一种用于子宫内膜癌早期诊断的生物标志物及应用

1.本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种用于子宫内膜癌早期诊断的生物标志物及应用。


背景技术：

2.子宫内膜癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一，随着人们日益改变的生活方式，该病的发病率不断提高，严重威胁着女性生命健康。据可靠调查统计，在我国该病的发病率已处于众多女性恶性肿瘤的第二位，仅次于宫颈肿瘤。目前，50岁以上的绝经妇女是子宫内膜癌疾病的高发人群。长期以来，手术一直是唯一可能根治子宫内膜癌的方式。因此，早期准确的诊断直接关系到治疗是否成功。然而，子宫内膜癌早期症状不明显，且缺乏用于子宫内膜癌早期诊断的有效而特异的生物标志物。因此，迄今为止还没有可靠的方法对这种疾病进行早期诊断。
3.影像学检查由于其便捷性、准确性的优势，已广泛应用于子宫内膜癌的诊断中。传统检测子宫内膜癌的方式有ct检查和经阴道超声检查。经阴道超声检查具有价格低廉、创伤性小的优点，ct检查则对检测淋巴结是否侵犯较为敏感，但二者均会具有一定诊断局限性。目前，mri是诊断子宫内膜癌的主要辅助手段，具有良好的软组织对比度。但实施mri诊断子宫内膜癌也具有一定局限性。当患者有子宫内膜癌合并其他良性病变时，mri仅能诊断子宫内膜增厚或局部占位性病变，不能准确诊断子宫内膜癌的发生。
4.随着分子生物学技术的发展，人们对基因组的认识也越来越深刻，现有技术发现子宫内膜癌的发生发展与基因或其表达水平的改变有重要的关系。但是目前没有特别有效的早期诊断标志物应用于临床。因此，探究调控子宫内膜癌发生发展的分子靶点，寻找有效的用于早期诊断的生物标志物是履待解决的关键问题。cilp2基因在子宫内膜癌诊断中的可能作用还未见报道。


技术实现要素：

5.为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于子宫内膜癌早期诊断的生物标志物及应用。使用基因标志物来诊断子宫内膜癌具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。
6.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
7.一种用于子宫内膜癌早期诊断的生物标志物，所述生物标记物包括cilp2基因和/或其表达产物，所述cilp2基因的序列为seq id no.1。
8.本发明还提供了cilp2基因和/或其表达产物在制备子宫内膜癌早期诊断产品中的应用。
9.进一步的，所述产品为特异性检测cilp2基因和/或其表达产物的产品。
10.进一步的，所述产品为特异性检测cilp2基因和/或其表达产物的试剂，也可以是包含该试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。
11.进一步的，所述产品包括检测cilp2基因mrna水平的产品和/或检测cilp2蛋白水平的产品。
12.进一步的，所述产品包括：通过pcr、实时定量pcr、免疫检测、原位杂交或芯片检测cilp2基因及其表达产物的表达水平以诊断子宫内膜癌的产品。
13.进一步的，所述用pcr诊断子宫内膜癌的产品包括特异扩增cilp2基因的引物；
14.进一步的，所适用实时定量pcr诊断子宫内膜癌的产品包括特异扩增cilp2基因的引物；
15.进一步的，所述特异扩增cilp2基因的引物为如seq id no.3和seq id no.4所示的一对特异扩增cilp2基因的引物。
16.进一步的，所述用免疫检测诊断子宫内膜癌的产品包括与cilp2蛋白特异性结合的抗体；
17.进一步的，所述用原位杂交诊断子宫内膜癌的产品包括与cilp2基因的核酸序列杂交的探针；
18.进一步的，所述用芯片诊断子宫内膜癌的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与cilp2蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与cilp2基因的核酸序列杂交的探针。
19.所述诊断子宫内膜癌的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知cilp2基因的异常与子宫内膜癌相关也属于cilp2基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。
20.本发明还提供了一种诊断子宫内膜癌的工具，所述工具包括检测cilp2基因表达的试剂；所述试剂包括检测cilp2基因mrna的引物和/或探针、检测cilp2蛋白的抗体。
21.所述工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高适量测序平台。
22.其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核昔酸探针包括用于检测cilp2基因转录水平的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的cilp2蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括cilp2基因在内的多个基因的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括cilp2蛋白在内的多个蛋白质的表达水平。
23.其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测cilp2基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括检测cilp2蛋白的特异性抗体。
24.进一步，所述试剂包括使用pcr、实时定量pcr、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测cilp2基因表达水平过程中所需的试剂；所述试剂包括针对cilp2基因的引物和/或探针。
25.本发明还提供了一种cilp2基因和/或其表达产物在制备子宫内膜癌治疗药物中的应用。
26.进一步的，所述药物能够使得所述cilp2基因的表达量减少。
27.在本发明的上下文中，“诊断子宫内膜癌”既包括判断受试者是否己经患有子宫内膜癌、也包括判断受试者是否存在患有子宫内膜癌的风险。
28.本发明的优点和有益效果：
29.本发明首次提出cilp2基因可以作为子宫内膜癌的生物标志物，通过检测受试者子宫内膜组织中cilp2的表达，可以更及时、更特异、更灵敏地判断受试者是否患有子宫内膜癌、或者判断受试者是否存在患有子宫内膜癌的风险，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。
附图说明
30.图1tcga数据库中癌旁组织和子宫内膜癌组织中cilp2基因的表达差异；
31.图2geo数据库中早期子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织中cilp2的表达差异；
32.图3cilp2基因的表达对子宫内膜癌患者生存率的影响。
具体实施方式
33.下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照试剂制造厂商所建议的条件。
34.实施例1tcga数据库中癌旁组织和子宫内膜癌组织中cilp2基因的表达差异
35.tcga(the cancer genome atlas，癌症基因组图谱)是由national cancer institute(nci，美国国家癌症研究所)和national human genome research institute(nhgri，美国国家人类基因组研究所)于2006年联合开发的数据库，收录了各种人类癌症的临床数据，基因组变异，mrna表达，mirna表达，甲基化等数据，是癌症研究者很重要的数据来源。基因表达谱数据动态分析(gene expression profiling interactive analysis,gepia)(http://gepia.cancer-pku.cn/index.html)是中国北京大学开发的公开数据库，主要用于tcga收录数据的分析和可视化。
36.在本项研究中，我们通过gepia来分析tcga数据库中cilp2基因在子宫内膜癌中的表达规律。结果如图1所示，cilp2在子宫内膜癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(p《0.01)。
37.实施例2早期子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织中cilp2的表达差异
38.geo数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)中的gse17205数据集共收录早期(病理回顾i期)子宫内膜癌样本91例(80例子宫内膜样和12例浆液性)和绝经后妇女萎缩性子宫内膜样本12例。样本用寡核苷酸芯片分析。本研究从geo数据库下载了该数据集，并使用r软件v4.0.3进行统计分析。p值《0.05被认为具有统计学意义。早期子宫内膜癌组织和正常组织中cilp2基因的表达分布如图2所示，横坐标代表不同组样本，纵坐标代表该基因表达分布情况，不同颜色代表不同组别。两组样本显著性通过wilcox检验。结果显示，cilp2在早期子宫内膜癌组织中的表达明显高于正常子宫内膜组织(p《0.0001)。
39.实施例3cilp2基因的表达对子宫内膜癌患者生存率的影响
40.使用gepia网站(http://gepia.cancer-pku.cn)分析tcga收录的子宫内膜癌患者数据集中cilp2基因高表达组和低表达组之间的总体生存率(os)。参数设置如下：组截断值，中位数；置信区间，95％；对数秩p值，《0.05。图3所示为cilp2基因的表达对子宫内膜癌患者os的影响，hr代表高表达组相对于低表达组样本的风险系数，若hr》1代表该基因为危
险因素(表达越高，预后越差)，若hr《1则代表该基因为保护因素(表达越高，预后越好)。结果提示，cilp2的高表达是子宫内膜癌患者预后差的高危因素(p《0.01)。抑制cilp2的高表达将有益于患者生存率的提高。
41.以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点，对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。