一种MANF基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用的制作方法

技术特征：
1.一种manf基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用，其特征在于，包括以下步骤：s1、原始胚胎干细胞的获取首先取得足月产胎儿脐带组织，接着将脐带组织剪碎成1mm3左右的组织块，并将组织块接种于培养皿中加入培养液，待组织块贴壁后再补充培养液继续培养，其中的干细胞可沿组织块周围长出，然后去除组织块并进行传代扩增获得大量干细胞，使得同一组织块可进行反复培育，用酶原梯度法分离并收集细胞将细胞接种在培养皿中；s2、细胞转染构建manf基因载体，将manf基因载体用pbs缓冲液10％铺在s1步骤中取得的细胞中，使得细胞在培养皿中进行细胞转染；s3、细胞观察接着将培养皿中取1ml细胞液，加入1ml含有脂质体和质粒的混合物，10h后去除复合物的培养基，加入培养液，待48h后，经过滤膜过滤即可等得到含有病毒的上清液，完成慢病毒的包装利用病毒感染干细胞，并利用荧光显微镜观察干细胞的转染效果继续传代培养，经过转染的脐带间充质干细胞即可得到manf基因修饰的脐带间充质干细胞；s4、细胞鉴定利用显微镜用荧光对细胞的生长、表型、核型、细胞周期以及分化潜能进行分析鉴定，将细胞中活性强的细胞单独放置在培养皿中；s5、细胞储存将s4步骤中得到的细胞置于培养液中，并对细胞进行降温，最后细胞置于-196℃的液氮中保存。2.根据权利要求1所述的一种manf基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用，其特征在于：所述在步骤s1原始胚胎干细胞的获取过程中用胰酶提取足月产胎儿脐带组织中充质干细胞悬液离心10min，弃上清液。3.根据权利要求1所述的一种manf基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用，其特征在于：所述在步骤s2细胞转染过程中manf基因载体为慢病毒载体。4.根据权利要求1所述的一种manf基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用，其特征在于：所述在步骤细s3细胞观察过程中为了防止细菌污染按细胞培养体系要求在培养皿中添加双抗。5.根据权利要求1所述的一种manf基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用，其特征在于：所述在步骤细s3细胞观察过程中1ml混合液体由胎牛血清(fbs)、非必需氨基酸、β-巯基乙醇、白血病抑制因子(lif)、干细胞因子(scf)、碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)构成，其中白血病抑制因子(lif)具有抑制干细胞分化的功能。

技术总结
本发明公开了一种MANF基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用，涉及滚塑技术领域，包括以下步骤：S1、原始胚胎干细胞的获取；S2、细胞转染；S3、细胞观察；S4、细胞鉴定；S5、细胞储存。该MANF基因修饰的脐带间充质干细胞制备与应用，利用MANF基因载体使得脐带间充质干细胞转染表达为脐带间充质干细胞，该脐带间充质干细胞制备过程中经过传代培养并经由细胞鉴定将无损的细胞留置保存，使得脐带间充质干细胞活性高效用强，由于脐带间充质干细胞源自脐带兼具胚胎干细胞和成体于细胞的遗传和行为特征细胞采集不对采集者造成伤害，同时迁移到新环境下，对环境刺激更敏感适应性，因为脐带间充质干细胞具有较低的免疫，移植后不会引起宿主的免疫防御。主的免疫防御。


技术研发人员：赵彬
受保护的技术使用者：赵彬
技术研发日：2022.08.25
技术公布日：2022/12/16