体，例如水、乙醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油，以及一种或多种乳化剂和/或助悬剂。液体制剂也可以通过例如由小药囊重构固体来制备。
[0254]
本发明的化合物还可以用于速溶、速崩剂型，例如liang和chen的expert opinion in therapeutic patents，11(6)，981-986(2001)中所述的那些。
[0255]
可以使用制剂化学家已知的标准方法制备典型的片剂，例如通过直接压制、造粒(干、湿或熔融)、熔融凝结或挤出。片剂制剂可以包含一层或多层，并且可以是包衣的或未包衣的。
[0256]
适于口服的赋形剂的实例包括载体，例如纤维素、碳酸钙、磷酸氢钙、甘露糖醇和柠檬酸钠，造粒粘合剂，例如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和明胶，崩解剂，例如羟基乙酸淀粉钠和硅酸盐，润滑剂，例如硬脂酸镁和硬脂酸，润湿剂，例如十二烷基硫酸钠，防腐剂，抗氧化剂，矫味剂和着色剂。
[0257]
用于口服的固体制剂可以配制成速释和/或调释剂型。调释制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控双重释放、靶向释放和程序化释放。在verma等人，pharmaceutical technology在线，25(2)，1-14(2001)中可以找到合适的调释技术，例如高能分散体、渗透和包衣颗粒的细节。其他调释制剂描述于美国专利号no.6,106,864中。
[0258]
胃肠外施用
[0259]
本发明的化合物还可以直接施用到血流中、肌肉中或内脏器官中。用于肠胃外施用的合适方式包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内和皮
下。用于肠胃外施用的合适装置包括针(包括显微操作针)注射器、无针注射器和输注技术。
[0260]
肠胃外制剂典型地为水溶液，其可以包含赋形剂，例如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选ph为3至9)，但是对于一些应用，它们可以更适合地配制成无菌非水溶液或干燥形式，以与合适的介质(例如无菌无热原水)结合使用。
[0261]
在无菌条件下制备肠胃外制剂，例如通过冷冻干燥，可以使用本领域技术人员众所周知的标准制药技术容易地完成。
[0262]
用于制备肠胃外溶液的式(i)化合物的溶解度可以通过合适的加工来增加，例如使用高能喷雾干燥分散体和/或通过使用适当的配制技术，例如使用溶解度增强剂。
[0263]
用于肠胃外施用的制剂可以配制成速释和/或调释剂型。调释制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控双重释放、靶向释放和程序化释放。
[0264]
本发明的药物组合物还包括本领域已知的用于绕过血脑屏障或可以直接注射到脑中的组合物和方法。用于注射的合适区域包括大脑皮质、小脑、中脑、脑干、下丘脑、脊髓和心室组织，以及包括颈动脉体和肾上腺髓质的pns区域。
[0265]
剂量
[0266]
当然，化合物的有效剂量的大小将随被治疗的病症的严重程度的性质和施用途径的不同而变化。适当剂量的选择在临床医师的范围内。日剂量范围为人和非人动物体重每千克约10μg至约100mg，并且通常可以为每千克体重每剂量约10μg至30mg。可以每天一至三次给予上述剂量。
[0267]
例如，口服可能需要5mg至1000mg，例如5-500mg的总日剂量，而静脉内剂量可能仅需要0.01-30毫克/千克体重，例如0.1-10mg/kg，更优选0.1-1毫克/千克体重。总日剂量可以以单剂量或分剂量施用。本领域技术人员还将理解，在某些病症的治疗或预防中，本发明的化合物可以“根据需要”(即根据需要或期望)作为单剂量服用。
[0268]
合成方法学
[0269]
可以使用如下在一般反应方案和代表性实施例中所述的方法制备式(i)的化合物。在适当的情况下，方案内的个体变换可以以不同的顺序完成。通过以下非限制性实施例举例说明本发明，其中使用以下缩写和定义。通过液相色谱法-质谱法(lcms)或1h nmr或它们两者表征了化合物。
[0270]
根据另一方面，本发明提供制备式(i)(i)化合物的方法，其包括使式(iv)化合物(其中y是oh)与式(v)(i)的胺(其中pg是保护基团，例如boc或cbz)反应，得到式(iii)(i)的酰胺(方案1)。可以使用标准方法学，例如通过使用偶联剂如dcc、hatu、hbtu、edc的反应或经由混合酸酐的反应，进行酰胺偶联反应。或者，可以使用socl2、pcl3或pcl5，将其中y为oh的酸(iv)转化为其中y为cl的酰氯(iv)，然后可以使该酰氯与胺(v)(i)反应，优选在合适的溶剂中在合适的碱存在下反应。或者，可以使其中y形成酯的化合物(iv)直接与胺(v)(i)反应，优选在合适的溶剂中反应。可以使用标准方法使式(iii)(i)的化合物脱保护，得到胺(ii)(i)，然后可以使该胺与溴化氰反应，得到相应的式(i)(i)的化合物。
[0271][0272]
方案1
[0273]
在另一方面，本发明提供化合物，其选自式(ii)(i)和(iii)(i)：
[0274][0275]
其中pg是保护基团，优选boc或cbz，并且r1、r2、r3、r4和r5如本技术中对式(i)化合物及其优选实施方案、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的盐所定义。
[0276]
当式(i)(i)的化合物有式(ia)(i)，式(ii)(i)、(iii)(i)和(iv)分别为(iia)(i)、(iiia)(i)和(iva)。当式(i)(i)的化合物有式(ib)(i)，式(ii)(i)、(iii)(i)和(iv)分别为(iib)(i)、(iiib)(i)和(ivb)(i)。
[0277]
根据另一方面，本发明提供制备式(i)(ii)的化合物的方法，其包括使其中y是oh的式(iv)的化合物与其中pg是保护基团，例如boc或cbz的式(v)(ii)的胺反应，得到式(iii)(ii)的酰胺(方案2)。酰胺偶联反应可以使用标准方法进行，例如通过使用偶联试剂如dcc、hatu、hbtu、edc的反应或经由混合酸酐的反应进行。或者，可以使用socl2、pcl3或pcl5将其中y是oh的酸(iv)转化为其中y是cl的酰基氯(iv)，然后可以使该酰基氯与胺(v)(ii)，优选在合适的碱存在下在合适的溶剂中反应。或者，可以使其中y形成酯的化合物(iv)直接与胺(v)(ii)，优选在合适的溶剂中反应。可以使用标准方法使式(iii)(ii)的化合物去保护，得到胺(ii)(ii)，然后可以使胺(ii)(ii)与溴化氰反应得到相应的式(i)(ii)化合物。
[0278][0279]
方案2
[0280]
在另一方面，本发明提供化合物，其选自式(ii)(ii)和(iii)(ii)：
[0281][0282]
其中pg是保护基团，优选boc或cbz，并且r1、r2、r3、r4和r5如本技术中对式(i)化合物及其优选实施方案、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的盐所定义。
[0283]
当式(i)(ii)的化合物具有式(ia)(ii)，式(ii)(ii)、(iii)(ii)和(iv)分别为(iia)(ii)、(iiia)(ii)和(iva)。当式(i)(ii)的化合物具有式(ib)(ii)，式(ii)(ii)、(iii)(ii)和(iv)分别为(iib)(ii)、(iiib)(ii)和(ivb)(ii)。
[0284]
保护基优选选自叔丁氧基羰基(boc)、苄氧基羰基(cbz)、对甲氧基苄基羰基(meoz)、9-芴基甲氧基羰基(fmoc)、乙酰基(ac)、苯甲酰基(bz)、苄基(bn)、氨基甲酸酯、对甲氧基苄基(pmb)、3,4-二甲氧基苄基(dmpm)、对甲氧基苯基(pmp)、甲苯磺酰基(ts)、三氯乙氧基羰基(troc)、4-硝基苯磺酰基(nosyl)和2-硝基苯基亚磺酰基(nps)。最优选boc和cbz。
[0285]
缩写
[0286]
br s
ꢀꢀ
宽单峰(nmr信号)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
meoh
ꢀꢀ
甲醇
[0287][0288]
co
ꢀꢀꢀꢀ
一氧化碳
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
min
ꢀꢀꢀ
分钟
[0289]dꢀꢀꢀꢀꢀ
双峰(nmr信号)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n2ꢀꢀꢀꢀ
氮
[0290]
dba
ꢀꢀꢀ
二苄基丙酮
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
nmp
ꢀꢀꢀ
n-甲基吡咯烷酮
[0291]
dcm
ꢀꢀꢀ
二氯甲烷
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
rac
ꢀꢀꢀ
外消旋
[0292]
dmf
ꢀꢀꢀ
n,n-二甲基甲酰胺
ꢀꢀꢀꢀꢀ
rt
ꢀꢀꢀꢀ
室温
[0293]
dmso
ꢀꢀꢀ
二甲亚砜
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀsꢀꢀꢀꢀꢀ
单峰(nmr信号)
[0294][0295]
es
ꢀꢀꢀꢀ
电喷雾
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
sfc
ꢀꢀꢀ
超临界流体色谱法
[0296]
etoac
ꢀꢀ
乙酸乙酯
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
socl
2 亚硫酰氯
[0297][0298]hꢀꢀꢀꢀꢀ
小时
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tbd
ꢀꢀꢀ
1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]癸-5-烯
[0299][0300]
h2ꢀꢀꢀꢀ
氢
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tea
ꢀꢀꢀ
三乙胺
[0301]
hplc
ꢀꢀ
高效液相色谱法
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tfa
ꢀꢀꢀ
三乙酸
[0302]
lcms
ꢀꢀꢀ
液相色谱法
–
质谱法
ꢀꢀꢀ
thf
ꢀꢀꢀ
四氢呋喃
[0303][0304]mꢀꢀꢀꢀꢀ
多重峰(nmr信号)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tscl
ꢀꢀ
4-甲苯磺酰氯
[0305]
mscl
ꢀꢀ
甲磺酰氯
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
vol
ꢀꢀꢀ
体积
[0306]
mecn
ꢀꢀꢀ
乙腈
[0307][0308]
lcms/hplc/sfc方法
[0309]
方法c
[0310][0311]
方法c1
[0312]
[0313][0314]
方法c2
[0315]
[0316][0317]
方法h
[0318][0319]
方法h1
[0320]
[0321][0322]
方法j
[0323]
[0324][0325]
方法f
[0326][0327]
方法p3
[0328]
[0329][0330]
方法y3用于分析型手性sfc的方法
[0331][0332]
方法y4用于分析型手性sfc的方法
[0333][0334]
方法y5用于分析型手性sfc的方法
[0335][0336]
方法y6用于分析型手性sfc的方法
[0337][0338]
方法y7用于分析型手性sfc的方法
[0339][0340]
方法y8用于分析型手性sfc的方法
[0341]
[0342][0343]
方法y12用于分析型手性sfc的方法
[0344][0345]
方法y15用于分析型手性hplc的方法
[0346]
[0347][0348]
方法y16用于分析型手性sfc的方法
[0349][0350]
中间体a
[0351]
5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0352][0353]
(i)nah，thf，0℃，2h；(ii)三溴化苯基三甲基铵，thf，0℃至rt，16h；
[0354]
(iii)nan(cho)2，mecn，70℃，1h，然后浓hcl，70℃，16h；(iv)k2co3，dcm，0℃至rt，2h；(v)pocl3，100℃，7h。
[0355]
步骤(i)
[0356]
3-乙酰基-4-环丙氧基苄腈
[0357]
该反应一式三份进行。在0℃向搅拌的环丙醇(cas 16545-68-9，来自synthonix，0.71g，12.27mmol)的thf(6ml)溶液中分批加入nah(60％在油中，0.49g，12.27mmol)并搅拌30分钟。在0℃滴加3-乙酰基-4-氟苄腈(cas 267875-54-7，来自combi-blocks，1.0g，6.13mmol)的thf(4ml)溶液，并在0℃搅拌混合物2h。将反应混合物与另外两个相同批次合并，然后倒入冰冷的水(500ml)中并用etoac(2x500ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过急骤柱色谱法(硅胶，12％ etoac的正己烷溶液)纯化，得到3-乙酰基-4-环丙氧基苄腈(3.18g，15.82mmol，85％收率)。
[0358]
lcms：m/z不支持；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：8.05(dd，j＝8.8，2.4hz，1h)，7.96(d，j＝2.0hz，1h)，7.64(d，j＝8.8hz，1h)，4.13-4.17(m，1h)，2.50(s，3h)，0.81-0.93(m，4h)。
[0359]
步骤(ii)
[0360]
3-(2-溴乙酰基)-4-环丙氧基苄腈
[0361]
在0℃向搅拌的3-乙酰基-4-环丙氧基苄腈(3.18g，15.82mmol)在thf(40ml)中的溶液中加入三溴化苯基三甲基铵(5.94g，15.82mmol)。将混合物缓慢升温至室温并搅拌16小时，然后倒入水(200ml)中并用etoac(2x200ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩，得到3-(2-溴乙酰基)-4-环丙氧基苄腈(4.3g，15.41mmol，97％收率)。该粗物质被直接用于下一步。
[0362]
lcms：方法f，6.61min；ms：es ：297.0，299.0(m 18)。
[0363]
步骤(iii)
[0364]
4-环丙氧基-3-甘氨酰苄腈盐酸盐
[0365]
向搅拌下的3-(2-溴乙酰基)-4-环丙氧基苄腈(4.3g，15.41mmol)的乙腈(43ml)溶液中加入二甲酰氨基钠(1.75g，18.49mmol)并在70℃加热3h。将反应混合物冷却至室温并减压浓缩。将残余物用meoh(43ml)和浓hcl(4.3ml)稀释。将混合物进一步在70℃加热16h，然后让其冷却至室温。将混合物减压浓缩，将残余物与异丙醇(25ml)一起搅拌以形成沉淀。减压过滤收集固体，得到4-环丙氧基-3-甘氨酰苄腈盐酸盐(5.0g，定量收率)。
[0366]
lcms：方法c，1.30min；ms：es ：217.4。
[0367]
步骤(iv)
[0368]
2-((2-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
[0369]
在0℃向搅拌的4-环丙氧基-3-甘氨酰苄腈盐酸盐(5.0g，19.80mmol)在dcm(50ml)中的溶液中加入k2co3(10.92g，79.2mmol)。在0℃滴加乙基草酰氯(5.4g，4.43ml，39.60mmol)。使混合物升温至室温，搅拌2小时，然后倒入水(500ml)中并用dcm(2x300ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩，得到2-((2-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(5.0g，定量收率)。
[0370]
lcms：方法c，1.52min；ms：es 316.9。
[0371]
步骤(v)
[0372]
5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0373]
在100℃将2-((2-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(5.0g，15.81mmol)在pocl3(50ml，10vol)中搅拌的溶液加热7h。将混合物冷却至rt，倒入冰冷的水(500ml)中并用etoac(2x200ml)萃取。合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物悬浮在meoh(40ml)中并在-78℃搅拌15分钟。减压过滤收集固体，得到5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(1.0g，3.35mmol，三步收率21％)。lcms：方法c，1.77min；ms：es ：299.5。
[0374]
中间体b
[0375]
5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙基酯
[0376][0377]
(i)zn(cn)2，zn dust，pdcl2(dppf)。dcm复合物，dma，120℃，16h；(ii)溴化吡啶鎓，thf，0℃至rt，16h；(iii)nan(cho)2，mecn，80℃，5h，然后浓hcl，80℃，16h；(iv)k2co3，dcm，0℃至rt，4h；(v)pocl3，100℃，16h。
[0378]
步骤(i)
[0379]
3-乙酰基-4-甲氧基苄腈
[0380]
在室温向1-(5-溴-2-甲氧基苯基)乙烷-1-酮(cas 16740-73-1，来自combi-blocks，60.0g，261.89mmol)在dma(600ml)中搅拌的溶液中加入氰化锌(92.25g，785.67mmol)和锌粉(17.22g，261.89mmol)。将混合物用n2气脱气30分钟，接着加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(ii)，与dcm(10.69g，13.09mmol)的复合物。在120℃将混合物加热16h。使混合物冷却至rt，通过celite hyflow
tm
过滤，将滤液倒入冰冷的水(800ml)中，并用etoac(2x1000ml)萃取。将合并的有机相用冰冷的水(4x1000ml)洗涤，用na2so4干燥并减压浓缩。残余物经柱色谱法纯化(60-120#硅胶，15％ etoac的正己烷溶液)，得到3-乙酰基-4-甲氧基苄腈(40.0g，228.57mmol，87％收率)。
[0381]
lcms：方法c，1.52min；ms：es ：176.08。
[0382]
步骤(ii)
[0383]
3-(2-溴乙酰基)-4-甲氧基苄腈
[0384]
在0℃向搅拌的3-乙酰基-4-氧基苄腈(7.20g，41.14mmol)的thf(72ml)溶液中加入三溴吡啶鎓(14.47g，45.25mmol)。将混合物缓慢升温至室温并搅拌16小时，然后倒入水(400ml)中并用etoac(2x400ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩，得到3-(2-溴乙酰)-4-甲氧基苄腈(13.0g，定量收率)。该粗物质被直接用于下一步。
[0385]
步骤(iii)
[0386]
3-甘氨酰基-4-甲氧基苄腈盐酸盐
[0387]
向搅拌着的3-(2-溴乙酰)-4-甲氧基苄腈(10.5g，41.51mmol)的乙腈(105ml)溶液中加入二甲酰氨基钠(5.91g，62.26mmol)并在80℃将该混合物加热8h。将反应混合物冷却至rt，减压浓缩并将残余物用meoh(105ml)和浓hcl(10.5ml)稀释。将混合物在80℃进一步加热16h，然后冷却至rt。将混合物减压浓缩，残余物与异丙醇(40ml)一起搅拌形成沉淀，减压过滤收集沉淀，得到3-甘氨酰基-4-甲氧基苄腈盐酸盐(9.0g，39.73mmol，95％收率)。
[0388]
lcms：方法c2，0.40min；ms：es ：191.0。
[0389]
步骤(iv)
[0390]
2-((2-(5-氰基-2-甲氧苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
[0391]
在0℃向搅拌的3-甘氨酰基-4-甲氧基苄腈盐酸hcl盐(9.0g，39.73mmol)在dcm(90ml)中的溶液中加入k2co3(21.93g，158.92mmol)。在0℃滴加乙基草酰氯(10.84g，8.89ml，79.46mmol)。使混合物升温至室温并搅拌4h。将混合物倒入水(900ml)中并用dcm(2x500ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩，得到2-((2-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酯(9.0g，31.03mmol，78％收率)。
[0392]
lcms：方法c，1.34min；ms：es 291.1。
[0393]
步骤(v)
[0394]
5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0395]
在100℃将2-((2-(5-氰基-2-甲氧苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(1.2g，4.14mmol)在pocl3(12ml，10vol)中搅拌的溶液中加热2h。将混合物冷却至室温，倒入冰冷的水(200ml)中并用etoac(3x100ml)萃取。合并的有机相用饱和nahco3溶液(3x100ml)洗涤，用na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过急骤柱色谱法(硅胶，32％ etoac的正己烷溶液)纯化，得到5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.60g，2.20mmol，53％收率)。
[0396]
lcms：方法c，1.53min；ms：es ：272.6。
[0397]
中间体c
[0398]
5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0399][0400]
(i)hatu，dipea，thf，0℃至rt，3h；(ii)溴化甲基镁，thf，-10℃至0℃，4h；(iii)三溴化苯基三甲基铵，mecn，0℃至rt，9h；(iv)nan(cho)2，mecn，80℃，1h，然后浓hcl，80℃，3h；(v)k2co3，dcm，0℃至rt，3h；(vi)pocl3，110℃，16h。
[0401]
步骤(i)
[0402]
5-溴-n-甲氧基-n-甲基-2-(三氟甲氧基)苯甲酰胺
[0403]
在0℃向5-溴-2-(三氟甲氧基)苯甲酸(cas 403646-47-9，来自combi-blocks，10.0g，35.08mmol)在thf(100ml)中搅拌的溶液中分批加入dipea(13.57g，17.9ml，105.25mmol)和hatu(20.0g，52.62mmol)。30min后，在0℃加入n,o-二甲基羟胺hcl(4.45g，45.61mmol)。将混合物缓慢升温至室温并搅拌3小时，然后倒入冰冷的水(300ml)中并用etoac(3x150ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩得到5-溴-n-甲氧基-n-甲基-2-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(12.2g，定量收率)。该粗物质被直接用于下一步。
[0404]
lcms：方法c，1.69min；ms：es ：327.8，329.8。
[0405]
步骤(ii)
[0406]
1-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮
[0407]
在-10℃向5-溴-n-甲氧基-n-甲基-2-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(12.2g，37.31mmol)在thf(130ml)中搅拌的溶液中滴加溴化甲基镁(3m在乙醚中，24.9ml，74.62mmol)。将混合物缓慢升温至0℃并搅拌4小时，然后倒入饱和nh4cl溶液(300ml)中并用etoac(3x200ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩，得到1-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(10.0g，定量收率)。该粗物质被直接用于下一步。
[0408]
lcms：方法c，m/z不支持；1h nmr(400mhz，cdcl3)δppm：7.92(s，1h)，7.67-7.71(m，1h)，7.24(d，j＝8.0hz，1h)，2.62(s，3h)。
[0409]
步骤(iii)
[0410]
2-溴-1-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮
[0411]
在0℃向1-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(10.0g，35.46mmol)在乙腈(100毫升)中搅拌的溶液中分批加入三溴化苯基三甲基铵(13.33g，35.46mmol)。将混合物缓慢升温至室温并搅拌9小时，然后倒入水(200ml)中并用etoac(3x100ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩。通过柱色谱法(硅胶，5％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到2-溴-1-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮(11.5g，31.95mmol，三步收率91％)。
[0412]
lcms：m/z不支持；1h nmr(400mhz，cdcl3)δppm：7.93(s，1h)，7.73(dd，j＝8.8，2.4hz，1h)，7.25(d，j＝8.0hz，1h)，4.45(s，2h)。
[0413]
步骤(iv)
[0414]
2-氨基-1-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮盐酸盐
[0415]
向2-溴-1-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1酮(10.0g，27.78mmol)在乙腈(100ml)中搅拌的溶液中加入二甲酰氨基钠(5.28g，55.58mmol)并将混合物在80℃加热1h。将混合物冷却至室温，减压浓缩，残余物用meoh(100ml)和浓hcl(10.0ml)稀释。将混合物在80℃加热3h，然后冷却至rt。将混合物减压浓缩，残余物与乙醚(4x30ml)一起搅拌形成沉淀，减压过滤收集沉淀，得到2-氨基-1-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮盐酸盐(9.41g，定量收率)。lcms：方法c，1.65min；ms：es ：299.9，301.9。
[0416]
步骤(v)
[0417]
2-((2-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
[0418]
在0℃向2-氨基-1-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)乙烷-1-酮hcl盐(9.4g，28.19mmol)在dcm(94ml)中搅拌的溶液中加入k2co3(11.67g，84.56mmol)。在0℃滴加乙基草酰氯(5.7 7g，4.73ml，42.28mmol)。使混合物升温至室温，搅拌3小时，然后倒入水(150ml)中并用dcm(3x120ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩，得到2-((2-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(3.4g，8.56mmol，两步31％收率)。
[0419]
lcms：方法c，2.09min；ms：es-396.0，398.0。
[0420]
步骤(vi)
[0421]
5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0422]
在110℃将2-((2-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(3.4g，8.56mmol)在pocl3(17ml，5vol)中搅拌的溶液中加热16h。将混合物冷却至室温，倒入冰冷的水(250ml)中并用etoac(3x100ml)萃取。合并的有机相用饱和nahco3溶液(3x100ml)洗涤，用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，18％ etoac的正己烷溶液)纯化得到残留物，得到5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(1.3g，3.43mmol，40％收率)。
[0423]
lcms：方法c，2.39min；ms：es ：379.8，381.8。
[0424]
中间体d
[0425]
5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0426][0427]
(i)三氟甲磺酸，nbs，mecn，-30℃至rt，18h；(ii)k2co3，mei，dmf，0℃至rt，3h；(iii)三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡，pdcl2(pph3)2，1,4-二噁烷，100℃，3h，然后nbs，thf:水，0℃，10min；(iv)nan(cho)2，mecn，80℃，2h，然后浓hcl，80℃，16h；(v)氯氧代乙酸乙酯，k2co3，dcm，0℃至rt，2h；(vi)pocl3，100℃，5h。
[0428]
步骤(i)
[0429]
5-溴-2-氟-4-羟基苄腈
[0430]
在-30℃向2-氟-4-羟基苄腈(cas 82380-18-5，来自combi-blocks，8.0g，58.39mmol)在乙腈(80ml)中搅拌的溶液中滴加三氟甲磺酸(10.51g，6.18ml，70.07mmol)。10分钟后，在-30℃分批加入n-溴代琥珀酰亚胺(10.39g，58.39mmol)。将混合物缓慢升温至室温并搅拌18小时，然后倒入饱和nahco3溶液(150ml)中并用etoac(2x150ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩，得到5-溴-2-氟-4-羟基苄腈(5.08g，23.63mmol，40％收率)。该粗物质被直接用于下一步。
[0431]
lcms：方法c，1.58min；ms：es-：214.0，216.0。
[0432]
步骤(ii)
[0433]
5-溴-2-氟-4-甲氧基苄腈
[0434]
在0℃向5-溴-2-氟-4-羟基苄腈(5.08g，23.63mmol)在dmf(30ml)中搅拌的溶液中加入k2co3(6.52g，47.26mmol)。10min后，在0℃逐滴加入甲基碘(5.03g，2.21ml，35.45mmol)。将混合物缓慢升温至室温并搅拌3小时，然后倒入水(100ml)中并用etoac(2x100ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩。通过柱色谱法(硅胶，2％etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到5-溴-2-氟-4-甲氧基苄腈(5.70g，定量收率)。
[0435]
lcms：m/z不支持；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：8.30(d，j＝7.2hz，1h)，7.46(d，j＝12.0hz，1h)，4.01(s，3h)。
[0436]
步骤(iii)
[0437]
5-(2-溴乙酰基)-2-氟-4-甲氧基苄腈
[0438]
将5-溴-2-氟-4-甲氧基苄腈(5.70g，24.89mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(cas 97674-02-7，来自combi-blocks，13.46g，37.34mmol)在1,4-二噁烷(70ml)中搅拌的溶液用n2脱气15分钟，接着在室温加入双(三苯基膦)合二氯化钯(ii)(0.87g，1.24mmol)。将混合物在100℃加热3小时。将混合物冷却至0℃并加入thf:水(2:1，120ml)。在0℃加入n-溴代琥珀酰亚胺(8.85g，49.78mmol)。在0℃将混合物搅拌10分钟，然后倒入水(100ml)中并用etoac(2x100ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩。通过柱色谱法(硅胶，2％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到5-(2-溴乙酰基)-2-氟-4-甲氧基苄腈(6.3g，23.25mmol，两步收率98％)。
[0439]
lcms：m/z不支持；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：8.27(dd，j＝7.6，2.4hz，1h)，7.54(dd，j＝12.0，2.4hz，1h)，4.84(s，2h)，4.05(s，3h)。
[0440]
步骤(iv)
[0441]
2-氟-5-甘氨酰基-4-甲氧基苄腈盐酸盐
[0442]
向搅拌下的5-(2-溴乙酰基)-2-氟-4-甲氧基苄腈(6.30g，23.25mmol)在乙腈(65ml)中的溶液中加入二甲酰氨基钠(25.85g，27.9mmol)并在80℃将混合物加热2h。将混合物冷却至rt，减压浓缩并用meoh(65ml)和浓hcl(6.5ml)将残余物稀释。将混合物在80℃加热16h，然后冷却至rt。将混合物减压浓缩，残余物与异丙醇(100ml)一起搅拌形成沉淀，减压过滤收集沉淀，得到2-氟-5-甘氨酰基-4-甲氧基苄腈盐酸盐(5.3g，定量收率)。
[0443]
lcms：方法h，1.96min；ms：es ：209.1。
[0444]
步骤(v)
[0445]
2-((2-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
[0446]
在0℃向2-氟-5-甘氨酰基-4-甲氧基苄腈hcl盐(5.30g，21.67mmol)在dcm(60ml)中搅拌的溶液中加入k2co3(11.96g，86.68mmol)。在0℃滴加乙基草酰氯(5.89g，4.83ml，43.34mmol)。使混合物升温至室温，搅拌2小时，然后倒入水(150ml)中并用etoac(2x150ml)萃取。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩，得到2-((2-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(4.20g，13.63mmol，两步58％收率)。lcms：方法c，1.50min；ms：es 309.4。
[0447]
步骤(vi)
[0448]
5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0449]
在100℃将2-((2-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(4.2g，13.63mmol)在pocl3(42ml，10vol)中搅拌的溶液加热5h。将混合物冷却至室温，倒入冰冷的水(100ml)中并用etoac(2x150ml)萃取。合并的有机相用饱和nahco3溶液(2x100ml)洗涤，用na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物悬浮在meoh(30ml)中并在-78℃搅拌15分钟。减压过滤收集固体，得到5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(1.60g，5.51mmol，40％收率)。
[0450]
lcms：方法c，1.63min；ms：es ：291.2。
[0451]
实施例1
[0452]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0453][0454][0455]
(i)tbd，thf，0℃至rt；(ii)tfa，dcm，0℃至rt；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至rt。
[0456]
步骤(i)
[0457]
(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0458]
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.60g，2.01mmol)和(2r,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 348165-63-9，0.60g，3.02mmol)在thf(10ml)中搅拌的溶液中分批添加tbd(0.42g，3.02mmol)。将该混合物温热至rt并搅拌1h，然后倾入水(70ml)并用etoac(2x70ml)萃取。将合并的有机相用无水na2so4干燥并在减压下浓
缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，30％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.32g，0.71mmol，35％收率)。
[0459]
lcms：方法c，1.86min；ms：es-451.4。
[0460]
步骤(ii)
[0461]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0462]
在0℃向(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.31g，0.68mmol)在dcm(7ml)中搅拌的溶液中逐滴添加tfa(0.93ml，3vol)。让该混合物温热至rt并搅拌45min，然后在减压下浓缩，得到5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.3g，0.64mmol，94％收率)。
[0463]
lcms：方法c，1.38min；ms：es 353.3。
[0464]
步骤(iii)
[0465]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0466]
在rt向5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.3g，0.64mmol)在thf(8ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.27g，1.93mmol)并将该混合物搅拌10min。在0℃添加溴化氰(0.07g，0.64mmol)并在rt将该混合物搅拌45min，然后倾入水(70ml)并用etoac(2x70ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，40％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.1g，0.27mmol，42％收率)。
[0467]
lcms：方法h，2.96min；ms：es 378.0；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.36(d，j＝6.4hz，1h)，8.27(s，1h)，7.98(d，j＝8.4hz，1h)，7.68
–
7.70(m，2h)，4.51-4.53(m，1h)，4.21-4.23(m，1h)，3.89-3.95(m，1h)，3.77-3.81(m，1h)，3.43-3.46(m，1h)，2.16-2.18(m，1h)，1.76-1.83(m，1h)，1.26(d，j＝6.4hz，3h)，0.92(s，4h)。手性sfc：方法y5，5.18min。
[0468]
实施例2
[0469]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0470]
[0471][0472]
(i)tbd，thf，0℃至rt；(ii)tfa，dcm，0℃至rt；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至rt。
[0473]
步骤(i)
[0474]
(2s,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0475]
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.50g，1.67mmol)和叔丁基-(2s,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸酯(cas 1207853-53-9，0.46g，2.01mmol)在thf(8ml)中搅拌的溶液中分批添加tbd(0.35g，2.51mmol)。将该混合物温热至rt并搅拌3h，然后倾入水(100ml)并用etoac(2x80ml)萃取。将合并的有机相用na2so4无水干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，55％etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2s,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.32g，0.66mmol，39％收率)。
[0476]
lcms：方法c1，1.35min；ms：es 483.4。
[0477]
步骤(ii)
[0478]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0479]
在0℃向(2s,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.32g，0.66mmol)在dcm(8ml)中搅拌的溶液中逐滴添加tfa(0.96ml，3vol)。让该混合物温热至rt并搅拌1h，然后在减压下浓缩，得到5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.32g，0.64mmol，97％收率)。
[0480]
lcms：方法c1，1.06min；ms：es 383.4。
[0481]
步骤(iii)
[0482]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0483]
在rt向5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.32g，0.64mmol)在thf(8ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.27g，1.93mmol)并搅拌10min。在0℃添加溴化氰(0.07g，0.64mmol)。在rt将该混合物搅拌1h，然后倾入水(80ml)并用etoac(2x80ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，70％etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到5-(5-氰基-2-环丙氧
苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.10g，0.24mmol，38％收率)。
[0484]
lcms：方法h，2.94min；ms：es 408.2；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.32(d，j＝6.4hz，1h)，8.26(d，j＝1.6hz，1h)，7.98(d，j＝8.8hz，1h)，7.69-7.70(m，2h)，4.47-4.59(m，1h)，4.19-4.27(m，1h)，4.00-4.10(m，1h)，3.70-3.74(m，1h)，3.39-3.51(m，3h)，3.36(s，3h)，2.11-2.18(m，1h)，1.98-2.03(m，1h)，0.92(s，4h)。手性sfc：方法y3，3.56min。
[0485]
步骤(iii)替代性合成
[0486]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0487]
在n2气氛下，在rt在n2气氛下向5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(600.0g，1209.67mmol)在thf(6l)中搅拌的溶液中添加k2co3(500.80g，3629.01mmol)并搅拌15至20min。在0℃逐滴添加溴化氰(153.87g，1451.60mmol)在thf(1.2l)中的溶液。让该混合物温热至rt并在rt搅拌1h。通过tlc(流动相：50％etoac的正己烷溶液，产物r
f 0.05；10％ meoh/dcm产物r
f 0.4监测反应的进展。将混合物用水(3l)淬灭并用etoac(3x6l)萃取。将合并的有机相用盐水溶液(1.5l)洗涤，用无水na2so4干燥并在减压下浓缩，得到粗品5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基-甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(505g)。将该粗物质(505g)悬浮在ipa(5l，10vol)中并在80℃加热，得到澄清溶液。让该混合物缓慢地冷却至rt，然后在0℃形成结晶固体，通过在减压下过滤收集该固体，用冷ipa(505ml)洗涤并50℃真空下干燥，得到5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)-吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺，其为白色结晶固体(400.0g，982.80mmol)。
[0488]
将来自ipa重结晶的物质(400g)悬浮在ipa(10l，25vol)中，添加活性炭(100g)，并在80℃将混合物加热1h。将热混合物通过celite hyflow
tm
过滤并用热ipa(800ml，2vol)洗涤。让滤液缓慢地冷却至rt，然后在0℃形成结晶固体，通过抽吸过滤收集该固体，用冷ipa(400l，1vol)洗涤并在50℃在真空下干燥，得到5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺，其为白色结晶固体(320.0g，786.24mmol，63％收率)。
[0489]
lcms：方法h1，2.81min，ms：es 408.2；hplc：方法p3，24.22min；手性hplc：方法y，28.97min；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.29(d，j＝6.8hz，1h)，8.22(d，j＝2.0hz，1h)，7.95(dd，j＝8.8，2.4hz，1h)，7.67(d，j＝8.8hz，1h)，7.65(s，1h)，4.48-4.58(m，1h)，4.18-4.22(m，1h)，4.01-4.07(m，1h)，3.70-3.74(m，1h)，3.40-3.51(m，3h)，3.35(s，3h)，2.12-2.18(m，1h)，1.97-2.03(m，1h)，0.88-0.96(m，4h)；手性hplc：方法y15，15.11min；99.8％ee；hplc：方法y26，27.87min；dsc峰温度(熔化)＝132.7℃；高分辨ms：es-406.1521(计算的精确质量407.1594)。在bruker axs d8 advance上获得了下表中的xrpd数据：cu,kα：1.540598；1.544426；kα2/kα1＝0.50。
[0490][0491]
替代性重结晶
[0492]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0493]
将粗品5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(134.4g，98.9％ lc纯度)悬浮在乙醇(1340ml，10vol)中并加热至55至
1-甲酸叔丁酯(0.09g，0.19mmol，37％收率)。
[0504]
lcms：方法c，1.76min；ms：es-469.1。
[0505]
步骤(ii)
[0506]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(氟甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0507]
在0℃向(2s,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(氟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.09g，0.19mmol)在dcm(5ml)中搅拌的溶液中逐滴添加tfa(0.9ml，10vol)。让该混合物温热至rt并搅拌1h，然后在减压下浓缩，得到5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(氟甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.16g，定量收率)。
[0508]
lcms：方法c，1.35min；ms：es-368.9。
[0509]
步骤(iii)
[0510]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(氟甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0511]
在rt向5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(氟甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.15g，0.32mmol)在thf(5ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.13g，0.96mmol)并将该混合物搅拌10min。在0℃添加溴化氰(0.03g，0.32mmol)。在rt将该混合物搅拌1h，然后倾入水(40ml)并用etoac(2x40ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，69％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(氟甲基)-吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.01g，0.03mmol，两步16％收率)。
[0512]
lcms：方法h，2.96min；ms：es 396.1；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.39(d，j＝6.8hz，1h)，8.25(s，1h)，7.98(d，j＝7.2hz，1h)，7.68
–
7.70(m，2h)，4.41-4.69(m，3h)，4.10-4.26(m，2h)，3.61-3.80(m，1h)，3.43-3.53(m，1h)，2.12-2.25(m，1h)，1.95-2.07(m，1h)，0.92(s，4h)。手性sfc：方法y4，4.96min。
[0513]
实施例4
[0514]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0515]
2-甲酰胺
[0545]
在rt向5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.31g，0.66mmol)在thf(15ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.27g，1.98mmol)并在搅拌10min后，在0℃向混合物中添加溴化氰(0.07g，0.66mmol)。在0℃将该混合物搅拌0.5h，然后倾入水(50ml)并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，60％etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.11g，0.29mmol，两步52％收率)。
[0546]
lcms：方法h，2.66min；ms：es 382.2；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.34(d，j＝6.8hz，1h)，8.25(s，1h)，7.96(d，j＝8.0hz，1h)，7.85(s，1h)，7.43(d，j＝8.8hz，1h)，4.47-4.58(m，1h)，4.09(s，3h)，4.00-4.10(m，1h)，3.70-3.74(m，1h)，3.41-3.53(m，3h)，3.36(s，3h)，2.08-2.20(m，1h)，1.95-2.06(m，1h)。手性sfc：方法y7，5.42min。
[0547]
实施例6
[0548]
4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0549][0550][0551]
(i)agotf，etoac，80℃；(ii)lioh.h2o，h2o，thf，0℃至rt；(iii)pocl3，吡啶，0℃至rt；(iv)tfa，dcm，0℃至rt；(v)k2co3，cnbr，thf，0℃至rt。
[0552]
步骤(i)
[0553]
4-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0554]
在rt向5-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(3.5g，13.83mmol)和草氨酸乙酯(cas 617-36-7，来自sigma-aldrich，4.86g，41.51mmol)在etoac(35ml)中搅拌的溶液中添加三氟甲磺酸银(cas2923-28-6，来自combi-blocks，10.66g，41.51mmol)。在80℃将该混合物加热24h，然后倾入水(120ml)，通过celite hyflow
tm
过滤并用etoac(3x70ml)萃取滤液。将合并的有机相用无水na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，16％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到4-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.53g，1.95mmol，14％收率)。
[0555]
lcms：方法c，1.65min；ms：es 273.1。
[0556]
步骤(ii)
[0557]
4-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸
[0558]
在0℃向4-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.50g，1.84mmol)在thf:水(1:1，10ml)中搅拌的溶液中分批添加氢氧化锂一水合物(0.23g，5.51mmol)。在0℃将该混合物搅拌2h，然后倾入水(70ml)，用1n hcl酸化并用dcm(3x70ml)萃取。将合并的有机相用无水na2so4干燥并在减压下浓缩，得到4-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸(0.15g，0.61mmol，33％收率)。lcms：方法c2，0.81min；ms：es 245.1。
[0559]
步骤(iii)
[0560]
(2s,4r)-4-(4-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0561]
在0℃向4-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酸(0.16g，0.65mmol)和(2s,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1207853-53-9，0.15g，0.65mmol)在吡啶(3ml)中搅拌的溶液中逐滴添加pocl3(0.3g，0.18ml，1.97mmol)。在0℃将该混合物搅拌10min，然后倾入水(50ml)并用etoac(2x30ml)萃取。将合并的有机相用无水na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，22％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2s,4r)-4-(4-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.18g，0.39mmol，60％收率)。
[0562]
lcms：方法c，1.70min；ms：es-455.1。
[0563]
步骤(iv)
[0564]
4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0565]
在0℃向(2s,4r)-4-(4-(5-氰基-2-甲氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.17g，0.37mmol)在dcm(5ml)中搅拌的溶液中逐滴添加tfa(0.85ml，5vol)。让该混合物温热至rt并搅拌1h，然后在减压下浓缩，得到4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.25g，定量收率)。
[0566]
lcms：方法c，1.32min；ms：es 357.1。
[0567]
步骤(v)
[0568]
4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0569]
在rt向4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)pyrrolidin-3-yl)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.24g，0.51mmol)在thf(5ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.21g，1.53mmol)并搅拌10min。在0℃添加溴化氰(0.04g，0.41mmol)。在rt将该混合物搅拌1h，然后倾入水(50ml)并用etoac(3x50ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，71％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.05g，0.14mmol，两步36％收率)。
[0570]
lcms：方法h，2.80min；ms：es-380.1；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.25(d，j＝6.8hz，1h)，8.72(s，1h)，8.44(d，j＝1.6hz，1h)，7.89(dd，j＝8.8，2.0hz，1h)，7.37(d，j＝
8.8hz，1h)，4.47-4.58(m，1h)，4.07(s，3h)，4.00-4.18(m，1h)，3.69-3.73(m，1h)，3.43-3.50(m，3h)，3.34(s，3h)，2.09-2.19(m，1h)，1.96-2.02(m，1h)。手性sfc：方法y3，3.49min。
[0571]
实施例7
[0572]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-[0573]
2-甲酰胺
[0574][0575]
(i)tbd，thf，0℃至rt；(ii)zn(cn)2，zn，pd2(dba)3，膦配体，dma，140℃；(iii)tfa，dcm，0℃至rt；(iv)k2co3，cnbr，thf，0℃至rt。
[0576]
步骤(i)
[0577]
(2s,4r)-4-(5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0578]
在0℃向5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.70g，1.84mmol)和(2s,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1207853-53-9，0.42g，1.84mmol)在thf(8ml)中搅拌的溶液中分批添加tbd(0.38g，2.77mmol)。在0℃将该混合物搅拌2h，然后倾入水(100ml)并用etoac(3x70ml)萃取。将合并的有机相用无水na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，25％etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2s,4r)-4-(5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.37g，0.66mmol，35％收率)。
[0579]
lcms：方法c，2.00min；ms：es 564.4，566.4。
[0580]
步骤(ii)
[0581]
(2s,4r)-4-(5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0582]
在rt向(2s,4r)-4-(5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.35g，0.62mmol)在dma(3ml)中搅拌的溶液中添加氰化锌(0.18g，1.55mmol)、锌粉(0.02g，0.31mmol)和1,1
′‑
二茂铁二基-双(二苯基膦)(0.07g，0.12mmol)。用n2将该混合物脱气15min，接着添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.11g，
0.12mmol)。在140℃在微波下将该混合物加热1h，然后让其冷却至rt，倾入冰冷的水(70ml)并用etoac(3x70ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，22％etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2s,4r)-4-(5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)-苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.25g，0.5mmol，80％收率)。
[0583]
lcms：方法c，1.83min；ms：es ：511.4。
[0584]
步骤(iii)
[0585]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0586]
在0℃向(2s,4r)-4-(5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.25g，0.49mmol)在dcm(3ml)中搅拌的溶液中逐滴添加tfa(1.25ml，5vol)。让该混合物温热至rt并搅拌2h，然后在减压下浓缩，得到5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.39g，定量收率)。
[0587]
lcms：方法c，1.38min；ms：es 411.1。
[0588]
步骤(iv)
[0589]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0590]
在rt向5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.39g，0.74mmol)在thf(5ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.31g，2.23mmol)并搅拌10min。在0℃添加溴化氰(0.06g，0.59mmol)。在rt将该混合物搅拌1h，然后倾入水(70ml)并用etoac(3x70ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，40％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.14g，0.33mmol，两步66％收率)。
[0591]
lcms：方法h，3.03min；ms：es-434.1；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.40(d，j＝6.8hz，1h)，8.51(d，j＝1.6hz，1h)，8.12(dd，j＝8.8，2.0hz，1h)，7.86(s，1h)，7.82(d，j＝8.4hz，1h)，4.51-4.55(m，1h)，3.99-4.08(m，1h)，3.69-3.74(m，1h)，3.42-3.51(m，3h)，3.34(s，3h)，2.11-2.17(m，1h)，1.97-2.03(m，1h)。手性sfc：方法y4，3.57min。
[0592]
实施例8
[0593]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0594][0595]
(i)tbd，thf，0℃至rt；(ii)zn(cn)2，zn，pd2(dba)3，膦配体，dma，140℃；(iii)tfa，dcm，0℃至rt；(iv)k2co3，cnbr，thf，0℃至rt。
[0596]
步骤(i)
[0597]
(2r,4r)-4-(5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0598]
在0℃向5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.40g，1.05mmol)和(2r,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 348165-63-9，0.23g，1.16mmol)在thf(8ml)中搅拌的溶液中分批添加tbd(0.22g，1.57mmol)。让该混合物温热至rt并搅拌3h，然后倾入水(50ml)并用etoac(3x60ml)萃取。将合并的有机相用无水na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，32％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2r,4r)-4-(5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.14g，0.26mmol，24％收率)。
[0599]
lcms：方法c，2.01min；ms：es 534.2，536.2。
[0600]
步骤(ii)
[0601]
(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0602]
在rt向(2r,4r)-4-(5-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.13g，0.24mmol)在dma(1.3ml)中搅拌的溶液中添加氰化锌(0.07g，0.61mmol)、锌粉(0.01g，0.12mmol)和1,1
′‑
二茂铁二基-双(二苯基膦)(0.03g，0.05mmol)。用n2将该混合物脱气10min，接着添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.04g，0.05mmol)。在140℃在微波下将该混合物加热1h，然后让其冷却至rt，倾入水(20ml)并用etoac(3x30ml萃取)。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，38％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.05g，0.10mmol，42％收率)。
[0603]
lcms：方法c，1.88min；ms：es ：425.6(m-56)。
[0604]
步骤(iii)
[0605]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0606]
在0℃向(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.05g，0.1mmol)在dcm(2ml)中搅拌的溶液中逐滴添加tfa(0.15ml，3vol)。让该混合物温热至rt并搅拌1h，然后在减压下浓缩，得到5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.08g，定量收率)。
[0607]
lcms：方法c，1.38min；ms：es 381.2。
[0608]
步骤(iv)
[0609]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0610]
在rt向5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.08g，0.16mmol)在thf(4ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.07g，0.48mmol)并搅拌10min。在0℃添加溴化氰(0.02g，0.16mmol)。在rt将该混合物搅拌1h，然后倾入水(20ml)并用etoac(3x25ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，47％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.02g，0.05mmol，；两步47％收率)。
[0611]
lcms：方法h，3.02min；ms：es-404.0；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.43(d，j＝6.8hz，1h)，8.51(s，1h)，8.11(d，j＝8.4hz，1h)，7.84(s，1h)，7.82(d，j＝8.4hz，1h)，4.48-4.57(m，1h)，3.89-3.94(m，1h)，3.76-3.80(m，1h)，3.42-3.46(m，1h)，2.15-2.18(m，1h)，1.76-1.83(m，1h)，1.25(d，j＝6.4hz，3h)。手性sfc：方法y8，5.02min。
[0612]
实施例9
[0613]
5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0614][0615]
(i)tbd，thf，0℃至rt；(ii)tfa，dcm，0℃至rt；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至rt。
[0616]
步骤(i)
[0617]
(2r，4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0618]
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.50g，1.72mmol)和(2r,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 348165-63-9，0.27g，1.38mmol)在thf(10ml)中搅拌的溶液中分批添加tbd(0.29g，2.07mmol)。将该混合物温热至rt并搅拌2h，然后倾入水(50ml)并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相用无水na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，40％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.3g，0.67mmol，38％收率)。
[0619]
lcms：方法c，1.78min；ms：es 389.3(m-56)。
[0620]
步骤(ii)
[0621]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0622]
在0℃向(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.3g，0.67mmol)在dcm(7ml)中搅拌的溶液中逐滴添加tfa(0.9ml，3vol)。让该混合物温热至rt并搅拌1h，然后在减压下浓缩，得到5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.29g，定量收率)。
[0623]
lcms：方法c，1.39min；ms：es 345.3。
[0624]
步骤(iii)
[0625]
5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0626]
在rt向5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.29g，0.63mmol)在thf(7ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.26g，1.89mmol)并搅拌10min。在0℃添加溴化氰(0.07g，0.63mmol)。在rt将该混合物搅拌1h，然后倾入水(70ml)
形成沉淀，且通过减压下过滤收集该固体，得到5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.13g，0.35mmol，两步52％收率)。
[0627]
lcms：方法h，2.75min；ms：es 370.1；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.31(d，j＝6.4hz，1h)，8.28-8.31(m，1h)，7.79-7.82(m，1h)，7.49-7.52(m，1h)，4.47-4.59(m，1h)，4.08(s，3h)，3.85-3.99(m，1h)，3.76-3.80(m，1h)，3.42-3.45(m，1h)，2.12-2.23(m，1h)，1.73-1.87(m，1h)，1.24
ꢀ‑
1.29(m，3h)。手性sfc：方法y5，4.98min。
[0628]
实施例10
[0629]
4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0630][0631]
步骤(i)
[0632]
4-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0633]
在rt向3-(2-溴乙酰基)-4-环丙氧基苄腈(0.70g，2.50mmol)和草氨酸乙酯(cas 617-36-7，来自sigma-aldrich，0.66g，3.75mmol)在etoac(10ml)中搅拌的溶液中添加三氟甲磺酸银(cas 2923-28-6，来自combi-blocks，0.96g，3.75mmol)。在80℃将该混合物加热16h。将再一相同批量合并，然后倾入水(100ml)，通过celite hyflow
tm
过滤并用etoac(2x100ml)萃取滤液。将合并的有机相用无水na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，10％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到4-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.35g，1.17mmol，23％收率)。
[0634]
lcms：方法h1，3.40min；ms：es 299.0。
[0635]
步骤(ii)
[0636]
(2s,4r)-4-(4-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0637]
在0℃向4-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.32g，1.07mmol)和(2s,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1207853-53-9，0.25g，1.07mmol)在dmf(7ml)中搅拌的溶液中分批添加tbd(0.18g，1.28mmol)。让该混合物温热至rt并搅拌2h，然后倾入水(50ml)并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相用无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，30％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2s,4r)-4-(4-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.10g，0.22mmol，20％收率)。
[0638]
lcms：方法h1，3.51min；ms：es-481.3。
[0639]
步骤(iii)
[0640]
4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐
[0641]
在0℃向(2s,4r)-4-(4-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.1g，0.22mmol)在dcm(5ml)中搅拌的溶液中逐滴添加tfa(1ml，10vol)。让该混合物温热至rt并搅拌1h，然后在减压下浓缩，得到4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.14g，定量收率)。
[0642]
lcms：方法j，3.61min；ms：es 383.0。
[0643]
步骤(iv)
[0644]
4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0645]
在rt向4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.14g，0.28mmol)在thf(5ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.12g，0.84mmol)并搅拌5min。在0℃添加溴化氰(0.03g，0.28mmol)。在rt将该混合物搅拌1h，然后倾入水(30ml)并用etoac(2x30ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，45％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.04g，0.09mmol，47％收率，两步)。
[0646]
lcms：方法h1，2.97min；ms：es-406.2；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.24(d，j＝6.8hz，1h)，8.52(s，1h)，8.43(d，j＝2.0hz，1h)，7.92(dd，j＝8.8，2.0hz，1h)，7.64(d，j＝8.4hz，1h)，4.48-4.56(m，1h)，4.15-4.23(m，1h)，4.0-4.08(m，1h)，3.68-3.72(m，1h)，3.42-3.50(m，3h)，3.32(s，3h)，2.10-2.15(m，1h)，1.96-2.01(m，1h)，0.86-0.97(m，4h)。
[0647]
手性hplc：方法y15，10.0min。
[0648]
实施例11
[0649]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0650][0651][0652]
步骤(i)
[0653]
(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0654]
在0℃向5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.25g，0.83mmol)和(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5，0.19g，0.83mmol)在甲苯(5ml)中搅拌的溶液中分批添加tbd(0.12g，0.83mmol)。让该混合物温热至rt并搅拌1h，然后倾入水(50ml)并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相用无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，35％etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.08g，0.16mmol，19％收率)。
[0655]
lcms：方法c1，1.41min；ms：es 483.4。
[0656]
步骤(ii)
[0657]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐
[0658]
在0℃向(2r,4r)-4-(5-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.07g，0.15mmol)在dcm(1ml)中搅拌的溶液中逐滴添加tfa(0.22ml，3vol)。让该混合物温热至rt并搅拌1h，然后在减压下浓缩，得到5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.10g，定量收率)。
[0659]
lcms：方法c1，1.06min；ms：es 383.2。
[0660]
步骤(iii)
[0661]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0662]
在rt向5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.10g，0.20mmol)在thf(5ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.08g，
0.60mmol)并搅拌5min。在0℃添加溴化氰(0.02g，0.20mmol)。在rt将该混合物搅拌1h，然后倾入水(50ml)并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，45％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.02g，0.04mmol，29％收率，两步)。
[0663]
lcms：方法h1，2.94min；ms：es 408.2；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.18(d，j＝6.8hz，1h)，8.24(s，1h)，7.96(d，j＝8.4hz，1h)，7.67-7.69(m，2h)，4.50-4.61(m，1h)，4.15-4.25(m，1h)，3.88-3.97(m，1h)，3.63-3.72(m，1h)，3.46-3.60(m，2h)，3.37-3.41(m，4h)，2.27-2.38(m，1h)，1.80-1.90(m，1h)，0.83-0.98(m，4h)。手性sfc：方法y12，3.53min。
[0664]
实施例12
[0665]
4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0666][0667][0668]
步骤(i)
[0669]
叔丁基(2r,4r)-4-(4-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸酯
[0670]
在0℃分批向4-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.40g，1.34mmol)[实施例10；步骤(i)]和(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5，0.31g，1.34mmol)在甲苯(5ml)中搅拌的溶液中添加tbd(0.19g，1.34mmol)。让该混合物温热至rt并搅拌4h，然后倾入水(50ml)并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相用无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，40％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到(2r,4r)-4-(4-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.22g，0.46mmol，34％收率)。lcms：方法c1，1.42min，ms：es 483.3。
[0671]
步骤(ii)
[0672]
4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐
[0673]
在0℃向(2r,4r)-4-(4-(5-氰基-2-环丙氧基苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.22g，0.46mmol)在dcm(5ml)中搅拌的溶液中逐滴添加tfa(0.66ml，3vol)。让该混合物温热至rt并搅拌1h，然后在减压下浓缩，得到4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.28g，定量收率)。
[0674]
lcms：方法c1，1.09min。ms：es 383.2。
[0675]
步骤(iii)
[0676]
4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0677]
在rt向4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.28g，0.56mmol)在thf(5ml)中搅拌的溶液中添加k2co3(0.23g，1.69mmol)并搅拌5min。在0℃添加溴化氰(0.06g，0.56mmol)。在rt将该混合物搅拌1h，然后倾入水(50ml)并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相用na2so4干燥并在减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(硅胶，65％ etoac的正己烷溶液)纯化残余物，得到4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺(0.06g，0.14mmol，31％收率，两步)。
[0678]
lcms：方法h1，3.01min；ms：es 408.2；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：9.10(d，j＝7.6hz，1h)，8.52(s，1h)，8.38(s，1h)，7.91(d，j＝8.4，2.0hz，1h)，7.64(d，j＝8.8hz，1h)，4.51-4.56(m，1h)，4.16-4.23(m，1h)，3.88-3.97(m，1h)，3.63-3.67(m，1h)，3.46-3.56(m，2h)，3.38-3.41(m，4h)，2.29-2.36(m，1h)，1.83-1.90(m，1h)，0.92(br s，4h)。手性sfc：方法y16，5.11min。
[0679]
实施例13
[0680]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0681][0682]
可以通过与实施例1类似的方法在步骤(i)中使用(2s,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 708274-46-8)，制备标题化合物。
[0683]
实施例14
[0684]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0685]
[0686]
可以通过与实施例4类似的方法，在步骤(i)中使用(2s,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 708274-46-8)，制备标题化合物。
[0687]
实施例15
[0688]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0689][0690]
可以通过与实施例5类似的方法，在步骤(i)中使用(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5)，制备标题化合物。
[0691]
实施例16
[0692]
4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0693][0694]
可以通过与实施例6类似的方法，在步骤(iii)中使用(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5)，制备标题化合物。
[0695]
实施例17
[0696]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0697][0698]
可以通过与实施例7类似的方法，在步骤(i)中使用(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5)，制备标题化合物。
[0699]
实施例18
[0700]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0701][0702]
可以通过与实施例8类似的方法，在步骤(i)中使用(2s,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 708274-46-8)，制备标题化合物。
[0703]
实施例19
[0704]
5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0705][0706]
可以通过与实施例9类似的方法，在步骤(i)中使用(2s,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 708274-46-8)，制备标题化合物。
[0707]
本发明化合物的生物活性
[0708]
缩写：
[0709]
tamra
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
羧基四甲基罗丹明
[0710]
pcr
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
聚合酶链反应
[0711]
pbs
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
磷酸缓冲盐水
[0712]
edta
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙二胺四乙酸
[0713]
tris
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇
[0714]
np-40
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
nonidet p-40，辛基苯氧聚乙氧基乙醇
[0715]
bsa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
牛血清白蛋白
[0716]
pns
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
周围神经系统
[0717]
bh3
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
bcl-2同源结构域3
[0718]
pten
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
磷酸酶和张力蛋白同源物
[0719]
sds-page
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
[0720]
dmso
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲亚砜
[0721]
yfp
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
黄色荧光蛋白
[0722]
vme
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙烯基甲酯
[0723]
ha
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
血凝素
[0724]
ahx
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氨基己酸
[0725]
usp30生化ic
50
测定法
[0726]
在96孔聚丙烯v形底板(greiner#651201)中，在50％ dmso中以21倍最终浓度(对于最终浓度100μm，为2100μm)制备了稀释板。典型的8-点稀释系列为100、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03μm最终。在黑色384孔板(小体积，greiner 784076)中一式两份进行反应，最终反应体积为21μl。将1μl的50％ dmso或稀释的化合物加入该板中。将usp30(boston biochem#e582)在反应缓冲液(40mm tris，ph 7.5，0.005％吐温20，0.5mg/ml bsa，5mmβ-巯基乙醇)中稀释以达到4nm的最终测定浓度，并将10μl稀释的usp30加到化合物中。将酶和化合物在室温下温育30min。通过加入50nm通过异肽键与泛素连接的tamra标记的肽作为荧光偏振底物来引发反应。加入底物并在室温下温育2小时后立即读取反应。在pherastar plus(bmg labtech)上进行读取。λ激发540nm；λ发射590nm。
[0727]
示例性化合物在usp30生化ic
50
测定法中的活性：
[0728][0729]
参比例
[0730]
示例化合物在usp30生物化学ic
50
测定法中的活性：
[0731][0732]
靶外药理学
[0733]
在eurofins cerep safety screen44组试验中对实施例2进行了药理特征分析。在10μm的单一浓度下，观察到对该组试验中所有靶标的结合或酶活性的抑制小于50％。由于在该试验中对靶标的亲和力低，实施例1的靶外相互作用的可能性低。
[0734]
安全性药理学
[0735]
在稳定表达的cho细胞中，在0.01至30μm的浓度下，评价了实施例2对herg钾通道的影响。实施例2在30μm产生了herg电流幅度的35％的最大抑制值，表明其影响qt间隔的倾向几乎没有。
[0736]
遗传毒理学
[0737]
在细菌逆向突变测定法(ames)和体外小核测定法中评估了实施例2。所有体外测
试在有和没有外源代谢活化的情况下使用高达细胞毒性或不溶性限制的浓度的浓度进行。在逆向突变测定法中，在鼠伤寒沙门氏菌菌株ta98、ta100、ta1535和ta97a以及大肠杆菌(escherichia coli)菌株wp2 uvra pkm101中，在具有和不具有代谢活化的情况下，当在至多5000微克/板测试时，实施例2不诱导突变。
[0738]
在tk6细胞中使用体外小核测定法评估了染色体损伤的诱导。当在外源代谢活化的存在情况下温育3小时，接着恢复27小时时，以及当在外源代谢活化的不存在情况下温育27小时，接着恢复27小时时，实施例2对于小核的诱导是阴性的。
[0739]
usp30内源性细胞靶标接合测定法
[0740]
将稳定过表达yfp-帕金蛋白的hela细胞接种到6孔培养皿中。一旦粘附，则在37℃、5％ co2下用适当浓度的测试化合物或介质对照处理细胞1小时。通过将细胞刮入冷pbs中，离心并在裂解缓冲液(50mm tris-碱，ph 7.5，50mm nacl，1％ np-40/igepal ca-630，2mm mgcl2，10％甘油，5mmβ-巯基乙醇，不含edta的complete小片(roche)，phosstop片(roche))中裂解10分钟，制备了全细胞裂解物。在室温将来自澄清的细胞裂解物的20μg蛋白质的等效物与最终浓度为2.5μm的ha-ahx-ahx-ub-vme探针一起温育。通过添加5x sds上样缓冲液终止反应，并通过sds page和蛋白质印迹分离了蛋白质。使用抗-usp30绵羊s746d抗体(mrc ppu reagents and services)和兔抗绵羊二级igg(h l)辣根过氧化物酶缀合物(thermo#31480)检测了usp30，并使用ecl试剂(ge#rpn2109)在ge las4000成像仪上可视化。通过定量相当于usp30以及与ub-vme探针结合的usp30的条带以及与介质处理的对照相比该比例的表达，测量了靶标接合。
[0741]
tom20-泛素化测定法
[0742]
可以用线粒体去极化剂(离子载体(例如cccp、缬氨霉素)、线粒体复合物抑制剂(寡霉素、抗霉素a))攻击人细胞系以诱导tom20的泛素化，然后在usp30抑制剂存在下进一步促进tom20的泛素化。随后通过细胞裂解物的蛋白质印迹评估tom20泛素化，可能由于添加的每个分子泛素的8kda分子量增加而进行tom20泛素化加合物检测，导致tom20免疫反应性条带的梯化。可以使用梯状免疫反应条带的化学发光光密度测定法来定量tom20-泛素化水平。
[0743]
体外细胞毒性(细胞tox)：使用alamarblue
tm
作为测定终点在hct116人结肠直肠癌细胞中测量。在96小时连续化合物暴露的时间期限内测量了化合物细胞毒性。
[0744]
进一步研究
[0745]
log p：分配系数；亲脂性测量。
[0746]
log d：分布系数；亲脂性测量。
[0747]
tpsa：拓扑极性表面积。
[0748]
比浊法溶解度：将在dmso中制备的测试化合物溶液稀释到水性缓冲液中。通过测量620nm处的吸光度，使用比浊法作为终点。
[0749]
fassif：在ph 6.5下测量的禁食状态下的模拟肠液。
[0750]
hep cl小鼠：小鼠细胞中的体外肝细胞清除率。
[0751]
hep cl人：人细胞中的体外肝细胞清除率。
[0752]
血浆f
u,p
：通过体外平衡透析测定的血浆制备物中化合物的游离分数。
[0753]
脑f
u,br
：通过体外平衡透析测定的脑匀浆制备物中化合物的游离分数。
[0754]
clu：体外清除率。本技术中所定义的clu是调整清除率，其又从固有清除率计算。由于肝代谢反应固有清除率是预测清除率，其由化合物在肝细胞制备物中的温育确定。以ml/min/kg计的值越低，则化合物越稳定。
[0755]
cl体内清除率：每单位时间从其中完全除去物质的血浆(或任何基质)的体积的药代动力学测量值。以ml/min/kg计的值越低，则化合物越稳定。
[0756]
口服f：口服生物利用度。
[0757]
mdr1-mdck(马丁-达比狗肾细胞单层)(体外)通量测定法。
[0758]
wt-mdck(野生型)体外通量
[0759]
kp
uu
为脑中未结合的药物与血浆中未结合的药物的比率，并且可以表示治疗外周和/或cns适应证的潜力。
[0760][0761]
[0762][0763]
这些实施例具有有益特性，证明了优于其他化合物的潜在优势。例如，对于实施例1和2，在小鼠中测得的分别为41和20ml/min/kg的观察到的iv血浆清除率低，证明了有价值的血浆稳定性，并且所述化合物具有非常好的口服生物利用度，其分别为37和47％。
[0764][0765]
[0766][0767][0768][0769]
[0770][0771]
比较数据
[0772]
参比例a、b、c、d和e是已知的dub抑制剂，它们已被鉴定为与usp30抑制剂一样有活性，并且与具有腈胺结构特征的本发明化合物具有一定结构相似性。wo 2016/046530中公开了参比例b、c、d和e具有uchl1抑制活性。
[0773]
对usp30的效价
[0774]
经在所述生物化学测定法中测量，本发明的实施例1至实施例11比参比例a、b、c、d和e对usp30的活性显著更强。实施例12比参比例b、c、d和e对usp30的活性显著更强。例如，实施例1至实施例11的作用强度是参比例a的作用强度的6.8倍至34倍，是参比例b、c和d的作用强度的16倍至155倍，是参比例e的作用强度的至少440倍。
[0775]
相对于其他dub对usp30的选择性
[0776]
所提供的数据证明，与参比例a相比，实施例1、2、4、6、7、11和12相对于9种dub(usp2、usp6、usp10、usp15、usp16、usp21、usp25、usp28和usp46)对usp30显著更具选择性。这些实施例对usp30的活性强度至少是对所述九种dub中的每一种的活性强度(实施例7未针对usp15进行测试)的110倍到7820倍。这是相对于参比例a的显著选择性优势，参比例a的活性强度低至2.2倍。
[0777]
相对于uchl1对usp30的选择性
[0778]
所提供的数据证明，与参比例b、c、d和e相比，实施例1、2、4、6、7、11和12相对于uchl1对usp30的选择性显著更高。实施例1、2、4、6、7、11相对于uchl1对usp30的活性强度更高大于30000倍，实施例12的活性强度更高大于4412倍，而参比例b、c、d和e的活性强度分别仅高3.0、1.3、0.8和1.5倍；
‘
c’对uchl1更具选择性。
[0779]
相对于组织蛋白酶b、k、l、s和v对usp30的选择性
[0780]
所提供的数据证明，与参比例a相比，实施例1、2、4、6、7、11和12相对于组织蛋白酶(b、k、l、s和v)对usp30显著更具选择性。这些实施例对usp30的活性强度比对所述组织蛋白酶中每一种的活性强度更高全部大于1540倍。这是相对于参比例a的显著选择性优势，参比例a对组织蛋白酶k的活性强度仅高11.6倍。
[0781]
相对于现有技术的参比例，本发明化合物的如上所鉴别的优点既是显著的又是令人意外的。其单独，特别是组合，这种优越性使得本发明的化合物特别适用于治疗或预防与usp30活性相关的疾病。
[0782]
临床前体外模型
[0783]
(a)人肾近端小管细胞顺铂损伤模型，其经修改用于测试肾保护剂。
[0784]
从移植排斥的肾脏中分离出原代人ptc。
[0785]
将分离的细胞接种到96孔transwell插入物(表面积＝0.143cm2)上，每个插入物的密度为20,000个细胞。在初始接种24小时后以及在培养的第3天和第5天更新培养基。
[0786]
在实验中使用之前单层显示80-120ω.cm2范围内的teer。
[0787]
在将细胞暴露于顺铂(20μm)之前，将人ptc单层在细胞层的顶侧和基底外侧预暴露于实施例2(0.01、0.03、0.1、0.3、1.0和3.0μm)1小时。随后，将细胞暴露于实施例2(0.01、0.03、0.1、0.3、1.0和3.0μm)和顺铂(20μm)至顶侧和基底外侧24小时和48小时。此外，平行包括阴性对照(仅实施例2，实施例2的0.5％ dmso，顺铂溶剂对照0.2％二甲基甲酰胺(dmf)，阳性对照(顺铂20μm)和顺铂加顺铂摄取抑制剂(dolutegravir 100μm)。在人类细胞单层(n＝3)和三个不同供体(n＝3)中一式三份进行了实验。
[0788]
在96孔transwell插入物中进行的在测试化合物处理的单层上进行了基于atp产生和ldh释放的细胞活力测定。
[0789]
实施例2以浓度依赖性方式防止顺铂诱导的atp损失。实施例2还降低了顺铂诱导的ldh升高。这些数据证明，实施例2可以防止顺铂诱导的对人近端小管上皮细胞的毒性。
[0790]
临床前体内模型
[0791]
使用发表的文献中的标准研究方法，在代表性体内疾病模型中可以测试本发明的化合物的功效，所述的文献包括，例如：
[0792]
(a)博来霉素诱导的肺纤维化模型，其是特发性肺纤维化的主要临床前体内模型。[kobayashi等人，2016，j immunol，197(2):504-516]。
[0793]
(b)饮食诱导的nafld和葡萄糖稳态模型。[nishida等人，2013，lab invest；feb；93(2):230-41]。
[0794]
(c)帕金森病的mptp模型，其是观察由化学诱导的线粒体功能障碍触发的脑多巴胺能系统中的神经变性的常用范例。[karuppagouner等人，2014，sci rep.2014年5月2日；4:4874]。
[0795]
(d)ndufs4ko利氏综合征模型。[kruse等人，2008，cell metab.apr；7(4):312-20]。
[0796]
(e)老年啮齿动物模型：对海马、认知和运动功能的影响。[kobilo等人，2014，learn mem.jan 17；21(2):119-26；creed等人，2019，neuroscience.jun 15；409:169-179；van skike等人，2020，aging cell.19；e13057]。
[0797]
(f)单侧输尿管梗阻性肾病模型(uuo)。[chevalier等人，2009，kidney int 75(11)：1145-1152]。
[0798]
uuo引起以肾小管细胞损伤、间质性炎症和纤维化为特征的肾损伤。它用作不可逆肾后性急性肾损伤(aki)的模型。实验性uuo已经说明了细胞凋亡、炎症和纤维化的分子机制，它们全部为肾损伤中的关键过程，无论主要损害如何。因此，uuo模型为研究者提供了梗阻以外的信息(chevalier等人，2009，kidney int 75(11)：1145-1152)。
[0799]
在uuo模型中评估了实施例2，以确定该化合物减轻进行性肾小管间质性纤维化和慢性肾病(ckd)的能力。
[0800]
在本研究的第1天，根据以下给药方案之一通过经口管饲法对成年c57bl/6小鼠给药；介质，5或1.5mg/kg实施例2，一日两次。在第1天给药后2小时，对研究小鼠进行手术以在
两个点结扎左输尿管。随后通过观察由肾积水引起的肾盂扩张确认了uuo手术成功。根据它们的规定方案给动物给药10天，届时收获肾，或进行组织病理学评估和蛋白质/rna评估。进行天狼猩红染色以评估胶原沉积的程度，且使用ihc评估相对α-平滑肌肌动蛋白(α-sma)表达。
[0801]
结果证明，一日两次(p.o.)给予的5mg/kg和1.5mg/kg实施例2在统计学上减少了胶原沉积，经结扎的肾中的天狼猩红染色减少证明了该结果。α-sma染色的评估表明，当与介质处理的对照相比时，一日两次经口给予5mg/kg和1.5mg/kg实施例2导致uuo损伤的肾中α-sma水平的统计学降低。
[0802]
(g)可以通过双侧肾蒂钳夹诱导aki，导致缺血再灌注损伤(iri)，其导致肾功能的严重丧失、肾小管损伤和炎症[lu等人，2012.j nephrol.25(5)：738-45]。
[0803]
预防性给药：
[0804]
将实施例2给予c57bl/6小鼠5mg/kg和1.5mg/kg bid(p.o.)，并与第-1天至第 21天的介质处理进行比较。第0天，麻醉小鼠，将其左肾蒂夹住45分钟，然后释放以诱导iri。在第 21天收获肾脏。评估形态和纤维化。
[0805]
各组之间的体重相似，并且在整个观察期间保持不变。在第 21天，masson三色染色显示来自实施例2处理的动物(两个剂量水平)的外髓质中的肾小管萎缩和胶原含量显著更少。在第 21天，实施例2处理的动物(两个剂量水平)中皮质和外髓质中的纤连蛋白表达显著降低。
[0806]
实施例2证明了该ir诱导的ckd模型中的功效。每日治疗已显示出减轻肾小管萎缩和减少纤维化的显著益处。
[0807]
损伤后管理：
[0808]
在第0天(零)麻醉c57bl/6小鼠，并将其左肾蒂夹住45分钟，然后释放以诱导iri。然后给小鼠施用介质或实施例2；5mg/kg(p.o.)bid 21天，第一次治疗在iri手术后5小时开始(即治疗剂量)。监测小鼠并在第 21天收获肾脏。使用盲法组织学评分方法定量评估肾切片的相对细胞形态和纤维化。
[0809]
各组之间的体重相似，并且在整个观察期间保持不变。在第 21天，实施例2处理的小鼠皮质中的纤连蛋白染色显著减少。
[0810]
实施例2证明了当治疗性给药时在该ir诱导的ckd模型中的部分功效。在建立缺血再灌注损伤后的初始治疗已显示出对减少皮质纤维化的显著益处。
[0811]
本发明的段落
[0812]
本发明涉及以下内容：
[0813]
1.式(i)的化合物，其选自式(i)(i)和式(i)(ii)：
[0814][0815]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0816]
r1选自(c
1-c4)烷基，(c
1-c4)氟烷基和ch2och3；
[0817]
r2选自(c
1-c4)烷基，cf3和环丙基；以及
[0818]
r3，r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0819]
2.根据第1段所述的化合物，其中r1选自甲基，ch2f，chf2，cf3和ch2och3。
[0820]
3.根据第2段所述的化合物，其中r1选自甲基和ch2och3。
[0821]
4.根据第1至3段任一段所述的化合物，其中r2选自甲基，cf3和环丙基。
[0822]
5.根据第4段所述的化合物，其中r2选自甲基和环丙基。
[0823]
6.根据第1至5段任一段所述的化合物，其中r3选自氢和氟。
[0824]
7.根据第6段所述的化合物，其中r3是氢。
[0825]
8.根据第1至7段任一段所述的化合物，其中r4和r5各是氢。
[0826]
9.根据第1至8段任一段所述的化合物，其具有式(i)(i)：
[0827][0828]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0829]
10.根据第9段所述的化合物，其具有式(ia)(i)：
[0830][0831]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0832]
11.根据第10段所述的化合物，其选自：
[0833]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0834]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0835]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(氟甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0836]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0837]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0838]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0839]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；以及
[0840]
5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0841]
或其药学上可接受的盐。
[0842]
12.根据第9段所述的化合物，其具有式(ib)(i)：
[0843][0844]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0845]
13.根据第12段所述的化合物，其选自：
[0846]
4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺以及4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；或它们的药学上可接受的盐。
[0847]
14.根据第1至8段任一段所述的化合物，其具有式(i)(ii)：
[0848][0849]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0850]
15.根据第14段所述的化合物，其具有式(ia)(ii)：
[0851][0852]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0853]
16.根据第15段所述的化合物，其选自：
[0854]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0855]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0856]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0857]
5-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0858]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0859]
5-(5-氰基-2-(三氟甲氧基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0860]
5-(5-氰基-4-氟-2-甲氧苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；以及
[0861]
5-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(氟甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0862]
或其药学上可接受的盐。
[0863]
17.根据第14段所述的化合物，其具有式(ib)(ii)：
[0864][0865]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0866]
18.根据第17段所述的化合物，其选自：
[0867]
4-(5-氰基-2-环丙氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；以及
[0868]
4-(5-氰基-2-甲氧苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺；
[0869]
或其药学上可接受的盐。
[0870]
19.根据第1至18段任一段所述的化合物、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其用作药物。
[0871]
20.根据第1至18段任一段所述的化合物、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症或纤维化。
[0872]
21.根据第1至18段任一段所述的化合物、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症或纤维化的药物中的用途。
[0873]
22.用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症或纤维化的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的根据第1至18段任一段所述的化合物、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐的步骤。
[0874]
23.根据第20至22段所述的化合物、用途或方法，其中所述涉及线粒体功能障碍的病症选自cns病症；神经变性疾病；帕金森病；阿尔茨海默病；肌萎缩性侧索硬化；亨廷顿病；缺血；中风；路易体痴呆；额颞痴呆；多发性硬化；线粒体脑病乳酸酸中毒和中风样发作综合征；母系遗传性糖尿病和耳聋；莱伯遗传性视神经病变；神经病、共济失调、视网膜色素变性-母系遗传性利氏综合征；丹农病；糖尿病；糖尿病肾病；代谢紊乱；心力衰竭；导致心肌梗塞的缺血性心脏病；精神疾病，精神分裂症；多发性硫酸酯酶缺乏症；粘脂病ii；粘脂病iii；粘脂病iv；gm1-神经节苷脂贮积病；神经元蜡样质-脂褐质沉积病；阿尔佩斯病；巴尔特综合征；β-氧化缺陷；肉碱-酰基-肉碱缺乏症；肉碱缺乏症；肌酸缺乏综合征；辅酶q10缺乏症；复合物i缺乏症；复合物ii缺乏症；复合物iii缺乏症；复合物iv缺乏症；复合物v缺乏症；cox缺乏症；慢性进行性眼外肌麻痹综合征；cpt i缺乏症；cpt ii缺乏症；戊二酸尿症ii型；基-塞二氏综合征；乳酸酸中毒；长链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症；利氏病或综合征；利氏综合征法国加拿大变体；致死性婴儿心肌病；勒夫特病；中链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症；肌阵挛性癫痫和破碎红纤维综合征；线粒体细胞病；线粒体隐性共济失调综合征；线粒体dna耗竭综合征；肌神经胃肠疾病和脑病；皮尔逊综合征；丙酮酸脱氢酶缺乏症；丙酮酸羧化酶缺乏症；polg突变；中/短链3-羟基酰基辅酶a脱氢酶缺乏症；极长链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症；过氧化物酶体疾病；甲基丙二酸血症；甲羟戊酸激酶缺乏症；认知功能和肌肉强度的年龄依赖性下降；以及与所有神经变性病症和神经精神病症有关的认知受损。
[0875]
24.根据第23段所述的化合物、用途或方法，其中所述的神经变性疾病选自帕金森病、阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿病、局部缺血、中风、路易体痴呆、多系统萎缩、进行性核上性麻痹、皮质基底变性、额颞痴呆；以及与α-突触核蛋白、帕金蛋白、pink1、gba和lrrk2中的突变相关的帕金森病，以及其中帕金蛋白或pink1突变、截短或缺失的常染色体隐性青少年帕金森病或早发性帕金森病(eopd)。
[0876]
25.根据第23段所述的化合物、用途或方法，其中所述的神经变性疾病为利氏综合征或利氏病、x-连锁性利氏病、利氏综合征法国加拿大变体和/或与利氏病相关的症状。
[0877]
26.根据第20至22段所述的化合物、用途或方法，其中所述的癌症选自乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、睾丸癌、头颈癌、胰腺癌、脑癌、黑素瘤、骨癌、肝癌、软组织癌、组织器官癌、血细胞癌、cml、aml、套细胞淋巴瘤、神经母细胞瘤、黑素瘤、软组织肉瘤、脂肪肉瘤、成纤维细胞肉瘤、平滑肌肉瘤、肝细胞癌、骨肉瘤、食道癌、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、转移癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、鼻咽癌、结肠直肠癌、结肠直肠癌、
非小细胞肺癌、其中凋亡途径失调的癌症和其中bcl-2家族的蛋白质突变或过表达或表达不足的癌症。
[0878]
27.根据第20至22段所述的化合物、用途或方法，其中所述的纤维化选自所述与在创伤、炎症、组织修复、免疫反应、细胞增生和瘤形成之后发生的胞外基质成分的积累相关的纤维化或纤维化病症。
[0879]
28.根据第27段所述的化合物、用途或方法，其中所述的纤维化选自与主要器官疾病相关的纤维化或纤维化病症、纤维增生性病症以及与创伤相关的瘢痕形成。
[0880]
29.根据第28段所述的化合物、用途或方法，其中所述的纤维化选自与间质性肺病、肝硬化、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪肝病和非酒精性脂肪性肝炎相关的纤维化或纤维化病症、肾病、急性肾损伤、慢性肾病、肾移植功能延迟、心脏或血管疾病、眼部疾病、全身性和局部硬皮病、瘢痕疙瘩、肥厚性瘢痕、动脉粥样硬化、再狭窄、杜普伊特伦挛缩、手术并发症、化疗药物诱导的纤维化、辐射诱导的纤维化、意外损伤和烧伤、腹膜后纤维化和腹膜纤维化/腹膜瘢痕形成。
[0881]
30.根据第29段所述的化合物、用途或方法，其中所述与间质性肺病相关的纤维化选自结节病、矽肺、药物反应、感染、胶原血管病、类风湿性关节炎、系统性硬化症、硬皮病、肺纤维化、特发性肺纤维化、常见间质性肺炎、间质性肺病、隐原性纤维化肺泡炎、闭塞性细支气管炎和支气管扩张。
[0882]
31.根据第29段所述的化合物、用途或方法，其中所述的肾病是急性肾病、急性肾损伤或慢性肾病。
[0883]
32.药物组合物，其包含第1至18段任一段中所定义的式(i)的化合物、其互变异构体或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
[0884]
33.化合物，其选自式(ii)(i)、(iii)(i)、(ii)(ii)和(iii)(ii)：
[0885][0886]
其互变异构体或所述化合物或互变异构体的盐；
[0887]
其中r1、r2、r3、r4和r5如权利要求1至18任一项中对式(i)的化合物所定义；并且pg
为保护基，其优选选自叔丁氧基羰基、苄氧基羰基、对甲氧基苄基羰基、9-芴基甲氧基羰基、乙酰基、苯甲酰基、苄基、氨基甲酸酯、对甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、对甲氧基苯基、甲苯磺酰基、三氯乙氧基羰基、4-硝基苯磺酰基和2-硝基苯基亚磺酰基。