一种抗衰组合物及其制备方法和用途与流程

1.本发明涉及医药和化妆品技术领域，特别是一种抗衰组合物及其制备方法和用途。


背景技术：

2.现代生活中人们长期经历着高强度工作，暴露于电脑手机等高辐射以及紫外线照射环境，使得原本随年龄增长日渐暗淡的皮肤衰老得更加快速。皮肤衰老明显的特征是皮肤松弛和出现皱纹、色素沉着、皮肤粗糙、皮肤变薄、角质屏障功能减弱。在细胞水平表现为表皮细胞更新减慢，角质形成细胞活性下降，真皮层中成纤维细胞数量减少，合成胶原蛋白和弹性蛋白的能力下降。这导致各种支撑皮肤的胶原肽键出现硬化、断裂，导致皮肤真皮层网状结构疏松，随即被破坏，出现塌陷，皮肤组织的保湿度和强韧性降低，皮肤随即出现干燥、皱纹、松弛等问题。此外，体内活性氧自由基大量产生，过量的活性氧自由基会修饰和干涉细胞蛋白质、脂质和dna，从而引起细胞大分子的氧化损伤、细胞的氧化与抗氧化功能失衡，发生氧化应激，进而引起肌肤表皮功能与活性下降，加速衰老。
3.β-烟酰胺单核苷酸，简称nmn，是一种自然存在的生物活性核苷酸，广泛应用于保健类产品中。nmn是nad 的前体，其功能也主要通过nad 体现。nad 全称烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，又名辅酶i，它广泛分布于人体细胞，参与上千种生物催化反应，是人体内必不可少的辅酶。研究表明，随着年龄增长，nad 水平降低，会导致dna修复能力下降，细胞功能衰退，从而导致新陈代谢失调、人体衰老等。β-烟酰胺单核苷酸能够在细胞中转化为nad ，因此补充β-烟酰胺单核苷酸能够提高体内nad 含量，恢复线粒体能量，激活机体能量代谢，刺激各衰老组织的新陈代谢和修复，延长细胞寿命，提高atp生成量，进而提高机体代谢能力，从而延缓、改善、防止衰老等，或改善年龄诱导的代谢紊乱、老年疾病等，被认为是预防衰老和恢复年轻的补充剂。因此，β-烟酰胺单核苷酸在抗衰老领域受到了广泛关注，开发以β-烟酰胺单核苷酸为活性成分的药物、化妆品、食品、保健品成为研究热点。然而，β-烟酰胺单核苷酸本身具有高度敏感和不稳定的分子特征，其化学性质不稳定，对温度、湿度、光和氧等因素较敏感，通过研究发现，β-烟酰胺单核苷酸在液体中稳定性差，在传统的护肤品膏霜乳液剂型中降解快，短时间内其含量即出现大幅度下降，将其直接应用于化妆品等液体组合物中无法有效发挥其抗衰作用，这限制了β-烟酰胺单核苷酸的应用。
4.随着经济的发展、生活水平的提高以及保养护理意识的增强，人们越来越注重皮肤护理和保养，抗衰护理产品日益成为广大消费者不可或缺的产品。目前，市面上改善皮肤衰老多采用内服抗衰老保健品或者外用抗衰老护肤品的方式，内服的固体制剂通常用在食品、保健品、药品领域，外用的膏霜乳液等护肤品通常用在化妆品领域，两者分属不同范畴，各司其职，没有联系。此外，受人类思维的局限性影响，认为可以内服的抗衰老固体制剂只能内服，没有考虑过将可以内服的抗衰老固体制剂加入到外用的护肤品等液体组合物中联合使用，协同抗衰，这大大限制了护肤品的应用方式，阻碍了抗衰效果的提高。
5.并且，现有技术中没有将可以内服的β-烟酰胺单核苷酸固体组合物直接与化妆品
等传统的液体组合物联合使用的公开或教导，因此，研发一种新型的抗衰组合物，使β-烟酰胺单核苷酸在液体组合物中存在时仍能稳定高效发挥作用，提供一种β-烟酰胺单核苷酸固体组合物与化妆品等传统的液体组合物联合使用的抗衰方案显得尤为必要，同时采用多种方式灵活使用，发挥协同增效作用，进行有针对性的个性化抗衰护理。


技术实现要素：

6.针对现有技术的缺陷，本发明提供一种抗衰组合物，包括液体组合物和β-烟酰胺单核苷酸固体组合物，其中的β-烟酰胺单核苷酸固体组合物既能口服，亦能舌下含服，还可以加入液体组合物中混合均匀后外用，通过将β-烟酰胺单核苷酸固体组合物与液体组合物合理搭配使用，获得了组合护肤、协同抗衰的优异的技术效果。
7.鉴于此，本发明提供一种抗衰组合物，所述组合物包括液体组合物和β-烟酰胺单核苷酸固体组合物；
8.可选地，所述β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入所述液体组合物中，混合均匀后外用；
9.可选地，所述β-烟酰胺单核苷酸固体组合物内服，所述液体组合物外用；
10.可选地，所述β-烟酰胺单核苷酸固体组合物内服，另取β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入所述液体组合物中，混合均匀后外用；
11.可选地，所述内服包括口服或舌下含服。
12.可选地，本发明所述固体组合物还包括至少一种药学上可接受的辅料。
13.可选地，所述辅料包括乳糖、蔗糖、三氯蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚维酮、羟丙基纤维素、海藻酸钠、吐温80、十二烷基硫酸钠、聚乙二醇和月桂硫酸镁中的一种或多种。
14.可选地，聚乙二醇选自聚乙二醇4000(peg4000)或聚乙二醇6000(peg6000)。
15.在本发明中，所述辅料优选水溶性辅料，通过使用水溶性辅料，解决现有技术中固体制剂在液体中不能完全溶解的问题。本发明的β-烟酰胺单核苷酸固体组合物既可内服，也可与液体组合物混合均匀后外用。因β-烟酰胺单核苷酸易溶于水，且固体组合物所用辅料为水溶性辅料，从而可以确保β-烟酰胺单核苷酸固体组合物能够在液体组合物中完全溶解，保证在外用β-烟酰胺单核苷酸时不会残留不溶物，以免影响使用的肤感。
16.可选地，本发明所述固体组合物的剂型包括胶囊剂、片剂、颗粒剂或粉剂；
17.可选地，所述胶囊剂包括软胶囊剂、硬胶囊剂或肠溶胶囊剂；
18.可选地，所述片剂包括压制片剂、冻干片剂或舌下含片。
19.本发明所述固体组合物的剂型中，每一单位制剂含有10mg～500mg的β-烟酰胺单核苷酸。
20.所述胶囊剂的内容物包括β-烟酰胺单核苷酸；
21.或者，所述胶囊剂的内容物包括以下组分(w/w)：
22.β-烟酰胺单核苷酸
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10％-90％
23.稀释剂
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10％-90％
24.或者，所述胶囊剂的内容物包括以下组分(w/w)：
25.β-烟酰胺单核苷酸
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20％-90％
26.稀释剂
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5％-79％
27.助流剂和/或润滑剂
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1％-5％
28.其中，所述胶囊剂中，所述稀释剂选自乳糖、蔗糖、三氯蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇和木糖醇中的一种或几种；
29.所述助流剂和/或润滑剂选自十二烷基硫酸钠、聚乙二醇和月桂硫酸镁中的一种或几种。
30.可选地，所述压制片剂包括以下组分(w/w)：
31.β-烟酰胺单核苷酸
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10％-90％
32.稀释剂
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10％-90％
33.或者，所述压制片剂包括以下组分(w/w)：
34.β-烟酰胺单核苷酸
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10％-80％
35.稀释剂
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17％-89％
36.黏合剂
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1％-3％
37.或者，所述压制片剂包括以下组分(w/w)：
[0038][0039]
或者，所述压制片剂包括以下组分(w/w)：
[0040][0041]
其中，所述压制片剂中，所述稀释剂选自乳糖、蔗糖、三氯蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇和木糖醇中的一种或几种；
[0042]
所述黏合剂选自聚维酮和羟丙基纤维素中的一种或几种；
[0043]
所述崩解剂选自聚维酮、海藻酸钠和吐温80中的一种或几种；
[0044]
所述助流剂和/或润滑剂选自十二烷基硫酸钠、聚乙二醇和月桂硫酸镁中的一种或几种。
[0045]
可选地，所述冻干片剂包括以下组分(w/w)：
[0046]
β-烟酰胺单核苷酸
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10％-60％
[0047]
辅料
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40％-90％
[0048]
其中，所述冻干片剂中，所述辅料选自乳糖、蔗糖、三氯蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇和海藻酸钠中的一种或几种。
[0049]
可选地，本发明所述液体组合物包括水。
[0050]
可选地，所述液体组合物还包括保湿剂和/或增稠剂。
[0051]
可选地，所述液体组合物还包括美容上或药学上有效量的活性成分。
[0052]
可选地，所述活性成分是抗衰活性成分。
[0053]
可选地，所述活性成分包括多肽、天然植物成分、维生素c及其衍生物和类视黄醇中的一种或几种。
[0054]
待施用的美容上或药学上有效量的活性成分以及它们的剂量将依赖于许多因素，包括年龄、患者的状态、病症或疾病的严重性、施用的途径和频率以及待使用的活性成分的具体性质。
[0055]“美容上或药学上有效量”意指无毒性的但足以提供希望的效果的一种或多种活性成分的量。在本发明的液体组合物中以获得希望的效果的美容上或药学上有效的浓度使用活性成分；在一个优选形式中，相对于液体组合物的总重量，在0.00000001％(按重量计)和20％(按重量计)之间，优选在0.000001％(按重量计)和15％(按重量计)之间、更优选在0.0001％(按重量计)和10％(按重量计)之间，并且甚至更优选在0.0001％(按重量计)和5％(按重量计)之间。
[0056]
可选地，所述多肽包括肌肽、脱羧肌肽、九肽-1、六肽-2、四肽-30、乙酰基六肽-8、五肽-18、乙酰谷氨酸酰七肽-1、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、五肽-3、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺、棕榈酰五肽-4、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、三肽-1、四肽-21、棕榈酰六肽-6、棕榈酰三肽-5、乙酰基四肽-9、乙酰基四肽-11、豆蔻酰五肽-11、豆蔻酰六肽-4、豆蔻酰八肽-1、六肽-3、五肽-31、铜肽、六肽-8、六肽-9、六肽-10、己酰四肽-3、棕榈酰二肽-5-二氨基丁酰羟基苏氨酸、棕榈酰二肽-6-二氨基羟基丁酸、棕榈酰六肽-12和三肽-10瓜氨酸中的一种或几种。
[0057]
可选地，所述多肽选自肌肽和/或脱羧肌肽。
[0058]
可选地，所述液体组合物中，所述多肽的质量百分浓度为0.0001％-5％，优选为0.0005％-1％、0.001％-0.1％或0.005％-0.01％。
[0059]
可选地，所述液体组合物中，所述保湿剂的质量百分浓度为0.001％-20％；所述增稠剂的质量百分浓度为0.001％-1％。
[0060]
可选地，所述液体组合物中，所述保湿剂包括丁二醇(可选为1％-10％，w/w)、透明质酸(可选为0.005％-1％，w/w)、泛醇(可选为0.01％-5％，w/w)、糖分异构体(可选为0.01％-10％，w/w)、葡聚糖(可选为0.1％-10％，w/w)、戊二醇(可选为0.1％-10％，w/w)和己二醇(可选为0.01％-5％，w/w)中的一种或几种。
[0061]
本发明的实施例中，丁二醇(可选为1％-10％，w/w)，优选为2％-9％、3％-8％或4％-6％；
[0062]
透明质酸(可选为0.005％-1％，w/w)，优选为0.008％-0.5％、0.01％-0.2％或0.05％-0.1％；
[0063]
泛醇(可选为0.01％-5％，w/w)，优选为0.05％-3％、0.1％-1％或0.2％-0.5％；
[0064]
糖分异构体(可选为0.01％-10％，w/w)，优选为0.05％-8％、0.1％-5％或0.5％-2％；
[0065]
葡聚糖(可选为0.1％-10％，w/w)，优选为0.5％-8％、1％-5％或2％-4％；
[0066]
戊二醇(可选为0.1％-10％，w/w)，优选为0.5％-5％、1％-3％或1.5％-2％；
[0067]
己二醇(可选为0.01％-5％，w/w)，优选为0.05％-2％、0.1％-1％或0.2％-0.5％。
[0068]
可选地，所述增稠剂包括水解小核菌胶(可选为0.005％-1％，w/w)或胞外多糖(可选为0.005％-1％，w/w)中的一种或几种。
[0069]
本发明的实施例中，水解小核菌胶(可选为0.005％-1％，w/w)，优选为0.008％-0.8％、0.01％-0.5％或0.05％-0.2％；
[0070]
胞外多糖(可选为0.005％-1％，w/w)，优选为0.008％-0.8％、0.01％-0.5％或0.05％-0.2％。
[0071]
本发明的另一方面，提供一种上述的抗衰组合物的制备方法，所述制备方法包括β-烟酰胺单核苷酸固体组合物的制备方法和液体组合物的制备方法。
[0072]
所述β-烟酰胺单核苷酸固体组合物的制备方法包括：按照质量百分比称取β-烟酰胺单核苷酸，不加或加入至少一种药学上可接受的辅料，混合均匀；填充胶囊、压制片剂或溶解冻干。
[0073]
可选地，所述填充胶囊的方法，包括以下步骤：
[0074]
(1)按照上述胶囊剂的内容物的组分及用量，称取β-烟酰胺单核苷酸、稀释剂、助流剂和/或润滑剂，分别过筛；
[0075]
任选的步骤(2)在稀释剂中，加入β-烟酰胺单核苷酸，混合均匀；
[0076]
任选的步骤(3)加入助流剂和/或润滑剂混合均匀，制得胶囊填充粉末；
[0077]
(4)将定量的胶囊填充粉末填入空胶囊内，制得β-烟酰胺单核苷酸胶囊。
[0078]
可选地，所述空胶囊为肠溶胶囊。
[0079]
可选地，所述压制片剂的方法，包括以下步骤：
[0080]
(1)按照上述压制片剂的组分及用量，将β-烟酰胺单核苷酸、稀释剂、任选的黏合剂、任选的部分用量的崩解剂，混合均匀；或将β-烟酰胺单核苷酸、稀释剂、任选的黏合剂、任选的全部用量的崩解剂，混合均匀；或将β-烟酰胺单核苷酸、稀释剂、任选的黏合剂混合均匀；
[0081]
任选的步骤(2)继续加入余量的崩解剂，混合均匀；或不再加崩解剂，直接执行步骤(3)；或继续加入全部用量的崩解剂，混合均匀；
[0082]
任选的步骤(3)继续加入助流剂和/或润滑剂，混合均匀后压片；
[0083]
可选地，将β-烟酰胺单核苷酸、稀释剂、黏合剂、全部用量的崩解剂混合均匀，继续加入助流剂和/或润滑剂混合均匀后，采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片；
[0084]
可选地，将β-烟酰胺单核苷酸、稀释剂、黏合剂混合均匀，湿法制粒，干燥，整粒，得到内颗粒；往内颗粒中加入全部用量的崩解剂混合均匀，再加入助流剂和/或润滑剂，混合均匀后压片；
[0085]
可选地，将β-烟酰胺单核苷酸、稀释剂、黏合剂、部分用量的崩解剂混合均匀，加入部分用量的助流剂和/或润滑剂，混合均匀后进行干法制粒，整粒，得到内颗粒；往内颗粒中加入余量的崩解剂混合均匀，再加入余量的助流剂和/或润滑剂，混合均匀后压片；
[0086]
可选地，压片后还包括包衣的步骤，所述包衣包括包薄膜衣或肠溶衣。
[0087]
可选地，所述溶解冻干的方法，包括以下步骤：
[0088]
(1)按照上述冻干片剂的组分及用量，将β-烟酰胺单核苷酸、辅料置于混合容器中，加水搅拌，混合溶解，灌装至合适体积的模具中；
[0089]
(2)将灌装好的模具放入真空冷冻干燥机，抽真空，并升华至物料完全干燥，压封、包装，得到β-烟酰胺单核苷酸冻干片剂。
[0090]
可选地，所述液体组合物的制备方法包括：按照质量百分比称取保湿剂和/或增稠剂，所述保湿剂和/或增稠剂混合均匀溶解后，加入任选的美容上或药学上有效量的活性成分，搅拌溶解即得；
[0091]
其中，所述活性成分是抗衰活性成分；
[0092]
可选地，所述活性成分选自多肽、天然植物成分、维生素c及其衍生物和类视黄醇中的一种或几种。
[0093]
本发明的另一方面，提供一种上述的抗衰组合物在制备抗衰老的药物、营养品、保健品或护肤品中的用途。
[0094]
本发明的另一方面，提供一种上述的抗衰组合物在制备用于治疗、预防和/或修复皮肤老化的产品中的用途。
[0095]
本发明的另一方面，提供一种上述的抗衰组合物在制备用于减少、预防或治疗皱纹的产品中的用途。
[0096]
本发明的另一方面，提供一种上述的抗衰组合物在制备用于抗氧化产品中的用途。
[0097]
本发明的另一方面，提供一种抗衰方法，所述方法包括给予上述的抗衰组合物，所述方法包括将所述β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入所述液体组合物中，混合均匀后外用。
[0098]
本发明的另一方面，提供一种抗衰方法，所述方法包括给予上述的抗衰组合物，所述方法包括内服所述β-烟酰胺单核苷酸固体组合物，外用所述液体组合物。
[0099]
本发明的另一方面，提供一种抗衰方法，所述方法包括给予上述的抗衰组合物，所述方法包括内服所述β-烟酰胺单核苷酸固体组合物，另取所述β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入所述液体组合物中，混合均匀后外用。
[0100]
本发明所述的抗衰组合物，其施用或给药频率可以变化很大，这取决于每个受试者的需要，其中建议的施用或给药范围从每月1次至每天10次，优选从每周1次至每天4次，更优选从每周3次至每天3次，甚至更优选每天1次或2次。
[0101]
为了便于理解本发明，对在本发明中所使用的一些术语和表述的含义说明如下：
[0102]
在本发明中，术语“皮肤”应理解为是构成它的多个层，从最上层或角质层至最下层或皮下组织，两个端点都包括在内。这些层由不同类型的细胞组成，如角质形成细胞、成纤维细胞、黑色素细胞、和/或脂肪细胞等。在本发明中，术语“皮肤”包括头皮。
[0103]
术语“治疗”，指的是给予本发明的抗衰组合物以减轻或消除一种疾病或病症、或减少或消除与这种疾病或病症相关的一种或多种症状。术语“治疗”还涵盖了减轻或消除该疾病或病症的生理后果的能力。
[0104]
术语“护理”包括疾病和/或病症的预防。
[0105]
术语“修复”，指的是本发明的抗衰组合物在一种疾病或病症出现后改善、缓解或恢复其原状的能力。
[0106]
术语“预防”，指的是本发明的抗衰组合物在一种疾病或病症出现前防止、延迟、或阻碍其出现或发展的能力。
[0107]
术语“老化”指的是皮肤随着年龄的增长经历的变化(自然老化)，或通过暴露于阳光(光老化)或暴露于环境污染物，如化学污垢或污染物、烟草烟雾等而经历的变化，并且包括所有外在可见的和/或通过触摸可感知的变化，例如并且不局限于：皮肤上的不连续性的发展(如皱纹、细纹、表情纹、拉伸纹、条纹、沟纹、不平整或粗糙、毛孔尺寸增大、水分损失、弹性损失、紧致性损失、平滑性损失、变形恢复能力损失、回弹性损失)、皮肤下垂(如脸颊下垂、眼睛下方出现眼袋、或出现双下巴等)、皮肤颜色的变化(如瘢痕、变红、眼袋、或出现色素过度沉着区域如老年斑或雀斑等)、异常分化、过度角质化、弹性组织变性、角化症、脱发、橘皮样皮肤、胶原结构损失，以及角质层、真皮、表皮、血管系统(例如出现蜘蛛静脉或毛细血管扩张症)或靠近皮肤的那些组织的其他组织学变化。
[0108]
术语“光老化”指的是由于皮肤长期暴露于紫外线辐射而导致的皮肤过早老化，它呈现出与自然老化相同的生理特征，例如并且不局限于：松弛、下垂、颜色改变或色素沉着不规则、异常和/或过度角质化。
[0109]
本发明相对于现有技术所取得的有益效果包括：
[0110]
1、本发明提供一种抗衰组合物，所述组合物包括液体组合物和β-烟酰胺单核苷酸固体组合物。β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入液体组合物中，混合均匀后外用；或者β-烟酰胺单核苷酸固体组合物内服，液体组合物外用；或者β-烟酰胺单核苷酸固体组合物内服，另取β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入液体组合物中，混合均匀后外用。通过将β-烟酰胺单核苷酸固体组合物与液体组合物合理搭配，协同抗衰，本发明的组合物具有比现有技术更优的皮肤护理功效。
[0111]
2、本发明所述的抗衰组合物，克服了本领域普通技术人员的技术偏见。本领域普通技术人员认为，固体组合物通常用在食品、保健品、药品领域，用于口服发挥作用，而护肤是通过外用膏霜乳液等护肤品涂抹来实现，涉及化妆品领域，由此可知固体组合物和外用的护肤品分属不同范畴，各司其职，两者没有联系。本发明突破了本领域普通技术人员的思维局限，提供一种抗衰组合物，其中的β-烟酰胺单核苷酸固体组合物既能口服，亦能舌下含服，还可以加入液体组合物中混合均匀后外用，通过将β-烟酰胺单核苷酸固体组合物与液体组合物合理搭配，协同抗衰，组合护肤，取得了优异的技术效果。
[0112]
3、本发明的抗衰组合物中，β-烟酰胺单核苷酸以固体形式存在，在使用时再将β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入液体组合物中，混合均匀，现配现用，可以提高β-烟酰胺单核苷酸的稳定性和安全性，在相同投料量的情况下取得了更优异的抗衰效果；克服了β-烟酰胺单核苷酸在液体中稳定性差，直接应用于化妆品等液体组合物中无法有效发挥作用的缺陷。
[0113]
4、本发明的抗衰组合物，在提高了β-烟酰胺单核苷酸的稳定性，实现了高效抗衰的同时，产品的使用方便性不会受到影响，也利于储存及运输，而且新颖的使用方式，可以给消费者带来良好的使用体验。此外，通过使用水溶性辅料，β-烟酰胺单核苷酸固体组合物能够在液体组合物中完全溶解，保证在外用β-烟酰胺单核苷酸时不会残留不溶物，以免影响使用的肤感。
[0114]
5、本发明的抗衰组合物，可以采用多种方式灵活使用，如采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入不含活性成分的液体组合物中，混合均匀后外用的方式；采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入含活性成分的液体组合物中，混合均匀后外用的方式；采用β-烟酰
胺单核苷酸固体组合物仅内服，不含活性成分的液体组合物外用的内服外用方式；采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物仅内服，含活性成分的液体组合物外用的内服外用方式；采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物内服，另取β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入不含活性成分的液体组合物中，混合均匀后外用的内服外用方式；采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物内服，另取β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入含活性成分的液体组合物中，混合均匀后外用的内服外用方式等。此外，在外用时，外用液体组合物中可以包括至少一种活性成分。通过不同的使用方式，本发明的抗衰组合物可以发挥协同增效、双重协同增效甚至多重协同增效作用，从而取得不同的抗衰效果，有利于消费者根据各自的需求，采用适合自身情况的使用方式，进行有针对性的个性化抗衰护理，以达到最优的状态。
附图说明
[0115]
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对本发明的描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0116]
图1是测试例3中测试样品对角质形成细胞ros的影响结果图(n＝3)。
[0117]
图2是测试例4中测试样品的dpph清除率结果图。**表示nmn 肌肽(2:1)组与nmn组相比差异显著，p《0.01(n＝4)；##表示nmn 肌肽(2:1)组与肌肽组相比差异显著，p《0.01(n＝4)。
具体实施方式
[0118]
为了更好地理解本发明，下面结合实施例、对比例、测试例及附图对发明作详细的说明，然而，应当理解的是，这些实施例、对比例、测试例及附图仅用作说明目的，并且不旨在限制本发明的范围。
[0119]
实施例1制备β-烟酰胺单核苷酸胶囊
[0120]
处方1：
[0121][0122][0123]
制备方法：
[0124]
称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸过40目筛，将定量的β-烟酰胺单核苷酸粉末填入空胶囊内，制得β-烟酰胺单核苷酸胶囊。
[0125]
实施例2制备β-烟酰胺单核苷酸胶囊
[0126]
处方2：
[0127][0128]
制备方法：
[0129]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸过40目筛，乳糖过20目筛；
[0130]
(2)在乳糖中，加入β-烟酰胺单核苷酸，混合均匀，制得胶囊填充粉末；
[0131]
(3)将定量的胶囊填充粉末填入空胶囊内，制得β-烟酰胺单核苷酸胶囊。
[0132]
实施例3制备β-烟酰胺单核苷酸胶囊
[0133]
处方3：
[0134][0135]
制备方法：
[0136]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇分别过40目筛；
[0137]
(2)在乳糖、甘露醇中，加入β-烟酰胺单核苷酸，混合均匀，制得胶囊填充粉末；
[0138]
(3)将定量的胶囊填充粉末填入空胶囊内，制得β-烟酰胺单核苷酸胶囊。
[0139]
实施例4制备β-烟酰胺单核苷酸胶囊
[0140]
处方4：
[0141][0142]
制备方法：
[0143]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸过40目筛，乳糖过24目筛；
[0144]
(2)在乳糖中，加入β-烟酰胺单核苷酸，混合均匀，制得胶囊填充粉末；
[0145]
(3)将定量的胶囊填充粉末填入空胶囊内，制得β-烟酰胺单核苷酸胶囊。
[0146]
实施例5制备β-烟酰胺单核苷酸胶囊
[0147]
处方5：
[0148][0149]
制备方法：
[0150]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇、peg4000分别过40目筛；
[0151]
(2)在乳糖、甘露醇中，加入β-烟酰胺单核苷酸，混合均匀；
[0152]
(3)加入peg4000混合均匀，制得胶囊填充粉末；
[0153]
(4)将定量的胶囊填充粉末填入空胶囊内，制得β-烟酰胺单核苷酸胶囊。
[0154]
实施例6制备β-烟酰胺单核苷酸胶囊
[0155]
处方6：
[0156][0157]
制备方法：
[0158]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇、peg6000分别过40目筛；
[0159]
(2)在乳糖、甘露醇中，加入β-烟酰胺单核苷酸，混合均匀；
[0160]
(3)加入peg6000混合均匀，制得胶囊填充粉末；
[0161]
(4)将定量的胶囊填充粉末填入空胶囊内，制得β-烟酰胺单核苷酸胶囊。
[0162]
实施例7制备β-烟酰胺单核苷酸胶囊
[0163]
处方7：
[0164][0165]
制备方法：
[0166]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、山梨醇、peg6000分别过40目筛；
[0167]
(2)在山梨醇中，加入β-烟酰胺单核苷酸，混合均匀；
[0168]
(3)加入peg6000混合均匀，制得胶囊填充粉末；
[0169]
(4)将定量的胶囊填充粉末填入空胶囊内，制得β-烟酰胺单核苷酸胶囊。
[0170]
实施例8制备β-烟酰胺单核苷酸胶囊
[0171]
处方8：
[0172][0173][0174]
制备方法：
[0175]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、山梨醇、peg6000分别过40目筛；
[0176]
(2)在乳糖、山梨醇中，加入β-烟酰胺单核苷酸，混合均匀；
[0177]
(3)加入peg6000混合均匀，制得胶囊填充粉末；
[0178]
(4)将定量的胶囊填充粉末填入空胶囊内，制得β-烟酰胺单核苷酸胶囊。
[0179]
实施例9制备β-烟酰胺单核苷酸片剂
[0180]
处方9：
[0181][0182]
制备方法：
[0183]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇分别过40目筛；
[0184]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇混合均匀；
[0185]
(3)采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片。
[0186]
实施例10制备β-烟酰胺单核苷酸片剂
[0187]
处方10：
[0188][0189]
制备方法：
[0190]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸过40目筛，乳糖过24目筛；
[0191]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、乳糖混合均匀；
[0192]
(3)采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片。
[0193]
实施例11制备β-烟酰胺单核苷酸片剂
[0194]
处方11：
[0195][0196]
制备方法：
[0197]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、甘露醇分别过40目筛；
[0198]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、甘露醇混合均匀；
[0199]
(3)采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片。
[0200]
实施例12制备β-烟酰胺单核苷酸片剂
[0201]
处方12：
[0202][0203]
制备方法：
[0204]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、聚维酮分别过40目筛，乳糖过24目筛；
[0205]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、聚维酮混合均匀；
[0206]
(3)采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片。
[0207]
实施例13制备β-烟酰胺单核苷酸片剂
[0208]
处方13：
[0209][0210]
制备方法：
[0211]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、羟丙基纤维素、聚维酮分别过40目筛，乳糖过24目筛；
[0212]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、羟丙基纤维素、聚维酮混合均匀；
[0213]
(3)采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片。
[0214]
实施例14制备β-烟酰胺单核苷酸片剂
[0215]
处方14：
[0216][0217]
制备方法：
[0218]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇、聚维酮、海藻酸钠、吐温80 分别过40目筛；
[0219]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇、聚维酮、海藻酸钠、吐温80混合均匀；
[0220]
(3)采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片。
[0221]
实施例15制备β-烟酰胺单核苷酸片剂
[0222]
处方15：
[0223][0224]
制备方法：
[0225]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、羟丙基纤维素、海藻酸钠、peg6000分别过40目筛，乳糖过24目筛；
[0226]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、羟丙基纤维素、海藻酸钠混合均匀，再加入peg6000混合均匀；
[0227]
(3)采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片。
[0228]
实施例16制备β-烟酰胺单核苷酸片剂
[0229]
处方16：
[0230][0231]
制备方法：
[0232]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇、聚维酮、海藻酸钠、peg6000分别过40目筛；
[0233]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇、聚维酮混合均匀，加入纯化水进行湿法制粒，干燥；
[0234]
(3)干燥后用24目筛整粒，得到内颗粒；
[0235]
(4)往内颗粒中加入海藻酸钠混合均匀，再加入peg6000混合均匀，压片即得。
[0236]
实施例17制备β-烟酰胺单核苷酸片剂
[0237]
处方17：
[0238][0239]
制备方法：
[0240]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、甘露醇、聚维酮、海藻酸钠、peg6000分别过40目筛；
[0241]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、甘露醇、聚维酮、部分用量的海藻酸钠(占海藻酸钠总量的80％，即60mg/片)混合均匀；
[0242]
(3)再加入部分用量的peg6000(占peg6000总量的50％，即12.5mg/片)，混合均匀；
[0243]
(4)进行干法制粒，用24目筛整粒，得到内颗粒；
[0244]
(5)往内颗粒中加入余量的海藻酸钠(占海藻酸钠总量的20％，即15mg/片)混合均匀，再加入余量的peg6000(占peg6000总量的50％，即12.5mg/片)，混合均匀后压片。
[0245]
实施例18制备β-烟酰胺单核苷酸舌下片
[0246]
处方18：
[0247][0248]
制备方法：
[0249]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇、蔗糖、羟丙基纤维素、海藻酸钠、peg6000分别过40目筛；
[0250]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、乳糖、甘露醇、蔗糖、羟丙基纤维素、海藻酸钠混合均匀，再加入peg6000混合均匀；
[0251]
(3)采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片。
[0252]
实施例19制备β-烟酰胺单核苷酸舌下片
[0253]
处方19：
[0254][0255]
制备方法：
[0256]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、山梨醇、蔗糖、聚维酮、海藻酸钠、peg6000分别过40目筛；
[0257]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、山梨醇、蔗糖、聚维酮、海藻酸钠混合均匀，再加入peg6000混合均匀；
[0258]
(3)采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片。
[0259]
实施例20制备β-烟酰胺单核苷酸舌下片
[0260]
处方20：
[0261][0262]
制备方法：
[0263]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、山梨醇、甘露醇、蔗糖、聚维酮分别过40目筛；
[0264]
(2)将β-烟酰胺单核苷酸、山梨醇、甘露醇、蔗糖、聚维酮混合均匀；
[0265]
(3)采用粉末直压工艺对混合物进行直接压片。
[0266]
实施例21制备β-烟酰胺单核苷酸冻干片剂
[0267]
处方21：
[0268][0269]
制备方法：
[0270]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、甘露醇，置于混合容器中，加水搅拌，混合溶解，灌装至合适体积的模具中；
[0271]
(2)将灌装好的模具放入真空冷冻干燥机，抽真空，并升华至物料完全干燥，压封、包装，得到β-烟酰胺单核苷酸冻干片剂。
[0272]
实施例22制备β-烟酰胺单核苷酸冻干片剂
[0273]
处方22：
[0274][0275]
制备方法：
[0276]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、甘露醇、海藻糖，置于混合容器中，加水搅拌，混合溶解，灌装至合适体积的模具中；
[0277]
(2)将灌装好的模具放入真空冷冻干燥机，抽真空，并升华至物料完全干燥，压封、包装，得到β-烟酰胺单核苷酸冻干片剂。
[0278]
实施例23制备β-烟酰胺单核苷酸冻干片剂
[0279]
处方23：
[0280][0281]
制备方法：
[0282]
(1)称取处方量的β-烟酰胺单核苷酸、甘露醇、聚维酮、蔗糖，置于混合容器中，加
水搅拌，混合溶解，灌装至合适体积的模具中；
[0283]
(2)将灌装好的模具放入真空冷冻干燥机，抽真空，并升华至物料完全干燥，压封、包装，得到β-烟酰胺单核苷酸冻干片剂。
[0284]
实施例24制备液体组合物
[0285]
配方：
[0286][0287]
制备方法：将注射用水灌装至合适体积的容器中即得。
[0288]
实施例25制备液体组合物
[0289]
配方：
[0290][0291]
制备方法：
[0292]
(1)按照配方用量，预先将b相中原料在合适的移动容器中分散至无颗粒状，备用；
[0293]
(2)将a相中的原料加入锅中；
[0294]
(3)将b相加入a相中，搅拌20min至混合均匀；
[0295]
(4)依次加入c相中原料，搅拌均匀，即得。
[0296]
实施例26制备液体组合物
[0297]
精华配方：
[0298]
[0299][0300]
制备方法：
[0301]
(1)按照配方用量，预先将b相中原料在合适的移动容器中分散至无颗粒状，备用；
[0302]
(2)将a相中的原料加入锅中，加热至80℃-85℃，保温至25-30min；
[0303]
(3)将b相加入a相中，搅拌20min至混合均匀，然后开始降温；
[0304]
(4)降温至60℃，加入c相，搅拌均匀；
[0305]
(5)降温至40℃-45℃，依次加入d相中原料，搅拌均匀，即得。
[0306]
实施例27制备多肽液体组合物
[0307]
多肽精华液配方：
[0308]
[0309][0310]
制备方法：
[0311]
(1)按照配方用量，预先将b相中原料在合适的移动容器中分散至无颗粒状，备用；
[0312]
(2)将a相中的原料加入锅中，加热至80℃-85℃，保温至25-30min；
[0313]
(3)将b相加入a相中，搅拌20min至混合均匀，然后开始降温；
[0314]
(4)降温至60℃，加入c相，搅拌均匀；
[0315]
(5)降温至40℃-45℃，依次加入d相中原料，搅拌均匀，即得。
[0316]
根据上述制备方法，将肌肽替换为脱羧肌肽、九肽-1、六肽-2、四肽-30、乙酰基六肽-8、五肽-18、乙酰谷氨酸酰七肽-1、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、五肽-3、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺、棕榈酰五肽-4、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、三肽-1、四肽-21、棕榈酰六肽-6、棕榈酰三肽-5、乙酰基四肽-9、乙酰基四肽-11、豆蔻酰五肽-11、豆蔻酰六肽-4、豆蔻酰八肽-1、六肽-3、五肽-31、铜肽、六肽-8、六肽-9、六肽-10、己酰四肽-3、棕榈酰二肽-5-二氨基丁酰羟基苏氨酸、棕榈酰二肽-6-二氨基羟基丁酸、棕榈酰六肽-12和三肽-10瓜氨酸中的一种或几种，各多肽的质量百分浓度为0.0001％-5％，可制备得到其他的多肽液体组合物。
[0317]
对比例1制备β-烟酰胺单核苷酸抗衰水
[0318]
配方：
[0319]
编号原料名称以重量计％a注射用水适量至100.00bβ-烟酰胺单核苷酸0.50
[0320]
制备方法：将注射用水灌装至合适体积的容器中，加入b相中原料，搅拌均匀，即得。对比例2制备β-烟酰胺单核苷酸抗衰精华液
[0321]
配方：
[0322][0323]
制备方法：
[0324]
(1)按照配方用量，预先将b相中原料在合适的移动容器中分散至无颗粒状，备用；
[0325]
(2)将a相中的原料加入锅中，加热至80℃-85℃，保温至25-30min；
[0326]
(3)将b相加入a相中，搅拌20min至混合均匀，然后开始降温；
[0327]
(4)降温至60℃，加入c相，搅拌均匀；
[0328]
(5)降温至40℃-45℃，依次加入d相中原料，搅拌均匀，即得。
[0329]
对比例3制备β-烟酰胺单核苷酸抗衰乳液
[0330]
配方：
[0331]
[0332][0333]
制备方法：
[0334]
(1)按照配方用量，预先将d相中原料加热至60℃-65℃溶解，备用；
[0335]
(2)将a相中的原料加入锅中，搅拌均匀至无颗粒为止，加热至70℃-75℃，保温至25-30min；
[0336]
(3)将b相中原料放入锅中，加热至70℃-75℃溶解，搅拌均匀；
[0337]
(4)将b相加入a相中，并加入c相中原料，搅拌5-10min至混合均匀，然后开始降温；
[0338]
(5)降温至60℃-65℃，加入d相中原料，搅拌均匀；
[0339]
(6)降温至40℃-45℃，加入e相中原料，搅拌均匀；
[0340]
(7)少量多次的加入f相中原料，搅拌均匀，测试溶液ph值，直至ph值为5.5-7.0，即得。
[0341]
对比例4制备β-烟酰胺单核苷酸抗衰霜
[0342]
配方：
[0343]
[0344][0345]
制备方法：
[0346]
(1)按照配方用量，预先将d相中原料加热至60℃-65℃溶解，备用；
[0347]
(2)将a相中的原料加入锅中，搅拌均匀至无颗粒为止，加热至70℃-75℃，保温至25-30min；
[0348]
(3)将b相中原料放入锅中，加热至70℃-75℃溶解，搅拌均匀；
[0349]
(4)将b相加入a相中，并加入c相中原料，搅拌5-10min至混合均匀，然后开始降温；
[0350]
(5)降温至60℃-65℃，加入d相中原料，搅拌均匀；
[0351]
(6)降温至40℃-45℃，加入e相中原料，搅拌均匀；
[0352]
(7)少量多次的加入f相中原料，搅拌均匀，测试溶液ph值，直至ph值为5.5-7.0，即得。
[0353]
对比例5制备不含β-烟酰胺单核苷酸的胶囊剂
[0354]
处方：
[0355][0356]
制备方法：
[0357]
(1)称取处方量的乳糖、甘露醇分别过40目筛；
[0358]
(2)将乳糖和甘露醇混合均匀，制得胶囊填充粉末；
[0359]
(3)将定量的胶囊填充粉末填入空胶囊内，制得不含β-烟酰胺单核苷酸的胶囊。
[0360]
测试例1稳定性试验
[0361]
1.1仪器
[0362]
恒温恒湿箱、高效液相色谱仪。
[0363]
1.2试验样品
[0364]
实施例1-23、对比例1-4。
[0365]
1.3试验依据
[0366]
《中国药典》2020年版四部通则9001原料药物与制剂稳定性试验指导原则。
[0367]
1.4试验条件与检验项目
[0368]
恒温恒湿箱40℃
±
2℃，rh75％
±
5％，于第2周通过hplc检测各样品中β-烟酰胺单核苷酸的含量，以评价各不同剂型中β-烟酰胺单核苷酸的稳定性。
[0369]
1.5稳定性试验结果
[0370]
实施例1-23、对比例1-4的样品在试验条件下放置2周，检测各样品中β-烟酰胺单核苷酸的含量，稳定性数据见下表1：
[0371]
表1放置2周的稳定性试验数据
[0372]
[0373][0374]
由表1的结果可知，在试验条件下放置2周，实施例1-23的β-烟酰胺单核苷酸含量没有出现显著变化，对应的含量仍然均≥99％，而仅经过短短2周的时间，对比例1-4的β-烟酰胺单核苷酸含量却出现了大幅下降，最低降至0.68％，说明β-烟酰胺单核苷酸在化妆品传统的膏霜乳液剂型中降解快，稳定性差，在以固体形式存在的体系中具有更好的稳定性。β-烟酰胺单核苷酸含量的降低必然导致其功效的下降，甚至可能产生有害的降解产物，对人体具有潜在危害。因此，本发明的抗衰组合物，β-烟酰胺单核苷酸以固体形式存在，在使用时再将β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入液体组合物中，混合均匀，现配现用，可以提高β-烟酰胺单核苷酸的稳定性和安全性，在相同投料量的情况下取得了更优异的抗衰效果；克服了β-烟酰胺单核苷酸在液体中稳定性差，直接应用于化妆品等液体组合物中无法有效发挥作用的缺陷。此外，本发明的β-烟酰胺单核苷酸固体组合物还能够口服或者舌下含服，通过将β-烟酰胺单核苷酸固体组合物与液体组合物合理搭配使用，协同抗衰，可以发挥相对于现有技术更加显著的抗衰功效。
[0375]
测试例2抗衰效果评价试验
[0376]
2.1受试者
[0377]
390名40-65岁的健康女性，随机分为13组，平均每组30人。
[0378]
2.2组别、测试样品、使用方法及使用量
[0379]
组
①
：实施例3内服，一次两粒，一天两次，早晚坚持使用；
[0380]
组
②
：对比例5内服，一次两粒，一天两次，早晚坚持使用；
[0381]
组
③
：实施例26外用，一次1.5ml，一天两次，早晚坚持使用；
[0382]
组
④
：实施例27外用，一次1.5ml，一天两次，早晚坚持使用；
[0383]
组
⑤
：每次将两粒实施例3胶囊的内容物加入1.5ml实施例26的液体组合物中，混合均匀，溶解后外用，一天两次，早晚坚持使用；
[0384]
组
⑥
：每次将两粒对比例5胶囊的内容物加入1.5ml实施例26的液体组合物中，混合均匀，溶解后外用，一天两次，早晚坚持使用；
[0385]
组
⑦
：每次将两粒实施例3胶囊的内容物加入1.5ml实施例27的多肽液体组合物中，混合均匀，溶解后外用，一天两次，早晚坚持使用；
[0386]
组
⑧
：实施例3内服，一次两粒，实施例26外用，一次1.5ml；内服外用联合，一天两次，早晚坚持使用；
[0387]
组
⑨
：对比例5内服，一次两粒，实施例26外用，一次1.5ml；内服外用联合，一天两次，早晚坚持使用；
[0388]
组
⑩
：实施例3内服，一次两粒，实施例27外用，一次1.5ml；内服外用联合，一天两次，早晚坚持使用；
[0389]
组：每次内服一粒实施例3胶囊，另取一粒实施例3胶囊，将其胶囊内容物加入1.5ml实施例26的液体组合物中，混合均匀，溶解后外用；内服外用联合，一天两次，早晚坚持使用；
[0390]
组：每次内服一粒对比例5胶囊，另取一粒对比例5胶囊，将其胶囊内容物加入1.5ml实施例26的液体组合物中，混合均匀，溶解后外用；内服外用联合，一天两次，早晚坚持使用；
[0391]
组：每次内服一粒实施例3胶囊，另取一粒实施例3胶囊，将其胶囊内容物加入1.5ml实施例27的多肽液体组合物中，混合均匀，溶解后外用；内服外用联合，一天两次，早晚坚持使用。
[0392]
2.3评价方法
[0393]
根据分组，各组分别使用对应的样品，一天两次，早晚坚持使用，不得使用其他化妆品，连续使用4周，对受试者使用产品后的抗衰效果进行评价。
[0394]
2.4评价结果
[0395]
对受试者使用产品后的抗衰效果进行评价，结果见下表2。
[0396]
表2抗衰效果评价结果
[0397]
[0398][0399]
注：每组30人，人数占比经四舍五入得到，保留2位小数。
[0400]
结果显示，组
①
受试者内服β-烟酰胺单核苷酸胶囊，在使用4周后，皮肤紧致度增加的人数占比为50.00％。组
②
受试者内服不含β-烟酰胺单核苷酸的胶囊，在使用4周后，皮肤紧致度增加的人数占比仅为6.67％。通过皮肤弹性、水润光滑程度等其他评价指标亦可看出，组
①
受试者中相应指标的人数占比均明显高于组
②
的人数占比。从组
①
与组
②
的对比可知，内服β-烟酰胺单核苷酸具有抗衰的效果，组
①
的受试者在测试结束后，愿意继续使用产品的人数占比为66.67％，而组
②
的受试者在测试结束后愿意继续使用产品的人数占比仅为3.33％。组
③
受试者外用不含肽的精华液，组
④
受试者外用含肌肽的精华液，相比之下，在精华液中加入肌肽后，抗衰效果得到提升。
[0401]
组
⑤
受试者将胶囊中含β-烟酰胺单核苷酸的内容物加入不含肽的精华液中，混合均匀，溶解后外用。组
⑥
受试者将胶囊中不含β-烟酰胺单核苷酸的内容物加入不含肽的精华液中，混合均匀，溶解后外用。由于组
⑥
受试者使用的胶囊中不含β-烟酰胺单核苷酸，组
⑥
相对于组
③
单纯外用不含肽的精华液，其抗衰效果没有得到提升。相比之下，组
⑤
具有比组
⑥
更优的抗衰效果，而且也比组
①
、组
③
的效果好，说明使用本发明的抗衰组合物，将β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入不含活性成分的液体组合物中，混合均匀后外用，比单纯内服β-烟酰胺单核苷酸固体组合物、单纯外用不含活性成分的液体组合物，能够明显提升抗衰效果。组
⑦
受试者将胶囊中含β-烟酰胺单核苷酸的内容物加入含肌肽的精华液中，混
合均匀，溶解后外用，相比于组
①
、组
④
、组
⑤
，组
⑦
中通过β-烟酰胺单核苷酸和肌肽发挥协同作用，其抗衰效果进一步提升。
[0402]
组
⑧
受试者内服β-烟酰胺单核苷酸胶囊，外用不含肽的精华液，通过内服外用的方式抗衰，相比于组
①
单纯内服β-烟酰胺单核苷酸胶囊、组
③
单纯外用不含肽的精华液，组
⑧
的抗衰效果更加明显，测试结束后愿意继续使用组
⑧
对应产品的人数占比达73.33％。组
⑨
受试者内服不含β-烟酰胺单核苷酸的胶囊，外用不含肽的精华液，由于内服的胶囊中不含β-烟酰胺单核苷酸，组
⑨
相对于组
③
单纯外用不含肽的精华液，其抗衰效果没有明显变化。由此可知，使用本发明所述的抗衰组合物，通过内服β-烟酰胺单核苷酸固体组合物，外用液体组合物，内服外用发挥协同作用，可以达到更优的抗衰效果。组
⑩
的受试者内服β-烟酰胺单核苷酸胶囊，外用含肌肽的精华液，采用内服外用的方式，β-烟酰胺单核苷酸和肌肽协同抗衰，具有比组
①
、组
④
、组
⑧
更优的技术效果。
[0403]
组的受试者内服β-烟酰胺单核苷酸胶囊，除此之外，另取β-烟酰胺单核苷酸胶囊，将其内容物加入不含肽的精华液中，混合均匀，溶解后外用。组的受试者内服不含β-烟酰胺单核苷酸的胶囊，除此之外，另取不含β-烟酰胺单核苷酸的胶囊，将其内容物加入不含肽的精华液中，混合均匀，溶解后外用。由于胶囊中不含β-烟酰胺单核苷酸，组对应产品的抗衰效果与组
③
、组
⑨
相比没有提升。相比之下，组的受试者通过内服β-烟酰胺单核苷酸胶囊，另取β-烟酰胺单核苷酸胶囊，将其内容物加入不含肽的精华液中，混合均匀，溶解后外用，采用这种内服外用，且外用的活性成分中亦含有β-烟酰胺单核苷酸的方式，可以取得显著的抗衰效果，且其抗衰效果优于组
⑧
，测试结束后愿意继续使用组对应产品的人数占比高达86.67％。由此可知，使用本发明所述的抗衰组合物，通过内服β-烟酰胺单核苷酸固体组合物，另取β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入液体组合物中，混合均匀后外用，可以取得比采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物仅内服，液体组合物仅外用的内服外用方式更优的抗衰功效。组的受试者通过内服β-烟酰胺单核苷酸胶囊，另取β-烟酰胺单核苷酸胶囊，将其内容物加入含肌肽的精华液中，混合均匀，溶解后外用。采用这种内服外用，且外用的活性成分中同时含有β-烟酰胺单核苷酸和肌肽的方式，通过内服外用协同以及外用中β-烟酰胺单核苷酸和肌肽协同，发挥双重协同增效作用，组具有所有组别中最优的抗衰效果。
[0404]
通过比较组
⑤
、组
⑦
、组
⑧
、组
⑩
、组组可知，本发明的抗衰组合物，可以采用多种方式灵活使用，如采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入不含活性成分的液体组合物中，混合均匀后外用的方式；采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入含活性成分的液体组合物中，混合均匀后外用的方式；采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物仅内服，不含活性成分的液体组合物仅外用的内服外用方式；采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物仅内服，含活性成分的液体组合物外用的内服外用方式；采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物内服，另取β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入不含活性成分的液体组合物中，混合均匀后外用的内服外用方式；采用β-烟酰胺单核苷酸固体组合物内服，另取β-烟酰胺单核苷酸固体组合物加入含活性成分的液体组合物中，混合均匀后外用的内服外用方式等。此外，在外用时，外用液体组合物中可以包括至少一种活性成分。通过不同的使用方式，本发明的抗衰组合物可以发挥协同增效、双重协同增效甚至多重协同增效作用，从而取得不同的抗衰效果，有利于消费者根据各自的需求，采用适合自身情况的使用方式，进行有针对性的个性化抗衰护理，以达到最优的状态。而且，本发明的抗衰组合物及其使用方法，相对于传统的单纯内服抗衰胶
囊或者单纯外用抗衰精华液涂抹护肤，取得了更优的皮肤护理效果。这种有创意、新颖独特的产品及其使用方法深受消费者喜爱，给消费者带来良好的使用体验；并且产品的使用方便性不会受到影响，日常使用方便，外出携带也方便，也利于储存及运输，容易被消费者接受。
[0405]
测试例3ros染色实验
[0406]
3.1试剂与材料
[0407]
胎牛血清、dmem培养基、青霉素、链霉素、ros活性氧检测试剂盒。
[0408]
3.2仪器
[0409]
荧光显微镜、co2培养箱、超净工作台。
[0410]
3.3细胞株
[0411]
人角质形成细胞(hacat)，购买自中国科学院典型培养物保藏委员会昆明细胞库。
[0412]
3.4待测样品
[0413]
给药组：nmn、肌肽、nmn 肌肽(1:1)、nmn 肌肽(2:1)，测试浓度均为100ppm。
[0414]
空白对照组：pbs。
[0415]
uv组：uv辐射，加pbs。
[0416]
3.5实验目的
[0417]
衰老的指征之一是细胞内氧化应激水平提高，即ros增加，而通过降低氧化应激水平可以减缓衰老。本实验的目的是采用ros染色实验测试β-烟酰胺单核苷酸和肌肽的组合物对氧化应激水平的影响，以评价其抗氧化作用。以此同时，进一步证明β-烟酰胺单核苷酸和肌肽的协同抗衰作用。
[0418]
3.6实验方法
[0419]
取冻存的hacat细胞培养，按照1：2传代至5代左右，选择长势较好的细胞作为实验对象。
[0420]
取细胞悬液接种于6孔板上，加入完全培养基2ml/孔，置于37℃、5％co2培养箱中培养24h(接种浓度10000个/孔)。待细胞长满至80％，用真空泵将原培养基溶液吸出，建立紫外辐射模型。空白对照组加入200μl pbs、1800μl/孔的培养基，使用两层封口膜封住孔，不进行uv照射。uv组和给药组分别加入pbs 600μl/孔，暴露于uv灯下照射15min(辐照剂量：80mj/cm2)。照射15min后，将pbs溶液吸出，uv组加入200μl pbs，补加培养基至2ml/孔；给药组加入完全培养基1800μl/孔，按照稀释倍数稀释好样品浓度，加入200μl/孔的待测样品(终浓度为100ppm)。各组放入培养箱内培养24h。
[0421]
按照1:1000用无血清培养液稀释ros活性氧检测试剂盒中的dcfh-da，使其终浓度为10μm。去除细胞培养液，加入稀释好的dcfh-da 600μl/孔，加入的体积以能充分盖住细胞为宜。37℃细胞培养箱内孵育20min，用pbs洗涤细胞3次，以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。置于荧光显微镜下观察。
[0422]
3.7实验结果
[0423]
细胞内ros是引发细胞氧化损伤的直接原因之一，是细胞凋亡的一个重要标志，ros水平与胶原纤维含量呈负相关，降低细胞内ros的含量是抗衰、抗氧化的有效方式和重要途径。本实验在紫外辐射模型的基础上，使用活性氧荧光探针进行标记，观察各测试样品对ros水平的影响，以评价β-烟酰胺单核苷酸与肌肽组合后的抗氧化作用。
[0424]
测试样品对角质形成细胞ros的影响结果见图1。结果显示，与空白对照组相比，经uv辐射后，相同单位内细胞ros含量显著提高(如图1中浅色部分所示)，表明紫外辐射模型建模成功。与uv组相比，100ppm的nmn、肌肽、nmn 肌肽(1:1)组合物、nmn 肌肽(2:1)组合物均可以在一定程度上降低单位细胞ros水平；而且100ppm的nmn 肌肽(1:1)组合物、100ppm的nmn 肌肽(2:1)组合物降低单位细胞ros的效果明显好于相同浓度的单一nmn和单一肌肽。其中，100ppm nmn 肌肽(2:1)组合物降低单位细胞ros含量的效果最好，具有优异的抗氧化能力。
[0425]
由此说明，nmn与肌肽按不同比例组合得到的组合物，相较于nmn或肌肽单独存在时，表现出了预料不到的抗氧化作用。相较于nmn或肌肽单独存在时，nmn与肌肽的组合物具有更加显著的抗光老化修复能力及抗氧化作用，取得了预料不到的技术效果，由此进一步证明了β-烟酰胺单核苷酸和肌肽组合具有协同抗衰作用。本发明的抗衰组合物，通过将β-烟酰胺单核苷酸固体组合物与液体组合物合理搭配使用，协同抗衰，可以发挥相对于现有技术更加显著的抗衰功效。
[0426]
测试例4抗氧化实验
[0427]
4.1试剂与材料
[0428]
dpph、甲醇。
[0429]
4.2实验仪器
[0430]
酶标仪。
[0431]
4.3待测样品
[0432]
nmn、肌肽、nmn 肌肽(2:1)，测试浓度均为100ppm。
[0433]
4.4实验目的
[0434]
本实验的目的是通过测定样品的dpph清除率来评价β-烟酰胺单核苷酸和肌肽的组合物的抗氧化作用。以此同时，进一步证明β-烟酰胺单核苷酸和肌肽的协同抗衰作用。
[0435]
4.5实验方法
[0436]
称取12.5mg dpph，用95％甲醇溶解移至50ml棕色容量瓶，定容，避光保存。称取待测样品，用95％甲醇溶解，配制对应浓度的样品溶液。
[0437]
取100μl待测样品甲醇溶解液与100μl 200μg/ml的dpph标准混合液，避光反应45min，于490nm处测定吸光值abs
spl
；以100μl甲醇与100μl 200μg/ml的dpph标准液作为对照品，于490nm处测定吸光值abs
control
；以100μl待测样品与100μl甲醇作为空白对照，于490nm处测定吸光值abs
blank
。
[0438]
各样品的dpph清除率按以下公式计算：
[0439]
清除率(％)＝(abs
control
—abs
spl
)/(abs
control
—abs
blank
)
×
100％。
[0440]
4.6实验结果
[0441]
dpph是一种自由基，溶液为蓝色，当dpph被还原时，则会变成黄色，因此可根据此来定量和定性分析测试样品的抗氧化性能，各样品的dpph清除率结果见图2。
[0442]
结果显示，相较于nmn或肌肽单独存在时，在相同测试浓度下，100ppm的nmn 肌肽(2:1)组合物的dpph清除率明显更高，结果具有显著的统计学差异，说明nmn与肌肽的组合物具有更强的dpph自由基清除能力，表现出了预料不到的抗氧化作用。由此进一步证明了β-烟酰胺单核苷酸和肌肽组合具有协同抗衰作用。本发明的抗衰组合物，通过将β-烟酰胺
单核苷酸固体组合物与液体组合物合理搭配使用，协同抗衰，可以发挥相对于现有技术更加显著的抗衰功效，可用于制备抗氧化产品，减少、预防或治疗皱纹，治疗、预防和/或修复皮肤老化，制备抗衰老的药物、营养品、保健品或护肤品。
[0443]
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所做的进一步详细的说明，但是不表示本发明的具体实施是局限于这些说明。对于本发明所属领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或是替换，都应视为属于本发明的保护范围。