用于治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝脏炎症、肝细胞气球样变、肝纤维化和脂肪变性的(S)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸(APL)

cn、-no2、-nh2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
12.r3、r4、r7、r8、r9、r
10
、r
13
和r
14
独立地选自由以下组成的组：氢和-(c
1-c6)烷基；
13.r5和r6独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r5和r6两者不能均为-oh；
14.r
11
和r
12
独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r
11
和r
12
两者不能均为-oh；
15.m为1至4的整数；
16.n为0至4的整数；
17.o为0至4的整数；
18.p为1至4的整数；
19.q为0至4的整数；并且
20.r为0至4的整数。
21.另一方面，本发明的特征在于根据式i的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗受试者的nash。
22.另一方面，本发明的特征在于式i化合物或其药学上可接受的盐，其用于制备用于治疗nash的药物。
23.在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式(i)化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐，
24.在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐，
25.在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐，
26.在实施例中，r1和r2独立地选自由以下组成的组：氢和-(c
1-c8)烷基。
27.在实施例中，r3、r4、r5、r6、r7和r8中的每一个独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。
28.在实施例中，r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
和r
14
中的每一个独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。
29.在实施例中，r3、r4、r5、r6、r7和r8中的每一个独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基；并且r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
和r
14
中的每一个独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。
30.在实施例中，或其药学上可接受的盐，m n o的总和在2至10的范围内，并且p q r的总和在2至10的范围内。
31.在实施例中，m为3；p为4；n、o、q和r中的每一者为零。在实施例中，r3、r4、r9和r
10
独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r1和r2独立地选自由以下组成的组：氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r1、r2、r3、r4、r9和r
10
为氢。
32.在实施例中，m为4；n为2；o为零；p为3；q为1；并且r为零。在实施例中，r3、r4、r5、r6、r9、r
10
、r
11
和r
12
独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r1和r2独立地选自由以下组成的组：氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r9、r
10
、r
11
和r
12
为氢。
33.在实施例中，m为4；n为1；o为零；p为3；q为1；并且r为零。在实施例中，r3、r4、r5、r6、r9、r
10
、r
11
和r
12
独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r1和r2独立地选自由以下组成的组：氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r9、r
10
、r
11
和r
12
为氢。
34.在实施例中，受试者是人。
35.在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐向受试者施用持续至少约四周、五周、六周、七周、八周、九周、十周、十一周、十二周、十三周、十四周、十五周或十六周的时间段。
36.在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐向受试者施用持续至少约4-6周、4-8周、4-10周、4-12周、4-14周或4-16周的时间段。
37.在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐以约2-1000mg/kg/天、10-1000mg/kg/天或10-100mg/kg/天的剂量向受试者施用。
38.在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐以每日约10mg/kg或更多的剂量向受试者施用。
39.在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐以每日约2mg/kg或更多的剂量向受试者施用。
40.在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐以每日约100-5000mg、500-5000mg或600-3000mg的总每日剂量向受试者施用。
41.在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐向受试者口服施用。
42.在实施例中，受试者的nafld活性评分(nas)≥4。
43.在实施例中，受试者的nafld活性评分(nas)≥5。
cn、-no2、-nh2、-nh(c
1-c6)烷基、-n[(c
1-c6)烷基)]2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
[0066]
r2选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c8)烷基、-(c
1-c8)烯基、-(c
1-c8)炔基、未经取代或经取代的-芳(c
1-c6)烷基、未经取代或经取代的-杂芳(c
1-c6)烷基，其中所述经取代的芳(c
1-c6)烷基和所述经取代的杂芳(c
1-c6)烷基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、-cn、-no2、-nh2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
[0067]
r3、r4、r7、r8、r9、r
10
、r
13
和r
14
独立地选自由以下组成的组：氢和-(c
1-c6)烷基；
[0068]
r5和r6独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r5和r6两者不能均为-oh；
[0069]r11
和r
12
独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r
11
和r
12
两者不能均为-oh；
[0070]
m为1至4的整数；
[0071]
n为0至4的整数；
[0072]
o为0至4的整数；
[0073]
p为1至4的整数；
[0074]
q为0至4的整数；并且
[0075]
r为0至4的整数。
[0076]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式(i)化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐，
[0077]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐，
[0078]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物
为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐，
[0079]
在实施例中，肝脏炎症是小叶炎症。
[0080]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使肝脏炎症评分为0或1。
[0081]
在实施例中，受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0082]
一方面，本发明的特征在于用于减少肝细胞气球样变的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效量的根据式i的化合物，
[0083][0084]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0085]
r1选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c8)烷基、-(c
1-c8)烯基、-(c
1-c8)炔基、未经取代或经取代的-芳(c
1-c6)烷基、未经取代或经取代的-杂芳(c
1-c6)烷基，其中所述经取代的芳(c
1-c6)烷基和所述经取代的杂芳(c
1-c6)烷基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nh(c
1-c6)烷基、-n[(c
1-c6)烷基)]2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
[0086]
r2选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c8)烷基、-(c
1-c8)烯基、-(c
1-c8)炔基、未经取代或经取代的-芳(c
1-c6)烷基、未经取代或经取代的-杂芳(c
1-c6)烷基，其中所述经取代的芳(c
1-c6)烷基和所述经取代的杂芳(c
1-c6)烷基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、-cn、-no2、-nh2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
[0087]
r3、r4、r7、r8、r9、r
10
、r
13
和r
14
独立地选自由以下组成的组：氢和-(c
1-c6)烷基；
[0088]
r5和r6独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r5和r6两者不能均为-oh；
[0089]r11
和r
12
独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r
11
和r
12
两者不能均为-oh；
[0090]
m为1至4的整数；
[0091]
n为0至4的整数；
[0092]
o为0至4的整数；
[0093]
p为1至4的整数；
[0094]
q为0至4的整数；并且
[0095]
r为0至4的整数。
[0096]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸，
或其药学上可接受的盐。在实施例中，式(i)化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐，
[0097]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐，
[0098]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐，
[0099]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使气球样变评分为0。
[0100]
在实施例中，受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0101]
一方面，本发明的特征在于用于治疗肝纤维化的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效量的根据式i的化合物，
[0102][0103]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0104]
r1选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c8)烷基、-(c
1-c8)烯基、-(c
1-c8)炔基、未经取代或经取代的-芳(c
1-c6)烷基、未经取代或经取代的-杂芳(c
1-c6)烷基，其中所述经取代的芳(c
1-c6)烷基和所述经取代的杂芳(c
1-c6)烷基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nh(c
1-c6)烷基、-n[(c
1-c6)烷基)]2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
[0105]
r2选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c8)烷基、-(c
1-c8)烯基、-(c
1-c8)炔基、未经取代
或经取代的-芳(c
1-c6)烷基、未经取代或经取代的-杂芳(c
1-c6)烷基，其中所述经取代的芳(c
1-c6)烷基和所述经取代的杂芳(c
1-c6)烷基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、-cn、-no2、-nh2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
[0106]
r3、r4、r7、r8、r9、r
10
、r
13
和r
14
独立地选自由以下组成的组：氢和-(c
1-c6)烷基；
[0107]
r5和r6独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r5和r6两者不能均为-oh；
[0108]r11
和r
12
独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r
11
和r
12
两者不能均为-oh；
[0109]
m为1至4的整数；
[0110]
n为0至4的整数；
[0111]
o为0至4的整数；
[0112]
p为1至4的整数；
[0113]
q为0至4的整数；并且
[0114]
r为0至4的整数。
[0115]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式(i)化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐，
[0116]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐，
[0117]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐，
[0118]
在实施例中，受试者患有2期、3期或4期肝纤维化。
[0119]
在实施例中，受试者患有肝硬化。
[0120]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使受试者的肝纤维化稳定。
[0121]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使受试者的肝纤维化逆转。
[0122]
在实施例中，受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0123]
一方面，本发明的特征在于用于治疗脂肪变性的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效量的根据式i的化合物，
[0124][0125]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0126]
r1选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c8)烷基、-(c
1-c8)烯基、-(c
1-c8)炔基、未经取代或经取代的-芳(c
1-c6)烷基、未经取代或经取代的-杂芳(c
1-c6)烷基，其中所述经取代的芳(c
1-c6)烷基和所述经取代的杂芳(c
1-c6)烷基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nh(c
1-c6)烷基、-n[(c
1-c6)烷基)]2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
[0127]
r2选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c8)烷基、-(c
1-c8)烯基、-(c
1-c8)炔基、未经取代或经取代的-芳(c
1-c6)烷基、未经取代或经取代的-杂芳(c
1-c6)烷基，其中所述经取代的芳(c
1-c6)烷基和所述经取代的杂芳(c
1-c6)烷基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、-cn、-no2、-nh2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
[0128]
r3、r4、r7、r8、r9、r
10
、r
13
和r
14
独立地选自由以下组成的组：氢和-(c
1-c6)烷基；
[0129]
r5和r6独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r5和r6两者不能均为-oh；
[0130]r11
和r
12
独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r
11
和r
12
两者不能均为-oh；
[0131]
m为1至4的整数；
[0132]
n为0至4的整数；
[0133]
o为0至4的整数；
[0134]
p为1至4的整数；
[0135]
q为0至4的整数；并且
[0136]
r为0至4的整数。
[0137]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸，
或其药学上可接受的盐。在实施例中，式(i)化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐，
[0138]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐，
[0139]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐，
[0140]
在实施例中，受试者的脂肪变性评分为1、2或3。
[0141]
在实施例中，式i化合物或其药学上可接受的盐的施用使受试者的脂肪变性减少。
[0142]
在实施例中，受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0143]
如本公开中关于所公开的物质组合物和方法所设想的，一方面，本公开的实施例包括其中所公开的组分和/或步骤。另一方面，本公开的实施例基本上由其中所公开的组分和/或步骤组成。在又另一方面，本公开的实施例由其中所公开的组分和/或步骤组成。
附图说明
[0144]
专利或申请文件包含至少一张彩色附图。在请求并支付必要的费用后，将由专利局提供带有彩色附图的本专利或专利申请公开物的副本。
[0145]
被包含以提供对公开的进一步理解的、并入本说明书并且构成其一部分的附图展示了本公开的示例性实施例并且与描述一起用于解释本公开的原理。
[0146]
图1描绘了关于apl对nash大鼠模型的葡萄糖耐量受损的影响的数据。图1是用媒剂(阳性对照)或apl(处理)每日两次处理的zucker苗条(fa/fa)和肥胖(fa/fa)大鼠持续78天的葡萄糖耐量测试(gtt)的曲线下面积(auc)的图。进行双向anova和邦费罗尼多重比较后检验(bonferroni multiple comparison post test)。在阳性对照组与处理组之间观察
到显著的统计差异(**p《0.01)。
[0147]
图2(包括图2a和图2b)描绘了关于apl对饮食诱导的nash小鼠模型的葡萄糖耐量受损的影响的数据。图2a是喂食食物饮食(chow)和媒剂(阴性对照)、高脂肪/高果糖饮食(hfd)和媒剂(阳性对照)或hfd和apl(处理)持续131天，之后将动物禁食、口服施用葡萄糖(2mg/g体重)并测量血糖的c57bl/6j小鼠的葡萄糖水平的图。进行双向anova和邦费罗尼多重比较后检验。在15分钟(****p《0.0001)、60分钟(*p《0.05)和120分钟(***p《0.001)时间点时，在阳性对照组与处理组之间观察到显著的统计差异。在0分钟和30分钟(*p《0.05)、45分钟(**p《0.01)以及15分钟、30分钟、60分钟和120分钟(**p《0.0001)时间点时，也观察到阴性对照组与阳性对照组之间的显著差异。阴性对照组与处理组在任何时间点均没有显著的统计学差异。图2b是喂食chow或hfd的c57bl/6j小鼠的葡萄糖水平的auc的图。chow动物用媒剂(阴性对照)或apl每日两次处理，持续120天。hfd动物用媒剂(阳性对照)、apl(处理)或吡格列酮(pioglitazone，pio)处理。在阳性对照组与处理组之间观察到显著的统计差异(**p《0.01)。
[0148]
图3描绘了喂食chow和媒剂(阴性对照)、hfd和媒剂(阳性对照)或hfd和apl(tb-019；处理)持续131天的c57bl/6j小鼠的肝脏活检的20x放大的图。切片用苏木精和曙红(h&e)染色。阳性对照组的切片显示出严重的肝细胞脂肪累积、炎性浸润和脂肪性肝炎的病理体征以及气球样变，尤其是在肝脏的区3处。相比之下，处理组的肝脏切片显示出由hfd诱导的极少或没有气球样变。因此，apl(tb-019)有效减少饮食诱导的显微肝脏损伤。
[0149]
图4描绘了喂食chow和媒剂(阴性对照)、hfd和媒剂(阳性对照)或hfd和apl(处理)持续131天的c57bl/6j小鼠的肝脏活检的100x放大的图。
[0150]
图5(包括图5a-5d)描绘了关于nash小鼠模型的肝脂肪变性的数据。c57bl/6j小鼠喂食chow或hfd。用媒剂或apl(p.o.b.i.d.)处理小鼠。apl剂量为200mg/kg/天，每日口服施用(p.o.)两个剂量(b.i.d.)。与apl处理的媒剂同时喂养动物20周。chow(媒剂)：喂食食物和施用媒剂的小鼠(阴性对照)；hfd(媒剂)：喂食hfd和施用媒剂的小鼠(阳性对照)；hfd(apl)：喂食hfd和施用apl(处理)的小鼠。图5a包括苏木精和曙红(h&e)染色的肝脏组织样品的代表性图像，并且图5b包括用bodipy和dapi免疫染色的肝脏组织样品的代表性图像。图5c和5d描绘了细胞核数据(图5c)和脂肪沉积数据(图5d)的数量的图。在20x放大视野中进行测量。分析来自每组的三只不同动物的超过21个视野：阴性对照(视野数＝26)、阳性对照(视野数＝25)以及处理(视野数＝23)。使用imagej(schneider等人,2012,《自然方法(nature methods)》9(7):671-675)的间接测量用于计算脂肪沉积(阈值以红色示出)。从计数中排除含有大血管的视野。使用operetta cls
tm
(马萨诸塞州沃尔瑟姆的珀金埃尔默公司(perkinelmer,waltham,ma))的4.6高含量成像和分析软件以及珀金埃尔默共聚焦显微镜评估核计数。在两个实验中进行单向anova和图克的多重比较后检验(tukey's multiple comparison post test)。观察到阳性对照中的肝细胞数量的显著统计减少(***p《0.001)。阴性对照组与处理组之间没有统计差异。进一步地，阳性对照与阴性对照之间存在脂肪沉积的显著统计差异(**p《0.01)。在阴性对照与处理组之间没有观察到脂肪沉积的显著统计差异。
[0151]
图6(包括图6a和6b)描绘了饮食诱导肥胖症(nash dio小鼠模型)中关于非酒精性脂肪性肝脏疾病活性评分(nas)的数据。向c57bl/6j小鼠喂食食物饮食(chow)或高脂肪/高
果糖饮食(hfd)。将小鼠用媒剂或apl(200mg/kg体重)以p.o.b.i.d处理130天。chow(媒剂)：喂食食物和施用媒剂的小鼠(阴性对照；hfd(媒剂)：喂食hfd和施用媒剂的小鼠(阳性对照)；hfd apl：喂食hfd和施用apl(处理)的小鼠。图6a包括苏木精和曙红(h&e)染色的肝脏组织样品的代表性图像。箭头1：大泡性脂肪变性。箭头2：微泡性脂肪变性。箭头3：肥大。箭头4：炎性灶。图6b描绘了不同处理组的脂肪变性(肝脏脂肪)、炎症和肥大的nas组分评分。进行双向anova和邦费罗尼多重比较后检验。观察到阳性对照组与处理组之间存在显著统计差异(***p《0.001)。
[0152]
图7(包括图7a和7b)描绘了nash dio小鼠模型中关于nas的数据。c57bl/6j小鼠喂食chow或hfd。将小鼠用媒剂或apl(tb-019；200mg/kg体重)以p.o.b.i.d处理130天。chow(媒剂)：喂食食物和施用媒剂的小鼠(阴性对照)；hfd(媒剂)：喂食hfd和施用媒剂的小鼠(阳性对照)；hfd apl：喂食hfd和施用apl(tb-019；处理)的小鼠。进行了非酒精性脂肪性肝炎的组织病理学分析、nash活性评分(nas)。图7a描绘了各组的总nas评分平均值(阴性对照＝0.28
±
0.46；阳性对照＝6
±
1.76；处理组＝1.2
±
1.06)。进行单向anova和图克的多重比较后检验。anova分析显示出各组之间存在显著差异(*****p《0.0001)。测试后多重比较分析(图基)还示出所有组对之间的显著差异(阴性对照对阳性对照，***q＝23.38；阴性对照对处理组，*q＝3.55；以及阳性对照对处理组，***q＝18.5)。图7b描绘了关于nash dio小鼠模型的肝脏中的病理变化的数据，具体地：(1)脂肪变性(st)；(2)小叶炎症(li)；以及(3)肝气球样变(hb)。进行双向anova rm和邦费罗尼多重比较后检验。对于所有比较，观察到阴性对照组与阳性对照组之间的显著差异(****p《0.0001)。对于小叶炎症，观察到阴性对照与处理组之间的显著统计差异(****p《0.0001)。对于所有比较，观察到处理组与阳性对照之间的显著统计差异(****p《0.0001)。
[0153]
图8(包括图8a、8b和8c)描绘了关于大鼠nash模型的肝脏胶原纤维的数据。图8a是来自施用媒剂的zucker(fa/fa)苗条大鼠、zucker fa/fa肥胖大鼠和施用媒剂apl的zucker(fa/fa)肥胖大鼠的肝脏切片的代表性苏木精和曙红染色的图像(40x放大)。图8b是肝脏切片的马森三色染色(mason trichrome staining)的代表性图像(100x放大)。图8c是图8b中的图像中的红色框中的区域的放大。箭头指向用媒剂处理的zucker肥胖大鼠的间充质肝组织中的胶原纤维。
[0154]
图9(包括图9a、9b和9c)描绘了关于大鼠nash模型的肝4-羟基壬烯醛(4-hne)的数据。图9a是来自施用媒剂的zucker(fa/fa)苗条大鼠、zucker(fa/fa)肥胖大鼠(阴性对照)和施用媒剂(阳性对照)或施用apl(处理)的zucker(fa/fa)肥胖大鼠的4-hne免疫荧光肝脏切片的代表性图像。63x放大的肝脏组织共焦显微镜检查。图9b和9c分别是4hne/免疫荧光强度(每μm2组织面积4hne强度)的定量和总组织面积的定量的图。在两个实验中进行单向anova和图克的多重比较后检验。在对照组与apl处理组之间观察到显著统计差异(***p《0.001)。在阴性对照组与处理组之间未观察到显著统计差异(n＝非统计差异)。
[0155]
图10(包括图10a和10b)描绘了关于nash dio小鼠模型的肝4-羟基壬烯醛(4-hne)的数据。图10a是来自喂食chow并用媒剂处理的c57bl/6小鼠(阴性对照；左图像)、喂食hfd并用媒剂(阳性对照；中间图像)或apl(tb-019；处理；右图像)处理的c57bl/6小鼠的4-hne免疫荧光肝脏切片的代表性图像。20x和63x放大的肝脏组织共焦显微镜检查。图10b是4hne/免疫荧光强度(每μm2组织面积4hne强度)的定量的图。进行单向anova和图克的多重
比较后检验。在阳性对照组与处理组之间观察到显著统计差异(***p《0.001)。在阴性对照与处理组之间未观察到统计差异。
[0156]
图11(包括图11a、11b、11c、11d、11e和11f)描绘了关于nash amln饮食小鼠模型的替代血清生物标记物的数据。在二十(20)周后，向c57bl/6j小鼠喂食chow或改变为hfd的经修饰的amln饮食。在第五十(50)周，用媒剂或apl(p.o.b.i.d.)处理小鼠。apl剂量为25mg/kg、50mg/kg或100mg/kg，每日口服施用(p.o.)两个剂量(b.i.d.)(总剂量为50mg/kg/天、100mg/kg/天或200mg/kg/天)。在用媒剂或apl处理十六(16)周后，采集样品用于分析。执行邓尼特多重比较检验(dunnet's multiple comparison test)。图11a描绘了血清丙氨酸氨基转移酶(alt)水平。图11b描绘了血清天冬氨酸氨基转移酶(ast)水平。图11c描绘了血清碱性磷酸酶(alp)水平。图11d描绘了血清甘油三酯水平。图11e描绘了血清非酯化脂肪酸(nefa)水平。图11f描绘了血清胆固醇水平。所有描绘的结果均来自于接受50mg/kg/天apl的小鼠，但胆固醇除外，其中小鼠接受200mg/kg/天apl。在阳性对照组与处理组之间观察到显著的统计差异(*p《0.02；**p＝0.002；***p＝0.0008以及****p《0.0001)。
[0157]
图12(包括图12a和12b)描绘了关于nash amln饮食小鼠模型的nas和纤维化的数据。在二十(20)周后，向c57bl/6j小鼠喂食chow或改变为hfd的经修饰的amln饮食。在寻求五十(50)，用媒剂或apl(p.o.b.i.d.)处理小鼠。apl剂量为25mg/kg、50mg/kg或100mg/kg，每日口服施用(p.o.)两个剂量(b.i.d.)(总剂量为50mg/kg/天、100mg/kg/天或200mg/kg/天)。在用媒剂或apl处理的十六(16)周后，采集活检组织，用苏木精和曙红(h&e)染色，并评估脂肪变性、炎症和肝细胞气球样变。图12a描绘了如与阳性对照组相比，处理组的nas的减少。在阳性对照组与处理组之间观察到显著统计差异(***p《0.001)。图12b描绘了如与阳性对照组相比，处理组的肝纤维化的减少。在阳性对照组与处理组之间观察到显著统计差异(****p《0.0001)。
[0158]
定义
[0159]
除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。
[0160]
还应理解，本文中所用的术语仅仅是为了描述具体实施例，并且不打算作为限制。
[0161]
冠词“一个/一种(a/an)”在本文中指代冠词的一个/种或多于一个/种(即，至少一个/种)语法宾语。举例来说，“一个要素”意指一个要素或一个以上的要素。因此，例如，“一个细胞”的表述包含多个相同类型的细胞。
[0162]
如本文所使用的，当提及如量、持续时间等可测量值时，“约”意味着涵盖偏离指定值 /-20％或 /-10％、 /-5％、 /-1％或 /-0.1％的变化，因为这样的变化适合于执行所公开的方法。
[0163]
除非另有说明，否则术语“烷基”本身或作为另一种取代基的一部分意指具有指定碳原子数的直链或支链烃基(即，c
1-c6意指一至六个碳)。实例包含：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、新戊基和己基。在实施例中，烷基是(c
1-c6)烷基，如(c
1-c3)烷基(例如，甲基和乙基)。
[0164]
除非另有说明，否则单独使用或与其它术语组合使用的术语“烯基”意指具有所述碳原子数并含有一个或多个双键的直链或支链烃基。实例包含次乙基(乙烯基)、丙烯基(烯丙基)、丁烯基、异戊烯基、丁二烯基、1,3-戊二烯基和1,4-戊二烯基。表示烯基的官能团示
例为-ch
2-ch＝ch
2-。
[0165]
除非另有说明，否则单独使用或与其它术语组合使用的术语“炔基”意指具有所述碳原子数并含有一个或多个三键的直链或支链烃基。
[0166]
除非另有说明，否则单独使用或与其它术语组合使用的术语“烷氧基”意指如上定义的所述烷基基团，该烷基基团经由氧原子连接到该分子的其余部分，例如甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基(异丙氧基)以及高级同系物和异构体。烷氧基基团的烷基部分可具有如上文针对烷基基团所定义的指定碳原子数。在实施例中，烷氧基是(c
1-c6)烷氧基，如(c
1-c3)烷氧基(例如，甲氧基和乙氧基)。
[0167]
如本文所使用的，术语“apl”和“tb-019”是指作为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸(化合物(1))的式i化合物或其药学上可接受的盐。
[0168]
术语“芳香族”是指具有一个或多个具有芳香族特征的多不饱和环(即，具有(4n 2)个离域π(pi)电子，其中n为整数)的碳环或杂环。
[0169]
术语“芳基”是指含有至少一个芳环的芳族烃环体系。芳族环可以任选地稠合或以其它方式连接到其它芳族烃环或非芳族烃环。芳基基团的实例包含例如苯基、萘基、1,2,3,4-四氢萘和联苯基。芳基的实例包含苯基和萘基。
[0170]
术语“芳烷基”基团是指被芳基基团取代的烷基基团。
[0171]
如本文所使用的，“有效量”意指向有需要的受试者(例如，患有或有患上诸如nash等疾病或状况的风险的患者)施用时，在缓解疾病或病状的一种或多种表现(例如，预防、抑制、治疗或减轻特定病症或疾病(例如，nash)的症状)方面提供治疗益处的化合物的量。然而应理解，完全治疗效果不一定通过施用一次剂量发生，并且可以在施用一系列剂量之后发生。因此，有效量可以一次或多次施用来施用。在治疗性(包含预防性)应用的上下文中，向受试者施用的活性剂的量将取决于疾病或病状的类型和严重程度以及取决于受试者的特性，如总体健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。它还取决于疾病或病状的程度、严重性和类型。技术人员将能够根据这些和其它因素确定适当的剂量。式i的化合物也可以与一种或多种其它治疗化合物组合施用。
[0172]
除非另有说明，否则术语“卤代”或“卤素”本身或作为另一种取代基的一部分意指氟、氯、溴或碘原子。在实施例中，卤素包含氟、氯或溴。在实施例中，卤素是氟或氯。
[0173]
术语“杂芳烷基”基团是指被杂芳基取代的烷基基团。
[0174]
除非另有说明，术语“杂环”或“杂环基”或“杂环的”本身或作为另一个取代基的一部分意指未经取代或经取代的单环或多环杂环系统，其由碳原子和选自由n、o和s组成的组的至少一个杂原子组成。杂环通常含有五到十个环原子。除非另有说明，否则杂环体系可以在杂环体系的提供结构异构体的任何杂原子或碳原子处连接到另一个原子。
[0175]
术语“杂芳基”或“杂芳族”是指具有芳族特性的杂环。
[0176]
除非另有说明，否则术语“烃基”本身或作为另一种取代基的一部分意指具有指定碳原子数的直链或支链烃(即，c
1-c6意指一至六个碳)。实例包含：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、新戊基和己基。在实施例中，烃基是(c
1-c6)烷基，如(c
1-c3)烷基，如甲基和乙基。术语“不饱和烃基”意指含有至少一个双键或三键的烃基。
[0177]
术语“卤代烷基”意指其中至少一个氢原子被卤素原子取代的烷基基团。术语“全卤代烷基”意指其中所有氢原子均被卤素原子取代的卤代烷基基团。全卤代烷基包含全氟
烷基，如-(c
1-c6)全氟烷基(例如，-(c
1-c3)全氟烷基，如-cf3)。
[0178]
术语“卤代烷氧基”意指其中至少一个氢原子被卤素原子取代的烷氧基基团。术语“全卤代烷氧基”是指其中所有氢原子均被卤素原子取代的卤代烷氧基基团。全卤代烷氧基包含全氟烷氧基，如-(c
1-c6)全氟烷氧基(例如，-(c
1-c3)全氟烷氧基，如-ocf3)。
[0179]
如本文所用，“个体”或“患者”或“受试者”(如在治疗的受试者中)意指哺乳动物和非哺乳动物两者。哺乳动物包含例如人；非人灵长类，例如猿和猴；狗；猫；牛；马；绵羊；以及山羊。非哺乳动物包含鱼类和鸟类。在一个实施例中，个体是人。
[0180]
如本文所用，术语“药学上可接受的”是指当将所调配的化合物施用于患者时不会显著消除该化合物的生物学活性、药理学活性和/或其它性质的化合物的调配物。在实施例中，药学上可接受的调配物不会对患者造成明显的刺激。
[0181]
术语“取代的”意指一个原子或原子基团已取代氢作为与另一个基团连接的取代基。对于芳基和杂芳基基团，术语“取代的”是指任何水平的取代，即单取代、二取代、三取代、四取代或五取代，其中这种取代被允许。取代基被独立地选择，并且取代可以在任何化学可及的位置处。取代基可包含例如来自卤素、氧基、叠氮基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、烷基硫代、烷基硫代烷基、烷氧基烷基、烷基氨基、三卤代甲基、羟基、巯基、羟、烷基甲硅烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂芳基、烯基、炔基、芳基和氨基基团的组的部分中的一个。包括碳链的取代基可以含有1-6个、1-3个或1-2个碳原子。
[0182]
如本文所使用的，与疾病或病状(例如，nash)相关的术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”可互换使用，并且旨在指示采取措施以在患有或有患上疾病或病症(例如，nash)的风险的个体中获得有益或期望的临床结果，包含预防、维持、抑制、治疗或减轻疾病或病状的症状。因此，对患者的治疗可以包含预防或延迟进一步的疾病进展(例如，预防或维持)、预防或减轻已经或预期发展出的症状的严重程度、改善现有症状和预防额外的症状和/或对有风险患上某种病状(例如，nash)的受试者进行预防性治疗，从而降低所述受试者患上所述病状的可能性。
[0183]
范围：在本公开内容中，可以以范围格式来呈现本公开内容的各个方面。应当理解，范围格式的描述仅是为了方便和简洁，而不应被解释为对本公开内容的范围的硬性限制。因此，对范围的描述应被视为已明确公开了所有可能的子范围以及该范围内的各个数值。例如，对范围诸如1至6的描述应被视为具有具体公开的子范围，诸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及该范围内的各个数字，诸如1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围的广度如何，这都适用。
具体实施方式
[0184]
以下描述了本公开的实施例。然而，需要明确指出的是，本公开不限于这些实施例，而是意图包含对于本领域的技术人员来说显而易见的修改和其等效物。
[0185]
非酒精性脂肪性肝脏疾病(nafld)通常可以描述其中过量脂肪在肝张中累积并且不是由大量饮酒引起的一系列病状。例如，单纯性脂肪肝(非酒精性脂肪肝或nafl)是肝脏中有脂肪，但很少或没有肝脏炎症或细胞损伤的病状：这种病状通常不会进展到产生肝脏损伤或其它并发症。然而，非酒精性脂肪性肝炎(nash)是受试者患有脂肪肝连同肝脏炎症(肝炎)和/或细胞损伤的单独病状，其也可以产生纤维化(包含肝硬化)或肝癌。仅一小部分
nafld患者患有nash(约20％)，其中约3％-12％的美国成年人患有nash：尽管如此，nash已被确定为肝移植等待名单和肝移植登记的第二大原因。因此，患有nash的患者的结局的严重程度突出了对有效疗法的紧迫需要。
[0186]
目前，对nafld和nash的治疗依赖于饮食和其它生活方式改变，而不是药物疗法。具体地，在针对nash和其相关病理或并发症(例如，纤维化和肝硬化)的有效治疗药物的开发方面存在着相当大的挑战。
[0187]
已经出乎意料地发现，式i化合物在治疗肝脏疾病和病症，包含非酒精性脂肪性肝炎(nash)以及如肝纤维化(包含肝硬化)、肝脏脂肪变性、肝脏炎症(例如，小叶炎症)和肝细胞气球样变等与nash相关或者可能独立于nash发生的病症方面有效。
[0188]
例如，已经发现式i化合物或其药学上可接受的盐在治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)中有效，如在nash的本领域公认的啮齿动物模型中所证实。具体地，已经发现式i化合物改善糖尿病相关的葡萄糖耐量受损(igt)；减少肝脏中的脂肪沉积；减弱肝脂肪变性；减弱肝纤维化、肝炎症、肝肥大；并且治疗nash。因此，式i化合物或其任何药学上可接受的盐可以用于治疗(例如，预防、抑制、减少或维持)这些病状中的任一者，包含如本文所描述的病状。
[0189]
例如，患有或有风险患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)或其它肝脏病变(包含脂肪变性、肝脏炎症(例如，小叶炎症)、肝细胞气球样变和/或纤维化(例如，肝硬化))的个体可以受益于包括施用根据式i的化合物或其药学上可接受的盐的治疗。
[0190]
式i化合物
[0191]
用于治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法的化合物包含根据式i的化合物，
[0192][0193]
和其药学上可接受的盐，
[0194]
其中：
[0195]
r1选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c8)烷基、-(c
1-c8)烯基、-(c
1-c8)炔基、未经取代或经取代的-芳(c
1-c6)烷基、未经取代或经取代的-杂芳(c
1-c6)烷基，其中所述经取代的芳(c
1-c6)烷基和所述经取代的杂芳(c
1-c6)烷基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nh(c
1-c6)烷基、-n[(c
1-c6)烷基)]2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
[0196]
r2选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c8)烷基、-(c
1-c8)烯基、-(c
1-c8)炔基、未经取代或经取代的-芳(c
1-c6)烷基、未经取代或经取代的-杂芳(c
1-c6)烷基，其中所述经取代的芳(c
1-c6)烷基和所述经取代的杂芳(c
1-c6)烷基上的取代基选自由以下组成的组：卤素、-cn、-no2、-nh2、-oh、卤代(c
1-c6)烷基、-(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、-sh、硫代(c
1-c6)烷基、-sonh2、-so2nh2、-so-(c
1-c6)烷基、-so
2-(c
1-c6)烷基、-nhso2(c
1-c6)烷基和-nhso2nh2；
[0197]
r3、r4、r7、r8、r9、r
10
、r
13
和r
14
独立地选自由以下组成的组：氢和-(c
1-c6)烷基；
[0198]
r5和r6独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r5和r6两者不能均为-oh；
[0199]r11
和r
12
独立地选自由以下组成的组：氢、-(c
1-c6)烷基和-oh，前提是r
11
和r
12
两者不能均为-oh；
[0200]
m为1、2、3或4；
[0201]
n为0、1、2、3或4；
[0202]
o为0、1、2、3或4；
[0203]
p为1、2、3或4；
[0204]
q为0、1、2、3或4；并且
[0205]
r为0、1、2、3或4。
[0206]
在实施例中，包括r1和/或r2的卤代(c
1-c6)烷基和/或卤代(c
1-c6)烷氧基选自全卤代(c
1-c6)烷基和全卤代(c
1-c6)。
[0207]
在实施例中，r1选自氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r2选自氢或-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r1和r2独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。在前述实施例中，-(c
1-c8)烷基是-(c
1-c6)烷基、-(c
1-c3)烷基或者甲基或乙基。在实施例中，r1和r2为氢。
[0208]
在实施例中，r3、r4、r5、r6、r7和r8中的每一个独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。-(c
1-c8)烷基是-(c
1-c6)烷基、-(c
1-c3)烷基或者甲基或乙基。在实施例中，r3、r4、r5、r6、r7和r8为氢。
[0209]
在实施例中，r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
和r
14
中的每一个独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。-(c
1-c8)烷基是-(c
1-c6)烷基、-(c
1-c3)烷基或者甲基或乙基。在实施例中，r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
和r
14
为氢。
[0210]
在实施例中，根据上述方案，r3到r
14
中的每一个独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r3至r
14
为氢。
[0211]
在式i化合物的实施例中，m n o的总和在2至10、9、8、7、6、5、4或3的范围内；在3至10、9、8、7、6、5或4的范围内；或者在4至10、9、8、7、6或5的范围内。在实施例中，m n o的总和为12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2。
[0212]
在式i化合物的实施例中，p q r的总和在1至10、9、8、7、6、5、4、3或2的范围内；在2至10、9、8、7、6、5、4或3的范围内；在3至10、9、8、7、6、5或4的范围内；或者在4至10、9、8、7、6或5的范围内。在实施例中，p q r的总和为12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1。
[0213]
在限定m n o的总和和/或限定p q r的总和的上述实施例的实施例中，r3至r
14
中的每一者独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r3至r
14
为氢。
[0214]
在式i化合物的实施例中，m为3；p为4；并且n、o、q和r中的每一者为零。在实施例中，r3、r4、r9和r
10
独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r3、r4、r9和r
10
独立地为氢。在实施例中，r1和r2可以独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r1和r2可以独立地为氢。在实施例中，r1、r2、r3、r4、r9和r
10
为氢。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸(化合物(1))或其药学上可接受的盐。
[0215]
在式i化合物的实施例中，m为4；n为1或2；p为3；o、q和r中的每一者为零。在实施例中，r3、r4、r9和r
10
独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r3、r4、r9和r
10
独立地为氢。在实施例中，r1和r2可以独立地选自氢和-(c
1-c8)烷基。在实施例中，r1和r2可以为独立选择的
氢。在实施例中，r1、r2、r3、r4、r9和r
10
为氢。在实施例中，式i化合物为式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐，或者(s)-2-氨基-5-((6-氨基戊基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。
[0216]
在实施例中，r1和r2各自为氢。在实施例中，r3、r4、r5、r6、r7和r8各自为氢。在实施例中，r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
和r
14
各自为氢。在实施例中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
、r
13
和r
14
各自为氢。在实施例中，(m n o)为3。在实施例中，(m n o)为4。在实施例中，(m n o)为5。在实施例中，(m n o)为6。在实施例中，(p q r)为3。在实施例中，(p q r)为4。在实施例中，(p q r)为5。在实施例中，(p q r)为6。
[0217]
在实施例中，式i化合物的药学上可接受的盐用于本文所描述的方法中。本文描述了示例性药学上可接受的盐。在实施例中，药学上可接受的盐是式i化合物的盐酸盐(例如，式i化合物中的单盐酸盐、二盐酸盐或三盐酸盐)。
[0218]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式(i)化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐，
[0219]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐，
[0220]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐，
[0221]
化合物的合成
[0222]
式i化合物可以根据本领域已知的方法制备。本文描述了示例性合成。
[0223]
化合物(1)
[0224]
制备式i化合物化合物(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸的二盐酸盐(化合物(1)，二盐酸盐)的示例性方法如下。
[0225]
a.(s)-(2-氧代氮杂环庚烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0226][0227]
将二碳酸二叔丁酯(733μl，3.189mmol)添加到l-(-)-α-氨基-ε-己内酰胺盐酸盐(500mg，3.037mmol)和三乙胺(847μl，6.074mmol)在无水四氢呋喃(4ml)中的悬浮液中。将所得悬浮液在室温下搅拌过夜，并浓缩。将残留的白色固体在乙酸乙酯和水之间分配。除去水层。将有机层用1n盐酸水溶液洗涤两次，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥并浓缩。获得呈白色固体的纯标题化合物((s)-(2-氧代氮杂环庚烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯)。1h nmr(400mhz,cd3od)δ6.45(bd,j＝5.8hz,1h),4.18-4.30(m,1h),3.17-3.30(m,2h),1.70-2.03(m,4h),1.48-1.57(m,1h),1.45(s,9h),1.28-1.42(m,1h)；ms(esi):m/z 250.8(m na)

。
[0228]
b.(s)-(1-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-2-氧代氮杂环庚烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0229][0230]
将双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(2.524mmol；2.5ml的1.0m四氢呋喃溶液)添加到(s)-(2-氧代氮杂环庚烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(288mg；1.262mmol)的无水四氢呋喃溶液(12ml)中。
[0231]
将所得悬浮液在室温下搅拌三十分钟。一次性添加3-(boc-氨基)丙基溴(2.524mmol；470μl)，并且将反应在室温下搅拌28小时。
[0232]
将反应混合物在旋转蒸发仪上浓缩，并且将残余物在乙酸乙酯与水之间分配。去除水层。将有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将粗产物通过柱色谱法使用0％至100％乙酸乙酯/己烷的梯度溶剂系统在硅胶柱上纯化，以得到呈无色油的标题化合物((s)-(1-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-2-氧代氮杂环庚烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ5.96(bd,j＝5.0hz,1h),5.32(bs,1h),4.36(m,1h),3.45-3.62(m,2h),3.33-3.41(m,1h),3.08-3.22(m,2h),2.97-3.06(m,1h),2.02-2.09(m,1h),1.92-2.00(m,1h),1.76-1.87(m,2h),1.61-1.70(m,2h),1.40-1.50(m,19h),1.31-1.38(m,1h)；ms(esi):m/z 407.8(m na)

。
[0233]
c.(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐(化合物(1)，二盐酸盐)的制备
[0234]
[0235]
将(s)-(1-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-2-氧代氮杂环庚烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.2596mmol)溶解在12n盐酸水溶液(4ml)中。将所得溶液在室温下搅拌，直到所有的鼓泡停止。将溶液转移到微波反应瓶中，并在160℃下加热九十分钟。浓缩后，得到呈浅黄褐色固体的纯标题化合物((s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐)。1h nmr(400mhz,d2o)δ4.00(t,j＝6.3hz,1h),3.08-3.20(m,6h),1.90-2.15(m,4h),1.72-1.83(m,2h),1.43-1.62(m,2h)；ms(esi):m/z 203.9(m h)

。
[0236]
已经测定了(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸(“apl”)的溶解度、肝脏微粒体稳定性和溶液稳定性。参见wo 2018/049019和美国公开2019/0192462。
[0237]
化合物(2)
[0238]
制备式i化合物化合物(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐(化合物(2)，三盐酸盐)的示例性方法如下。
[0239]
a.(6-氧己基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0240][0241]
将无水二甲基亚砜(83μl)在-78℃下逐滴添加到草酰氯(50μl)于无水二氯甲烷(2ml)中的搅拌溶液中。搅拌15分钟后，滴加6-(叔丁氧基-羰基氨基)-1-己醇(115mg，0.53mmol)的无水二氯甲烷(1ml)溶液。将所得混合物在-78℃下搅拌45分钟。添加三乙胺(368μl)，并允许反应升温至室温。将此溶液在旋转蒸发器上浓缩，以得到呈灰白色固体的标题化合物((6-氧己基)氨基甲酸叔丁酯)(86mg，75％产率)，其无需进一步纯化即可使用。
[0242]
b.(s)-2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-5-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)己基)氨基)-戊酸的制备
[0243][0244]
向n-α-苄基氧基羰基-l-鸟氨酸(94mg，0.352mmol)于含有乙酸(100μl)的无水甲醇(2ml)中的搅拌悬浮液中添加(6-氧己基)氨基甲酸叔丁酯(114mg，0.528mmol)于无水甲醇(1.9ml)中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌30分钟。然后添加氰基硼氢化钠(66mg，1.057mmol)，并将该反应在室温下搅拌过夜。在旋转蒸发仪上浓缩后，将残余物在乙酸乙酯和1m硫酸氢钾水溶液之间分配。除去水层。将有机相用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在旋转蒸发仪上浓缩。通过反相色谱(c18柱)使用10％至100％乙腈的水溶液与0.1％甲酸改性剂的梯度纯化所得残余物。获得呈浅黄色油的标题化合物((s)-2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-5-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)己基)氨基)-戊酸)(87mg，53％产率)。1h nmr(400mhz,d2o)δ3.94(t,j＝5.92hz,0.5h),3.63(m,0.5h),2.99-3.13(m,6h),1.65-2.04(m,8h),1.43(m,4h)；ms(esi):m/z 466.2[(m h)

]。
[0245]
c.(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐的制备
[0246][0247]
将(s)-2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-5-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)己基)氨基)戊酸(18mg，0.039mmol)于6n盐酸水溶液(4ml)中的溶液回流两小时。将此溶液在旋转蒸发器上浓缩，以得到呈淡黄色油的标题化合物((s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐)(12mg，90％产率)。1h nmr(400mhz,d2o)δ4.27(m,0.5h),3.95(m,0.5h),3.33-3.48(m,6h),2.00-2.37(m,8h),1.77(m,4h)；ms(esi):m/z 232.2[(m h)

]。
[0248]
化合物(3)
[0249]
制备式i化合物化合物(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐(化合物(3)，三盐酸盐)的示例性方法如下。
[0250]
a.(5-氧戊基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0251][0252]
将无水二甲基亚砜(58μl)在-78℃下逐滴添加到草酰氯(35μl)于无水二氯甲烷(1.5ml)中的搅拌溶液中。搅拌15分钟后，滴加6-(叔丁氧基-羰基氨基)-1-戊醇(75mg，0.37mmol)的无水二氯甲烷(0.75ml)溶液。将所得混合物在-78℃下搅拌45分钟。添加三乙胺(257μl)，并允许反应升温至室温。将此溶液在旋转蒸发器上浓缩，以得到呈灰白色固体的标题化合物((5-氧戊基)氨基甲酸叔丁酯)(52mg，70％产率)，其无需进一步纯化即可使用。
[0253]
b.(s)-2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-5-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)戊基)氨基)-戊酸的制备
[0254][0255]
向n-α-苄基氧基羰基-l-鸟氨酸(35mg，0.13mmol)于含有乙酸(38μl)的无水甲醇(1ml)中的搅拌悬浮液中添加(5-氧戊基)氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.20mmol)于无水甲醇(1.0ml)中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌30分钟。然后添加氰基硼氢化钠(25mg，0.40mmol)，并将反应在室温下搅拌过夜。在旋转蒸发仪上浓缩后，将残余物在乙酸乙酯和1m硫酸氢钾水溶液之间分配。除去水层。将有机相用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并在旋转蒸发仪上浓缩。通过反相色谱(c18柱)使用10％至100％乙腈的水溶液与0.1％甲酸改性剂的梯度纯化所得残余物。获得呈无色油的标题化合物((s)-2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-5-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)戊基)氨基)-戊酸)(34mg，58％产率)。1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.26-7.38(m,5h),5.08(s,2h),4.03(m,1h),2.90-3.07(m,6h),1.87(m,1h),1.65-1.79(m,5h),1.34-1.54(m,13h)；ms(esi):m/z 452.30[(m h)

]。
[0256]
c.(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐的制备
[0257][0258]
将(s)-2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-5-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)戊基)氨基)戊酸(20mg，0.044mmol)于6n盐酸水溶液(4ml)中的溶液回流两小时。将此溶液在旋转蒸发器上浓缩，以得到呈淡黄色油的标题化合物((s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐)(12mg，88％产率)。1h nmr(400mhz,cd3od)δ4.06(t,j＝5.36hz,1h),3.06(m,4h),2.96(t,j＝7.52hz,2h),1.88-2.10(m,4h),1.68-1.83(m,4h),1.47-1.55(m,2h)；ms(esi):m/z218.2[(m h)

]。
[0259]
本领域技术人员应理解，wo 2018/049019和美国公开2019/0192462的方案1-16中所描述的方法不是可以合成式i化合物的唯一手段，并且合成有机反应的库可潜在地用于合成本公开的化合物。本领域技术人员知道如何选择和实施合适的合成路线。合适的合成方法可以通过参考文献来鉴定，所述文献包含参考资料，诸如comprehensive organic synthesis，编辑b.m.trost和i.fleming(佩加蒙出版社(pergamon press),1991)；comprehensive organic functional group transformations，编辑a.r.katritzky、o.meth-cohn和c.w.rees(佩加蒙出版社,1996),《综合有机官能团转化ii(comprehensive organic functional group transformations ii)》,编辑a.r.katritzky和r.j.k.taylor(编辑)(elsevier，第2版，2004年)；comprehensive heterocyclic chemistry，编辑a.r.katritzky和c.w.rees(pergamon press,1984)；以及comprehensive heterocyclic chemistry ii，编辑a.r.katritzky、c.w.rees和e.f.v.scriven(pergamon press,1996)。
[0260]
式i化合物和中间体可以从其反应混合物中分离，并且通过如过滤、液-液萃取、固相萃取、蒸馏、重结晶或色谱法等标准技术进行纯化。
[0261]
应当理解，当式i化合物含有一个或多个手性中心时，所述化合物可以以纯对映异构体或非对映异构体形式或作为外消旋混合物存在，并且可以作为纯对映异构体或非对映异构体形式或作为外消旋混合物分离。本公开因此包含本公开的化合物中的任何可能的对映异构体、非对映异构体、外消旋体或其混合物，其在nash的治疗中具有生物活性。
[0262]
手性中心位于式i化合物的α-氨基酸官能团的α-碳中。根据卡恩-英戈尔德-普雷洛格(cahn-ingold-prelog)规则规则，式i化合物由所含有的α-氨基酸官能团的关于α-碳的(s)绝对构型表征，
[0263][0264]
如化合物(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸(化合物(1))所例示的，其为式i化合物：
[0265][0266]
(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸
[0267]
根据实施例，式i化合物是关于所含有的α-氨基酸官能团的α-碳的构型的分离的(s)旋光异构体。“分离的旋光异构体”意指已经从相同式的相应旋光异构体中基本上纯化的化合物。在实施例中，分离的异构体的纯度为至少约80重量％、至少85重量％、至少90重量％、至少95重量％、至少98重量％、至少约99重量％，其余部分由对应的(r)对映异构体构成。在实施例中，分离的(s)对映异构体不含对应的(r)对映物，但痕量的(r)对映异构体除外。
[0268]
药学上可接受的盐
[0269]
当式i的化合物适当地被能够形成盐的基团或原子取代时，可以采取盐的形式。这样的基团和原子是有机化学领域的普通技术人员所熟知的。术语“盐”涵盖作为本公开的化合物的游离酸或游离碱的加成盐。术语“药学上可接受的盐”是指具有在药物应用中提供效用的范围内的毒性特征的盐。然而，药学上不可接受的盐可以具有如高结晶度等性质，这些性质在本公开的实践中有用，例如在本公开的化合物的合成、纯化或调配过程中有用。
[0270]
合适的药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸或有机酸制备。无机酸的实例包含盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸。合适的有机酸可以选自脂族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和磺酸类的有机酸，其实例包含甲酸、乙酸、新戊酸、丙酸、糠酸、粘酸、羟乙磺酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、葡糖醛酸、马来酸、富马酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、苯乙酸、扁桃酸、双羟萘酸(扑酸)、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、三氟甲磺酸、2-羟基乙磺酸、对甲苯磺酸、对氨基苯磺酸、环己基氨基磺酸、硬脂酸、藻酸、β-羟基丁酸、水杨酸、半乳糖二酸、樟脑磺酸和半乳糖醛酸。药学上不可接受的酸加成盐的实例包含例如高氯酸盐和四氟硼酸盐。
[0271]
在实施例中，合适的药学上可接受的盐是本文所描述的化合物的盐酸盐(例如，化合物(1)、(2)和(3)中任一者的盐酸盐)。在实施例中，盐酸盐是单氯盐。在实施例中，盐酸盐是二盐酸盐。在实施例中，盐酸盐是三盐酸盐。
[0272]
本公开的化合物的合适的药学上可接受的碱加成盐包含例如金属盐，其包含碱金属盐、碱土金属盐以及过渡金属盐，例如钙盐、镁盐、钾盐、钠盐、以及锌盐。药学上可接受的碱加成盐还包含由碱性胺形成的有机盐，例如，n,n'二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、三乙醇胺、葡甲胺(n-甲基葡糖胺)和普鲁卡因。药学上不可接受的碱加成盐的实例包含锂盐和氰酸盐。
[0273]
所有这些盐可以通过常规方法由对应的根据式i的化合物通过例如适当的酸或碱与根据式i的化合物反应来制备。盐可以呈结晶形式，并且通过从合适的溶剂中结晶盐来制备。本领域技术人员将知道如何制备和选择合适的盐形式，例如，如p.h.stahl和c.g.wermuth所著的handbook of pharmaceutical salts:properties,selection,and use(wiley-vch 2002)中描述的。
[0274]
治疗方法
[0275]
非酒精性脂肪性肝炎(nash)
[0276]
一方面，本发明的特征在于用于治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效量的根据式i的化合物或其药学上可接受的盐。另一方面，本发明的特征在于根据式i的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗受试者的nash。另一方面，本发明的特征在于式i化合物或其药学上可接受的盐，其用于制备用于治疗nash的
药物。
[0277]
非酒精性脂肪性肝脏疾病(nafld)已成为全世界慢性肝脏疾病最突出的形式之一，反映了肥胖症的流行。肝脂肪变性或“脂肪性肝脏”是脂肪在肝脏中的累积。不同于nafld，非酒精性脂肪性肝炎(nash)是特征在于严重的健康风险的病症。除了肝脏中具有过量的脂肪之外，nash的特征可以在于肝炎症和肝细胞损伤(气球样变)的组织学证据，伴随或不伴随纤维化。被诊断患有nash的受试者的发病率和死亡率风险显著增加，并且持续需要用于治疗nash的治疗剂。
[0278]
更具体地，nash的特征可以在于增加的心血管和肝脏相关死亡的风险。nash可以导致肝硬化，其中肝脏会永久地受损并留下疤痕。肝硬化产生体液潴留、肌肉萎缩、肠出血和肝功能衰竭。肝脏移植是针对伴有肝功能衰竭的晚期肝硬化的唯一治疗。移植越来越多地在患有nash的患者中进行。nash是目前肝脏移植的第二大原因，在这十年结束时，其很可能由于控制丙型肝炎的新抗病毒药物而成为第一，丙型肝炎目前是肝功能衰竭的第一大原因。
[0279]
在实施例中，nash可以通过肝脏活检进行诊断(例如，脂肪变性、炎症和肝细胞气球样变的组织学证据，例如，在没有其它肝脏疾病原因或大量饮酒的情况下)。例如，nafld活性评分(nas)在鉴定患有nash的患者时可以是有用的。参见kleiner等人,“非酒精性脂肪性肝病组织学评分系统的设计与验证(design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease)”,《肝脏病学(hepatology)》,41(6):1313-1321(2005)。
[0280]
nas是脂肪变性(0-3)、肝细胞气球样变(0-2)和小叶炎症(0-3)的单独评分的总和，其中最大评分为8。根据上文kleiner等人提出的标准，活检后可以生成nas评分。还参见表1。
[0281]
表1.nafld活性评分(nas)的组成部分
[0282][0283]
在实施例中，基于肝脏活检(例如，用于确定nas评分的肝脏活检)选择受试者。
[0284]
在实施例中，基于nas评分选择受试者。在实施例中，nas评分为4分或更多(即，nas评分为≥4)确定nash的存在。在实施例中，肝脏活检显示nas评分为5分或更多(即，nas评分
为≥5)确定nash的存在。
[0285]
在实施例中，基于在治疗之前确定的nas评分选择受试者。
[0286]
在实施例中，治疗前nas评分为4分或更多(即，nas评分为≥4)确定nash的存在。在实施例中，肝脏活检显示治疗前nas评分为5分或更多(即，nas评分为≥5)确定nash的存在。
[0287]
在实施例中，nash的特征在于nafld活性评分(nas)为5分或更多，其中nas是脂肪变性(范围：0-3)、肝细胞气球样变(范围：0-2)和小叶炎症(范围：0-3)的单独评分之和。参见kleiner等人,同上。脂肪变性是肝脏内脂质的异常保留。脂肪变性评分表示含有脂肪滴(脂肪变性)的肝细胞的百分比为0(《5％)、1(5％-33％)、2(33％-66％)和3(》66％)。根据本公开的就nash进行治疗的患者的nas脂肪变性评分可以为1、2或3。肝细胞气球样变是一类细胞死亡，其视觉特征在于细胞核在细胞中心处或附近的肥大和定位。在实施例中，肝细胞气球样变的评分为0(无)、1(少量)或2(许多细胞具有显著的气球样变)。在实施例中，根据炎症的病灶的数量对小叶炎症进行评分：0(无病灶)、1(《2个病灶/200x视野)和2(2-4个病灶/200x视野)。在实施例中，受试者的小叶炎症评分为0、1、2或3，并且气球样变评分为0、1或2，前提是小叶炎症评分和气球样变评分的总和为至少2。
[0288]
在实施例中，本文所描述的方法和用途包括nas评分的改进。在实施例中，改进在不使纤维化恶化的情况下发生。
[0289]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐的施用使nafld活性评分(nas)《4。
[0290]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的nas评分降低至少一(≥1)。
[0291]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的nas评分降低至少二(≥2)。
[0292]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的nas评分降低至少三(≥3)。
[0293]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的肝脏脂肪变性评分降低一(1)至三(3)。
[0294]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的肝细胞气球样变评分降低一(1)至二(2)。
[0295]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的小叶炎症评分降低一(1)至三(3)。
[0296]
在实施例中，受试者的脂肪变性评分为1、2或3。
[0297]
在实施例中，脂肪变性包括大泡脂肪变性。在实施例中，脂肪变性包括微泡脂肪变性。在实施例中，脂肪变性包括大泡脂肪变性和微泡脂肪变性。
[0298]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使有需要的患者的脂肪性肝炎消退，而纤维化没有恶化。在实施例中，消退包括不存在肝细胞气球样变(例如，气球样变评分为0)；不存在炎症或轻度炎症(例如，气球样变评分为0-1)；和/或存在或不存在脂肪变性(例如，脂肪变性评分为0-3)。
[0299]
在实施例中，nash是特征在于小叶炎症和肝细胞气球样变中的至少一者的脂肪性肝炎。在实施例中，在不存在肝脏疾病的其它原因和/或大量饮酒的情况下发生nash。
[0300]
在实施例中，受试者具有肝脏炎症。在实施例中，肝脏炎症是小叶炎症。
[0301]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使肝脏炎症减轻。
[0302]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使肝脏炎症评分为0或1(例如，如本文所描述)。
[0303]
在实施例中，受试者的肝脏的特征在于肝细胞气球样变。
[0304]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使肝细胞气球样变减少。
[0305]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使气球样变评分为0。
[0306]
在实施例中，治疗独立于确定nas评分而开始。
[0307]
在实施例中，基于替代标志物选择受试者，所述替代标志物与nas评分的组织学评估相平行(例如，生物标志物)。
[0308]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使nas中至少两点改善，而不会使有需要的患者的纤维化恶化。
[0309]
在实施例中，受试者患有肝纤维化。
[0310]
在实施例中，用值0-4对纤维化进行评分/分期(表2)。
[0311]
表2.纤维化评分/分期
[0312][0313]
在实施例中，受试者患有非肝硬化性nash。
[0314]
在实施例中，受试者患有肝硬化性nash。
[0315]
在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为0-3。在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为0。在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为1。在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为2。在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为3。在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为4(肝硬化)。在实施例中，治疗后患者的纤维化阶段评分可以至少不比治疗前的基线评分更差，并且可替代地，纤维化阶段评分可以降低至少一个水平，可替代地至少两个或三个水平。
[0316]
在实施例中，本文所描述的方法和用途不会使受试者的肝纤维化评分(受试者的肝纤维化的稳定)增加。
[0317]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的肝纤维化评分(受试者的肝纤维化的逆转)降低至少一(≥1)。
[0318]
在实施例中，使用增强的肝纤维化测试(elf)评分来表征肝纤维化。在实施例中，肝纤维化的特征在于elf评分小于7.7。在实施例中，肝纤维化的特征在于elf评分大于或等于7.7并且小于9.8。在实施例中，肝纤维化的特征在于elf评分大于9.8。
[0319]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使有需要的患者的纤维化阶段的维持(无恶化)。
[0320]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使有需要的患者的纤维化消退。
[0321]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的肝脏肥大减少。
[0322]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的肝脏胶原水平降低。
[0323]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的肝组织α平滑肌肌动蛋白(α-sma)水平降低。
[0324]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的肝细胞凋亡水平降低。
[0325]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的透明质酸水平降低。
[0326]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的金属蛋白酶组织抑制剂(timp-1)水平降低。
[0327]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的iii型前胶原末端肽(piiinp)水平降低。
[0328]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的可溶性fas配体水平降低。
[0329]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的瘦素水平降低。
[0330]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的天冬氨酸氨基转移酶(ast):血小板指数(apri)降低。
[0331]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的纤维化4(fib-4)评分降低。
[0332]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的肝脏硬度降低。
[0333]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的脂联素水平升高。
[0334]
血清标志物和生物标志物
[0335]
在实施例中，本文所描述的方法和用途中的任何方法和用途使有需要的患者的血清标志物(例如，肝纤维化或nash等肝脏病理的血清标志物)发生变化。因此，在实施例中，基于血清标志物(包含本文所描述的任何血清标志物)的特定表达水平来选择患者。例如，本文所描述的方法对于具有特定(例如，阈值水平)血清标志物(例如，本文所描述的任何血清标志物)的患者特别有益。进一步地，本文所描述的方法可以使血清标志物的有利变化(例如，调节本文所描述的任何血清标志物的水平)。在实施例中，本文所描述的方法可以使升高的血清标志物(例如，本文描述的任何升高的血清标志物)减少。
[0336]
例如，进行对纤维化的无创测量以监测治疗功效可以有助于避免对重复肝脏活检的需要(例如，以鉴定可以受益于本文所描述方法的患者，包含具有本文所描述的任何肝脏病理学的患者，如nash)。在实施例中，血清标志物是fib-4。在实施例中，血清标志物是apri。apri和fib-4评分由以下公布的等式计算(kim等人,《肝脏病学》2013,57:1357)，其中“plt计数”是血小板计数；“ast”是天冬氨酸氨基转移酶，并且正常上限为40iu/ml；并且“alt”是丙氨酸氨基转移酶：
[0337]
apri＝([ast/正常上限]/plt技术[109/l])
[0338]
fib-4＝(年龄[年]x ast[iu/l])/(plt[109/l]x(alt[iu/l])1/2)。
[0339]
因此，示例性血清标志物包含酶，如丙氨酸氨基转移酶(alt)、天冬氨酸氨基转移酶(ast)、碱性磷酸酶(alp)或γ-谷氨酰转移酶(ggt)或其任何组合。在实施例中，患者具有至少一种升高的肝酶。
[0340]
仍其它示例性血清标志物包含：总胆固醇、高密度脂蛋白(hdl)-胆固醇、甘油三酯、胆红素、白蛋白、c肽、载脂蛋白a1、载脂蛋白b、瘦素、脂联素、游离脂肪酸、生长素释放肽和肿瘤坏死因子-α(tnf-α)。
[0341]
在实施例中，受试者具有升高的肝丙氨酸氨基转移酶(alt)水平。在实施例中，本文所描述的方法和用途使肝丙氨酸氨基转移酶(alt)水平降低。在实施例中，受试者的alt水平落在正常水平内(例如，约10-40iu/l)。在实施例中，受试者的alt水平大于约40iu/l。在实施例中，alt不大于约30iu/l(例如，对于男性患者)。在实施例中，alt大于约30iu/l(例如，对于男性患者)。在实施例中，alt不大于约19iu/l(例如，对于女性患者)。在实施例中，alt大于约19iu/l(例如，对于女性患者)。
[0342]
在实施例中，受试者具有升高的肝天冬氨酸氨基转移酶(ast)水平。在实施例中，受试者的ast水平落在正常水平内(例如，约10-35iu/l)。在实施例中，受试者的ast水平大于约30iu/l。在实施例中，受试者的ast水平大于约35iu/l。在实施例中，本文所描述的方法和用途使肝天冬氨酸氨基转移酶(ast)水平降低。
[0343]
在实施例中，测定天冬氨酸氨基转移酶(ast)与丙氨酸氨基转移酶(ast)的比率。在实施例中，患者的ast/alt的比率大于1。在实施例中，患者的ast/alt的比率小于1。
[0344]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的天冬氨酸氨基转移酶(ast)与丙氨酸氨基转移酶(alt)的比率降低。
[0345]
在实施例中，本文所描述的方法和用途使受试者的天冬氨酸氨基转移酶(ast)与丙氨酸氨基转移酶(alt)的比率变化，使得所述比率更接近1。
[0346]
在实施例中，受试者具有升高的碱性磷酸酶(alp)水平。在实施例中，受试者的alt水平落在正常范围内(例如，约20-140iu/l或约37-116iu/l)。在实施例中，受试者的alt水平大于约120iu/l或约140iu/l。在实施例中，受试者的alt水平大于约150iu/l。在实施例中，本文所描述的方法和用途使碱性磷酸酶(alp)水平降低。
[0347]
在实施例中，受试者具有升高的γ-谷氨酰转移酶(ggt)水平。在实施例中，受试者的ggt水平落在正常范围内(例如，约5-30iu/l或约9-48iu/l)。在实施例中，受试者具有ggt。在实施例中，受试者的升高的ggt水平为至少约50iu/l。ggt水平为至多约90iu/l或约100iu/l。在实施例中，本文所描述的方法和用途使ggt水平降低。
[0348]
在实施例中，受试者具有升高的甘油三酯水平。在实施例中，本文所描述的方法和用途使甘油三酯水平降低。
[0349]
在实施例中，受试者具有升高的非酯化脂肪酸(nefa)水平。在实施例中，本文所描述的方法和用途使非酯化脂肪酸(nefa)水平降低。
[0350]
在实施例中，受试者具有升高的胆固醇水平。在实施例中，本文所描述的方法和用途使胆固醇水平降低。
[0351]
在实施例中，受试者具有抑制水平的hdl-胆固醇。
[0352]
肝脏炎症
[0353]
一方面，本发明的特征在于用于治疗(例如，减轻)肝脏炎症的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效量的根据式i的化合物或其药学上可接受的盐。
[0354]
在实施例中，肝脏炎症是小叶炎症。
[0355]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接
受的盐的施用使肝脏炎症评分为0或1。
[0356]
在实施例中，受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0357]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸(化合物(1))或其药学上可接受的盐。在实施例中，式(i)化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐(化合物(1)，二盐酸盐)。
[0358]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸(化合物(2))，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐(化合物(2)，三盐酸盐)。
[0359]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸(化合物(3))，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐(化合物(3)，三盐酸盐)。
[0360]
肝细胞气球样变
[0361]
一方面，本发明的特征在于用于治疗(例如，减轻)肝细胞气球样变的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效量的根据式i的化合物或其药学上可接受的盐。
[0362]
肝细胞气球样变是一类细胞死亡，其视觉特征在于细胞核在细胞中心处或附近的肥大和定位。
[0363]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使气球样变评分为0。
[0364]
在实施例中，受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0365]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸(化合物(1))或其药学上可接受的盐。在实施例中，式(i)化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐(化合物(1)，二盐酸盐)。
[0366]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸(化合物(2))，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐(化合物(2)，三盐酸盐)。
[0367]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸(化合物(3))，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐(化合物(3)，三盐酸盐)。
[0368]
肝纤维化(包含肝硬化)
[0369]
一方面，本发明的特征在于用于治疗肝纤维化的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效量的根据式i的化合物或其药学上可接受的盐。
[0370]
在实施例中，受试者患有2期、3期或4期肝纤维化。
[0371]
在实施例中，受试者患有肝硬化(4期肝纤维化)。
[0372]
在实施例中，受试者的纤维化阶段评分≥1。
[0373]
在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为0-3。
[0374]
在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为0。在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为1。在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为2。在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为3。在实施例中，受试者的纤维化阶段评分为4(肝硬化)。
[0375]
在实施例中，在治疗后，患者的纤维化阶段评分可以至少不比治疗前的基线评分
更差，并且可替代地，纤维化阶段评分可以降低至少一个水平，可替代地至少两个或三个水平。
[0376]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使受试者的肝纤维化稳定。
[0377]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐的施用使受试者的肝纤维化逆转。
[0378]
在实施例中，受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0379]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸(化合物(1))或其药学上可接受的盐。在实施例中，式(i)化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐(化合物(1)，二盐酸盐)。
[0380]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸(化合物(2))，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐(化合物(2)，三盐酸盐)。
[0381]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸(化合物(3))，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐(化合物(3)，三盐酸盐)。
[0382]
脂肪变性
[0383]
一方面，本发明的特征在于用于治疗脂肪变性的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效量的根据式i的化合物或其药学上可接受的盐。
[0384]
在实施例中，式i化合物或其药学上可接受的盐的施用使受试者的脂肪变性减少。
[0385]
在实施例中，脂肪变性包括大泡脂肪变性。在实施例中，脂肪变性包括微泡脂肪变性。在实施例中，脂肪变性包括大泡脂肪变性和微泡脂肪变性。
[0386]
在实施例中，受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0387]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸(化合物(1))或其药学上可接受的盐。在实施例中，式(i)化合物为(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸二盐酸盐(化合物(1)，二盐酸盐)。
[0388]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸(化合物(2))，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((6-氨基己基)氨基)戊酸三盐酸盐(化合物(2)，三盐酸盐)。
[0389]
在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸(化合物(3))，或其药学上可接受的盐。在实施例中，式i化合物为(s)-2-氨基-5-((5-氨基戊基)氨基)戊酸三盐酸盐(化合物(3)，三盐酸盐)。
[0390]
并存病状
[0391]
本文所描述的方法可以用于治疗患有并存病状的受试者。
[0392]
在实施例中，受试者为糖尿病前期。
[0393]
在实施例中，受试者为糖尿病患者。在实施例中，受试者患有2型糖尿病。
[0394]
在实施例中，受试者不是糖尿病患者。在实施例中，受试者未患有2型糖尿病。
[0395]
在实施例中，受试者肥胖。在实施例中，受试者不肥胖。在实施例中，受试者的身体质量指数(bmi)大于30。在实施例中，受试者的bmi小于30。在实施例中，受试者的bmi小于
25。
[0396]
在实施例中，受试者患有血脂异常。在实施例中，受试者未患有血脂异常。
[0397]
在实施例中，受试者患有高血压。在实施例中，受试者未患有高血压。
[0398]
在实施例中，受试者患有胰岛素抵抗。在实施例中，受试者未患有胰岛素抵抗。
[0399]
在实施例中，受试者患有心血管疾病。在实施例中，受试者有患上心血管疾病的风险。在实施例中，受试者未患有心血管疾病。
[0400]
药物组合物
[0401]
另一方面，本发明的特征在于包括根据式i的化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体的药物组合物。“药学上可接受的载体”意指与调配物的其它成分相容并且对接受者无害的任何载体、稀释剂或赋形剂。
[0402]
在本文所描述的方法和用途的实施例中，化合物可以以药物组合物的形式与药学上可接受的载体组合施用。
[0403]
活性剂可以根据药物制剂领域的标准实践配制成剂型。参见alphonso gennaro编辑,《雷明顿氏药学全书(remington's pharmaceutical sciences)》,第18版(1990),宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(mack publishing co.,easton,pa)。合适的剂型可包括例如片剂、胶囊剂、溶液剂、肠胃外溶液剂、锭剂、栓剂或混悬剂。
[0404]
式i的化合物可以方便的方式施用。合适的局部途径包含口服、直肠、吸入(包含鼻)、局部(包含口腔和舌下)、经皮和阴道，例如，穿过表皮。式i化合物也可用于肠胃外给药(包含皮下、静脉内、肌内、皮内、动脉内、鞘内和硬膜外)等。应当理解，所选途径可以因例如接受者的病状而变化。
[0405]
对于肠胃外给药，可以将活性剂与合适的载体或稀释剂例如水、油(特别是植物油)、乙醇、盐水溶液、右旋糖(葡萄糖)水溶液和相关的糖溶液、甘油或二醇诸如丙二醇或聚乙二醇混合。用于肠胃外施用的溶液可以含有活性剂的水溶性盐。还可以添加稳定剂、抗氧化剂和防腐剂。合适的抗氧化剂包含亚硫酸盐、抗坏血酸、柠檬酸及其盐和edta钠。合适的防腐剂包含苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。用于肠胃外给药的组合物可以采取水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳液的形式。
[0406]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐向受试者口服施用。
[0407]
对于口服给药，可以将活性剂与一种或多种固体非活性成分组合以制备片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、颗粒剂或其它合适的口服剂型。例如，可以将活性剂与至少一种赋形剂诸如填充剂、粘结剂、湿润剂、崩解剂、溶液缓聚剂、吸收促进剂、润湿剂、吸收剂或润滑剂组合。根据一个片剂实施例，活性剂可以与羧甲基纤维素(cmc)钙、硬脂酸镁、甘露醇和淀粉结合，并且然后通过常规压片方法形成片剂。
[0408]
本公开的药物组合物还可以调配成使活性成分在其中缓释或控释，例如使用不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供期望的释放曲线、其它聚合物基质、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层涂层、微粒、脂质体和/或微球。
[0409]
通常，控释制剂是能够以所需速率释放活性成分以在期望的时间段内保持恒定药理学活性的药物组合物。这样的剂型在预定的时间段内向身体提供药物供应，因此与常规的非受控调配物相比，将药物水平维持在治疗范围内更长的时间段。
[0410]
美国专利号5,674,533公开了用于施用莫吉司坦(一种有效的外周镇咳药)的液体剂型的控释药物组合物。美国专利号5,059,595描述了通过使用用于治疗器质性精神障碍的抗胃炎片剂的活性剂的控释。美国专利号5,591,767描述了一种用于受控的储液器透皮贴剂。美国专利号5,120,548公开了一种由可溶胀聚合物组成的控释药物递送装置。美国专利号5,073,543描述了含有被神经节苷脂-脂质体媒剂包封的营养因子的控释调配物。美国专利号5,639,476公开了一种来源于疏水性丙烯酸聚合物的水分散体的包衣的稳定固体控释调配物。已知用于控释调配物中的可生物降解的微粒。美国专利号5,733,566描述了释放抗寄生虫组合物的聚合物微粒的用途。
[0411]
活性成分的控释可通过各种诱导物来刺激，例如ph、温度、酶、水或其它生理条件或化合物。存在各种药物释放机制。例如，在一个实施例中，控释组分可溶胀并形成足够大的多孔开口以在向患者施用后释放活性成分。在本公开的上下文中，术语“控制释放的组分”在本文中被定义为促进药物组合物中的活性成分的控制释放的一种或多种化合物，如聚合物、聚合物基质、凝胶、可渗透膜、脂质体和/或微球。在另一个实施例中，控释组分是可生物降解的，通过暴露于人体内的水环境、ph、温度或酶而诱导。在另一个实施例中，可以使用溶胶-凝胶，其中将活性成分掺入在室温下为固体的溶胶-凝胶基质中。将此基质植入体温高到足以诱导溶胶-凝胶基质形成凝胶的患者(例如，哺乳动物)中，从而将活性成分释放到患者体内。
[0412]
用于调配药物组合物的组分具有高纯度并且基本上不含潜在有害污染物(例如，至少是国家食品级，通常至少是分析级，并且更通常至少是药物级)。特别是对于人类消费，所述组合物可以根据美国食品和药物管理局适用法规中定义的优质生产规范标准制造或调配。例如，合适的调配物可以是无菌的和/或基本上等渗的和/或完全符合美国食品和药物管理局的所有药品生产质量管理规范。
[0413]
剂量和剂量方案
[0414]
医生将确定最合适的活性剂剂量，并且将随给药形式和所选的具体化合物而变化，此外，其将根据各种因素而变化，包含但不限于接受治疗的患者以及患者的年龄、所治疗病状的严重性、给药途径等。医师通常希望以显著小于化合物最佳剂量的小剂量开始治疗，并以小增量增加剂量，直到在该情况下达到最佳效果。通常会发现，当口服给药组合物时，将需要较大量的活性剂以产生与较小剂量的肠胃外给药相同的效果。该化合物以与可比较的治疗剂相同的方式使用，并且剂量水平与这些其它治疗剂通常使用的剂量水平为相同的数量级。
[0415]
例如，每日剂量为约2mg/kg/天至约1000mg/kg/天、约10mg/kg/天至约1000mg/kg/天或约10mg/kg/天至约100mg/kg/天。在实施例中，每日剂量为约2mg/kg/天至约1000mg/kg/天。在实施例中，每日剂量为约10mg/kg/天至约1000mg/kg/天。在实施例中，每日剂量为约10mg/kg/天至约100mg/kg/天。
[0416]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐以每日约2-1000mg/kg、10-1000mg/kg或10-100mg/kg的剂量向受试者(例如，人)施用。在实施例中，剂量为每日约10-1000mg/kg。在实施例中，剂量为每日约10-100mg/kg。
[0417]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上
可接受的盐以每日约10mg/kg或更多的总每日剂量向受试者(例如，人)施用。在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐以每日约2mg/kg或更多的总每日剂量向受试者(例如，人)施用。
[0418]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐以每日约100-5000mg、500-5000mg或600-3000mg的总每日剂量向受试者(例如，人)施用。在实施例中，总每日剂量为每日约500-5000mg。在实施例中，总每日剂量为每日约600-3000mg。
[0419]
治疗可以在单个、不间断的疗程中或在离散的疗程中进行所需的较长时间。在实施例中，受试者接受治疗。
[0420]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐向受试者(例如，人)施用持续至少约四周、五周、六周、七周、八周、九周、十周、十一周、十二周、十三周、十四周或十六周的时间段。
[0421]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐向受试者(例如，人)施用持续至少约十四周的时间段。
[0422]
在实施例中，式i化合物(例如，化合物(1)、(2)和(3)中的任一者)或其任何药学上可接受的盐向受试者(例如，人)施用持续至少约4-6周、4-8周、4-10周、4-12周、4-14周或4-16周的时间段。
[0423]
通过以下非限制性实例说明本公开的实践。
[0424]
实例
[0425]
在以下实例中，所有方案都得到机构动物护理和使用委员会(institutional animal care and use committee，iacuc)的批准。采取了所有措施，以确保动物的安康、安全、健康和舒适，并将压力和疼痛降到最低。使用经iacuc批准的安乐死方案执行如尸体剖检等程序。
[0426]
实例1-nash啮齿动物模型的apl和葡萄糖耐量
[0427]
本实验旨在测定(s)-2-氨基-6-((3-氨基丙基)氨基)己酸(apl)对本领域公认的nash模型的葡萄糖耐量受损(igt)的影响。采用以下啮齿动物模型：zucker fa/fa肥胖大鼠和zucker fa/fa苗条大鼠，以及c57bl/6j小鼠。c57bl/6j小鼠是饮食诱导的肥胖症(dio)模型；这些小鼠对致肥胖饮食表现出高敏感性，并且倾向于发展饮食诱导的肝坏死炎症和纤维化。参见例如，liang等人,2014,《公共科学图书馆综合(plos one)》,9(12):e115922；以及london和george,2007,《肝脏疾病临床(clinics in liver disease)》,11(1):55-74。
[0428]
将zucker fa/fa肥胖大鼠和zucker fa/fa苗条大鼠(7周龄雄性动物，获得自美国马萨诸塞州威明顿市的查尔斯河实验室(charles rivers laboratories,wilmington,ma,usa))维持在单独的笼子中(每只笼子1只大鼠，以鼓励啮齿动物活性)，并且其有自由获得标准啮齿类动物食物(目录#5053，获得自密苏里州圣路易斯的实验室饮食公司(labdiet,saint louis,mo))和水(使用hydrapak系统过滤和包装)，持续7天，直到实验开始。将zucker fa/fa肥胖大鼠随机分配到两个组：1)媒剂p.o.b.i.d.(口服施用，一天两次)持续78天(n＝7)；以及2)每千克体重100毫克(mg/kg)apl(p.o.b.i.d.)，持续78天(n＝8)。向zucker fa/fa苗条大鼠(n＝4)施用媒剂(p.o.b.i.d.)，持续78天。将用于溶解apl的溶液磷酸盐缓冲盐水(pbs)用作媒剂溶液。在无菌条件下，用浓度为100mg/ml的pbs溶解apl粉末；
根据每只动物的体重相应地调整体积。除了在葡萄糖耐量测试(gtt)程序期间外，动物自由获得食物和水。
[0429]
将从美国马萨诸塞州巴尔港的杰克逊实验室(jackson laboratories,bar harbor,me,usa)获得的5周龄c57bl/6j雄性小鼠维持在笼子中(每个笼子5只小鼠)，并且其有自由获得标准啮齿类动物食物(目录#5053，获得自密苏里州圣路易斯的实验室饮食公司)和水(使用hydrapak系统过滤和包装)，持续5天，直到实验开始。然后将动物随机分配到五个组(对于每组，n＝5)，从而接受不同的饮食和处理，如表a所示，持续130天。每种处理均以p.o.b.i.d.施用。通过口服强饲向每只动物施用的apl剂量为每千克体重200毫克，每日分成两个剂量，并且每只动物通过口服强饲吡格列酮的剂量为每千克体重20毫克，每日分成两个剂量。“hfd”是高脂肪/高果糖饮食，其含有58％的脂肪、25％的碳水化合物和17％的蛋白质。hfd获得自研究饮食公司(research diets,inc.)。“食物”指标准啮齿动物食物(目录号5053，获得自密苏里州圣路易斯市的实验室饮食)。除了在gtt实验期间，动物随意喂养。
[0430]
表a
[0431]
组食物处理(药物或对照)1食物媒剂2食物apl3hfd媒剂4hfdapl5hfd吡格列酮
[0432]
在实验时间段结束时(对于大鼠为78天，对于小鼠为130天)，使动物经受如下葡萄糖耐量测试(gtt)。将动物禁食5小时，称重，并且剪取其尾部以测量空腹血糖水平。紧接着，口服施用葡萄糖(2mg/g体重)。在葡萄糖施用后0分钟、15分钟、30分钟、45分钟、60分钟和120分钟测量葡萄糖水平。使用来自雅培(abbott)的alphatrak 2血糖仪测量葡萄糖。
[0433]
计算葡萄糖耐量测试数据的曲线下面积(auc)。图1和2中示出了这些数据。图1描绘了大鼠数据。与对照大鼠相比，用媒剂处理的所有肥胖大鼠的gtt的auc显著更高。用apl处理的肥胖大鼠的gtt的auc明显低于用媒剂处理的肥胖大鼠(**p《0.01)。在小鼠中，在第18周开始时(在130天时)进行gtt。图2描绘了小鼠数据。图2a描绘了随时间推移的gtt数据。在15分钟(****p《0.0001)、60分钟(*p《0.05)和120分钟(***p《0.001)时间点时，在阳性对照组与处理组之间观察到显著的统计差异。在0分钟和30分钟(*p《0.05)、45分钟(**p《0.01)以及15分钟、30分钟、60分钟和120分钟(**p《0.0001)时间点时，也观察到阴性对照组与阳性对照组之间的显著差异。阴性对照组与处理组在任何时间点均没有显著的统计学差异。图2b描绘了合并的auc数据。用媒剂溶液处理的hfd饮食小鼠的gtt的auc与对照小鼠(喂食食物并且用媒剂溶液处理)和用hfd喂食并且用apl处理的小鼠两者的gtt的auc相比显著更高(**p《0.01)。
[0434]
葡萄糖耐量受损(igt)和糖尿病是nash的显著合并症。这些数据指示，apl在大鼠nash模型和小鼠nash模型中在统计学上显著改善igt。
[0435]
实例2-高脂肪/高果糖啮齿动物nash模型的apl和肝脏脂肪变性
[0436]
如在实例1中，将c57bl/6小鼠(与实例1相同的小鼠样品)维持在笼子中(每个笼子
5只小鼠)，并且其有自由获得标准啮齿类动物食物(目录#5053，获得自密苏里州圣路易斯的实验室饮食公司)和水(使用hydrapak系统过滤和包装)，持续5天。向c57bl/6j小鼠喂食chow或高脂肪/高果糖饮食(hfd)，并且以口服施用(p.o.)媒剂或apl每日两次(b.i.d.)处理，持续18周。apl剂量为每日每千克200毫克(mg/kg)，按两个每千克体重100毫克(mg/kg)apl施用(p.o.b.i.d.)。动物随意喂食。将动物人道地实施安乐死，并且去除肝脏以进行组织学分析。允许福尔马林中的肝脏样品固定48小时，并且在固定后加工成ffpe块。将载玻片用苏木精和曙红(h&e)染色，并且使用bodipy和dapi免疫染色，以使用共聚焦显微镜检查定量脂肪沉积和核数量。参见例如，rico等人,2007,《细胞生理学杂志(j cell physiol)》,211(2):504-12；以及daemen等人,2016,《分子代谢(mol metab)》,5(3)153-63。图3、4和5中描绘了数据。
[0437]
图3和4描绘了用苏木精和曙红(h&e)染色的肝脏样品。图3描绘了20x放大的肝脏样品。最左边的柱描绘了喂食chow(阴性对照)的小鼠的肝脏样品；中心柱描绘了喂食hfd和媒剂(阳性对照)的小鼠的肝脏样品；最右边的柱描绘了来自喂食hfd并用apl处理(处理)的小鼠的肝脏样品。图4描绘了在100x下的类似肝脏切片。最左边的柱描绘了阴性对照组的肝脏；中心柱描绘了阳性对照组的肝脏；并且最右边的柱描绘了处理组的肝脏。
[0438]
用apl处理的动物的肝脏切片显示出不太严重的肝细胞脂肪累积、炎性浸润和肝细胞气球样变。这些数据表明，apl改善了与nash相关联的显著肝脏损伤。
[0439]
图5a是用chow或高脂肪/高果糖饮食(hfd)喂食、用媒剂或apl每日两次处理的来自c57bl/6j小鼠的肝脏切片的苏木精和曙红(h&e)染色的多个图像的表示。图5a中的左图像展示了在用chow饮食喂食的小鼠中观察到的肝脏的正常解剖结构。通过脂肪累积(白色大斑块)完全改变正常解剖结构，示出了在用hfd喂食并用媒剂溶液处理的小鼠的非酒精性脂肪性肝炎(nash)中观察到的病理基因组变化(图5a，中间图像)。相比之下，如图5a中所示，右图像，即用hfd喂食并用apl处理的小鼠保持肝脏的正常解剖结构。
[0440]
图5b是用来自相同小鼠的肝脏切片的用bodipy和dapi免疫荧光染色的多个图像的展示；并且图5c是来自用dapi染色的免疫荧光载玻片的核的定量。使用operetta cls
tm
(马萨诸塞州沃尔瑟姆的珀金埃尔默公司)的4.6高含量成像和分析软件进行核计数的定量。与用chow喂食的小鼠或用hfd喂食并用apl处理的小鼠相比，用hfd喂食的hfd小鼠具有统计上显著较少数量的核(***p《0.001)。这些数据表明，apl改善了nash的肝细胞死亡(即，气球样变)病理学。
[0441]
图5d是使用共聚焦显微镜检查评估的脂肪沉积的图。在20x放大视野中进行测量。分析来自每组的三只不同动物的超过21个视野：食物-媒剂(视野数＝26)、hfd-媒剂(视野数＝25)和hfd-apl(视野数＝23)。使用imagej(schneider等人,2012,《自然方法》9(7):671-675)的间接测量用于计算脂肪沉积。与chow对照小鼠和hfd/apl处理的小鼠相比，在hfd/媒剂处理的小鼠中脂肪沉积增加3倍(***p《0.001)。这些数据表明，apl减少肝脂肪沉积，并减弱了肝脂肪变性，两者都是nash的特征。
[0442]
肝细胞气球样变和脂肪变性对于nash是特异病征性的，并且指示肝脏损伤与病状相关。这些数据表明，apl显著减少了这些特征，并且有效治疗nash。
[0443]
实例3-高脂肪/高果糖啮齿动物nash模型的apl和非酒精性脂肪肝脏疾病活性评分(nas)
[0444]
将c57bl/6j小鼠维持在笼子中(每个笼子5只小鼠)，并且其有自由获得标准啮齿类动物食物(目录#5053，获得自密苏里州圣路易斯的实验室饮食公司)和水(使用hydrapak系统过滤和包装)，持续5天，直到实验开始。然后将动物随机分配到三个组(对于每组，n＝5)，从而接受不同的饮食和处理，如表b所示，持续130天。每种处理均以p.o.b.i.d.施用。apl剂量为200mg/kg体重。“hfd”是高脂肪/高果糖饮食，如实例1所描述的。“食物”是指如实例1所描述的标准啮齿动物食物。动物随意喂食。
[0445]
表b
[0446]
组食物处理(药物或对照)1食物媒剂2hfd媒剂3hfdapl
[0447]
在测试时间段结束时，将动物人道地实施安乐死，并且去除肝脏以进行组织学分析。允许福尔马林中的肝脏样品固定48小时，并且在固定后加工成ffpe块。将载玻片用苏木精和曙红(h&e)染色。图6a是肝脏切片的苏木精和曙红(h&e)染色的多个图像的表示。这些数据表明，apl减弱了nash的肝脏特异病征性的形态变化。阳性对照组表现出脂肪变性增加，大泡和微泡两者(分别为箭头1和箭头2)。另外，阳性对照组表现出晚期肥大(即，气球样变)和炎性病灶(分别为箭头3和箭头4)。
[0448]
根据nas评分系统评估肝脏样品的肝脏脂肪(脂肪变性)、炎症和肥大。图6b中描绘了nas评分。当与chow/媒剂处理的小鼠相比时，hfd/媒剂处理的小鼠在所有病理参数中的nas评分增加：大泡脂肪变性、微泡脂肪变性、肝肥大和炎性病灶。值得注意的是，apl处理显示出所有参数的统计上的显著改善(***p《0.001)。因此，apl减轻肝脏的肝脂肪变性、炎症和肥大，每种特异病征性肝脏损伤和nash。
[0449]
图7描绘了在nash dio小鼠模型的额外的nash活性评分(nas)数据。图7a描绘了用于喂食chow和施用媒剂的小鼠、喂食hfd和施用媒剂的小鼠以及喂食hfd并用apl(200mg/kg/天，分成2个剂量)处理的小鼠的总nas。这些数据表明，用apl处理显著降低了nas(****p《0.0001)。图7b描绘了脂肪变性、小叶炎症和肝气球样变的nas组成部分评分。这些数据再次证明，用apl处理显著降低了nas的每个组成部分，包含脂肪变性、小叶炎症和肝气球样变(****p《0.0001)。因此，apl减弱了nash的特征中的每个特征(肝脏中的肝脂肪变性、炎症和肥大)、降低总nas并且有效治疗nash。
[0450]
实例4-啮齿动物nash模型的apl和肝纤维化
[0451]
将zucker(fa/fa)肥胖大鼠和zucker(fa/fa)苗条大鼠(7周龄雄性动物，获得自美国马萨诸塞州威明顿市的查尔斯河实验室)维持在单独的笼子中(每只笼子1只大鼠，以鼓励啮齿动物活性)，并且其有自由获得标准啮齿类动物食物(目录#5053，获得自密苏里州圣路易斯的实验室饮食公司)和水(使用hydrapak系统过滤和包装)，持续7天，直到实验开始。将zucker(fa/fa)肥胖大鼠随机分配到两个组：1)媒剂p.o.b.i.d.(口服施用，一天两次)持续78天；以及2)每千克体重100毫克(mg/kg)apl(p.o.b.i.d.)，持续78天。zucker(fa/fa)苗条大鼠充当对照。apl剂量为100mg/kg/天。动物随意喂食。将动物人道地实施安乐死，并且去除肝脏以进行组织学分析。允许福尔马林中的肝脏样品固定48小时，并且在固定后加工成ffpe块。将载玻片用苏木精和曙红(h&e)和马森三色染色染色。
[0452]
图8中描绘了数据。图8a是来自zucker大鼠的苏木精和曙红染色肝脏切片的多个照片之一的展示。左侧图像是来自对照、zucker(fa/fa)苗条大鼠的肝脏的图像，并且示出肝脏的正常形态。中间图像是用媒剂处理的zucker(fa/fa)肥胖大鼠的肝脏的图像，并且右图像是用apl处理的zucker(fa/fa)肥胖大鼠的肝脏的图像。图像清楚地示出由于用媒剂处理的zucker(fa/fa)肥胖大鼠的脂肪累积而在肝组织处的巨大变化(中间图像)。相比之下，用apl处理的zucker(fa/fa)肥胖大鼠保留了肝脏的正常形态(右图像)。
[0453]
图8b是图8a中来自相同zucker大鼠的马森三色的染色肝切片的表示。图8c是图8b的一个区域的放大。在用媒剂处理的zucker(fa/fa)肥胖的放大中有多个蓝色染色胶原纤维明显染色(中间图像)，而在用apl处理的zucker(fa/fa)肥胖大鼠中有最少蓝色染色(右图像)。因此，apl减弱了肝脏拼贴纤维的增加。
[0454]
这些数据指示，apl减弱了肝纤维化，肝纤维化是与晚期和/或重度nash相关的肝脏损伤的特征。因此，apl减弱了肝纤维化的发展，并且有效治疗nash。
[0455]
实例5-啮齿动物(大鼠)nash模型的apl和肝蛋白羰基
[0456]
已经研究了大量氧化应激和抗氧化剂生物标志物，其可用于评估nash的特异病征性状态和进展，包含4-羟基壬烯醛(4-hne)。参见例如，ore等人,2019,《传统医学(考纳斯)(medicina(kaunas))》55(2):26。氧化应激可以通过形成活性羰基(主要是醛和酮)直接或间接地对蛋白质造成不可逆损伤。间接羰基化的过程中最常见的反应性醛是4-hne。apl对4-hne具有高亲和力，并且可以防止4-hne对蛋白质的不利影响，并且有效地减轻胰岛素抵抗。参见wo 2018/049019和美国专利申请公开2019/0192462。
[0457]
将来自实例4中的zucker大鼠的肝脏样品用来自艾博抗公司(abcam)的抗4hne抗体(目录号ab46545)染色，用于4-hne的存在的免疫荧光分析。图9中描绘了数据。图9a是来自施用媒剂的zucker(fa/fa)苗条大鼠、zucker(fa/fa)肥胖大鼠和施用媒剂施用apl的zucker(fa/fa)肥胖大鼠的4-hne免疫荧光肝脏切片的代表性图像。图9b是每组织面积的4hne免疫荧光强度的图，并且图9c是总组织面积的图。这些数据示出，与施用媒剂(***p《0.001)的zucker(fa/fa)肥胖大鼠相比，apl在统计学上显著减少zucker(fa/fa)肥胖大鼠的肝脏中的蛋白羰基并维持总肝脏组织面积。与健康肝脏相比，已知通过产物(如4-hne)的细胞毒性脂质在人nash肝脏中升高。参见例如，serviddio等人,解偶联蛋白-2(ucp2)诱导线粒体质子泄漏并增加非酒精性脂肪性肝炎(nash)肝脏对缺血再灌注损伤的易感性(uncoupling protein-2(ucp2)induces mitochondrial proton leak and increases susceptibility of non-alcoholic steatohepatitis(nash)liver to ischaemia-reperfusion injury).《肠道(gut)》.2008年7月；57(7):957-65.doi:10.1136/gut.2007.147496.电子出版2008年2月28日。数据暗示4-hne在nash的发病机制中起关键作用。进一步地，这些数据表明，用apl处理显著减少了4-hne的存在(***p《0.001)。如本文所公开的，4-hne的这种减少和nash的特征(如脂肪变性、小叶炎症、肝细胞气球化和纤维化)的改善表明4-hne的减少是减弱nash的重要治疗方法。
[0458]
实例6-啮齿动物(小鼠)nash模型的apl和肝蛋白羰基
[0459]
如实例1中所描述的，制备喂食食物并用媒剂处理的c57bl/6j小鼠、喂食hfd并用媒剂处理的c57bi/6j小鼠以及喂食hfd并用apl处理的c57bl/6j小鼠的肝脏样品，并且用来自艾博抗公司的抗4hne抗体(目录号ab46545)染色，以进行4-hne的存在的免疫荧光分析。
apl剂量、施用频率和处理的持续时间如实例1所描述(通过口服强饲向每只动物施用的apl剂量为每千克体重200毫克，分为每日两次剂量；处理持续时间为130天；随意喂养动物)。图10中描绘了数据。图10a是来自喂食食物并用媒剂处理的c57bl/6j小鼠、喂食hfd并用媒剂或apl(tb-019)处理的c57bl/6j小鼠的4-hne免疫荧光肝脏切片的20x或63x放大的代表性图像。图10b是每组织面积的4-hne免疫荧光强度的图。这些数据示出，与喂食hfd和施用媒剂的c57bl/6j小鼠相比，apl(tb-019)在统计学上显著减少喂食hfd的c57bl/6j小鼠的肝脏中的蛋白羰基(***p《0.001)。如本文所公开的，蛋白羰基化的这种减少和nash的特征(如脂肪变性、小叶炎症、肝细胞气球样变和纤维化)的改善表明4-hne的减少是减弱nash的重要治疗方法。
[0460]
nash的病理生理机制涉及肝细胞中游离脂肪酸的增加，其然后导致包含4-羟基壬烯醛(4-hne)的脂质毒性脂质的增加。不拘泥于理论认为，apl治疗nash的功效的机制是基于apl对4-hne的高亲和力，其减少或预防在肝细胞蛋白中的4-nhe的不利影响，包含羰基化。
[0461]
实例7-饮食诱导的小鼠模型的apl和肝脏功能血清标志物
[0462]
将c57bl/6小鼠维持在笼子中，并且其自由获得标准啮齿类动物食物(目录号5053，获得自密苏里州圣路易斯的实验室饮食公司)和水。向c57bl/6j小鼠喂食chow(阴性对照)或胰淀素肝脏nash(amln)饮食(58％的高脂肪、25％的碳水化合物、2％的胆固醇)，持续二十(20)周。从二十(20)周开始，将喂食amln饮食的动物更换为喂食hfd。在五十(50)周时，向动物每日两次(b.i.d.)口服施用(p.o.)媒剂(阳性对照)或apl(处理)。apl剂量为每日每千克50、100或200毫克(mg/kg)，分成两个剂量施用(即，每日两次25mg/kg、每日两次50mg/kg或每日两次100mg/kg)。在六十六(66)周时，采集血清样品，并测定alt、ast、apl、甘油三酯、非酯化脂肪酸和胆固醇。除了胆固醇测试组接受200mg/kg/天之外，所有处理组接受50mg/kg/天。这些结果汇总于图11中。如与阳性对照组动物相比，用apl处理的动物的alt、ast、alp、甘油三酯、非酯化脂肪酸和胆固醇表现出显著降低(*p《0.02；**p＝0.002；***p＝0.0008并且****p《0.0001)。图12汇总了nas和肝纤维化减少的结果。用apl处理的动物表现出nas(***p《0.001)和肝纤维化(*****p《0.0001)显著降低。此数据表明，apl减弱了nas、血清肝脏功能生物标志物和纤维化，并且因此有效治疗nash。
[0463]
本文所引用的每一篇专利、专利申请、genbank记录和公布中的公开内容据此全文以引用方式并入本文。
[0464]
尽管已参考以上实例详细描述了本实施例，但应理解，可以在不脱离这些实施例的精神的情况下进行各种修改，并且本领域的技术人员将容易知道。所附权利要求旨在理解为包含所有此类实施例和等同变型。