一种大规模提取筋腱中胶原的方法及应用

技术特征：
1.一种大规模提取筋腱中胶原的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将动物筋腱去除脂肪和碎肉，切碎后绞碎；2)配制碱液，再将绞碎后的动物筋腱置于碱液中浸泡，得到混合物；3)分离步骤2)混合物中的固体和溶液，固体为胶原；4)取出步骤3)的胶原继续加入碱液浸泡；5)重复步骤3)和步骤4)，直至固体完全发胀溶解，过滤后得到含胶原的溶液；6)对步骤5)收集的含胶原的溶液进行过滤，得到胶原浓缩液；7)在步骤6)的胶原浓缩液中加入缓冲液进行稀释，再进行过滤浓缩，得到浓缩的胶原溶液；8)在胶原溶液中加入ph调节剂，调节ph为1～5，再加入胃蛋白酶进行酶解；9)对酶解后的胶原溶液进行过滤，再加入ph调节剂和缓冲液进行稀释，重复过滤和稀释，得到胶原蛋白溶液。2.如权利要求1所述的大规模提取筋腱中胶原的方法，其特征在于，还包括步骤10)对胶原蛋白溶液进行胶原蛋白含量值的测定和过滤除菌，再验证胶原蛋白的生物活性。3.如权利要求1所述的大规模提取筋腱中胶原的方法，其特征在于，步骤1)中，将动物筋腱切碎至0.1～1cm，再用绞肉机进行绞碎，重复1～5次。4.如权利要求1所述的大规模提取筋腱中胶原的方法，其特征在于，所述碱液选用浓度为10～300nm的naoh溶液；所述缓冲液选用浓度为0.05～0.1mol/l的pbs溶液，所述ph调节剂选用5～50mmol/l的乙酸溶液。5.如权利要求1所述的大规模提取筋腱中胶原的方法，其特征在于，步骤2)中，动物筋腱与所述碱液的质量比为1：(1～50)，浸泡温度为2～25℃，浸泡时间为24～48小时。6.如权利要求1所述的大规模提取筋腱中胶原的方法，其特征在于，步骤5)中，重复对碱液浸泡动物筋腱和过滤步骤至少2次；过滤选用50～300目的不锈钢筛网。7.如权利要求1所述的大规模提取筋腱中胶原的方法，其特征在于，步骤7)中，采用缓冲液将胶原浓缩液稀释3～40倍，再过滤使得胶原溶液浓缩3～40倍，重复稀释和过滤步骤1～10次。8.如权利要求1所述的大规模提取筋腱中胶原的方法，其特征在于，步骤8)中，胃蛋白酶的加入量为0.01～0.1g/100ml胶原溶液；酶解的温度为15～25℃，时间为1～3天。9.如权利要求1所述的大规模提取筋腱中胶原的方法，其特征在于，步骤9)中，对酶解后的胶原溶液采用纱布过滤；所述缓冲液和ph调节剂加入的体积量为所述胶原溶液的5～40倍；采用孔径为10～300k的中空纤维柱孔进行过滤，浓缩5～40倍，重复稀释和过滤步骤2～10次。10.一种大规模提取筋腱中胶原的应用，其特征在于，所述胶原由权利要求1～9任一项所述的方法提取得到，所述胶原用于细胞培养。

技术总结
本发明公开了一种大规模提取筋腱中胶原的方法及应用，首先将动物筋腱绞碎，先将动物筋腱置于碱液中浸泡，过滤，收集筋腱，重复浸泡和过滤若干次后，过滤得到含有胶原的溶液，再进行过滤，得到胶原浓缩液；在胶原浓缩液中加入缓冲液进行稀释，重复过滤稀释和浓缩步骤若干次，过滤浓缩后得到胶原溶液，再调节pH，然后进行酶解，酶解后进行过滤；再进行稀释，继续重复过滤浓缩和稀释步骤若干次，过滤后得到胶原蛋白溶液。该提取方法将碱法提取、酸法提取和酶法提取结合，能有效提取动物筋腱中的胶原蛋白且不损害有效成分，适合产业化大规模提取。利用上述提取方法得到胶原蛋白生物活性高，能够很好地促进细胞贴壁和延伸，适用于细胞培养。养。


技术研发人员：刘郁夫 徐家华 冯少珍 陈瑞爱
受保护的技术使用者：广东益朗生物科技有限公司 华南农业大学
技术研发日：2022.04.02
技术公布日：2022/12/1