一种超分子琥珀酸溶剂、超分子改性弹性蛋白及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于化妆品技术领域，涉及一种超分子琥珀酸溶剂、超分子改性弹性蛋白及其制备方法和应用，尤其涉及一种能将活性分子递送到皮肤深层发挥作用，又不会对皮肤产生刺激的超分子琥珀酸溶剂、超分子改性弹性蛋白及其制备方法和应用。


背景技术：

2.弹性蛋白是弹性纤维的重要组成，它们主要存在于韧带和脉管壁，只占真皮总蛋白的2％，但能够赋予组织弹性和抗张能力，对皮肤弹性和柔软度起着非常重要的作用。随着内源性和外源性老化带来的皮肤衰老，弹性蛋白会逐渐分解，而它的缺失会引起皮肤松弛、下垂和产生细皱纹等不良后果。而弹性蛋白的再生和补充，则会抑制皮肤衰老的进程，防止老化问题的产生。因此，化妆品领域中的弹性蛋白的应用，可以达到保持肌肤年轻、细腻、有弹性的作用。
3.例如cn114081858a公开了一种焕颜抗衰面膜及其制备方法，所述焕颜抗衰面膜包括如下原料组分：水、甘油、丁二醇、海藻糖、羟乙基脲、木糖醇基葡糖苷、脱水木糖醇、木糖醇、芦荟提取物、龙胆根提取物、丙二醇、牛油果树果脂、薰衣草油、水解角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白、1,2-己二醇、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/vp共聚物、精氨酸、卡波姆、edta二钠。所述焕颜抗衰面膜能够有效补水保湿，提高皮肤弹性，保持肌肤紧致，防止肌肤暗沉，进而起到年轻化肌肤的作用。
4.虽然弹性蛋白具有多种出色的生物活性，但因其自身的分子量，极性等原因，很难被皮肤直接吸收，以至于难以发挥其特有的功效。因此，开发一种既能将弹性蛋白递送到皮肤深层发挥作用，又不会对皮肤产生刺激等不良影响的递送载体具有非常重要的应用价值。


技术实现要素：

5.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种超分子琥珀酸溶剂、超分子改性弹性蛋白及其制备方法和应用，尤其提供一种能将活性分子递送到皮肤深层发挥作用，又不会对皮肤产生刺激的超分子琥珀酸溶剂、超分子改性弹性蛋白及其制备方法和应用。
6.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
7.第一方面，本发明提供一种超分子琥珀酸溶剂，所述超分子琥珀酸溶剂由甜菜碱与琥珀酸反应得到。
8.本发明创造性地开发了一种由甜菜碱与琥珀酸反应得到的离子液体，即所述超分子琥珀酸溶剂，该离子液体具有良好的皮肤促渗透作用，且安全温和，其可以作为一种递送载体将经皮递送效率低下、生物利用率低的护肤活性分子顺利递送到皮肤深层，提高其生物利用度。
9.优选地，所述甜菜碱与琥珀酸的摩尔比为1:6-6:1，例如1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:
1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
10.第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述的超分子琥珀酸溶剂的制备方法，所述制备方法包括：将甜菜碱与琥珀酸分别溶于溶剂中，在搅拌状态下将琥珀酸溶液滴入甜菜碱溶液中，反应，除去溶剂，即得。
11.本发明所涉及的超分子琥珀酸溶剂的制备方法简单易操作，且适合大规模化的工业生产。其按照下述具体工艺参数进行制备时，得到的产物具有更稳定和更显著的促渗透作用。
12.优选地，所述反应在惰性气体保护下进行，所述惰性气体包括氩气、氦气或氮气。
13.优选地，所述反应在20-80℃(例如20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃等)水浴中进行5-24h(例如5h、10h、15h、18h、20h、24h等)；该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
14.优选地，所述除去溶剂的方式为真空干燥。
15.第三方面，本发明提供如第一方面所述的超分子琥珀酸溶剂在制备促渗透载体中的应用。
16.第四方面，本发明提供如第一方面所述的超分子琥珀酸溶剂在制备超分子改性活性分子中的应用，所述活性分子包括弹性蛋白和/或胶原蛋白。
17.第五方面，本发明提供一种超分子改性弹性蛋白，所述超分子改性弹性蛋白由第一方面所述的超分子琥珀酸溶剂包载弹性蛋白得到。
18.本发明所涉及的超分子改性弹性蛋白能够克服弹性蛋白经皮递送效率低下、生物利用率低的问题，能够将弹性蛋白顺利递送到皮肤深层，提高生物利用度，且其具有良好的生物安全性和稳定性，为弹性蛋白在化妆品领域的广阔应用提供了简单且成本低廉的有效手段。
19.第六方面，本发明提供一种根据第五方面所述的超分子改性弹性蛋白的制备方法，所述制备方法包括：将弹性蛋白滴入超分子琥珀酸溶剂中，混合，即得。
20.优选地，所述混合在搅拌状态15-40℃(例如15℃、18℃、20℃、25℃、30℃、40℃等)下进行1-20h(例如1h、4h、6h、8h、10h、15h、20h等)；该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
21.优选地，所述混合在惰性气体保护下进行，所述惰性气体包括氩气、氦气或氮气。
22.第七方面，本发明提供一种如第一方面所述的超分子琥珀酸溶剂或第五方面所述的超分子改性弹性蛋白在制备化妆品中的应用。
23.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
24.本发明创造性地开发了一种由甜菜碱与琥珀酸反应得到的离子液体，即所述超分子琥珀酸溶剂，该离子液体具有良好的皮肤促渗透作用，且安全温和，其可以作为一种递送载体将经皮递送效率低下、生物利用率低的护肤活性分子顺利递送到皮肤深层，提高其生物利用度。且本发明所涉及的超分子改性弹性蛋白能够克服弹性蛋白经皮递送效率低下、生物利用率低的问题，能够将弹性蛋白顺利递送到皮肤深层，提高生物利用度，且其具有良好的生物安全性和稳定性，为弹性蛋白在化妆品领域的广阔应用提供了简单且成本低廉的有效手段。
附图说明
25.图1是实施例1制得的超分子琥珀酸溶剂的核磁氢谱图。
具体实施方式
26.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
27.下述涉及的活性分子弹性蛋白、胶原蛋白均购自于深圳市萱嘉生物科技有限公司。
28.实施例1
29.本实施例提供一种超分子琥珀酸溶剂和一种超分子改性弹性蛋白，制备方法如下：
30.(1)称取0.01mol的甜菜碱溶于水中，并另称取0.01mol的琥珀酸溶于水中，将所述琥珀酸溶液混合均匀后转移至滴液漏斗中，在25℃搅拌状态下逐滴滴入甜菜碱溶液中，滴加完毕后，在氮气保护下转移到30℃水浴中反应24h，反应结束后真空干燥12h去除水，得到超分子琥珀酸溶剂。其核磁氢谱图如图1所示。
31.(2)在氮气氛围下，将上述超分子琥珀酸溶剂溶于水后滴入0.01mg弹性蛋白，在25℃下搅拌4h，浓缩干燥6h，即可得到超分子改性弹性蛋白。
32.实施例2
33.本实施例提供一种超分子琥珀酸溶剂和一种超分子改性弹性蛋白，制备方法如下：
34.(1)称取0.01mol的甜菜碱溶于水中，并另称取0.03mol的琥珀酸溶于水中，将所述琥珀酸溶液混合均匀后转移至滴液漏斗中，在25℃搅拌状态下逐滴滴入甜菜碱溶液中，滴加完毕后，在氩气保护下转移到40℃水浴中反应18h，反应结束后真空干燥24h去除水，得到超分子琥珀酸溶剂。
35.(2)在氩气氛围下，将上述超分子琥珀酸溶剂溶于水后滴入0.01mg弹性蛋白，在35℃下搅拌6h，浓缩干燥6h，即可得到超分子改性弹性蛋白。
36.实施例3
37.本实施例提供一种超分子琥珀酸溶剂和一种超分子改性弹性蛋白，制备方法如下：
38.(1)称取0.01mol的甜菜碱溶于水中，并另称取0.06mol的琥珀酸溶于水中，将所述琥珀酸溶液混合均匀后转移至滴液漏斗中，在25℃搅拌状态下逐滴滴入甜菜碱溶液中，滴加完毕后，在氩气保护下转移到50℃水浴中反应12h，反应结束后真空干燥24h去除水，得到超分子琥珀酸溶剂。
39.(2)在氩气氛围下，将上述超分子琥珀酸溶剂溶于水后滴入0.01mg弹性蛋白，在20℃下搅拌15h，浓缩干燥6h，即可得到超分子改性弹性蛋白。
40.实施例4
41.本实施例提供一种超分子琥珀酸溶剂和一种超分子改性弹性蛋白，制备方法如下：
42.(1)称取0.03mol的甜菜碱溶于水中，并另称取0.01mol的琥珀酸溶于水中，将所述
琥珀酸溶液混合均匀后转移至滴液漏斗中，在25℃搅拌状态下逐滴滴入甜菜碱溶液中，滴加完毕后，在氩气保护下转移到60℃水浴中反应5h，反应结束后真空干燥24h去除水，得到超分子琥珀酸溶剂。
43.(2)在氩气氛围下，将上述超分子琥珀酸溶剂溶于水后滴入0.01mg弹性蛋白，在30℃下搅拌8h，浓缩干燥6h，即可得到超分子改性弹性蛋白。
44.实施例5
45.本实施例提供一种超分子琥珀酸溶剂和一种超分子改性弹性蛋白，制备方法如下：
46.(1)称取0.06mol的甜菜碱溶于水中，并另称取0.01mol的琥珀酸溶于水中，将所述琥珀酸溶液混合均匀后转移至滴液漏斗中，在25℃搅拌状态下逐滴滴入甜菜碱溶液中，滴加完毕后，在氩气保护下转移到20℃水浴中反应24h，反应结束后真空干燥24h去除水，得到超分子琥珀酸溶剂。
47.(2)在氩气氛围下，将上述超分子琥珀酸溶剂溶于水后滴入0.01mg弹性蛋白，在25℃下搅拌10h，浓缩干燥6h，即可得到超分子改性弹性蛋白。
48.实施例6
49.本实施例提供一种超分子琥珀酸溶剂和一种超分子改性胶原蛋白，制备方法与实施例1的区别仅在于将0.01mg弹性蛋白替换为0.01mg胶原蛋白，其他条件均保持不变。
50.对比例1
51.本对比例提供一种超分子谷氨酸溶剂和一种超分子改性弹性蛋白，制备方法与实施例1的区别仅在于将0.01mol的琥珀酸替换为0.01mol的谷氨酸，其他条件均保持不变。
52.对比例2
53.本对比例提供一种超分子甘氨酸溶剂和一种超分子改性弹性蛋白，制备方法与实施例1的区别仅在于将0.01mol的琥珀酸替换为0.01mol的甘氨酸，其他条件均保持不变。
54.对比例3
55.本对比例提供单纯的超分子琥珀酸溶剂，制备方法同实施例1。
56.对比例4
57.本对比例提供单纯的弹性蛋白单体，制备方法同实施例1。
58.对比例5
59.本对比例提供单纯的胶原蛋白单体，制备方法同实施例1。
60.测试例1
61.生物安全性评价：
62.操作方法：使用不同浓度待测样品处理角质形成细胞后，按照碧云天生物科技有限公司的cck-8细胞增殖检测试剂盒进行实验操作，通过酶标仪进行定量分析，测定各组的细胞活力。
63.测试结果如表1所示：
64.表1
65.组别0.1μg/ml50μg/ml200μg/ml800μg/ml实施例199.83％99.65％97.63％98.77％实施例298.87％99.23％97.89％99.01％
实施例398.93％98.65％98.93％98.77％实施例498.97％98.23％99.29％98.11％实施例597.87％99.13％97.89％97.31％实施例699.93％98.15％98.93％98.77％对比例198.87％99.73％98.29％98.01％对比例297.93％98.55％96.93％97.77％对比例398.87％99.27％97.89％98.61％对比例498.93％98.65％98.93％98.17％
66.由表1数据可知：本发明所涉及的超分子琥珀酸溶剂、超分子改性弹性蛋白的细胞毒性很低，生物安全性高。
67.测试例2
68.皮肤渗透试验：
69.操作方法：以离体迷你香猪皮肤为模型，通过franz扩散池，在32
±
0.1℃条件下，以350r/min进行体外皮肤渗透实验，检测弹性蛋白或胶原蛋白在24h时的累积透皮量(μg/cm2)，以此评价超分子弹性蛋白的皮肤渗透性能。测试结果如表2所示：
70.表2
71.组别皮下角质层实施例168.5713.32实施例262.5710.46实施例359.2111.89实施例459.7813.21实施例556.1210.78实施例651.399.87对比例140.769.34对比例237.218.89对比例45.2110.39对比例53.218.87
72.由表2数据可知：本发明所涉及的超分子琥珀酸溶剂能够大幅度提高活性分子的经皮渗透量，其中弹性蛋白在皮肤中的滞留量显著地大于弹性蛋白单体，其中胶原蛋白在皮肤中的滞留量显著地大于胶原蛋白单体。
73.测试例3
74.促进胶原蛋白效果评价试验：
75.操作方法：用不同的待测样品(弹性蛋白浓度为5000ppm)处理角质形成细胞24h，对照组使用pbs溶液进行处理，实验组使用过氧化氢溶液(浓度200μm) 各组样品溶液进行处理，按照金属基质酶i(mmp-1)elisa检测试剂盒检测mmp-1进行测定，使用酶标仪进行定量评估。
76.测试结果如表3所示：
77.表3
78.组别金属基质酶ⅰ(％对照)
对照组100过氧化氢145.1实施例1117.2实施例2118.9实施例3121.3实施例4120.02实施例5124.9对比例1129.7对比例2122.65对比例4120.87
79.由表3数据可知：与对比例相比，本发明所涉及的超分子改性弹性蛋白具有更优异的抑制金属基质酶ⅰ、促进胶原蛋白产生及抗皱的效果。
80.申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种超分子琥珀酸溶剂、超分子改性弹性蛋白及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
81.以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
82.另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。