用于坞内测定的方法、系统和试剂盒与流程

技术特征：
1.一种评估多个生物微物体或由其生成的生物微物体的群间的被分析物的相对分泌水平的方法，所述方法包括：将多个生物微物体引入微流体装置的多个室中，其中微流体装置包括具有流动区域的外壳，其中多个室中的每个室均与流动区域流体连接，并且其中多个室包含第一流体介质；允许多个生物微物体或由其生成的生物微物体的群向多个室内的第一流体介质中分泌可溶性被分析物；将第二流体介质引入流动区域中，其中第二流体介质包含多个可溶性报道分子，并且其中每个报道分子均包含：结合组分，其被配置为与分泌的被分析物结合；和可检测的标记物；允许多个可溶性报道分子的一部分扩散进入多个室中并与其中分泌的可溶性被分析物结合，从而产生多个可溶性报道分子:分泌的被分析物(rmsa)复合物；和检测位于微流体装置内的受关注区域内的可溶性报道分子。2.根据权利要求1所述的方法，其中多个室中的每个室均包含分离区域，该分离区域与流动区域中第二流体介质的二次流动分离。3.根据权利要求1所述的方法，其中多个室中的每个室均包含连接区域，该连接区域与流动区域中第二流体介质的直接流动分离。4.根据权利要求1所述的方法，其中多个生物微物体中的单个生物微物体被置于多个室中的单个室中。5.根据权利要求1所述的方法，其中可溶性报道分子的浓度是可溶性报道分子对被分析物的k
d
的约1-10倍。6.根据权利要求1所述的方法，其中流动区域中的第二流体介质以约0.1-10秒的刷新率刷新，并且刷新率是替换流动区域中全部流体体积的时间段。7.根据权利要求1所述的方法，其中允许多个报道分子的一部分扩散进入多个室中包括允许多个报道分子在流动区域和多个室间达到平衡状态。8.根据权利要求7所述的方法，其中在引入第二流体介质后3小时内达到平衡状态。9.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括：获得多个室中每个室的分泌水平或分泌得分；和基于获得的分泌得分对多个室进行评级。10.根据权利要求1所述的方法，其中多个报道分子包含至少两种不同的报道分子，每种报道分子具有不同的标记物。11.根据权利要求1所述的方法，其中每个室均包括朝向流动区域的单个开口。12.根据权利要求1所述的方法，其中流动区域包括微流体通道，并且每个室均包括分离区域和将分离区域与微流体通道流体连接的连接区域，其中连接区域具有朝向微流体通道的近端开口和朝向分离区域的远端开口。13.根据权利要求1所述的方法，其中受关注区域至少部分在室的分离区域内。14.根据权利要求1所述的方法，其中受关注区域在室的钩区域内。15.根据权利要求1所述的方法，其中受关注区域靠近多个生物微物体中的生物微物体所在的区域。
16.根据权利要求1所述的方法，其中受关注区域沿着在多个室和流动区域之间扩散的轴(例如沿着在多个室的分离区域和微流体通道之间扩散的轴，例如沿着连接区域定义的扩散的轴)。17.根据权利要求1所述的方法，其中受关注区域不沿着在多个室和流动区域之间扩散的轴(例如不沿着在多个室的分离区域和微流体通道之间扩散的轴，例如不沿着连接区域定义的扩散的轴)。18.根据权利要求1所述的方法，其中受关注区域包括对应于多个室中的室内的区域的图像区域，其对测量被分析物浓度波动最敏感，并且在测量被分析物波动时对室中生物微物体的位置最不敏感。19.根据权利要求1所述的方法，其中检测位于微流体装置内的受关注区域内的报道分子是在报道分子扩散至多个室中并且报道分子与其中分泌的被分析物的结合处于或接近稳态条件之后进行的。20.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括：将第三流体介质引入流动区域，其中第三流体介质不包含报道分子；和允许至少一部分未结合的可溶性报道分子从多个室中扩散出来。21.根据权利要求1或20所述的方法，其中来自第二流体介质的多个可溶性报道分子是第一批多个可溶性报道分子，并且在将多个生物微物体引入微流体装置的多个室之前，所述方法进一步包括：将第四流体介质引入流动区域，其中第四流体介质包括第二批多个可溶性报道分子；获取微流体装置的图像；和将第五流体介质引入流动区域，其中第五流体介质不包含可溶性报道分子。22.根据权利要求21所述的方法，其中图像是在t＝0时获取的第一图像，可溶性报道分子的检测包括在t＝1时获取第二图像，其中在t＝l时，流动区域和多个室之间的未结合的可溶性报道分子的扩散已接近稳态。23.根据权利要求22所述的方法，其中受关注区域包括多个室中每个室的连接区域的至少一部分，所述方法进一步包括：从第二图像减去至少第一图像以产生校正图像；和分析校正图像，以确定受关注区域中可溶性rmsa复合物的相对量，所述受关注区域包括多个室的至少部分的每个连接区域的至少一部分。24.根据权利要求23所述的方法，其中受关注区域中可溶性rmsa复合物的相对量用于生成可溶性rmsa复合物量变化的线性近似值，并且线性近似值的斜率用于比较室之间分泌的被分析物的产生。25.根据权利要求24所述的方法，其进一步包括：在引入第四流体介质之前获取背景图像；和通过从第二图像中减去至少第一图像和背景图像来获得校正图像。26.根据权利要求22所述的方法，其中受关注区域是多个室中每个室的钩区域，所述方法进一步包括：从第二图像减去至少第一图像以产生校正图像；和分析校正图像，以对多个室的至少一部分量化钩区域中可溶性rmsa复合物的相对量，
其中钩区域中可溶性rmsa复合物的相对量用于比较多个室之间分泌的可溶性被分析物的产生。27.根据权利要求26所述的方法，其进一步包括：在引入第四流体介质之前获取背景图像；和通过从第二图像减去至少第一图像和背景图像来获得校正图像。28.根据权利要求21所述的方法，其中第一批多个可溶性报道分子和第二批多个可溶性报道分子包含相同的标记物。29.根据权利要求21所述的方法，其中第一批多个可溶性报道分子和第二批多个可溶性报道分子包含两种不同的报道分子，每种报道分子具有不同的标记物。30.根据权利要求21所述的方法，其中所述图像是在t＝0时获取的第一图像，所述方法进一步包括：在将第三流体介质引入流动区域之前并且在允许多个可溶性报道分子的部分扩散到多个室中并与其中分泌的可溶性被分析物结合之后，获取微流体装置的第二图像。31.根据权利要求30所述的方法，其中报道分子的检测包括获取微流体装置的第三图像。32.根据权利要求31所述的方法，其中受关注区域包括多个室中每个室的连接区域的至少一部分，所述方法进一步包括：从第三图像减去至少第一图像以产生校正图像；和分析校正图像，以对多个室的至少一部分量化每个连接区域的多个子区域中每个子区域中的可溶性rmsa复合物的量，其中多个子区域中部分子区域中的可溶性rmsa复合物的量用于生成线性近似值，且线性近似值的斜率用于比较多个室之间分泌的被分析物的产生。33.根据权利要求32所述的方法，其进一步包括：在引入第四流体介质之前获取背景图像；和通过从第三图像减去至少第一图像和背景图像来获得校正图像。34.根据权利要求32所述的方法，其进一步包括：在引入第四流体介质之前获取背景图像；和通过从第三图像减去至少第一图像、第二图像和背景图像来获得校正图像。35.根据权利要求31所述的方法，其中受关注区域是多个室中每个室的钩区域，所述方法进一步包括：从第三图像减去至少第一图像以产生校正图像；和分析校正图像，以对多个室的至少一部分量化钩区域中的rmsa复合物的量，其中钩区域中rmsa复合物的量用于比较多个室之间分泌的被分析物的产生。36.根据权利要求35所述的方法，其进一步包括：在引入第一流体介质之前获取背景图像；和通过从第三图像中减去至少第一图像和背景图像来获得校正图像。37.根据权利要求35所述的方法，其进一步包括：在引入第一流体介质之前获取背景图像；和通过从第三图像中减去至少第一图像、第二图像和背景图像来获得校正图像。
38.根据权利要求30所述的方法，其中第二图像用于确定流动区域和多个室之间未结合的报道分子的扩散是否已达到稳态。39.根据权利要求1所述的方法，其中分泌的被分析物的分子量是可溶性报道分子分子量的至少两倍。40.根据权利要求1所述的方法，其中分泌的被分析物的分子量比可溶性报道分子分子量大至少四倍。41.根据权利要求1所述的方法，其中分泌的被分析物的分子量比可溶性报道分子分子量大至少十倍。42.根据权利要求1所述的方法，其中生物微物体分泌的被分析物包括蛋白，糖，核酸，除蛋白、糖或核酸之外的有机分子，囊泡或病毒。43.根据权利要求1所述的方法，其中生物微物体分泌的被分析物是抗体，或任选地是糖基化抗体。44.根据权利要求1所述的方法，其中报道分子的结合组分与抗体重链h1结构域结合。45.根据权利要求1所述的方法，其中报道分子的结合组分与抗体轻链(例如，包含轻链肽的一个或多个氨基酸残基的表位)结合。46.根据权利要求1所述的方法，其中报道分子的结合组分与λ轻链(例如，包含λ轻链肽的一个或多个氨基酸残基的表位)结合。47.根据权利要求1所述的方法，其中报道分子的结合组分与κ轻链(例如，包含κ轻链肽的一个或多个氨基酸残基的表位)结合。48.根据权利要求1所述的方法，其中微流体装置包括多个室，其中生物微物体被引入多个室的至少两个室中的每个室，并且其中所述方法的剩余部分针对所述至少两个室中的每个室进行。49.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括：比较多个室的至少两个室的室分泌水平。50.根据权利要求49所述的方法，其进一步包括：比较多个室中多于一个室的分泌得分。51.根据权利要求1所述的方法，其中将多个生物微物体引入微流体装置的多个室中包括选择生物微物体和选择性地将所选择的生物微物体移动到多个室内。52.根据权利要求51所述的方法，其中选择是正选择。53.根据权利要求51所述的方法，其中选择是负选择。54.一种克隆系发育方法，其包括：进行权利要求1-53中任一项所述的方法；从多个室中选择一组室，其中该组室的每个室均具有指示其中含有的生物微物体或克隆群是最高的被分析物生产者的得分；从微流体装置输出包含在所选择的一组室的每个室中的一个或多个生物微物体；在相应的反应容器中扩增从所选择的一组室的每个室中输出的一个或多个生物微物体；和测定每个相应的反应容器中分泌的被分析物的水平，从而确定每个生物微物体或克隆群的分泌水平。

技术总结
本文描述了用于检测测定结果的方法、系统和试剂盒。具体而言，本公开的方法、系统和装置依赖于报道分子和受关注的被分析物的扩散速率之间的差异，以便对微流体装置中被分析物的量进行量化。被分析物可以是生物微物体的分泌产物。产物。


技术研发人员：P
受保护的技术使用者：伯克利之光生命科技公司
技术研发日：2021.03.08
技术公布日：2022/12/23