脐带间充质干细胞的分离培养方法与流程

技术特征：
1.一种脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：取脐带组织并经清洗处理后得到组织块；向所述组织块中加入混合酶溶液，处理第一预设时间后，再加入胶原酶i溶液，处理第二预设时间后离心并去除上清液，得到细胞沉淀；将所述细胞沉淀清洗后置于培养基中培养，得到脐带间充质干细胞；所述混合酶溶液包括弹性蛋白酶和中性蛋白酶，所述弹性蛋白酶和中性蛋白酶的质量比为(3～4)：1。2.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述混合酶溶液由弹性蛋白酶和中性蛋白酶组成，所述弹性蛋白酶和中性蛋白酶的质量比为(3.1～3.5)：1。3.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，向所述组织块中加入质量浓度为0.6g/l～0.8g/l的混合酶溶液；所述第一预设时间为30min～50min。4.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述胶原酶i溶液的浓度为1mg/ml～3mg/ml；所述第二预设时间为15min～20min。5.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述混合酶溶液与所述胶原酶i溶液按照(3.5～5)：1的体积比加入。6.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述离心并去除上清液过程中，离心转速为500rpm～700rpm，离心时间为20min～30min。7.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述取脐带组织并经清洗处理后得到组织块，具体包括以下步骤：取脐带组织，洗去组织块表面的血液和杂质，沿脐带静脉腔纵向剪开，剔除动脉和静脉；撕取脐带组织内的沃顿胶组织并清洗，然后将所述沃顿胶组织剪碎成2mm3～4mm3的样品块，清洗杂质后用pbs缓冲液处理，得到组织块。8.如权利要求7所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，取脐带组织，放入含1wt％～3wt％青霉素和1wt％～3wt％硫酸链霉素的pbs溶液中清洗3次～5次，每次4min～6min，洗去组织块表面的血液和杂质，沿脐带静脉腔纵向剪开，剔除动脉和静脉；撕取脐带组织内的沃顿胶组织并清洗，将所述沃顿胶组织剪碎成2mm3～4mm3的组织块，用无菌水冲洗20min～30min，洗去杂质后用pbs缓冲液处理4次～6次，每次5min～7min，得到组织块。9.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述培养基为含5wt％～7wt％胎牛血清的dmem培养基。10.如权利要求1所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，将所述细胞沉淀清洗后置于培养基中，然后置于温度为35℃～37℃、4.5％～5.5％co2饱和湿度的培养箱内培养，每隔48h换一次培养液。

技术总结
本发明公开了一种脐带间充质干细胞的分离培养方法，取脐带组织并经清洗处理后得到组织块；向所述组织块中加入混合酶溶液，处理第一预设时间后，再加入胶原酶I溶液，处理第二预设时间后离心并去除上清液，得到细胞沉淀；将所述细胞沉淀清洗后置于培养基中培养，得到脐带间充质干细胞；所述混合酶溶液包括弹性蛋白酶和中性蛋白酶，所述弹性蛋白酶和中性蛋白酶的质量比为(3～4)：1。本发明提供的分离培养方法操作简单，成本低，有利于脐带间充质干细胞的大规模培养。的大规模培养。的大规模培养。


技术研发人员：唐淑艳 刘小翠 蒙燕瑶 魏丽梅 冯嘉琨 许峻荣
受保护的技术使用者：广东唯泰生物科技有限公司
技术研发日：2022.08.29
技术公布日：2022/11/29