一种核酸碱基的重亚硫酸盐转化方法和提取、纯化方法与流程

技术特征：
1.一种核酸碱基的重亚硫酸盐转化方法，其特征在于，包括以下步骤：取样本加入重亚硫酸盐溶液、核酸保护液混合后，进行pcr孵育转化。2.根据权利要求1所述的一种核酸碱基的重亚硫酸盐转化方法，其特征在于，所述样本为外周血、血浆或血清、新鲜组织、细胞株、石蜡组织中的一种或多种样品中提取的dna。3.根据权利要求1或2所述的一种核酸碱基的重亚硫酸盐转化方法，其特征在于，所述核酸保护液包括水溶性维生素和醚类杂环化合物；所述水溶性维生素在核酸保护液中的摩尔浓度为0.05-0.15mol/l。4.根据权利要求3所述的一种核酸碱基的重亚硫酸盐转化方法和提取、纯化方法，其特征在于，所述pcr孵育转化的程序为95-105℃，10-20min；45-55℃，25-35min；95-105℃，1-10min；45-55℃，85-95min。5.一种核酸碱基的重亚硫酸盐提取、纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、将权利要求1-4任一项所述的方法孵育转化后的样本、裂解液、磁珠混合后，分离磁珠，弃上清；s2、加入去磺化溶液去磺化后，再次分离磁珠，弃上清；s3、干燥后，加入te缓冲液混合后，分离磁珠，收集混合后的混合液，测试。6.根据权利要求5所述的一种核酸碱基的重亚硫酸盐提取、纯化方法，其特征在于，步骤s1中所述裂解液包括离液盐、螯合剂、缓冲剂和水。7.根据权利要求6所述的核酸碱基的重亚硫酸盐提取、纯化方法，其特征在于，所述离液盐、缓冲剂、螯合剂的摩尔浓度比为(80-180)：(0.5-2)：(0.1-2)。8.根据权利要求5-7任一项所述的一种核酸碱基的重亚硫酸盐提取、纯化方法，其特征在于，步骤s1中所述磁珠为磁性硅颗粒。9.根据权利要求8所述的一种核酸碱基的重亚硫酸盐提取、纯化方法，其特征在于，所述磁珠的粒径为400-600nm，铁泄漏量小于5ppm。10.根据权利要求6或7所述的一种核酸碱基的重亚硫酸盐提取、纯化方法，其特征在于，所述离液盐为胍硫氰酸盐、盐酸胍、碘化钠中的一种或多种；所述螯合剂为乙二胺四乙酸二钠盐、1,2-环己二胺四乙酸二钠、肌醇六磷酸脂、乙二胺四乙酸四钠、酒石酸钠、乙二胺四乙酸二钠钙、柠檬酸钙中的一种或多种；所述缓冲剂为醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵、三羟甲基氨基甲烷醋酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、2-亚氨基硫烷盐酸盐中的一种或多种。

技术总结
本发明涉及转化纯化领域，尤其涉及IPC C12Q1领域，更具体地，涉及一种核酸碱基的重亚硫酸盐转化方法和提取、纯化方法。通过控制转化条件，可促进DNA双链处于解链状态，促进转化的同时，减少DNA降解等的发生，从而促进对多种样本，即便是难检测的血浆等样本的检测，其次，通过后续纯化提取，还可缩短纯化流程和时间的同时，提高DNA的回收率，用于更少量样本的检测，排除不同样本中残留基因组的干扰，提高检测灵敏性和准确度。测灵敏性和准确度。


技术研发人员：柯中和 谢立群 熊慧 肖晓 刘以哲 汪佳贝 詹冬 黄爱天 罗碧珍
受保护的技术使用者：上海思泰得医学检验实验室有限公司
技术研发日：2022.06.13
技术公布日：2022/11/29