萤光素酶联免疫吸附测定的制作方法

技术特征：
1.一种融合蛋白，其包含：-n-末端结构域，其包含作为骆驼科动物重链抗体(vhh)的可变结构域或单链可变片段(scfv)并且针对免疫球蛋白的抗体和-c-末端结构域，其包含具有萤光素酶活性的多肽：-具有氨基酸序列seq id no：1或-与氨基酸序列seq id no：1具有至少80％的氨基酸序列同一性。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述具有萤光素酶活性的多肽具有选自以下的氨基酸序列：seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4、seq id no：5、seq id no：6、seq id no：7、seq id no：8、seq id no：9、seq id no：10、seq id no：11、seq id no：12、seq id no：13、seq id no：14、seq id no：15、seq id no：16、和seq id no：17。3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述vhh针对免疫球蛋白的恒定片段(fc)。4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗体是vhh。5.根据权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白是针对过敏原的ige。6.根据权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白是针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2的蛋白n或s的igm或igg。7.一种试剂盒，其包含：-根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，和-具有萤光素酶活性的多肽的底物。8.权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白用于检测和/或量化样品中的免疫球蛋白的用途。9.一种用于检测样品中免疫球蛋白的存在的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使样品与权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白接触，(b)加入具有萤光素酶活性的多肽的底物，(c)检测发光。10.一种用于量化样品中免疫球蛋白的水平的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使样品与权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白接触，(b)加入具有萤光素酶活性的多肽的底物，(c)量化发光。11.一种用于量化样品中每个亲和间隔的免疫球蛋白水平以评估多克隆免疫球蛋白混合物的亲和范围的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在游离抗原的稀释系列的存在下，使样品与抗原接触，(b)使样品与权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白接触，(c)加入具有萤光素酶活性的多肽的底物，和(d)量化发光并绘制光强度与抗原浓度的关系图。12.一种萤光素酶，其与氨基酸序列seq id no：1具有至少80％的氨基酸序列同一性，并且包含至少一个选自以下的氨基酸替换：
‑
将在对应于seq id no：1第18位的位置的酪氨酸(y)替换为精氨酸(r)，-将在对应于seq id no：1第48位的位置的亮氨酸(l)替换为赖氨酸(k)，-将在对应于seq id no：1第56位的位置的异亮氨酸(i)替换为丙氨酸(a)，-将在对应于seq id no：1第116位的位置的酪氨酸(y)替换为苯丙氨酸(f)，-将在对应于seq id no：1第134位的位置的色氨酸(w)替换为选自苏氨酸(t)和谷氨酸(e)的氨基酸，-将在对应于seq id no：1第163位的位置的色氨酸(w)替换为选自苏氨酸(t)和谷氨酸(e)的氨基酸，和-将在对应于seq id no：1第166位的位置的半胱氨酸(c)替换为丝氨酸(s)。13.一种萤光素酶，其具有选自以下的氨基酸序列：seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4、seq id no：5、seq id no：6、seq id no：7、seq id no：8、seq id no：9、seq id no：10、seq id no：11、seq id no：12、seq id no：13、seq id no：14、seq id no：15、seq id no：16、和seq id no：17。14.权利要求12或13所述的萤光素酶在发光反应中的用途。15.一种方法，其包括以下步骤：(a)将权利要求12或13所述的萤光素酶暴露于底物，和(b)检测发光。16.一种试剂盒，其包含权利要求12或13所述的萤光素酶，和-所述萤光素酶的底物。17.根据权利要求7或16所述的试剂盒，其中所述底物为8-(2,3-二氟苄基)-2-((5-甲基呋喃-2-基)甲基)-6-苯基咪唑并[1,2-a]吡嗪-3(7h)-酮。

技术总结
本发明涉及一种融合蛋白，其包含：-N-末端结构域，其包含作为骆驼科动物重链抗体(VHH)的可变结构域或单链可变片段(scFV)并且针对免疫球蛋白的抗体；和-C-末端结构域，其包含具有萤光素酶活性的多肽：-具有氨基酸序列SEQ ID NO：1或-与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少80％的氨基酸序列同一性。80％的氨基酸序列同一性。


技术研发人员：T
受保护的技术使用者：巴斯德研究所
技术研发日：2021.04.26
技术公布日：2022/12/8