改进的T细胞制备方法与流程

技术特征：
1.一种制备修饰的t细胞的方法，包括以下步骤：(a)活化分离的t细胞的群体，(b)培养所述t细胞，(c)修饰所述t细胞以表达至少一种异源性t细胞受体(tcr)或嵌合抗原受体(car)，优选地通过用编码所述至少一种异源性t细胞受体(tcr)或嵌合抗原受体(car)的核酸或载体转导所述t细胞，(d)将akt的抑制剂(akt抑制剂)添加至修饰的t细胞中，(e)培养修饰的t细胞群体以扩增和/或增殖所述细胞或细胞群体，(f)任选地，收获和/或低温保存所述修饰的t细胞群体。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述t细胞富集用于cd3 部分。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述活化刺激所述t细胞的群体以增殖。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述活化是通过添加任选地连接至可去除的珠子的抗cd3抗体或其抗原结合片段和/或抗cd28抗体或其抗原结合片段。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，在活化之前或与所述活化同时实施修饰。6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，在活化之后实施修饰，优选在活化之后18至26小时。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，在修饰之后添加所述akt抑制剂，优选在修饰之后17至24小时。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述akt抑制剂选自由以下组成的组：变构抑制剂、竞争性atp抑制剂、akt与磷脂之间相互作用的抑制剂、akt的下游分子的磷酸化的抑制剂，优选pras40、核糖体s6、tsc2的磷酸化的抑制剂。9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述变构抑制剂选自arq092、arq751、bay1125976或mk-2206。10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述竞争性atp抑制剂选自福瑞塞替(gsk2110183)、gsk2141795、gsk690693、帕他色替(gdc-0068)、ly2780301、曲西立滨(tcn-pm；vd-0002)、azd5363或cct128930。11.根据权利要求8所述的方法，其中，所述akt与磷脂之间相互作用的抑制剂为哌立福新(d-21266，krx0401)。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，所述akt抑制剂以0.10μm至10μm的浓度添加，优选0.5μm。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中，与以下相比：(i)在不存在akt抑制剂的情况下产生的t细胞的或修饰的t细胞的群体，或(ii)在存在akt抑制剂的情况下产生的t细胞的或修饰的t细胞的群体，其中，在修饰之前添加和/或在活化之后小于24小时或等于24小时添加所述akt抑制剂；在存在所述akt抑制剂的情况下产生的修饰的t细胞的或t细胞的群体具有增加的或更高的相对比例的以下任一种或多种：(a)表达cd45ra 和ccr7 的t细胞，(b)是cd45ro-、ccr7 、cd45ra 、cd62l (l-选择素)、cd27 、cd28 和il-7rα 的t细胞，
(c)是t
scm
细胞(干细胞记忆性t细胞)的t细胞，(d)具有记忆表型的t细胞，优选cd8记忆表型。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中，与以下相比：(i)在不存在akt抑制剂的情况下产生的t细胞的或修饰的t细胞的群体，或(ii)在存在akt抑制剂的情况下产生的t细胞的或修饰的t细胞的群体，其中，在转导之前添加和/或在刺激之后小于24小时或等于24小时添加所述akt抑制剂；在存在所述akt抑制剂的情况下产生的修饰的t细胞的群体具有改善的或增加的水平的以下任一种或多种：(a)体内持久性，优选在体内输注之后8天至14天内测量的持久性，(b)从接种至收获的扩增，(c)缓解的持续时间或持续缓解率(drr)，(d)抗原诱导的干扰素γ的产生，(e)t细胞存活或寿命或活力百分比，(f)t细胞效应子功能，优选细胞毒性。15.一种根据权利要求1至14中任一项所述的方法产生的修饰的t细胞的群体。16.一种组合物，包含根据权利要求15所述的修饰的t细胞的群体和生理上可接受的赋形剂。17.根据权利要求15所述的修饰的t细胞的群体或根据权利要求16所述的组合物，用于过继性疗法。18.根据权利要求15所述的修饰的t细胞的群体或根据权利要求16所述的组合物，用于治疗癌症和/或肿瘤。19.一种试剂盒，包含根据权利要求1至14中任一项所述的方法产生的修饰的t细胞的群体和药品说明书，所述药品说明书包含使用所述t细胞治疗或延缓受试者的癌症和/或肿瘤的进展的说明。

技术总结
本发明涉及用于制备T细胞的改进方法和由此产生的改进的T细胞组合物。此产生的改进的T细胞组合物。


技术研发人员：K
受保护的技术使用者：艾达普特免疫有限公司
技术研发日：2021.04.16
技术公布日：2022/11/25