30％，温度25-30℃，发酵1-3天。
12.优选的，步骤1中增湿的水中含有0.01％的纤维素酶和0.05％的蛋白酶。
13.优选的，步骤1中发酵温度控制在28℃。
14.优选的，步骤1中发酵氧气浓度维持在45％。
15.优选的，步骤2中发酵氧气浓度维持在25％，发酵10天。
16.优选的，步骤3中发酵氧气浓度维持在3％。
17.优选的，步骤4中发酵二氧化碳浓度为5％，发酵3天。
18.优选的，步骤5中发酵氧气浓度维持在30％，发酵1天。
19.本发明产生的有益效果是：前期好氧发酵，注重发酵质量的提高，提高蛋白质的分解和风味物质的累积，同时可以排出尼古丁等有害物质。后期降氧发酵，控制颜色的加深和弹性变差，风味物质更加丰富和调和；用本发明处理后的烟叶，外观质量颜色均匀，色泽饱满，弹性增强，口感质量有较明显的改善，且醇化过程简单周期短，有很高的使用价值和经济效益。
具体实施方式
20.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
21.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
22.实施例1：
23.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
24.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
25.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡16h后，在温度25℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在30％下发酵3天；
26.步骤2：完成步骤1发酵后，降低氧浓度维持在20％下发酵10天；
27.步骤3：完成步骤2发酵后，充入氮气，使得氧浓度维持在5％，同时升高温度至35℃，发酵5天；
28.步骤4：完成步骤3发酵后，停止充入氮气，改为充入二氧化碳，维持二氧化碳浓度为3％，发酵3天；
29.步骤5：完成步骤4发酵后，停止充入二氧化碳，改为充入氧气，维持浓度为30％，温度25℃发酵3天。
30.实施例2
31.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
32.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
33.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡16h后，在温度25℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在30％下发酵5天；
34.步骤2：完成步骤1发酵后，降低氧浓度维持在20％下发酵10天；
35.步骤3：完成步骤2发酵后，充入氮气，使得氧浓度维持在5％，同时升高温度至35
℃，发酵5天；
36.步骤4：完成步骤3发酵后，停止充入氮气，改为充入二氧化碳，维持二氧化碳浓度为3％，发酵3天；
37.步骤5：完成步骤4发酵后，停止充入二氧化碳，改为充入氧气，维持浓度为30％，温度25℃发酵3天。
38.其中步骤1中的增湿用水溶解含有0.01％的纤维素酶和0.05％的蛋白酶。
39.实施例3
40.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
41.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
42.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡20h后，在温度28℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在45％下发酵3天；
43.步骤2：完成步骤1发酵后，降低氧浓度维持在25％下发酵10天；
44.步骤3：完成步骤2发酵后，充入氮气，使得氧浓度维持在5％，同时升高温度至40℃，发酵4天；
45.步骤4：完成步骤3发酵后，停止充入氮气，改为充入二氧化碳，维持二氧化碳浓度为3％，发酵3天；
46.步骤5：完成步骤4发酵后，停止充入二氧化碳，改为充入氧气，维持浓度为25％，温度28℃发酵2天。
47.其中步骤1中的增湿用水溶解含有0.01％的纤维素酶和0.05％的蛋白酶。
48.实施例4
49.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
50.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
51.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡24h后，在温度30℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在50％下发酵4天；
52.步骤2：完成步骤1发酵后，降低氧浓度维持在20％下发酵5天；
53.步骤3：完成步骤2发酵后，充入氮气，使得氧浓度维持在2％，同时升高温度至42℃，发酵5天；
54.步骤4：完成步骤3发酵后，停止充入氮气，改为充入二氧化碳，维持二氧化碳浓度为5％，发酵3天；
55.步骤5：完成步骤4发酵后，停止充入二氧化碳，改为充入氧气，维持浓度为30％，温度30℃发酵1天。
56.其中步骤1中的增湿用水溶解含有0.01％的纤维素酶和0.05％的蛋白酶。
57.实施例5
58.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
59.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
60.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡24h后，在温度28℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在45％下发酵5天；
61.步骤2：完成步骤1发酵后，降低氧浓度维持在25％下发酵10天；
62.步骤3：完成步骤2发酵后，充入氮气，使得氧浓度维持在3％，同时升高温度至42
℃，发酵5天；
63.步骤4：完成步骤3发酵后，停止充入氮气，改为充入二氧化碳，维持二氧化碳浓度为5％，发酵3天；
64.步骤5：完成步骤4发酵后，停止充入二氧化碳，改为充入氧气，维持浓度为30％，温度28℃发酵1天。
65.其中步骤1中的增湿用水溶解含有0.01％的纤维素酶和0.05％的蛋白酶。
66.对比例1
67.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
68.采用传统的堆积式发酵30天。
69.对比例2
70.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
71.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
72.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡24h后，在温度28℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在30％下发酵15天；
73.步骤2：完成步骤1发酵后，充入氮气使氧气浓度维持在10％，发酵15天。
74.结果分析将实施例1-5和对比例1和2制备的雪茄烟叶依据gb15269.4—2011雪茄烟第4部分感官技术要求进行雪茄烟感官质量评分(采用百分制)，评判项目、分值结果见表1：
75.表1
76.项目色泽风味杂气刺激性余味灰度合计实施例172571715576实施例272781816783实施例382781817785实施例4727.581917785.5实施例582891918789对比例12103810336对比例272471613572
77.从表1中可以看到，对比例1采用传统的堆积式发酵30天，明显发酵时间不足，常规需要至少1年，导致雪茄烟叶比较生，无法使用。本发明的逐步发酵法相较与一般的有氧发酵 无氧发酵2步法制备的雪茄烟烟叶在口感上有明显的改善，尤其是风味、刺激性和余味方面的提升。
78.尼古丁含量测定样品处理：取50g雪茄烟叶样品放在2000ml的单颈烧瓶里，再添加800ml的蒸馏水，接在sde一端，将温度控制在90℃～100℃；另外，再取100ml重蒸乙醚放在500ml的单颈瓶里，接在sde的另一端，保持恒温水浴37℃萃取5h，萃取结束用经活化的硫酸钠对乙醚萃取液脱水，再用旋转蒸发器除去乙醚，最终获得淡黄色透明尼古丁液体。
79.色谱分析：采用日本岛津gc-14b气相色谱仪，db-1色谱柱，氮气作为载气，流量设置50ml/min，氢流量设置50ml/min，柱温140℃。
80.通过标准曲线换算计算样品中尼古丁含量结果如表2：
81.表2
82.项目尼古丁含量实施例112.5mg/g实施例210.7mg/g实施例39.8mg/g实施例49.2mg/g实施例57.8mg/g对比例138.2mg/g对比例214.6mg/g
83.从表2的检测结果可以看到，采用本发明发酵法可以有效降低雪茄烟叶中的尼古丁含量。
84.以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
12.优选的，步骤1中增湿的水中含有0.01％的纤维素酶和0.05％的蛋白酶。
13.优选的，步骤1中发酵温度控制在28℃。
14.优选的，步骤1中发酵氧气浓度维持在45％。
15.优选的，步骤2中发酵氧气浓度维持在25％，发酵10天。
16.优选的，步骤3中发酵氧气浓度维持在3％。
17.优选的，步骤4中发酵二氧化碳浓度为5％，发酵3天。
18.优选的，步骤5中发酵氧气浓度维持在30％，发酵1天。
19.本发明产生的有益效果是：前期好氧发酵，注重发酵质量的提高，提高蛋白质的分解和风味物质的累积，同时可以排出尼古丁等有害物质。后期降氧发酵，控制颜色的加深和弹性变差，风味物质更加丰富和调和；用本发明处理后的烟叶，外观质量颜色均匀，色泽饱满，弹性增强，口感质量有较明显的改善，且醇化过程简单周期短，有很高的使用价值和经济效益。
具体实施方式
20.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
21.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
22.实施例1：
23.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
24.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
25.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡16h后，在温度25℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在30％下发酵3天；
26.步骤2：完成步骤1发酵后，降低氧浓度维持在20％下发酵10天；
27.步骤3：完成步骤2发酵后，充入氮气，使得氧浓度维持在5％，同时升高温度至35℃，发酵5天；
28.步骤4：完成步骤3发酵后，停止充入氮气，改为充入二氧化碳，维持二氧化碳浓度为3％，发酵3天；
29.步骤5：完成步骤4发酵后，停止充入二氧化碳，改为充入氧气，维持浓度为30％，温度25℃发酵3天。
30.实施例2
31.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
32.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
33.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡16h后，在温度25℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在30％下发酵5天；
34.步骤2：完成步骤1发酵后，降低氧浓度维持在20％下发酵10天；
35.步骤3：完成步骤2发酵后，充入氮气，使得氧浓度维持在5％，同时升高温度至35
℃，发酵5天；
36.步骤4：完成步骤3发酵后，停止充入氮气，改为充入二氧化碳，维持二氧化碳浓度为3％，发酵3天；
37.步骤5：完成步骤4发酵后，停止充入二氧化碳，改为充入氧气，维持浓度为30％，温度25℃发酵3天。
38.其中步骤1中的增湿用水溶解含有0.01％的纤维素酶和0.05％的蛋白酶。
39.实施例3
40.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
41.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
42.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡20h后，在温度28℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在45％下发酵3天；
43.步骤2：完成步骤1发酵后，降低氧浓度维持在25％下发酵10天；
44.步骤3：完成步骤2发酵后，充入氮气，使得氧浓度维持在5％，同时升高温度至40℃，发酵4天；
45.步骤4：完成步骤3发酵后，停止充入氮气，改为充入二氧化碳，维持二氧化碳浓度为3％，发酵3天；
46.步骤5：完成步骤4发酵后，停止充入二氧化碳，改为充入氧气，维持浓度为25％，温度28℃发酵2天。
47.其中步骤1中的增湿用水溶解含有0.01％的纤维素酶和0.05％的蛋白酶。
48.实施例4
49.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
50.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
51.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡24h后，在温度30℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在50％下发酵4天；
52.步骤2：完成步骤1发酵后，降低氧浓度维持在20％下发酵5天；
53.步骤3：完成步骤2发酵后，充入氮气，使得氧浓度维持在2％，同时升高温度至42℃，发酵5天；
54.步骤4：完成步骤3发酵后，停止充入氮气，改为充入二氧化碳，维持二氧化碳浓度为5％，发酵3天；
55.步骤5：完成步骤4发酵后，停止充入二氧化碳，改为充入氧气，维持浓度为30％，温度30℃发酵1天。
56.其中步骤1中的增湿用水溶解含有0.01％的纤维素酶和0.05％的蛋白酶。
57.实施例5
58.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
59.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
60.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡24h后，在温度28℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在45％下发酵5天；
61.步骤2：完成步骤1发酵后，降低氧浓度维持在25％下发酵10天；
62.步骤3：完成步骤2发酵后，充入氮气，使得氧浓度维持在3％，同时升高温度至42
℃，发酵5天；
63.步骤4：完成步骤3发酵后，停止充入氮气，改为充入二氧化碳，维持二氧化碳浓度为5％，发酵3天；
64.步骤5：完成步骤4发酵后，停止充入二氧化碳，改为充入氧气，维持浓度为30％，温度28℃发酵1天。
65.其中步骤1中的增湿用水溶解含有0.01％的纤维素酶和0.05％的蛋白酶。
66.对比例1
67.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
68.采用传统的堆积式发酵30天。
69.对比例2
70.原料选取海南雪茄烟，茄衣中部二级。
71.一种雪茄烟叶醇化的方法，包括如下步骤：
72.步骤1：将雪茄烟叶加水增湿至含水率为20-30％，平衡24h后，在温度28℃、相对湿度70-80％、氧气浓度维持在30％下发酵15天；
73.步骤2：完成步骤1发酵后，充入氮气使氧气浓度维持在10％，发酵15天。
74.结果分析将实施例1-5和对比例1和2制备的雪茄烟叶依据gb15269.4—2011雪茄烟第4部分感官技术要求进行雪茄烟感官质量评分(采用百分制)，评判项目、分值结果见表1：
75.表1
76.项目色泽风味杂气刺激性余味灰度合计实施例172571715576实施例272781816783实施例382781817785实施例4727.581917785.5实施例582891918789对比例12103810336对比例272471613572
77.从表1中可以看到，对比例1采用传统的堆积式发酵30天，明显发酵时间不足，常规需要至少1年，导致雪茄烟叶比较生，无法使用。本发明的逐步发酵法相较与一般的有氧发酵 无氧发酵2步法制备的雪茄烟烟叶在口感上有明显的改善，尤其是风味、刺激性和余味方面的提升。
78.尼古丁含量测定样品处理：取50g雪茄烟叶样品放在2000ml的单颈烧瓶里，再添加800ml的蒸馏水，接在sde一端，将温度控制在90℃～100℃；另外，再取100ml重蒸乙醚放在500ml的单颈瓶里，接在sde的另一端，保持恒温水浴37℃萃取5h，萃取结束用经活化的硫酸钠对乙醚萃取液脱水，再用旋转蒸发器除去乙醚，最终获得淡黄色透明尼古丁液体。
79.色谱分析：采用日本岛津gc-14b气相色谱仪，db-1色谱柱，氮气作为载气，流量设置50ml/min，氢流量设置50ml/min，柱温140℃。
80.通过标准曲线换算计算样品中尼古丁含量结果如表2：
81.表2
82.项目尼古丁含量实施例112.5mg/g实施例210.7mg/g实施例39.8mg/g实施例49.2mg/g实施例57.8mg/g对比例138.2mg/g对比例214.6mg/g
83.从表2的检测结果可以看到，采用本发明发酵法可以有效降低雪茄烟叶中的尼古丁含量。
84.以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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