μ-阿片受体激动剂及其制备方法和在医药领域的应用与流程

μ-阿片受体激动剂及其制备方法和在医药领域的应用
1.本技术是申请日为2018年09月17日、申请号为201811083349.0、发明名称为“μ-阿片受体激动剂及其制备方法和在医药领域的应用”的发明申请的分案申请。
技术领域
2.本发明属于药物化学领域，具体涉及一类氧杂螺环类小分子化合物及其制备方法和在医药领域的应用。


背景技术：

3.阿片类受体属于g蛋白偶联受体(gpcr)家族成员之一，在中枢神经系统中高度表达，通过中枢神经系统调控机体的一系列行为，包括痛觉、情感、应激反应等，主要有3种亚型:μ阿片受体(mor)、δ阿片受体(dor)、κ阿片受体(kor)(nature,2016,537(7619):185)。阿片受体激动剂是目前最为广泛使用的镇痛药，其中作用于μ-阿片受体(μ-opioid receptor,mor)的激动剂具有镇痛活性强、抗痛谱广的优点，在中度和重度疼痛治疗中具有不可替代的作用。
4.mor激动剂吗啡是从罂粟中提取的天然产物，作为镇痛药治疗急性重度疼痛已经有上百年的历史，在此之后，种类繁多的吗啡衍生物和合成化合物如羟考酮、氢吗啡酮、羟吗啡酮、左啡诺、丁丙诺啡、芬太尼、舒芬太尼、哌替啶等作为mor激动剂被开发成为临床用镇痛药，虽然这些mor激动剂具有强效的镇痛作用，但所有化合物均表现出了相似的临床副作用：便秘、恶心、呕吐、镇静、呼吸抑制等，此外，这些mor激动剂诱导的欣愉和躯体依赖极易产生成瘾性和滥用，从而引发社会性问题(journal of medicinal chemistry,2013,56(20):8019-31)，mor激动剂的长期使用还会导致镇痛耐受，需要剂量递增来控制疼痛，从而进一步增加上述的临床副作用(anasthesiol intensivmed notfallmed schmerzther.2003,38,14-26.)。
5.包括mor激动剂在内的大部分gpcr激动剂除了偶联g蛋白亚基激活g蛋白信号通路外，还可以激活其它信号通路，其中激活由β-arrestin介导的信号通路影响较大，β-arrestin可以结合到活化的gpcr上，使gpcr发生受体脱敏反应，中止g蛋白信号传导；β-arrestin还可以募集胞吞蛋白，诱导gpcr内吞；与gpcr下游信号分子形成复合物，激活其它信号传导分子，如mapk、src等激酶。近年来研究发现，β-arrestin通路与mor激动剂多个副作用相关，如便秘、呼吸抑制和镇痛耐受(science 1999,286,2495-2498；j.pharmacol.exp.ther.2005,314,1195-1201)。因此，研发一种可选择性激活g蛋白信号通路的“偏向性”mor激动剂药物，可降低β-arrestin介导的副作用，具有显著的临床价值和社会意义。
6.目前已有trevena inc公司申请的专利wo2012129495和江苏恒瑞医药有限公司的wo2017063509公开了一系列g蛋白偏向性mor激动剂，两个专利所公开化合物均为氧杂螺环类衍生物，trevena inc公司的化合物对g蛋白信号通路的选择性有限(j.med.chem.2013,56,8019-8031)，而在江苏恒瑞医药有限公司的专利wo2017063509中将化合物芳基的苄位
成环，化合物的emax提高，但g蛋白信号通路的选择性仍然有限，虽然目前已经公开了一系列g蛋白偏向性mor激动剂的专利，但仍需要开发新的具有更好的药效、选择性、药物代谢结果的mor激动剂。


技术实现要素：

7.针对现有技术的需求，发明人重新设计并合成了一类mor激动剂，该类化合物对g蛋白信号通路的选择性显著提高。
8.本发明的目的在于提供一种通式(i)所示的化合物，以及它们的立体异构体、互变异构体、对映体、非对映体、消旋体和可药用的盐
[0009][0010]
其中，
[0011]
ar1为取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基；ar1具体可为苯基、吡啶基、被取代的苯基、或被取代的吡啶基，其中所述苯基或所述吡啶基任选的被下列一个或多个取代基所取代：-c
1-3
烷基、-c
1-3
烷氧基或卤素；
[0012]
a为-c
1-2
亚烷基，或为被c
1-3
烷基取代的-c
1-2
亚烷基时，b为-nh-ch
2-ar2、-nh-c(o)-ar2或-nr1r2，其中r1和r2连同它们所连接的氮原子一起形成被t取代或未被取代的6-12元的杂芳基；
[0013]
t为-oh、-c
1-3
烷基、-c
1-3
烷氧基、羟基取代的c
1-3
烷基、卤素取代的c
1-3
烷基、卤素取代的c
1-3
烷氧基、卤素、氨基、单(c
1-3
烷基)-氨基-、双(c
1-3
烷基)-氨基-、腈基、苄基或苯基。
[0014]
进一步的，当a为-c
1-2
亚烷基，或为被甲基取代的-c
1-2
亚烷基；
[0015]-nr1r2为
[0016]
ar2为被取代的或未取代的苯基、被取代的或未取代的5-6元杂芳基，其中所述苯基或所述5-6元杂芳基任选的被下列一个或多个取代基所取代：-oh、-c
1-3
烷基、-c
1-3
烷氧基、羟基取代的c
1-3
烷基、卤素取代的c
1-3
烷基、卤素取代的c
1-3
烷氧基、卤素、氨基、单(c
1-3
烷基)-氨基-、双(c
1-3
烷基)-氨基-、腈基、苄基或苯基；
[0017]
其中ar2可具体为被上述取代基取代的苯基、噻吩基、咪唑基、吡啶基或吡唑基；
[0018]
ar2还可具体为
[0019]
在特定的实施方案中，如上所述通式(i)所示的化合物为：
[0020]
(3-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0021]
(2-氯-4-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0022]
n-甲基-2-(((2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基)氨基)甲基)苯胺；
[0023]
(3-氯-2-甲基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0024]
((3-氯-噻吩-2-基)甲基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0025]
(4-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0026]
(3,4-二甲基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0027]
(2,4-二甲基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0028]
(2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(3-氯-5-氟吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0029]
(2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(3-甲基-5-氟吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0030]
(4-溴-2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0031]
(4-甲基-2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0032]
3-{[(2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺甲基}-2-三氟甲氧基苯甲腈；
[0033]
((3-三氟甲基噻吩-2-基)甲基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0034]
4-{[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基胺]甲基}-3-三氟甲氧基苯酚；
[0035]
(2-二氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0036]
(5-氯-2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0037]
((3-二氟甲氧基噻吩-2-基)甲基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0038]
2-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]-7-三氟甲基-1,,2,3,4-四氢异喹啉；
[0039]
7-甲氧基-2-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-1,2,3,4-四氢异喹啉；
[0040]
{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(2-(三氟甲氧基)-苯甲基)-胺；
[0041]
(2-三氟甲氧基苯甲基)-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-胺；
[0042]
6-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-4,5,6,7-四氢-噻吩并[2,3-c]吡啶；
[0043]
3-甲基氨基-噻吩-2-羧酸[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-酰胺；
[0044]
[(5-甲氧基-1h-吡唑-4-基)甲基]-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺；
[0045]
((3-甲氧基噻吩-2-基)甲基)-2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙基]-1-胺；
[0046]
((3-甲氧基噻吩-2-基)甲基)-1-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙基]-2-胺；
[0047]
(3-溴-2-三氟甲氧基苯甲基)-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-胺；
[0048]
{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(2-(二氟甲氧基)-苯甲基)-胺；
[0049]
{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-((3-氯噻吩-2-基)-甲基)-胺；
[0050]
{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(3,4-二甲基-苯甲基)-胺；
[0051]
{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(3-氯-2-甲基-苯甲基)-胺；或
[0052]
{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-((3-二氟甲氧基噻吩-2-基)-甲基)-胺。
[0053]
如上所述，本发明还包括式(i)的化合物的药用可接受的盐和其立体异构体。
[0054]
所述药用可接受的盐有无机碱盐，如钠盐、钾盐、钙盐或铝盐；有机碱盐，如赖氨酸盐、精氨酸盐、三乙胺盐、二苄胺盐、哌啶盐及其他药学上可接受的有机胺盐。
[0055]
在本发明的化合物分子中包含至少一个可成盐的氮原子时，可以通过在有机溶剂(如乙腈、四氢呋喃)中与相应的有机酸或无机酸反应，从而转化为相应的盐。典型的有机酸有草酸、酒石酸、马来酸、琥珀酸、柠檬酸；典型的无机酸有硝酸、盐酸、硫酸、磷酸，优选为硝酸。
[0056]
在本发明的化合物中具有一个或多个不对称碳原子时，它们能够以如下形式存在：光学纯的对映异构体、纯的非对映异构体、对映异构体混合物、非对映异构体混合物、对映异构体外消旋混合物、外消旋物或外消旋物混合物。式(i)的化合物的全部可能的异构
体、立体异构体和其混合物也在本发明的范围内。
[0057]
本发明涉及一种制备通式(i)所示化合物的方法，其中：
[0058]
当a为-c
1-2
亚烷基，b为-nh-ch
2-ar2时，合成路线如方案1：
[0059]
方案1
[0060][0061]
其中ar1、ar2如权利要求1、2、3、4或5中定义的，所述酸优选为硫酸、盐酸、磷酸、三氟甲磺酸、氢溴酸或其组合；所述氧化剂优选为氯铬酸吡啶盐(pcc)、重铬酸吡啶盐(pdc)或其组合；所述芳基格式试剂优选为芳基溴化镁、芳基氯化镁或其组合；所述碱优选为氢氧化钾、氢氧化钠或其组合；所述还原剂1优选为四氢锂铝、硼烷四氢呋喃、硼烷二甲硫醚或其组合；所述还原剂2优选为硼氢化钠、硼氢化钾，三乙酰基硼氢化钠、氰基硼氢化钠或其组合；
[0062]
当a为被c
1-3
烷基取代的-c
1-2
亚烷基时，b为-nh-ch
2-ar2，合成路线如方案2或方案3，
[0063]
方案2
[0064][0065]
其中ar1、ar2为如权利要求1、2、3或4中定义的，r3为c1-3烷基，所述碱优选为氢化钠、二异丙基氨基锂、丁基锂叔丁醇钾、乙醇钠、六甲基二硅基氨基锂、六甲基二硅基氨钾或其组合；所述还原剂1优选为四氢锂铝、硼烷四氢呋喃、硼烷二甲硫醚或其组合；所述还原剂2优选为硼氢化钠、硼氢化钾、三乙酰基硼氢化钠、氰基硼氢化钠或其组合；
[0066]
方案3
[0067][0068]
其中ar1、ar2为如权利要求1、2、3或4中定义的，r4为c1-3烷基，所述还原剂1优选
为四氢锂铝、硼烷四氢呋喃、硼烷二甲硫醚或其组合；所述还原剂2优选为硼氢化钠、硼氢化钾、三乙酰基硼氢化钠、氰基硼氢化钠或其组合；
[0069]
当a为-c
1-2
亚烷基，b为-nh-c(o)-ar2时，合成路线如方案4，
[0070]
方案4
[0071][0072]
其中ar1、ar2如权利要求1、2、3或4中定义的，优选所述缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edci)/1-羟基苯并三唑(hobt)、二环己基碳二亚胺(dcc)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu)或其组合；
[0073]
当a为-c
1-2
亚烷基，b为-nr1r2时，合成路线如方案5，
[0074]
方案5
[0075][0076]
其中ar1、r1、r2如权利要求1、2、3或4中定义的，所述碱优选为氢氧化钠、氢氧化钾或其组合，所述缩合剂优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edci)/1-羟基苯并三唑(hobt)、二环己基碳二亚胺(dcc)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu)或其组合，所述还原剂优选为四氢锂铝、硼烷四氢呋喃、硼烷二甲硫醚或其组合。
[0077]
本发明涉及一种通式(i)所示化合物或其可药用的盐的制备方法，其中当a为-c
1-2
亚烷基，b为-nh-ch
2-ar2时，合成路线归纳如下(方案1’)：
[0078]
方案1’[0079][0080]
其中ar1、ar2为如以上所定义的。
[0081]
环戊酮与3-丁烯-1-醇在硫酸条件下生成螺环中间体1-2，1-2经合适的氧化剂氧化制得化合物1-3，1-3与氰基乙酸乙酯反应得到中间体1-4，1-4与格式试剂反应得到化合物1-5，1-5在碱性条件下水解脱羧，进一步还原氰基得到烷基胺1-7，1-7与相应的醛发生还原胺化得到最终化合物1-8。
[0082]
本发明涉及一种通式(i)所示化合物或其可药用的盐的制备方法，其中当a为被c
1-3
烷基取代的-c
1-2
亚烷基时，b为-nh-ch
2-ar2，合成路线归纳如下(方案2’和方案3’)：
[0083]
方案2’[0084][0085]
其中ar1、ar2为如以上所定义的，r3为c
1-3
烷基。
[0086]
化合物1-6在碱的作用下与卤代烷r3x反应后还原氰基得到化合物2-2，2-2与相应的醛发生还原胺化得到最终化合物2-3。
[0087]
方案3’[0088][0089]
其中ar1、ar2为如以上所定义的，r4为c
1-3
烷基。
[0090]
化合物1-6与烷基锂化合物r4li反应后，经还原剂还原得到中间体3-1，3-1与相应的醛发生还原胺化得到最终化合物3-2。
[0091]
本发明涉及一种通式(i)所示化合物或其可药用的盐的制备方法，其中当a为-c
1-2
亚烷基，b为-nh-c(o)-ar2时，合成路线归纳如下(方案4’)：
[0092]
方案4’[0093][0094]
其中ar1、ar2为如以上所定义的。
[0095]
中间体1-7与相应的羧酸ar2cooh在缩合剂作用下反应生成化合物4-1。
[0096]
本发明涉及一种通式(i)所示化合物或其可药用的盐的制备方法，其中当a为-c
1-2
亚烷基，b为-nr1r2时，合成路线归纳如下(方案5’)：
[0097]
方案5’[0098][0099]
其中ar1、r1、r2为如以上所定义的。
[0100]
中间体1-6在碱性条件下水解制得酸5-1，5-1在缩合剂的条件下与相应的胺缩合，经还原后得到最终产品5-3。
[0101]
本发明还提供了一种药物组合物，其包含上述至少一个化合物以及任选一种或多种医药上可接受的载剂和/或添加剂。
[0102]
本发明所提供的药物组合物可以制备为任何形式，例如颗粒、粉末、片剂、包衣片剂、胶囊、药丸、糖浆、滴剂、溶液、混悬剂和乳剂，或者活性成分的缓释制剂，其中胶囊剂的实例包括硬或软明胶胶囊剂，颗粒剂和粉剂可以是非泡腾或泡腾形式。
[0103]
本发明的药物组合物可进一步包括一种或多种医药或生理上可接受的载体，这些载体将适当配制以便于给药。例如，医药或生理上可接受的载体可以是盐水、热压水、林格氏液、缓冲盐水、葡萄糖、麦芽糖糊精、甘油、乙醇及其混合物。
[0104]
本发明的药物组合物还可以包括医药或生理上可接受的添加剂，例如稀释剂、润滑剂、粘合剂、助流剂、崩解剂、甜味剂、矫味剂、湿润剂、分散剂、表面活性剂、缓冲盐水、涂层剂、发泡剂、防腐剂、稳定剂或芳香剂。
[0105]
可以使用的稀释剂的实例包括但不限于乳糖、蔗糖、淀粉、高岭土、盐、甘露糖醇和磷酸二钙；润滑剂的实例包括但不限于滑石、淀粉、镁或钙的硬脂酸盐、石松子和硬脂酸；粘合剂的实例包括但不限于微晶纤维素、黄蓍胶、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊；助流剂的实例包括但不限于胶体二氧化硅；崩解剂的实例包括但不限于交联羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、膨润土、甲基纤维素、琼脂和羧甲基纤维素；甜味剂的实例包括但不限于蔗糖、乳糖、甘露糖醇和人工甜味剂，例如环磺酸钠和糖精，和任意数量的喷雾干燥矫味剂；矫味剂的实例包括但不限于从植物提取的天然矫味剂，例如果实，和味道较好的化合物，例如但不限于薄荷和水杨酸甲酯；湿润剂的实例包括但不限于丙二醇一硬脂酸酯、脱水山梨醇一油酸酯、二甘醇一月桂酸酯和聚氧乙烯月桂基醚。
[0106]
表面活性剂可以选自洗涤剂、乙氧基化蓖麻油、聚乙二醇化甘油酯、乙酰化单酸甘油酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、泊洛沙姆如188和407、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、聚氧乙烯衍生物如烷基化和烷氧基化的衍生物(吐温，如吐温-20、或者吐温-80)、甘油一酸酯或它们的乙氧基化衍生物、甘油二酸酯或它们的聚氧乙烯衍生物、甘油、胆酸或其衍生物、卵磷脂、醇类和磷脂、甘油磷酸脂(卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰丝氨酸)、甘油糖脂(半乳吡喃糖苷)、鞘磷脂(鞘髓磷脂)、和鞘糖脂(神经酰胺、神经节苷脂)、dss(多库酯钠、多库酯钙、多库酯钾、sds(十二烷基硫酸钠或月桂基硫酸钠)、二棕榈酰磷脂酸(dipalmitoyl phosphatidic acid)、辛酸钠、胆汁酸及其盐以及甘氨酸或牛磺酸偶联物、熊去氧胆酸、胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠、n-十六烷基-n,n-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐、阴离子(烷基-芳基-磺
酸盐)一价表面活化剂、棕榈酰溶血磷脂酰基-l-丝氨酸、溶血磷脂质(例如，乙醇胺、胆碱、丝氨酸或苏氨酸的1-酰基-sn-甘油-3-磷酸酯)、烷基、烷氧基(烷基酯)、溶血磷脂酰基胆碱的烷氧基(烷基醚-衍生物)和磷脂酰胆碱的烷氧基(烷基醚-衍生物)，如溶血磷脂酰胆碱的十二酰衍生物和十四酰衍生物、二棕榈酰磷脂酰胆碱、以及极性头部基团的改性，即胆碱、乙醇胺、磷脂酸、丝氨酸、苏氨酸、丙三醇、肌醇、和带正电荷的dodac、dotma、dcp、bishop、溶血磷脂酰丝氨酸和溶血磷脂酰苏氨酸、两性离子表面活性剂(例如n-烷基-n,n-二甲基铵基-1-丙磺酸盐、3-胆酸酰胺基-1-丙基二甲基铵基-1-丙磺酸盐、十二烷基磷酸胆碱、肉豆蔻酰基溶血磷脂酰胆碱、鸡蛋溶血卵磷脂)、阳离子表面活性剂(季铵碱)(例如，十六基-三甲基溴化铵、氯化十六烷基吡啶鎓)、非离子型表面活性剂、聚氧化乙烯/聚氧化丙烯嵌段共聚物(普流罗尼(pluronics)/tetronics、triton x-100、十二烷基β-d-吡喃葡萄糖苷)或者聚合物表面活性剂(吐温-40、吐温-80、brij-35(苄泽-35))、梭链孢酸衍生物(如牛磺二氢梭链孢酸钠等)、c6-c12长链脂肪酸及其盐(例如，油酸和辛酸)、酰基肉毒碱和衍生物、赖氨酸、精氨酸或组氨酸的nα-酰化的衍生物、或者赖氨酸或精氨酸的侧链酰化衍生物、包含赖氨酸、精氨酸或组氨酸以及中性或者酸性氨基酸的任何组合的二肽的nα-酰化衍生物、包含中性氨基酸和两个带电荷氨基酸的任何组合的三肽的nα-酰化衍生物，或它们的混合物。
[0107]
上述缓冲盐水可以选自乙酸钠缓冲液、碳酸钠缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、甘氨酰甘氨酸缓冲液、组氨酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、赖氨酸缓冲液、精氨酸缓冲液、磷酸钠缓冲液、和三(羟基甲基)-氨基甲烷缓冲液、或者它们的混合物，还可以是甘氨酰甘氨酸缓冲液、磷酸钠缓冲液或者它们的混合物。
[0108]
上述防腐剂可以选自苯酚、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、2-苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、2-苯基乙醇、苄醇、氯丁醇、和硫柳汞(thiomerosal)、或者它们的混合物，也可以是苯酚或间甲酚。
[0109]
防腐剂以约0.1mg/ml至约50mg/ml的浓度、以约0.1mg/ml至约25mg/ml的浓度、或者以约0.1mg/ml至约10mg/ml的浓度存在。
[0110]
上述稳定剂包括但不限于聚乙二醇(如peg3350)、聚乙烯醇(pva)、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、不同的盐(如氯化钠)、l-甘氨酸、l-组氨酸、咪唑、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、和苏氨酸或者它们的任何混合物。
[0111]
本发明还提供了上述化合物或者药物组合物在制备用于预防和/或治疗mor受体激动剂介导的相关疾病的药物中的用途。
[0112]
如上所述的mor受体激动剂介导的相关疾病包括但不限于疼痛、炎症、免疫功能障碍、食管回流、神经和精神病症或呼吸道疾病。
[0113]
上述所提到的疼痛包括但不限于创伤性疼痛、神经性疼痛、炎性疼痛、内脏疼痛、偏头痛和与癌症有关的疼痛。上述所提到的疼痛可以是术后疼痛、由癌症引起的疼痛、神经性疼痛、由创伤引起的疼痛或是由炎症引起的疼痛。
[0114]
本发明所提供化合物或者药物组合物还可以用于泌尿和生殖病症、药物和酒精滥用、胃炎或腹泻。相应地，本发明提供了本发明所提供的化合物或者药物组合物在制备用于改善泌尿和生殖病症、药物和酒精滥用、胃炎或腹泻的药物中的用途。
[0115]
给予本文中所述化合物和/或其药用盐的量和频率将根据主治临床医生考虑这些因素如年龄、病症和患者的大小以及被治疗的症状的严重性的判断来调节。通常，考虑的是
有效量可以为0.001mg/kg至10mg/kg体重，可具体地为0.01mg/kg至1mg/kg体重。
[0116]
在一些实施方式中，药物制剂为单位剂量形式。单位剂量的制剂中活性化合物的量可根据具体应用改变或调节：从约0.01mg至约1000mg、从约0.01mg至约750mg、从约0.01mg至约500mg、或者从约0.01mg至约250mg。
[0117]
该本发明的化合物对g蛋白信号通路的选择性显著提高，不仅能表现出优异的药效作用，而且在安全性方面也得到显著改善。
具体实施方式
[0118]
除非有相反说明，本文使用的部分术语具有如下涵义：
[0119]
在本文中，术语“c
1-3
烷基”包括包含1至3个(例如1、2、3个)碳原子的烷基。
[0120]
在本文中，术语“芳基”包括5和6元的单环芳族基团，其可以包含0-4个(例如1、2、3个)选自o、s、n的杂原子，例如苯、苯基、吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、咪唑、三唑、四唑、吡唑、唑、异唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等；此外，术语“芳基”还包括多环芳基，例如三环、二环，例如萘、苯并唑、苯并二唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并噻吩、亚甲二氧基苯基、喹啉、异喹啉、萘啶、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、苯并呋喃、脱氮嘌呤或中氮茚。这些具有杂原子的芳基也称为“芳基杂环”、“杂环”、“杂芳基”或“杂芳族基团”。
[0121]
典型的杂芳基包括2-或3-噻吩基；2-或3-呋喃基；2-或3-吡咯基；2-、4-或5-咪唑基；3-、4-或5-吡唑基；2-、4-或5-噻唑基；3-、4-或5-异噻唑基；2-、4-或5-唑基；3-、4-或5-异唑基；3-或5-1，2，4-三唑基；4-或5-1，2，3-三唑基；四唑基；2-、3-或4-吡啶基；3-或4-哒嗪基；3-、4-或5-吡嗪基；2-吡嗪基；2-、4-或5-嘧啶基。
[0122]
本文使用的术语“杂芳基”还指其中杂芳族环与一个或多个芳基、环脂族或杂环基的环稠合的基团，其中其连接基团或连接点位于杂芳族环上。其实例包括但不限于1-、2-、3-、5-、6-、7-或8-中氮茚基；1-、3-、4-、5-、6-或7-异吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基；2-、4-、5-、6-、7-或8-嘌呤基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-喹嗪基；2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基；1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基；1-、4-、5-、6-、7-或8-酞嗪基；2-、3-、4-、5-或6-萘啶基；2-、3-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基；3-、4-、5-、6-、7-或8-噌啉基；2-、4-、6-或7-蝶啶基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-4ah咔唑基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-咔唑基；1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-咔啉基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-菲啶基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-吖啶基；1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-啶基；2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-或10-菲咯啉基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-吩嗪基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩噻嗪基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩嗪基；2-、3-、4-、5-、6-或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-或10-苯并异喹啉基；2-、3-、4-或噻吩并[2，3-b]呋喃基；2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-7h-吡嗪并[2，3-c]咔唑基；2-、3-、5-、6-或7-2h-呋喃并[3，2-b]-吡喃基；2-、3-、4-、5-、7-或8-5h-吡啶并[2，3-d]-o-嗪基；1-、3-或5-1h-吡唑并[4，3-d]-唑基；2-、4-或5-4h-咪唑并[4，5-d]噻唑基；3-、5-或8-吡嗪并[2，3-d]哒嗪基；2-、3-、5-或6-咪唑并[2，1-b]噻唑基；1-、3-、6-、7-、8-或9-呋喃并[3，4-c]噌啉基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10或11-4h-吡啶并[2，3-c]咔唑基；2-、3-、6-或7-咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪基；7-苯并[b]噻吩基；2-、4-、5-、6-或7-苯并唑基；2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基；2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基；1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-苯并氧杂基；2-、4-、5-、6-、7-或8-苯并嗪基；
1-、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-1h-吡咯并[1，2-b][2]苯并氮杂基。典型的稠合杂芳基包括2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基；1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并[b]噻吩基；2-、4-、5-、6-或7-苯并唑基；2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基；2-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基。
[0123]
本文使用的“芳基”或“杂芳基”的芳环可以在一个或多个环位置上被上文所述的取代基取代，例如卤素、羟基、烷氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、羟基羰基、烷基羰基、烷基氨基羰基、芳基烷基氨基羰基、烯基氨基羰基、烷基羰基、芳基羰基、芳基烷基羰基、烯基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷硫基羰基、磷酸酯、膦酸酯、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、羟基硫代羰基、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸酯基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基，或芳族基团或杂芳族基团，其中芳基基团也可以与非芳族的脂环或杂环稠合或桥连，以形成多环(例如四氢萘)。
[0124]
在本文中，术语“烷氧基”包括与氧原子共价连接的被取代的和未被取代的烷基。烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、异丙基氧基、丙氧基、丁氧基和戊氧基。被取代的烷氧基的实例包括卤代烷氧基。烷氧基可被以下基团取代：烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羟基羰基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷硫基羰基、磷酸酯基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、羟基硫代羰基、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳族基团。
[0125]
以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
[0126]
实施例1：(3-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h01)
[0127][0128]
第一步：制备6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-醇(1-2)
[0129]
将3-丁烯-1-醇(10g，142mmol)和环戊酮(6g，71mmol)加入到茄形瓶中，冷却至0℃。向反应液中缓慢滴加75％硫酸，逐渐升至室温后反应过夜。向反应体系中加入水(100ml)，用氢氧化钠调节ph到8，用乙醚萃取(3
×
150ml)，乙醚层用饱和亚硫酸氢钠洗(40ml)，硫酸镁干燥，蒸干后蒸馏得到6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-醇(1-2，4g)，产率：36％。
[0130]
第二步：制备6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-酮(1-3)
[0131]
将6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-醇(4g，25.6mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，向其中加入氯铬酸吡啶盐(pcc，8.3g，39mmol)，室温下反应，tlc检测原料消失后，过滤，滤液浓缩后柱层析(展开剂为0％到50％乙酸乙酯/石油醚)得到6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-酮(1-3，3.1g)，产率：78％。
[0132]
第三步：制备2-氰基-[(9z)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-亚基]乙酸乙酯(1-4)
[0133]
在装有dean-stark蒸馏装置和冷凝管的50ml圆底烧瓶中分别加入6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-酮(1-3，3.1g，20mmol)、氰基乙酸乙酯(3.1g，24mmol)、醋酸铵(0.385g，5mmol)、乙酸(0.24g)和甲苯(30ml)。加热回流至不再有水被收集在dean-stark中，冷却，加入甲苯，并用水(30ml)洗涤有机层。用乙酸乙酯(3
×
50ml)萃取水层。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠(100ml)、食盐水洗涤(100ml)，硫酸镁干燥，过滤并浓缩。柱层析(展开剂为0％到60％乙酸乙酯/正己烷)纯化得到2-氰基-[(9z)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-亚基]乙酸乙酯(1-4，3.5g)，产率：70％。
[0134]
第四步：制备2-氰基-2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-亚基]乙酸乙酯(1a)
[0135]
在装有冷凝器、加料漏斗和带有氮气入口的橡胶隔片的圆底烧瓶中加入2-吡啶溴化镁(1m，6ml)、碘化亚铜(96mg，0.5mmol)和干燥乙醚(10ml)，冷却至0℃。将2-氰基-[(9z)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-亚基]乙酸乙酯(1-4，1.25g，5mmol)溶于无水乙醚(10ml)中，向反应中缓慢滴加，3小时后反应完全，将反应液倒入冰/盐酸(1n，10ml)混合液中，乙醚(3
×
50ml)萃取，饱和食盐水(50ml)洗涤，硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩后柱层析(展开剂为7％到60％乙酸乙酯/石油醚)得到2-氰基-2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-亚基]乙酸乙酯(1a，0.7g)，产率：43％。
[0136]
第五步：制备2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]乙腈(1b)
[0137]
向处于乙二醇(5ml)中的氢氧化钾(112mg，2mmol)的预先溶解的溶液中加入2-氰基-2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-亚基]乙酸乙酯(1a，0.66g，2mmol)。将混合物加热到120℃反应3小时，然后冷却。加入水(50ml)，用乙醚(3
×
50ml)萃取，用水(50ml)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩，柱层析纯化(展开剂5％到40％乙酸乙酯/正己烷)得到2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]乙腈(1b，400mg)，产率：80％。
[0138]
第六步：制备2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙胺(1c)
[0139]
在0℃下向处于无水乙醚(15ml)中的2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]乙腈(1b，256mg，1.0mmol)的溶液中滴加四氢锂铝(120mg，3mmol)。2小时后向反应液中分别加入水(0.1ml)、15％氢氧化钠水溶液(0.1ml)，然后水(0.1ml)淬灭。将反应混合物用乙醚(3
×
20ml)萃取，无水硫酸镁干燥，过滤后浓缩得到2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙胺(1c，200mg)，产率：77％，为黄色油状物，其在未进一步纯化下使用。
[0140]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.58(ddd,j＝4.8,1.9,0.9,1h),7.63(m,1h),7.30(m,1h),7.12(ddd,j＝7.4,4.8,1.0,1h),3.76(m,2h),2.55(td,j～11.6,5.1,1h),2.46(ddd,j＝13.7,5.1,2.7,1h),2.37(dd,j＝13.7,2.1,1h),2.14(td,j＝11.6,5.0,1h),1.92(m,2h),1.70(m,4h),1.46(m,4h),1.13(m,1h),0.71(dt,j＝13.4,8.8,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
16h24
n2o 261[m 1]

。
[0141]
第七步：制备(3-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺
[0142][0143]
2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙胺(130mg，0.5mmol)、无水硫酸镁(72mg，0.6mmol)加入到无水二氯甲烷中(8ml)，加入3-三氟甲氧基苯甲醛(105mg，0.55mmol)，室温搅拌过夜。将反应液过滤，滤液浓缩后加入无水甲醇中(5ml)，0℃下加入硼氢化钠(38mg，1mmol)，1小时后加水(10ml)，二氯甲烷萃取(3
×
20ml)，饱和食盐水洗(10ml)，无水硫酸钠干燥。薄层色谱法纯化(展开剂为0-10％甲醇/二氯甲烷)得到化合物(3-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺(76mg，黄色油状物)，产率：50％。
[0144]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.49(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),7.58(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.30-7.21(m,3h),7.09-7.07(m,3h),3.72-3.68(m,4h),2.56(td,j＝10.8,5.2hz,1h),2.38(dd,j＝13.6,2.0hz,1h),2.32(dd,j＝13.6,2.0hz,1h),2.16-2.03(m,2h),1.87(d,j＝13.6hz,2h),1.72-1.56(m,3h),1.50-1.34(m,4h),1.06(m,1h),0.67-0.60(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h29
f3n2o
2 435[m 1]

。
[0145]
实施例2：(2-氯-4-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h02)
[0146][0147]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为3-氯-4-三氟甲氧基苯甲醛，制得(2-氯-4-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺100mg，产率75％，外观为淡黄色粘稠物。
[0148]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.51(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),7.60(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.31(d,j＝1.6hz,1h),7.10(d,j＝8.4hz,1h),7.20-7.07(m,3h),3.74-3.72(m,2h),3.61(s,2h),2.50(td,j＝10.8,5.2hz,1h),2.39(dd,j＝14.0,2.0hz,1h),2.32(dd,j＝13.6,2.0hz,1h),2.14-1.97(m,2h),1.90(d,j＝13.6hz,1h),1.81-1.57(m,4h),1.52-1.43(m,3h),1.36(m,1h),1.08(m,1h),0.70-0.62(m,1h)。lc-ms:m/z(es )计算为c
24h28
clf3n2o
2 469[m 1]

。
[0149]
实施例3：n-甲基-2-(((2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基)氨基)甲基)苯胺的制备(h03)
[0150][0151]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-甲氨基苯甲醛，制得n-甲基-2-(((2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基)氨基)甲基)苯胺38mg，产率32％，外观为淡黄色粘稠物。
[0152]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.55(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),7.60(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.15(td,j＝7.6,1.6hz,1h),7.10(qd,j＝4.8,0.8hz,1h),6.87(dd,j＝7.2,1.2hz,1h),6.58-6.55(m,2h),3.74(dd,j＝8.0,2.8hz,2h),3.55(d,j＝1.6hz,2h),2.78(s,3h),2.47-2.31(m,3h),2.08(td,j＝11.2,5.2hz,1h),1.97-1.88(m,2h),1.73-1.64(m,3h),1.53-1.44(m,5h),1.10(m,1h),0.72-0.64(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h33
n3o 380[m 1]

。
[0153]
实施例4：(3-氯-2-甲基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h04)
[0154][0155]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-甲基-3-氯苯甲醛，制得(3-氯-2-甲基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺95mg，产率63％，外观为淡黄色粘稠物。
[0156]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.52(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),7.60(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.26(d,j＝8.0hz,1h),7.20(d,j＝7.6hz,1h),7.10-6.98(m,3h),3.74-3.71(m,2h),3.60(d,j＝2.0hz,2h),2.54(td,j＝11.2,5.2hz,1h),2.40(dd,j＝14.0,2.4hz,1h),8.52(dd,j＝13.6,1.6hz,1h),2.26(s,3h),2.12(td,j＝11.2,4.8hz,1h),2.03-1.96(m,1h),1.88(d,j＝13.6hz,1h),1.81-1.60(m,4h),1.52-1.35(m,4h),1.07(m,1h),0.67-0.62(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h31
cln2o 399[m 1]

。
[0157]
实施例5：((3-氯-噻吩-2-基)甲基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h05)
[0158][0159]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为3-氯噻吩-2-甲醛，制得((3-氯-噻吩-2-基)甲基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺
64mg，产率45％，外观为淡黄色粘稠物。
[0160]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.53(dd,j＝4.8,0.8hz,1h),7.60(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.26(d,j＝8.0hz,1h),7.13(d,j＝5.2hz,1h),7.10-7.07(qd,j＝4.8,1.2hz,1h),6.80(d,j＝5.6hz,1h),3.78(d,j＝3.6hz,2h),3.74-3.71(m,2h),2.53(td,j＝10.8,5.2hz,1h),2.42-2.30(m,2h),2.12(td,j＝11.2,5.2hz,1h),2.01-1.94(m,1h),1.89(d,j＝13.6hz,1h),1.77-1.60(m,4h),1.50-1.35(m,4h),1.07(m,1h),0.70-0.64(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
21h27
cln2os 391[m 1]

。
[0161]
实施例6：(4-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h06)
[0162][0163]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为4-三氟甲氧基苯甲醛，制得(4-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺40mg，产率52％，外观为淡黄色粘稠物。
[0164]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.50(d,j＝3.6hz,1h),7.60(td,j＝7.6,1.6.0hz,1h),7.29-7.25(m,3h),7.11-7.09(m,3h),3.73(m,2h),3.68(d,j＝2.4hz,2h),2.60-2.5(m,1h),2.40-2.31(m,2h),2.16-2.03(m,2h),1.90(d,j＝13.6hz,2h),1.75-1.61(m,3h),1.47(m,4h),1.09(m,1h),0.70-0.62(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h29
f3n2o
2 435[m 1]

。
[0165]
实施例7：(3,4-二甲基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h07)
[0166][0167]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为3，4-二甲基苯甲醛，制得(3,4-二甲基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺40mg，产率50％，外观为淡黄色粘稠物。
[0168]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.46(d,j＝4.0hz,1h),7.60(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.26(s,1h),7.10-7.03(m,4h),3.73-3.64(m,5h),3.47(s,1h),2.70(m,1h),2.29-2.23(m,4h),2.17(d,j＝8.4hz,6h),2.05(m,2h),1.87(d,j＝13.6hz,1h),1.77-1.60(m,4h),1.47-1.25 2.59(m,6h),1.06(m,1h),0.62(m,1h)..lc-ms:m/z(es )计算为c
25h34
n2o 379[m 1]

。
[0169]
实施例8：(2,4-二甲基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h08)
[0170]
[0171]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2，4-二甲基苯甲醛，制得(2,4-二甲基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺60mg，产率65％，外观为淡黄色粘稠物。
[0172]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.45(d,j＝4.4hz,1h),7.62(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.28(d,j＝8.0hz,1h),7.23(d,j＝8.0hz,1h),7.10(q,1h),6.93(s,2h),3.79-3.65(m,4h),2.76(td,j＝11.6,5.2hz,1h),2.26(s,5h),2.21(s,4h),2.06(m,2h),1.87(d,j＝13.6hz,1h),1.75(t,j＝9.2hz,1h),1.69-1.62(m,2h),1.45(m,2h),1.06(m,1h),0.64(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
25h34
n2o 379[m 1]

。
[0173]
实施例9：(2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(3-氯-5-氟吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h09)
[0174][0175]
制备方法同实施例1，将第四步的吡啶-2-溴化镁换为3-氯-5-氟吡啶-2-溴化镁，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-三氟甲氧基苯甲醛，制得(2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(3-氯-5-氟吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺20mg，产率38％，外观为淡黄色粘稠物。
[0176]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.35(d,j＝2.8hz,1h),7.33-7.27(m,2h),7.26-7.15(m,3h),3.71-3.65(m,4h),2.42(td,j＝11.2,5.2hz,1h),2.35(dd,j＝14.0,2.0hz,1h),2.26(dd,j＝13.6,2.0hz,1h),2.42(td,j＝11.2,4.8hz,1h),1.96-1.87(m,2h),1.76-1.64(m,4h),1.52-1.35(m,4h),1.09(m,1h),0.71-0.61(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h27
clf4n2o
2 486[m 1]

。
[0177]
实施例10：(2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(3-甲基-5-氟吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h10)
[0178][0179]
制备方法同实施例1，将第四步的吡啶-2-溴化镁换为3-甲基-5-氟吡啶-2-溴化镁，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-三氟甲氧基苯甲醛，制得(2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(3-甲基-5-氟吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺35mg，产率34％，外观为淡黄色粘稠物。
[0180]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.33(d,j＝2.8hz,1h),7.34-7.25(m,2h),7.26-7.15(m,3h),3.71-3.65(m,4h),2.42(td,j＝11.2,5.2hz,1h),2.35(m,4h),2.26(dd,j＝13.6,2.0hz,1h),2.42(td,j＝11.2,4.8hz,1h),1.96-1.87(m,2h),1.76-1.64(m,4h),1.52-1.35(m,4h),1.09(m,1h),0.71-0.61(m,1h)。lc-ms:m/z(es )计算为c
25h30
f2n2o
2 467[m 1]

。
[0181]
实施例11：(4-溴-2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h11)
[0182][0183]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-三氟甲氧基-4-溴苯甲醛，制得(4-溴-2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺78mg，产率58％，外观为淡黄色粘稠物。
[0184]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.50(dd,j＝4.0,0.8hz,1h),7.60(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.34-7.33(m,2h),7.28(s,1h),7.20(d,j＝8.4hz,1h),7.10(q,j＝4.8,6.8hz,1h),3.75(d,j＝2.8hz,1h),3.73(d,j＝2.4hz,1h),3.36(s,2h),2.50-2.32(m,3h),2.07(td,j＝11.2,5.2hz,1h),2.00-1.96(m,1h),1.90(d,j＝14.0hz,1h),1.78-1.65(m,6h),1.54-1.48(m,3h),1.10(m,1h),0.72-0.65(m,1h)。lc-ms:m/z(es )计算为c
24h28
brf3n2o
2 513[m 1]

。
[0185]
实施例12：(4-甲基-2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h12)
[0186][0187]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-三氟甲氧基-4-甲基苯甲醛，制得(4-甲基-2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺91mg，产率70％，外观为淡黄色粘稠物。
[0188]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.50(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),7.60(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.28(t,j＝8.0hz,2h),7.08(q,j＝4.8,6.8hz,1h),7.01(d,j＝8.0hz,1h),6.98(s,1h),3.74-3.69(m,4h),2.53(td,j＝11.6,5.6hz,1h),2.4-2.37(m,1h),2.32-2.29(m,4h),2.13(td,j＝11.2,4.8hz,1h),2.06-1.99(m,1h),1.88(d,j＝14.0hz,1h),1.85-1.77(m,1h),1.73-1.58(m,3h),1.51-1.45(m,3h),1.38-1.35(m,1h),1.11-1.07(m,1h),0.70-0.62(m,1h)。lc-ms:m/z(es )计算为c
25h31
f3n2o
2 449[m 1]

。
[0189]
实施例13：3-{[(2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺甲基}-2-三氟甲氧基苯甲腈的制备(h13)
[0190]
[0191]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-三氟甲氧基-4-氰基苯甲醛，制得3-{[(2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺甲基}-2-三氟甲氧基苯甲腈45mg，产率51％，外观为淡黄色粘稠物。
[0192]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.54-8.52(m,1h),7.59(dd,j＝1.2hz,1h),7.25-7.30(m,2h),7.25-7.18(m,3h),3.75-3.64(m,4h),2.62-2.32(m,3h),1.91-1.73(m,3h),1.69-1.40(m,8h),1.09(m,1h),0.70-0.62(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c25h28f3n3o2460[m 1] 。
[0193]
实施例14：((3-三氟甲基噻吩-2-基)甲基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h14)
[0194][0195]
第一步：制备3-(三氟甲基噻吩-2-基)甲醇(14b)
[0196]
在0℃下向处于无水乙醚(20ml)中的3-三氟甲基噻吩-2-羧酸甲酯(14a，1g，4.7mmol)的溶液中滴加四氢锂铝(240mg，6mmol)。2小时后向反应液中分别加入水(0.1ml)、15％氢氧化钠水溶液(0.1ml)，然后水(0.1ml)淬灭。将反应混合物用乙酸乙酯(3
×
20ml)萃取，无水硫酸镁干燥，过滤后浓缩得到3-(三氟甲基噻吩-2-基)甲醇(14b)(14b，500mg)，产率：57％，为黄色油状物，其在未进一步纯化下使用。
[0197]
第二步：制备3-三氟甲基噻吩-2-甲醛(14c)
[0198]
将3-(三氟甲基噻吩-2-基)甲醇(14b，0.364g，2mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，向其中加入氯铬酸吡啶盐(pcc，830mg，3.9mmol)，室温下反应，tlc检测原料消失后，过滤，滤液浓缩后柱层析(展开剂为0％到50％乙酸乙酯/石油醚)得到3-三氟甲基噻吩-2-甲醛(14c，0.2g)，产率：55％。
[0199]
第三步
[0200]
与实施例1描述的制备方法中的第七步一致，用3-三氟甲基噻吩-2-甲醛代替实施例1第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛，制备((3-三氟甲基噻吩-2-基)甲基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺21mg，产率25％，外观为淡黄色粘稠物。
[0201]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.55(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),7.61(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.32(d,j＝8.0hz,1h),7.24(d,j＝5.2hz,1h),7.10-7.06(qd,j＝4.8,1.2hz,1h),6.93(d,j＝5.2hz,1h),6.44(s,1h),4.63(s,2h),3.76-3.73(m,2h),3.34-3.26(m,1h),2.99-2.90(m,1h),2.47(dd,j＝13.6,2.0hz,1h),2.38(dd,j＝13.6,2.0hz,1h),2.13-2.05(m,1h),1.90(d,j＝13.6hz,2h),1.83-1.58(m,5h),1.53-1.44(m,3h),1.09(m,1h),0.71-0.64(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
22h27
f3n2os 425[m 1]

。
[0202]
实施例15：4-{[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基胺]甲基}-3-三氟甲氧基苯酚的制备(h15)
[0203][0204]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2
‑‑
三氟甲氧基-4-羟基苯甲醛，制得4-{[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基胺]甲基}-3-三氟甲氧基苯酚56mg，产率52％，外观为淡黄色粘稠物。
[0205]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.46(d,j＝4.4hz,1h),7.65(td,j＝7.6,1.6hz,1h),7.31(d,j＝8.0hz,1h),7.18-7.14(m,2h),6.61(s,1h),6.48(d,j＝7.2hz,1h),3.73(m,4h),2.76(m,1h),2.39-2.30(m,3h),2.13(m,1h),1.94(m,1h),1.87(d,j＝14.0hz,1h),1.74-1.62(m,3h),1.48-1.37(m,4h),1.09(m,1h),0.69-0.61(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h29
f3n2o
3 451[m 1]

。
[0206]
实施例16：(2-二氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h16)
[0207][0208]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-二氟甲氧基苯甲醛，制得(2-二氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺16mg，产率28％，外观为淡黄色粘稠物。
[0209]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.49(d,j＝4.4hz,1h),7.61(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.38(d,j＝8.4hz,1h),7.28-7.27(m,2h),7.15-7.06(m,3h),6.78-6.42(t,j＝73.6hz,1h),3.78-3.71(m,4h),2.62(td,j＝11.2,5.2hz,1h),2.36(d,j＝13.6hz,1h),2.30(d,j＝14.0hz,1h),2.18(td,j＝11.2,4.8hz,1h),2.08(td,j＝13.2,4.8hz,1h),1.90-1.87(m,2h),1.78-1.63(m,3h),1.49-1.36(m,4h),1.09(m,1h),0.70-0.62(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h30
f2n2o
2 417[m 1]

。
[0210]
实施例17：(5-氯-2-三氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h17)
[0211][0212]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-三氟甲氧基-5-氯苯甲醛，制得(2-二氟甲氧基苄基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺100mg，产率80％，外观为淡黄色粘稠物。
[0213]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.55(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),7.61(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.32(d,j＝2.8hz,1h),7.28(d,j＝8.4hz,1h),7.18(dd,j＝8.8,2.4hz,1h),7.12-7.08(m,2h),3.75(dd,j＝8.4,2.8hz,2h),3.63(s,2h),2.51-2.33(m,3h),2.10(td,j＝10.8,5.2hz,1h),2.03-1.95(m,1h),1.91(d,j＝13.6hz,1h),1.78-1.61(m,5h),1.54-1.50(m,3h),1.10(m,1h),0.73-0.66(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h28
clf3n2o
2 469[m 1]

。
[0214]
实施例18：((3-二氟甲氧基噻吩-2-基)甲基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h18)
[0215][0216]
第一步：制备3-二氟甲氧基噻吩-2-甲酸甲酯(18b)
[0217]
室温下，分别向甲苯/水(10ml/0.8ml)加入3-羟基噻吩-2-甲酸甲酯(18a，1g，6.3mmol)和氢氧化钠(0.51g，12.7mmol)，升温至90℃，向反应液中分别加入四正丁基溴化膦(0.11g，0.32mmol)、一氯二氟甲烷(3.28g，37.8mmol)。继续反应1小时，冷却，加水(15ml)，有机相分层后干燥，硫酸镁干燥，浓缩后柱层析(展开剂：乙酸乙酯/石油醚＝1:3)得到3-二氟甲氧基噻吩-2-甲酸甲酯(18b，0.4g)，产率：31％。
[0218]
第二步：制备3-(二氟甲氧基噻吩-2-基)甲醇(18c)
[0219]
在0℃下向处于无水乙醚(15ml)中的3-二氟甲氧基噻吩-2-甲酸甲酯(18b，0.4g，1.9mmol)的溶液中加入四氢锂铝(120mg，3mmol)。1小时后向反应液中分别加入水(0.1ml)、15％氢氧化钠水溶液(0.1ml)，然后水(0.1ml)淬灭。将反应混合物用乙酸乙酯(3
×
20ml)萃取，无水硫酸镁干燥，过滤后浓缩得到3-(二氟甲氧基噻吩-2-基)甲醇(18c，300mg)，产率：83％，为黄色油状物，其在未进一步纯化下使用。
[0220]
第三步：制备3-二氟甲氧基噻吩-2-甲醛(18d)
[0221]
将3-(二氟甲氧基噻吩-2-基)甲醇(18c，0.3g，1.67mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，向其中加入氯铬酸吡啶盐(pcc，830mg，3.9mmol)，室温下反应，tlc检测原料消失后，过滤，滤液浓缩后柱层析(展开剂为0％到50％乙酸乙酯/正己烷)得到3-二氟甲氧基噻吩-2-甲醛(18d，0.15g)产率：50％。
[0222]
第四步
[0223]
与实施例1制备中描述的第七步步骤一致，用3-二氟甲氧基噻吩-2-甲醛代替实施例1的制备方法的第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛，制备((3-二氟甲氧基噻吩-2-基)甲基)-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺34mg，产率28％，外观为淡黄色粘稠物。
三氟甲基-1,,2,3,4-四氢异喹啉(19，35mg)，产率35％。
[0233]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.60(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),7.65(td,j＝7.6,1.6hz,1h),7.34(d,j＝8.0hz,1h),7.22(s,1h),7.18-7.13(m,2h),3.81(d,j＝2.4hz,1h),3.80(d,j＝2.8hz,1h),3.54-3.43(q,j＝11.6,14.8hz,2h),2.86(t,j＝5.6hz,2h),2.56-2.38(m,5h),2.11(td,j＝12.4,4.0hz,1h),1.98(m,1h),1.87-1.65(m,5h),1.57-1.41(m,4h),1.14(m,1h),0.76-0.69(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c26h31f3n2o 445[m 1] 。
[0234]
实施例20：7-甲氧基-2-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-1,2,3,4-四氢异喹啉的制备(h20)
[0235][0236]
制备方法同实施例19，将第二步的7-三氟甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉换为7-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉，制得7-甲氧基-2-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-1,2,3,4-四氢异喹啉(20，34mg)，产率36％，外观为淡黄色粘稠物。
[0237]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.60(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),7.65(td,j＝7.6,1.6hz,1h),7.35(d,j＝8.0hz,1h),7.14(q,1h),6.67(d,j＝8.4hz,1h),6.68(dd,j＝8.4,2.8hz,1h),6.50(d,j＝2.4hz,1h),3.81-3.78(m,2h),3.76(s,3h),3.48-3.38(q,j＝11.2,14.4hz,2h),2.75(t,j＝6.0hz,2h),2.59-2.50(m,3h),2.41-2.34(m,2h),2.13-2.07(td,j＝11.6,3.2hz,1h),1.99-1.74(m,6h),1.57-1.48(m,4h),1.14(m,1h),0.76-0.68(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c26h34n2o2 407[m 1] 。
[0238]
实施例21：{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(2-(三氟甲氧基)-苯甲基)-胺的制备(h21)
[0239][0240]
第一步：制备氰基-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙酸乙酯(21a)
[0241]
向反应瓶中加入含有异丙基溴化镁2.0m的四氢呋喃溶液(6ml,12mmol)，再滴加2-溴-5-氟-吡啶(1.0ml,10mmol)的乙醚溶液(4ml)，将反应液室温搅拌三小时，得到相应的1m的格式试剂5-氟-2-吡啶溴化镁。
[0242]
向充满氮气的圆底反应瓶中加入无水乙醚(10ml)，加入上述所制备的格式试剂(1.0m,6ml)，碘化亚铜(96mg,0.5mmol)，将含有2-氰基-[(9z)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-亚基]乙酸乙酯(1-4，1.25g，5mmol)的乙醚(10ml)溶液在冰浴下30分钟内滴加到上述反应液中，保持冰浴下反应搅拌三小时，将反应液倾入1n冰盐酸(25ml)，用乙醚萃取(3x50ml)，饱和食盐水(50ml)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，通过硅胶柱(7％到60％etoac/pe)得到黄色油状化合物氰基-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙酸乙基酯(680mg,产率40％)。
[0243]
第二步：制备2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]乙腈(21b)
[0244]
向氢氧化钾(112mg,2mmol)的乙二醇(5ml)溶液中加入氰基-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙酸乙酯(21a，0.68g，2mmol)，将反应液加热至120℃反应三小时，冷却，加入水(50ml)，用乙醚(3x50ml)萃取，依次用水洗(50ml)，饱和食盐水洗涤(50ml)，无水硫酸钠干燥，浓缩通过柱层析(5％到40％乙酸乙酯/正己烷)得到固体化合物2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]乙腈(21b，400mg)，产率73％。
[0245]
第三步：制备2-(9-(5-氟吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙胺(21c)
[0246]
在0℃下，向化合物2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]乙腈(274mg，1.0mmol)的无水乙醚(10ml)溶液中加入四氢锂铝(120mg,3mmol)，将反应液搅拌2小时后，依次用0.1ml水,0.1ml的15％氢氧化钠和0.1ml水淬灭，用乙醚萃取(3x20ml)，无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状物2-(9-(5-氟吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙胺(200mg,产率72％)。
[0247]
第四步：制备{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(2-(三氟甲氧基)-苯甲基)-胺(h21)
[0248]
向含有2-(9-(5-氟吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙胺(21c，70mg，0.25mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入硫酸镁(72mg,0.6mmol)，室温下再加入2-三氟甲氧基苯甲醛(57mg,0.3mmol)，将反应液搅拌过夜，过滤，溶液浓缩，在0℃下加入5ml的甲醇，一次性加入硼氢化钠(38mg,1mmol)后，将反应液在0℃下搅拌一小时，用水(10ml)淬灭，用二氯甲烷萃取(3x20ml)，分离出的有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩通过制备薄层析得到黄色油状物{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(2-(三氟甲氧基)-苯甲基)-胺(33mg,30％)。
[0249]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.37(d,j＝2.8hz,1h),7.33-7.27(m,2h),7.26-7.15(m,4h),3.72-3.66(m,4h),2.44(td,j＝11.2,5.2hz,1h),2.36(dd,j＝14.0,2.0hz,1h),2.27(dd,j＝13.6,2.0hz,1h),2.44(td,j＝11.2,4.8hz,1h),1.96-1.87(m,2h),1.76-1.64(m,4h),1.52-1.35(m,4h),1.09(m,1h),0.70-0.61(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c24h28f4n2o2 453[m 1] 。
[0250]
实施例22：(2-三氟甲氧基苯甲基)-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-胺的制备(h22)
[0251][0252]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-三氟甲氧基苯甲醛，制得(2-三氟甲氧基苯甲基)-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-胺(22，34mg)，产率28％，外观为淡黄色粘稠物。
[0253]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.54-8.52(m,1h),7.59(dd,j＝1.2hz,1h),7.25-7.20(m,2h),7.20-7.08(m,4h),3.75-3.64(m,4h),2.62-2.32(m,3h),1.91-1.73(m,3h),1.69-1.40(m,8h),1.09(m,1h),0.70-0.62(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c24h29f3n2o2435[m 1] 。
[0254]
实施例23：6-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-4,5,6,7-四氢-噻吩并[2,3-c]吡啶的制备(h23)
[0255][0256]
制备方法同实施例19，将第二步的7-三氟甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉换为4,5,6,7-四氢-噻吩并[2,3-c]吡啶，制得6-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-4,5,6,7-四氢-噻吩并[2,3-c]吡啶(23，70mg)，产率64％，外观为黄色油状物。
[0257]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.54-8.56(m,1h),7.61(dd,j＝0.8hz,1h),7.31-7.29(m,1h),7.11-7.02(m,2h),6.70(d,j＝5.2hz,1h),3.78-3.71(m,2h),3.54-3.52(m,2h),2.62(d,j＝5.2hz,4h),2.36-2.32(m,3h),2.07(m,1h),1.97-1.91(m,2h),1.84-1.73(m,4h),1.47(m,2h),1.09(m,1h),0.70-0.62(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c23h30n2os 383[m 1] 。
[0258]
实施例24：3-甲基氨基-噻吩-2-羧酸[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-酰胺的制备(h24)
[0259][0260]
第一步：制备3-(叔丁氧甲酰胺基)噻吩-2-甲酸甲酯(24b)
[0261]
在0℃下，向化合物2-氨基噻吩-2-甲酸甲酯(24a,5g,31.8mmol)的四氢呋喃(70ml)溶液中加入三乙胺(6.4g,64mmol)，二碳酸二叔丁酯(8.3g,38mmol)，将反应液室温搅拌过夜，将反应液浓缩，用水(100ml)稀释，用乙酸乙酯萃取(100mlx3)，合并有机相，所得有机相依次用水洗(100ml)，饱和食盐水洗(100ml)，无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色固体化合物3-(叔丁氧甲酰胺基)噻吩-2-甲酸甲酯(24b,7.5g)，产率92％。
[0262]
第二步：制备3-((叔丁氧甲酰基)(甲基)胺基)噻吩-2-甲酸甲酯(24c)
[0263]
将化合物3-(叔丁氧甲酰胺基)噻吩-2-甲酸甲酯(24b,5.2g,20mmol)溶于四氢呋喃(70ml)中，冰浴下加入钠氢(960mg,24mmol)，冰浴下将反应液搅拌30分钟，然后滴加碘甲烷(3.4g,24mmol)，将反应液室温搅拌过夜，用饱和的氯化铵淬灭，用乙酸乙酯(100mlx3)萃取，有机相依次用水洗(30ml
×
2)，饱和食盐水洗(30ml)，无水硫酸钠干燥，浓缩，通过硅胶柱(pe:ea＝100:1-3:1)得到黄色油状物3-((叔丁氧甲酰基)(甲基)胺基)噻吩-2-甲酸甲酯(24c,2.8g)，产率51％。
[0264]
第三步：制备3-((叔丁氧甲酰基)(甲基)胺基)噻吩-2-甲酸(24d)
[0265]
将化合物3-((叔丁氧甲酰基)(甲基)胺基)噻吩-2-甲酸甲酯(24c，1.3g，5mmol)溶于乙醇(20ml)，加入氢氧化钠的水溶液(4m,10ml,40mmol)，将反应液室温搅拌过夜，将反应液浓缩，加水(10ml)稀释，调ph＝3，然后用乙酸乙酯萃取(50mlx3)，所得有机相依次用水洗(50ml
×
2)，饱和食盐水(50ml)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到黄色固体3-((叔丁氧甲酰基)(甲基)胺基)噻吩-2-甲酸(24d，1.1g,产率92％)。
[0266]
第四步：制备叔丁基甲基(2-((9-(吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基)氨甲酰基)噻吩-3-基)氨基甲酸酯(24e)
[0267]
向3-((叔丁氧甲酰基)(甲基)胺基)噻吩-2-甲酸(24d,122mg,0.5mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中加入hobt(135mg,1mmol),edci(191mg,1mmol)，在氩气保护下室温搅拌十分钟，然后加入2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙胺(1c,130mg,0.5mmol)和二异丙基乙基胺(258mg,2mmol)，将反应液室温搅拌过夜，tlc(dcm:meoh＝20:1,rf＝0.4)点板发现原料消失，反应液中加入水(30ml)，用二氯甲烷萃取(30mlx3)，合并有机相，所得有机相依次用水洗(30ml)，饱和食盐水洗(30ml)，无水硫酸钠干燥，浓缩通过薄层析(dcm:meoh＝20:1)得到黄色固体物叔丁基甲基(2-((9-(吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基)氨甲酰基)噻吩-3-基)氨基甲酸酯(24e,170mg)，产率68％。
[0268]
第五步：制备3-甲基氨基-噻吩-2-羧酸[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-酰胺(h24)
[0269]
向叔丁基甲基(2-((9-(吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基)氨甲酰基)噻吩-3-基)氨基甲酸酯(24e,150mg,0.3mmol)的二氯甲烷(2ml)的溶液中加入三氟乙酸(2ml)，将反应液搅拌过夜，再将反应液浓缩，用水(10ml)稀释，调ph＝9-10,然后用乙酸乙酯萃取(30mlx3),合并有机相，有机相水洗(30ml
×
2),饱和食盐水洗(30ml)，无水硫酸钠干燥，浓缩，通过硅胶柱(dcm:meoh＝100:1-10:1)得到黄色固体化合物24(90mg,产率75％)。
[0270]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.55(d,j＝4.8hz,1h),7.90(d,j＝8.0hz,1h),7.66(d,j＝8.4hz,1h),7.28-7.22(m,1h),7.10(s,1h),6.55(d,j＝7.2hz,1h),6.07(t,j＝0.6hz,1h),3.83-3.75(m,2h),3.41-3.44(m,1h),3.24-3.21(m,1h),2.89(s,3h),2.59-2.56(m,2h),2.27(d,j＝1.2hz,1h),2.09-2.03(m,1h),1.94-1.81(m,2h),1.52-1.40(m,7h),1.09(m,1h),0.70-0.62(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c22h29n3o2s 400[m 1] 。
[0271]
实施例25：[(5-甲氧基-1h-吡唑-4-基)甲基]-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺的制备(h25)
[0272][0273]
将2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙胺(1c,70mg,0.27mmol)，(5-甲氧基-1h-吡唑-1-基)甲醇(35mg,0.27mmol)和对甲苯磺酸一水合物(tsoh.h2o,10mg,0.054mmol)溶于二氯甲烷中(3ml)，加热回流16小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)，二氯甲烷萃取(15ml x 3)，有机层合并后干燥浓缩，经制备hplc分离纯化得到化合物[(5-甲氧基-1h-吡唑-4-基)甲基]-[2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)乙基]胺(20mg，黄色油状物)，产率：7％。
[0274]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.62(dd,j＝1.2hz,1h),8.00-7.96(m,1h),7.65(d,j＝8.4hz,1h),7.50(s,1h),7.45-7.42(m,1h),3.86-3.85(m,5h),3.75-3.73(m,2h),2.93-2.85(m,1h),2.49-2.31(m,3h),2.15-2.07(m,1h),1.92-1.42(m,9h),1.52-1.40(m,7h),1.13-1.07(m,1h),0.75-0.67(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
21h30
n4o
2 371[m 1]

。
[0275]
实施例26：((3-甲氧基噻吩-2-基)甲基)-2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙基]-1-胺的制备(h26)
[0276][0277]
第一步：制备2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]丙腈(26a)
[0278]
将2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]乙腈(1b，0.256g，1mmol)溶于无水n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，冷却至0℃，加入钠氢(60mg，1.5mmol)，0℃继续反应30分钟后加入碘甲烷(284mg，2mmol)，缓慢升至室温过夜。向反应液中加入冰水(10ml)淬灭，乙酸乙酯(15ml x 3)萃取，有机层水洗(15ml x 3)，饱和氯化钠洗(15ml)，干燥浓缩，通过硅胶
柱(展开剂5％到40％乙酸乙酯/正己烷)得到黄色固体化合物2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]丙腈(26a，0.2g)，产率：74％。
[0279]
第二步：制备2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙-1-胺(26b)
[0280]
在0℃下向处于无水乙醚(15ml)中的2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]丙腈(26a，270mg，1.0mmol)的溶液中滴加四氢锂铝(120mg，3mmol)。2小时后向反应液中分别加入水(0.1ml)、15％氢氧化钠水溶液(0.1ml)，然后水(0.1ml)淬灭。将反应混合物用乙醚(3
×
20ml)萃取，无水硫酸镁干燥，过滤后浓缩得到2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙-1-胺(26b，200mg)，产率：73％，为黄色油状物，其在未进一步纯化下使用。
[0281]
第三步：制备((3-甲氧基噻吩-2-基)甲基)-2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙基]-1-胺(h26)
[0282]
2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙-1-胺(26b，137mg，0.5mmol)、无水硫酸镁(72mg，0.6mmol)加入到无水二氯甲烷中(8ml)，加入3-甲氧基噻吩-2-醛(78mg，0.55mmol)，室温搅拌过夜。将反应液过滤，滤液浓缩后加入无水甲醇中(5ml)，0℃下加入硼氢化钠(38mg，1mmol)，1小时后加水(10ml)，二氯甲烷萃取(3
×
20ml)，饱和食盐水洗(10ml)，无水硫酸钠干燥。薄层色谱法纯化(展开剂为0-10％二氯甲烷/甲醇)得到化合物((3-甲氧基噻吩-2-基)甲基)-2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙基]-1-胺(26，100mg)，产率50％。
[0283]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.54(dd,j＝4.8,0.8hz,1h),7.62(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.24(d,j＝8.0hz,1h),7.18(d,j＝5.2hz,1h),7.12-7.06(qd,j＝4.8,1.2hz,1h),6.85(d,j＝5.3hz,1h),3.78(m,5h),3.74-3.71(m,2h),2.53(td,j＝10.8,5.2hz,1h),2.42-2.30(m,2h),2.12(td,j＝11.2,5.2hz,1h),2.01-1.94(m,1h),1.89(d,j＝13.6hz,1h),1.77-1.60(m,3h),1.50-1.35(m,4h),1.08(m,4h),0.70-0.64(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
23h32
n2o2s401[m 1]

。
[0284]
实施例27：((3-甲氧基噻吩-2-基)甲基)-1-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙基]-2-胺的制备(h27)
[0285][0286]
第一步：制备1-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙-2-胺(27a)
[0287]
2-[9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基]乙腈(1b，0.256g，1mmol)溶于无水四氢呋喃(10ml)中，冷却至-78℃，缓慢滴加甲基锂(0.94ml，1.5mmol，1.6m的乙醚溶液)，加完后在-78℃继续反应一小时，缓慢加入甲醇(10ml)淬灭，后缓慢升至室温继续搅拌2小时。向反应液中加入冰水(10ml)淬灭，乙酸乙酯(15ml x 3)萃取，有机层水洗(15ml x 3)，饱和氯化钠洗(15ml)，干燥浓缩。浓缩反应液加入甲醇溶解，加入10％钯碳(10mg)，冲入氢气，室温下反应过夜。过滤后蒸干溶剂得到1-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙-2-胺(27a)，为黄色油状物(27a，0.15g)，产率55％，其在未进一步纯化下使用。
[0288]
第二步：制备((3-甲氧基噻吩-2-基)甲基)-1-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙基]-2-胺(h27)
[0289]
用1-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙-2-胺(27a)代替2-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙-1-胺(26b)，通过实施例26制备中描述的步骤，制备((3-甲氧基噻吩-2-基)甲基)-1-(9-(吡啶-2-基)-6-氧杂螺[4.5]癸烷-9-基)丙基]-2-胺(27，34mg)，产率28％，外观为淡黄色粘稠物。
[0290]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.55(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),7.61(td,j＝7.6,2.0hz,1h),7.32(d,j＝8.0hz,1h),7.24(d,j＝5.2hz,1h),7.10-7.06(qd,j＝4.8,1.2hz,1h),6.93(d,j＝5.2hz,1h),6.44(s,1h),4.63(s,2h),3.76-3.73(m,1h),3.34-3.26(m,1h),2.99-2.90(m,1h),2.47(dd,j＝13.6,2.0hz,1h),2.38(dd,j＝13.6,2.0hz,1h),2.13-2.05(m,1h),1.90(d,j＝13.6hz,2h),1.83-1.58(m,5h),1.53-1.44(m,3h),1.09(m,4h),0.71-0.64(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
23h32
n2o2s 401[m 1]

。
[0291]
实施例28：(3-溴-2-三氟甲氧基苯甲基)-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-胺的制备(h28)
[0292][0293]
制备方法同实施例1，将第七步中的3-三氟甲氧基苯甲醛换为2-三氟甲氧基-3-溴苯甲醛，制得(3-溴-2-三氟甲氧基苯甲基)-[2-(9-吡啶-2-基-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基)-乙基]-胺(28，35mg)，产率55％，外观为淡黄色粘稠物。
[0294]
1h nmr(400mhz,cd3od):δ8.50(d,j＝3.6hz,1h),7.77-7.73(m,1h),7.62-7.60(m,1h),7.46(d,j＝8.0hz,1h),7.38(d,j＝7.6hz,1h),7.24-7.21(m,2h),3.80-3.71(m,4h),2.49-2.38(m,3h),2.05-1.87(m,3h),1.77-1.38(m,8h),1.13-1.08(m,1h),0.77-0.69(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h28
brf3n3o
2 513.1[m 1]

。
[0295]
实施例29：{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(2-(二氟甲氧基)-苯甲基)-胺的制备(h29)
[0296][0297]
制备方法同实施例21，将第四步中的2-三氟甲氧基苯甲醛换为2-二氟甲氧基苯甲醛，制得{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(2-(二氟甲氧基)-苯
甲基)-胺(29，22mg)，产率18％，外观为黄色粘稠物。
[0298]
1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.38(dd,j＝3.0,0.6hz,1h),7.35-7.24(m,4h),7.13(td,j＝7.5,1.2hz,1h),7.09-7.03(m,1h),3.80-3.64(m,4h),2.50(td,j＝11.2,5.2hz,1h),2.37(dd,j＝13.7,2.9hz,1h),2.28(dd,j＝13.9,2.1hz,1h),2.09(td,j＝11.2,4.8hz,1h),2.02-1.88(m,2h),1.84-1.61(m,4h),1.55-1.36(m,4h),1.10(dd,j＝14.2,6.6hz,1h),0.66(dt,j＝13.5,9.0hz,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h29
f3n2o
2 435.2[m 1]

。
[0299]
实施例30：{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-((3-氯噻吩-2-基)-甲基)-胺的制备(h30)
[0300][0301]
制备方法同实施例21，将第四步中的2-三氟甲氧基苯甲醛换为3-氯噻吩甲醛，制得{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-((3-氯噻吩-2-基)-甲基)-胺(30，46mg)，产率59％，外观为浅黄色粘稠物。
[0302]
1h nmr(400mhz,cdcl3)ppm 8.40(dd,j＝2.8hz,1h),7.31-7.36(td,j＝8.4,3.2hz,1h),7.28-7.29(d,j＝4.4hz,1h),7.14-7.15(d,j＝5.6hz,1h),6.82-6.84(d,j＝5.6hz,1h),3.68-3.78(m,4h),2.46-2.53(td,j＝11.2,5.6hz,1h),2.38-2.42(m,1h),2.28-2.32(m,1h),2.07-2.14(td,j＝11.2,5.6hz,1h),1.90-1.97(m,2h),1.60-1.78(m,6h),1.39-1.49(m,3h),1.09-1.14(m,1h),0.63-0.71(m,1h).lc-ms:m/z(esi )计算为c
21h26
clfn2os 409.1[m 1]

.
[0303]
实施例31：{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(3,4-二甲基-苯甲基)-胺的制备(h31)
[0304][0305]
制备方法同实施例21，将第四步中的2-三氟甲氧基苯甲醛换为3,4-二甲基苯甲醛，制得{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(3,4-二甲基-苯甲基)-胺(31，108mg)，产率38％，外观为黄色粘稠物。
[0306]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.31
–
8.25(m,1h),7.35
–
7.23(m,2h),7.06(s,1h),7.03(d,j＝1.2hz,2h),3.75
–
3.61(m,4h),2.71
–
2.57(m,1h),2.31
–
2.20(m,2h),2.20(s,1h),2.18(s,3h),2.16(s,4h),2.04
–
1.96(m,1h),1.87(d,j＝13.6hz,1h),1.73(t,j＝9.2hz,1h),1.69
–
1.58(m,1h),1.52
–
1.31(m,4h),1.03(s,1h),0.59(dt,j＝13.3,8.7hz,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
25h33
fn2o 397.3[m 1]

。
[0307]
实施例32：{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(3-氯-2-甲基-苯甲基)-胺的制备(h32)
[0308][0309]
制备方法同实施例21，将第四步中的2-三氟甲氧基苯甲醛换为3-氯-2-甲基苯甲醛，制得{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-(3-氯-2-甲基-苯甲基)-胺(32，35mg)，产率29％，外观为黄色粘稠物。
[0310]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.38(d,j＝2.9hz,1h),7.32(ddd,j＝8.8,8.0,2.9hz,1h),7.25(d,j＝8.2hz,1h),7.24
–
7.20(m,1h),7.10
–
6.96(m,2h),3.76
–
3.66(m,2h),3.60(s,2h),2.49(td,j＝11.2,5.3hz,1h),2.38(ddt,j＝8.1,5.4,2.7hz,1h),2.32
–
2.23(m,4h),2.09(td,j＝11.2,4.9hz,1h),2.00
–
1.86(m,2h),1.79
–
1.56(m,5h),1.53
–
1.33(m,5h),1.08(dd,j＝13.6,6.4hz,1h),0.64(dt,j＝13.6,8.9hz,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
24h30
clfn2o 417.1[m 1]

。
[0311]
实施例33：{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-((3-二氟甲氧基噻吩-2-基)-甲基)-胺的制备(h33)
[0312][0313]
制备方法同实施例21，将第四步中的2-三氟甲氧基苯甲醛换为2-二氟甲氧基噻吩甲醛，制得{2-[9-(5-氟-吡啶-2-基)-6-氧杂-螺[4.5]癸-9-基]-乙基}-((3-二氟甲氧基噻吩-2-基)-甲基)-胺(33，58mg)，产率36％，外观为浅黄色粘稠物。
[0314]
1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.36(d,j＝2.8hz,1h),7.36-7.25(m,2h),7.14(d,j＝5.5hz,1h),6.82-6.78(m,1h),6.44(t,j＝73.7hz,1h),3.81(s,2h),3.77-3.62(m,2h),2.59-2.47(m,1h),2.36(d,j＝13.5hz,1h),2.30-2.23(m,1h),2.13(td,j＝11.3,4.7hz,1h),2.04-1.92(m,1h),1.84-1.56(m,5h),1.44(qd,j＝18.0,16.4,6.6hz,4h),1.14-1.01(m,1h),0.70-0.57(m,1h).lc-ms:m/z(es )计算为c
22h27
f3n2o2s 441.2[m 1]

。
[0315]
生物学实验
[0316]
实验一、本发明的化合物对mor、kor、dor阿片受体的激动作用测试
[0317]
1.实验目的和方法
[0318]
本实验目的是为了测试本发明的化合物对μ阿片受体(mor)、κ阿片受体(kor)、δ阿片受体(dor)的激动作用，根据半最大效应浓度(ec
50
)评价化合物的体外活性。
[0319]
1.1细胞培养和细胞板的准备
[0320]
分别使用稳定表达μ阿片受体、δ阿片受体或κ阿片受体的hek293细胞系(稳定表达细胞系由药明康德提供)进行此测试。实验前在37℃水浴中快速解冻细胞，转移至50ml锥形管中，加入dmem为主的细胞培养基(invitrogen,cat#11960)直至45毫升。室温下1000rpm离心5分钟以沉淀细胞。吸出上清液，小心不要吸出细胞。将沉淀物轻弹至松散的细胞并重新悬浮于45ml dmem培养基中，使用vi-cell xr全自动细胞活力检测仪(beckman coulter)对细胞进行计数，根据计数结果调节细胞浓度为10
×
105细胞/ml。向384孔微孔板(greiner，#781280)中转入20μl细胞悬浮液(20
×
103细胞/孔)，置于37℃，5％co2培养箱(thermo)中过夜。
[0321]
1.2flipr钙流-4检测试剂盒(赛默飞世尔科技(中国)有限公司，货号f30206)溶液配置
[0322]
丙磺舒母液配置：将1ml flipr测试液加到77mg丙磺舒中配置成250mm的溶液。现配现用。
[0323]
2x(8um)fluo-4 direct tm上样缓冲液配置：解冻一瓶fluo-4 directtm晶体(f10471，试剂盒中提供)，将10ml flipr测试缓冲液(试剂盒中提供)加入样品瓶中，加入0.2ml上述丙磺舒母液，最终丙磺舒测定浓度为2.5mm，涡旋并静置10分钟(避光)。现配现用。
[0324]
1.3化合物的配置和化合物板的准备
[0325]
通过echo-550仪器(labcyte)将测试化合物h01-h33、吗啡和对应的阳性药(分别为dmago、dpdpe、u69593)在100％dmso中进行10个浓度的梯度稀释，从1200nm开始，4倍梯度，浓度范围为0.004578nm-1200nm。将如上梯度浓度的900nl化合物溶液转移到384孔化合物板备用(greiner，#781280)。
[0326]
本实验中所用的阳性药物分别：对于μ阿片受体，dmago([d-ala,nmephe,gly-ol]-脑啡肽,78123-71-4，tocris)；对于δ阿片受体，dpdpe([d-pen,d-pen]-脑啡肽,88373-73-3,吉尔生化有限公司),对于κ阿片受体，u69593(96744-75-1，sigma)。
[0327]
1.4荧光成像读板仪(flipr)检测
[0328]
从培养箱中取出如上准备的细胞板，加入20ul 2x fluo-4 directtm缓冲液。细胞板中的最终体积为40μl。在37℃，5％co2下孵育50分钟，在室温下孵育10分钟，放入flipr仪器(md)中，放入化合物板和枪头盒。在fliprtetra平台上运行方案，将10μl阳性药物或测试化合物从化合物板转至细胞板，读取荧光信号。
[0329]
1.5数据处理及统计：
[0330]
将上述每孔所产生的信号值进行计算，计算公式为活性％＝(测试化合物信号值-溶剂信号值)/(阳性药物信号值-溶剂信号值)。将活性百分比和相应化合物浓度通过graph pad7.0软件中激动剂公式进行数据统计和作图，计算出ec
50
值，如下表所示。
[0331]
2.测试结果和结论
[0332]
本发明的化合物对mor、dor、kor受体的活性测定的具体ec
50
值见以下表1。由表1可知，本发明的化合物对mor受体的激动效果优于吗啡。此外，本发明的化合物对dor、kor激动活性弱，对mor激动活性强，对mor受体具有高选择性。
[0333]
表1 利用本发明的化合物激动后mor、dor、kor受体的ec
50
值
[0334]
[0335][0336]
实验二、本发明化合物对mor受体的camp通路的激动作用测试
[0337]
1.实验目的和方法
[0338]
本实验目的是为了测试发明化合物对mor的camp通路的激动作用，根据ec
50
评价化合物的体外活性。
[0339]
1.1实验原理和技术
[0340]
本实验通过discoverx公司的hithunter磷酸腺苷测试酶片段互补(hithunter camp assay efc)技术来测量细胞camp水平，监测g蛋白偶联受体(gpcr)的功能状态。
[0341]
hithunter磷酸腺苷测试酶片段互补技术是discoverx公司的专利技术，原理就是将β-半乳糖苷酶(β-gal)分成两个片段，酶供体(ed)和酶受体(ea)，分开时各自无活性，但在溶液中可以迅速互补形成活性β-gal酶，产生信号。
[0342]
本测试中，细胞内camp和ed-camp(ed标记camp)与camp抗体(ab)结合，ed-camp-ab无法与ea互补，但ed-camp可与ea互补形成活性酶，产生发光信号。产生的信号量与细胞中camp的量成正比。
[0343]
mor受体与抑制型gαi蛋白结合，所以实验中使用毛喉萜(forskolin，用于诱导camp信号)诱导camp表达，测定化合物对上述诱导的抑制作用。
[0344]
1.2化合物的配置
[0345]
将本实验所用化合物h01-h33、吗啡、内啡肽(作为参照药物用于此实验)溶解于dmso配置成1mm的母液。并配制如下工作液：从4um的最高浓度开始，以3倍稀释，共10个浓度梯度，工作液浓度范围为0.000232-4um。
[0346]
1.3细胞培养与准备
[0347]
根据细胞标准操作程序(sop)将camp hunter细胞系(hek293，discoverx)从冷冻库中取出、扩增，取20ml接种到384孔微孔板中，37℃下孵育过夜。
[0348]
1.4实验流程
[0349]
使用hithunter camp assay检测试剂盒(discoverx，90-0075sm)，其中含有camp缓冲液、camp检测液、camp工作液a。
[0350]
将细胞培养基更换成15μl camp缓冲液(成分为：10ul的hbss/10mm hepes液，5ul的camp ab试剂(抗体，用于结合camp))。加入5μl化合物溶液或吗啡溶液或内啡肽溶液的工作液(含20um的毛喉萜(discoverx，92-0005))，37℃孵育60分钟。加入20μl camp检测液(成分为：campxs ed/cl(含ed片段，用于标记camp))孵育1小时，最后加入20μl camp工作液a(成分为：campxs ea(ea片段，用于结合ed-camp，并产生信号))温育3小时，通过perkinelmer envision
tm
仪器，测定化学发光信号。
[0351]
该实验设置了复孔。
[0352]
1.5数据处理与统计分析
[0353]
使用公式计算每孔信号活性百分比＝100％
×
(1-(测试样品的平均rlu
–
max对照的平均rlu)/(溶剂对照平均rlu-max对照的平均rlu))。其中max对照指内啡肽溶液的荧光信号值，溶剂对照指dmso的荧光信号值。通过discoverx cbis数据分析工作站(cheminnovation,ca)将信号活性百分比与化合物浓度，通过激动剂公式(软件自带，通用)进行统计分析，计算ec
50
值。
[0354]
2.测试结果和结论
[0355]
本发明的化合物激动mor影响camp水平的ec50值见以下表2。由表2所示数据可知，利用本发的明化合物测得的camp通路激动活性强，性能优于吗啡。
[0356]
表2 本发明化合物激动mor影响camp水平的ec
50
[0357]
实施例编号ec50(nm)_吗啡47.2
h014.93h024.06h034.36h044.36h0510.2h0611.8h073.08h084.77h098.45h102.89h117.31h125.51h139.43h1415.85h154.28h161.36h171.89h182.35h1918.58h2019.85h212.57h2211.89h239.73h243.74h2512.78h266.95h2711.96h2814.21h2910.45h3017.36h318.73h3213.45h3312.04
[0358]
实验三、本发明的化合物对mor的β-arrestin信号通路活性测试
[0359]
1.实验目的和方法
[0360]
本实验目的是为了测试本发明的化合物对mor的β-arrestin信号通路的活性。
[0361]
1.1实验原理和技术
[0362]
本实验通过discoverx公司的酶片段互补技术(pathhunterβ-arrestin gpcr测试)来测量细胞β-arrestin的水平。配体结合后的gpcr活化导致β-arrestin募集到受体上，
通过酶片段互补(efc)技术，获得信号检测来检测β-arrestin来测量gpcr的活化状态。
[0363]
pathhunterβ-arrestin gpcr测试将b-半乳糖苷酶(b-gal)酶分成两个片段，即酶供体(ed)和酶受体(ea)，这些片段独立时没有活性，在溶液中它们可以聚集在一起并互补以形成活性b-gal酶，进而产生信号。
[0364]
1.2化合物的配置
[0365]
将本实验所用化合物h01-h33、吗啡、内啡肽(本实验的参照药物)溶解于dmso配置成1mm的母液。并配制如下工作液：从最高浓度5um开始，以3倍稀释，共10个浓度梯度，浓度范围为0.00029-5um。
[0366]
1.3细胞的培养与准备
[0367]
根据标准操作程序(sop)将pathhunter细胞系(hek293，discoverx)从冷冻库中取出、扩增，以20μl的体积接种到384孔微孔板中，37℃孵育60mins。加入5μl的化合物或吗啡或内啡肽的工作液到上述微孔板的孔中，37℃或室温下孵育180分钟。
[0368]
1.4信号检测
[0369]
使用pathhunter检测试剂盒(discoverx，93-0001)。
[0370]
根据试剂盒供货商的推荐在加入了化合物或吗啡或内啡肽的细胞板中加入pathhunter检测试剂，在室温下孵育1小时产生测试信号。通过perkinelmer envision
tm
仪器，测定化学发光信号。活性计算公式：活性百分比＝100％
×
(测试样品的平均rlu-溶剂对照的平均rlu)/(max对照配体的平均rlu
–
溶剂对照的平均rlu)。max对照为内啡肽所产生的荧光信号值。计算的活性百分比以最大反应效率(max response，emax)表示。
[0371]
2.测试结果和结论
[0372]
本发明的化合物激动mor受体影响β-arrestin信号通路活性的ec
50
见以下表2。由以下表2中显示的数据可知，利用本发明的化合物测得的β-arrestin信号通路的活性较弱，优于吗啡。
[0373]
表3 本发明的化合物激动mor受体影响β-arrestin信号通路活性的ec
50
[0374]
[0375][0376]
实验四、化合物对大鼠手术切口损伤模型的效果测试
[0377]
1.摘要
[0378]
以体重在200g-300g的8周龄雄性sd大鼠为实验动物，测定实施例h02化合物、实施例h04化合物、实施例h10化合物、实施例h16化合物、实施例h17化合物、实施例h18化合物、实施例h21化合物、实施例h24化合物静脉给予后对大鼠手术痛的效果。探讨本发明的化合物的镇痛效果。
[0379]
2.实验方案
[0380]
2.1实验用化合物
[0381]
实施例h02化合物、实施例h04化合物、实施例h10化合物、实施例h16化合物、实施
例h17化合物、实施例h18化合物、实施例h21化合物、实施例h24化合物。
[0382]
2.2化合物的配制:
[0383]
称取一定量的化合物或trv130(mce，15150)，溶于乙醇/蓖麻油/水＝10/10/80，成澄清透明溶液。
[0384]
2.3操作
[0385]
2.3.1实验流程
[0386]
使大鼠适应实验环境3天后，进行术前基础值测定，随后将进行如下描述的手术痛操作，手术后约24小时，对所有动物进行给药前基础值测定，机械痛觉超敏的动物(缩爪阈值(pwt)小于5g)按pwt随机分到各个给药组。在静脉给药阳性药物trv130或本发明的各化合物(以0.3mg/kg的剂量)后30min、60min测定疼痛阈值。
[0387]
2.3.2手术痛操作
[0388]
手术过程执行无菌操作，手术器械(剪刀，镊子，手术刀，手术棉，缝合线)在手术前消毒。使用戊巴比妥钠(50mg/kg,腹腔注射)麻醉动物，挤压动物脚趾以确认动物手术前已经完全麻醉。距离脚后跟0.5cm位置起，纵向向脚趾方向做一个约1cm长的切口，切开皮肤后抬起趾短屈肌并造成纵向钝性损伤。按压止血后，缝合伤口。等动物完全苏醒后(可自由活动)将动物放回笼中(手术痛模型的构建参考文章：timothy j.brennan,erik p.vandermeulen,g.f.gebhart.characterization of a rat model of incisional pain.pain,64(1996):493-501)。
[0389]
2.3.3疼痛阈值测定
[0390]
使用上下法(up-down)进行痛觉敏感的测定。机械痛结果以动物的缩爪反应阈值(pwt)来表示。将大鼠单独放置在有机玻璃盒中，盒子底部为网格以保证大鼠脚部可以测试。在测试前使大鼠适应15分钟，适应完成后，使用测试纤维(von frey纤维丝,west coast)在大鼠后脚中部测试。测试纤维包括8个测试强度：3.61(0.4g)、3.84(0.6g)、4.08(1g)、4.31(2g)、4.56(4g)、4.74(6g)、4.93(8g)、5.18(15g)。测试时，将测试纤维垂直压向皮肤并施力使纤维弯曲6-8秒，每次测试间隔5秒。测试时，动物迅速缩脚被记为疼痛反应。测试纤维离开动物皮肤时动物缩脚也被记为疼痛反应。首先从2g开始，依据大鼠有无疼痛反应，再更换下一测试强度或上一测试强度。记录大鼠对不同测试强度的一系列反应。若大鼠出现疼痛反应，以“x”表示，若无疼痛反应，以“o”表示，可得到一串以“o”或“x”组合的序列，以出现“x”的前一次“o”作为起点，选择包括该起点的6次连续刺激反应，如“oxoxoo”，作为推算50％缩爪反应阈值的关键序列，以如下公式计算50％缩爪反应阈值：50％缩爪反应阈值(g)＝10
(xf kδ)
/10,000。其中，xf为最末次测试所用von frey纤维丝的对数值，k值是动物撤足反应模式(测试时记录)，为根据测量所得“x”、“o”序列查表后得到的值，δ＝测试中使用的von frey纤维丝间对数差值的均值。
[0391]
2.4实验结果及结论
[0392]
本发明的化合物对大鼠手术痛的药效测试结果见以下表4。由以下表4中显示的数据可看出，在本发明的化合物以0.3mg/kg的剂量给药后0.5小时和1小时，能抑制大鼠术后痛模型诱导的机械痛觉超敏，效果优于阳性药trv130。实验结果表明，本发明的化合物镇痛效果好，并且药效持续时间长。
[0393]
表4 本发明化合物对大鼠手术痛的药效测试
[0394][0395]
实验五、化合物对大鼠呼吸抑制的影响
[0396]
1.摘要
[0397]
以体重在200g-300g的8周龄雄性sd大鼠为实验动物，测定实施例h05化合物、实施例h08化合物、实施例h10化合物、实施例h16化合物、实施例h17化合物、实施例h18化合物、实施例h21化合物、实施例h24化合物静脉给予后对大鼠血样分压的效果。探讨发明化合物对呼吸抑制的影响。
[0398]
2.实验方案
[0399]
2.1实验用化合物
[0400]
实施例h05化合物、实施例h08化合物、实施例h10化合物、实施例h16化合物、实施例h17化合物、实施例h18化合物、实施例h21化合物、实施例h24化合物。
[0401]
2.2化合物的配制
[0402]
称取一定量的化合物或吗啡，溶于乙醇/蓖麻油/水＝10/10/80，成澄清透明溶液。
[0403]
2.3操作
[0404]
使大鼠适应实验环境3天后，每只动物进行戊巴比妥钠(50-60mg/kg,i.p)麻醉，然后分离右侧颈总动脉，实施单侧颈动脉埋管手术(pe60,id*od*长度为0.76mm*1.22mm*20cm，埋入动脉1cm，管内注满肝素钠封管液)，术后恢复1天，于称重后以手术痛药效剂量静脉单次给予本发明的各化合物或吗啡，分别在给药前、给药后5min、30min、60min、120min通过埋置管采取动脉血0.4-0.5ml，立即用血气分析仪(radiometer medical aps,abl90flex)测量血液的酸碱度(ph)、二氧化碳分压(pco2)和氧分压(po2)。
[0405]
2.4实验结果及结论
[0406]
在本发明的化合物和吗啡给药前、给药后各时间点，测得的二氧化碳分压见以下表5。由以下表5可见，本发明的化合物在药效剂量下的呼吸抑制的影响较弱。
[0407]
表5 本发明化合物对大鼠呼吸抑制的效果测试
sciex api4000三级四级杆质谱配备电喷雾电离源(esi)(applied biosystems，加拿大)。用于控制液质联用仪和定量分析的软件为analyst 1.6(applied biosystems，加拿大)，药动学参数采用winnonlin(version 5.2,pharsight,mountain view,ca)非房室模型进行分析。
[0423]
液相色谱分离采用aq-c18色谱柱(50
×
2.1mm，内径5μm)。柱温维持在室温。流动相的组成和梯度分别见下表6。
[0424]
表6.化合物的液相条件
[0425][0426]
待测化合物及内标的质谱条件见下表7。
[0427]
表7.质谱条件
[0428][0429]
2.5标准和质控溶液的准备
[0430]
将待测化合物溶解在dmso中配制成浓度为1mg/ml的储备液，用70％乙腈稀释得到一系列的标准工作溶液，浓度为30、10、3、1、0.3、0.1、0.03和0.01μg/ml，和一系列的标准质控溶液(24、8和0.03μg/ml)。将5μl标准溶液和45μl空白血浆基质混合均匀，得到标准曲线的各浓度点的标准溶液(3000、1000、300、100、30、10、3和1ng/ml)和质控标准溶液(血浆样品2400、800、80和3ng/ml)。
[0431]
将内标甲苯磺丁脲的固体粉末溶解在dmso中配制成1mg/ml的储备液。储备液用100％乙腈稀释得到200ng/ml的溶液作为蛋白沉淀剂。
[0432]
2.6实验结果
[0433]
本发明的化合物给药后药代动力学参数见以下表8。由表8所示数据可见，本发明的化合物药代吸收较好，具有较好的药动学特征。
[0434]
表8.本发明的化合物的药代动力学参数
[0435][0436]
实验七、本发明化合物的急毒测试
[0437]
1.摘要
[0438]
以体重在200-220g，8周龄的icr小鼠(雌雄各半)为实验动物，静脉注射实施例h10化合物、实施例h16化合物、实施例h17化合物、实施例h21化合物、实施例h24化合物，给药1次，连续观察14天，包括临床观察、体重和病理学检查。
[0439]
2.实验方案
[0440]
2.1实验用化合物
[0441]
测定实施例h10化合物、实施例h16化合物、实施例h17化合物、实施例h21化合物、实施例h24化合物。
[0442]
2.2化合物的配制
[0443]
称取一定量的化合物，溶于乙醇/蓖麻油/水＝10/10/80，配制成均一的溶液。
[0444]
2.3操作
[0445]
采用上下法观察小鼠单次静脉给予实施例化合物后的急性毒性，每个剂量组10只小鼠，雌雄各半。给药剂量为10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、35mg/kg，给药体积为10ml/kg，化合物使用上述溶媒配置成澄清透明溶液后静脉注射。
[0446]
2.4实验统计
[0447]
根据每个剂量动物的死亡率，使用bliss软件计算半数致死量(ld
50
)。
[0448]
2.5实验结果及结论
[0449]
最高剂量动物出现至少80％的死亡，最低剂量出现最多20％的死亡。
[0450]
给药后连续观察14天，所有动物均未出现其他异常表现。各组给药动物给药第2天体重稍有下降，但与对照组比差异不显著。14天观察期结束后全部动物安乐死后进行大体解剖检查，体表未见明显异常，胸腔、腹腔、盆腔、颅腔未见肉眼可见病变。
[0451]
本实验条件下，本发明化合物静脉给药后的ld
50
值为20-30mg/kg之间。安全性较好。