用于高胆固醇血症的普罗布考脂质体、制剂及其制备方法与流程

1.本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种用于高胆固醇血症的普罗布考脂质体、制剂及其制备方法。


背景技术：

2.普罗布考为血脂调节药并具有抗动脉粥样硬化作用。其降脂作用是通过降低胆固醇合成与促进胆固醇分解使血胆固醇和低密度脂蛋白降低，还改变高密度脂蛋白亚型的性质和功能，使血高密度脂蛋白胆固醇减低，具有显著的抗氧化作用，能抑制泡沫细胞的形成，延缓动脉粥样硬化斑块的形成，消退已形成的动脉粥样硬化斑块。
3.普罗布考为白色结晶性粉末，不溶于水，溶于乙醇和石油醚中，易溶于氯仿和丙醇。普罗布考在临床应用中存在的最大问题是口服生物利用度小，只有约10％左右，且吸收受食物影响，个体差异大，所以普罗布考用药的剂量大。由于普罗布考是水不溶性药物，在胃肠道的溶出度很小，所以难以吸收。中国专利cn102475688公开了一种普罗布考口服纳米固体制剂及其制备方法，现有普罗布考片剂在溶出介质(水)中30分钟的溶出只有3％。由此可知，提高普罗布考的溶出度是改善其口服吸收的关键。
4.微囊、包合物、自乳化药物、自组装纳米粒、固体分散体等方法均有报道能够用于提高普罗布考的溶出度。中国专利cn1138537公开了一种普罗布考包合物胶囊，中国专利cn1559385公开了一种普罗布考固体分散体，目的是增加普罗布考的水溶性，提高它的生物利用度。然而，由于普罗布考的给药剂量大，一片的规格达125mg或250mg，而将普罗布考制成包合物、固体分散体或微乳剂型需要大量载体材料，普罗布考的载药量低，最后制成一片含125mg或250mg普罗布考固体制剂的片重高达1g甚至2g。显然超出正常片重范围，实际临床中并不适用。
5.因此，需要设计一种既能增加普罗布考的生物利用度，同时又能适应于临床使用的含普罗布考的口服固体制剂。


技术实现要素：

6.克服现有技术的不足，本发明提供了一种普罗布考脂质体及其制备方法，通过优选脂质体包材，解决了普罗布考制剂载药量低的问题，克服了普罗布考水溶性差，溶出度低的问题。
7.具体而言，本发明的技术方案如下：
8.本发明的第一个目的在于提供第一种普罗布考脂质体的制备方法，包括以下步骤：
9.(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考溶于适量有机溶剂中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入缓冲溶液分散、振摇；
10.(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
11.(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥；
12.所述冷冻干燥程序为：
13.a.预冻：温度-30～-40℃，时间为1.5-3h；
14.b.升华：真空10-30pa，温度升到-5-5℃；
15.c.解析干燥：温度升至15-25℃，保持4-6h。
16.进一步的，所述缓冲液的ph＝4.5-5.5，优选为ph＝5.2。
17.进一步的，所述普罗布考脂质体包括普罗布考1重量份、磷脂0.5-1.5重量份、胆固醇0.1-0.5重量份、聚山梨酯0.05-0.2重量份。
18.具体的，所述普罗布考脂质体的制备方法包括以下步骤：
19.(1)将0.5-1.5重量份的磷脂、0.1-0.5重量份的胆固醇、0.05-0.2重量份的聚山梨酯、1重量份的普罗布考溶于适量有机溶剂中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝4.5-5.5的缓冲溶液分散、振摇；
20.(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
21.(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
22.所述冷冻干燥程序为：
23.a.预冻：温度-30～-40℃，时间为1.5-3h；
24.b.升华：真空10-30pa，温度升到-5-5℃；
25.c.解析干燥：温度升至15-25℃，保持4-6h。
26.进一步的，所述有机溶剂为三氯甲烷、乙醇、异丙醇、甲醇中的至少一种，优选为三氯甲烷。
27.进一步的，所述缓冲溶液为磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液中的一种，优选为邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液。
28.进一步的，所述磷脂为磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰胆碱、二硬脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酸、硬质酰胺中的至少一种，优选为鞘磷脂。
29.本发明的第二个目的在于提供第二种所述普罗布考脂质体的制备方法，其中步骤(1)中还可加入0.05-0.1重量份的天冬氨酸。
30.具体所述普罗布考脂质体的制备方法包括以下步骤：
31.(1)将0.5-1.5重量份的磷脂、0.1-0.5重量份的胆固醇、0.05-0.2重量份的聚山梨酯、1重量份的普罗布考、0.05-0.1重量份的天冬氨酸溶于适量有机溶剂中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝4.5-5.5的缓冲溶液分散、振摇；
32.(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
33.(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
34.所述冷冻干燥程序为：
35.a.预冻：温度-30～-40℃，时间为1.5-3h；
36.b.升华：真空10-30pa，温度升到-5-5℃；
37.c.解析干燥：温度升至15-25℃，保持4-6h。
38.其中，超声的目的在于提高脂质体膜的通透性，提高包封率，再者是利用超声波使脂质体微粒间产生剧烈的相互作用，达到很好的搅拌目的，有利于后续将脂质体粗产物挤压成粒径大小均匀的脂质体微粒，进而提高均一性。
39.本发明的第三个目的在于提供一种普罗布考脂质体，其特征在于，由上述第一种
方法制备而成。
40.本发明的第四个目的在于提供一种普罗布考脂质体，其特征在于，由上述第二种方法制备而成。
41.本发明的第五个目的在于提供两种普罗布考脂质体的制剂，所述制剂包含上述第一种方法制备的普罗布考脂质体或上述第一种方法制备的普罗布考脂质体，和药学上可接受的辅料。
42.进一步的，所述制剂包括但不限于片剂、颗粒剂、胶囊剂。
43.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
44.(1)本发明利用脂质体技术，将普罗布考进行包封，提高了普罗布考的水溶性，进而利用普罗布考脂质体制备成固体制剂，提高了其溶出度，从而增加普罗布考的生物利用度。
45.(2)本发明选择合适的脂质体材料对普罗布考进行包载，优化制备方法，提高了普罗布考脂质体的载药量和包封率，降低了制剂片重，适于临床使用，还降低了有关物质含量，提高其稳定性。
附图说明
46.图1：实施例8-13、对比实施例7普罗布考制剂溶出曲线
具体实施方式
47.为了使本发明的目的、技术方案更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明做进一步的说明，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例，实施例仅用于解释本发明。本领域技术人员应该理解的是，凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
48.一、普罗布考脂质体制备
49.实施例1普罗布考脂质体制备
50.配方：
[0051][0052]
制备方法：
[0053]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考溶于适量三氯甲烷中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝5.2的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲溶液分散、振摇；
[0054]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0055]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0056]
所述冷冻干燥程序为：
[0057]
a.预冻：温度-35℃，时间为2h；
[0058]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0059]
c.解析干燥：温度升至20℃，保持5h，即得。
[0060]
实施例2普罗布考脂质体制备
[0061]
配方：
[0062][0063][0064]
制备方法：
[0065]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考溶于适量三氯甲烷中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝4.5的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲溶液分散、振摇；
[0066]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0067]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0068]
所述冷冻干燥程序为：
[0069]
a.预冻：温度-35℃，时间为2h；
[0070]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0071]
c.解析干燥：温度升至20℃，保持5h。
[0072]
实施例3普罗布考脂质体制备
[0073]
配方：
[0074][0075]
制备方法：
[0076]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考溶于适量三氯甲烷中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝5.5的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲溶液分散、振摇；
[0077]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0078]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0079]
所述冷冻干燥程序为：
[0080]
a.预冻：温度-35℃，时间为2h；
[0081]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0082]
c.解析干燥：温度升至20℃，保持5h，即得。
[0083]
实施例4普罗布考脂质体制备
[0084]
配方：
[0085]
[0086][0087]
制备方法：
[0088]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考溶于适量乙醇中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液分散、振摇；
[0089]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0090]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0091]
所述冷冻干燥程序为：
[0092]
a.预冻：温度-30c，时间为3h；
[0093]
b.升华：真空10pa，温度升到-5℃；
[0094]
c.解析干燥：温度升至15c，保持4h。
[0095]
实施例5普罗布考脂质体制备
[0096]
配方：
[0097][0098]
制备方法：
[0099]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考溶于适量异丙醇中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝4.8的乙酸-乙酸钠缓冲液分散、振摇；
[0100]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0101]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0102]
所述冷冻干燥程序为：
[0103]
a.预冻：温度-40℃，时间为1.5h；
[0104]
b.升华：真空30pa，温度升到5℃；
[0105]
c.解析干燥：温度升至25℃，保持6h。
[0106]
实施例6普罗布考脂质体制备
[0107]
配方：
[0108][0109][0110]
制备方法：
[0111]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考、天冬氨酸溶于适量三氯甲烷、甲醇(体积比为3:1)的混合有机溶剂中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝5.2的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠分散、振摇；
[0112]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0113]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0114]
所述冷冻干燥程序为：
[0115]
a.预冻：温度-35℃，时间为2h；
[0116]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0117]
c.解析干燥：温度升至20℃，保持5h，即得。
[0118]
实施例7普罗布考脂质体制备
[0119]
配方：
[0120][0121]
制备方法：
[0122]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考、天冬氨酸溶于适量三氯甲烷、异丙醇(体积比为2:1)的混合有机溶剂中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝5.2的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠分散、振摇；
[0123]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0124]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0125]
所述冷冻干燥程序为：
[0126]
a.预冻：温度-35℃，时间为2h；
[0127]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0128]
c.解析干燥：温度升至20℃，保持5h，即得。
[0129]
对比实施例1普罗布考脂质体制备
[0130]
配方：
[0131][0132]
制备方法：
[0133]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考溶于适量三氯甲烷中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝5.2的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲溶液分散、振摇；
[0134]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0135]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0136]
所述冷冻干燥程序为：
[0137]
a.预冻：温度-35℃，时间为2h；
[0138]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0139]
c.解析干燥：温度升至20℃，保持5h，即得。
[0140]
对比实施例2普罗布考脂质体制备
[0141]
配方：
[0142][0143]
制备方法：
[0144]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考溶于适量三氯甲烷中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝6.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液分散、振摇；
[0145]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0146]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0147]
所述冷冻干燥程序为：
[0148]
a.预冻：温度-35℃，时间为2h；
[0149]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0150]
c.解析干燥：温度升至20℃，保持5h，即得。
[0151]
对比实施例3普罗布考脂质体制备
[0152]
配方：
[0153][0154]
制备方法：
[0155]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考溶于适量三氯甲烷中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝5.2的乙酸-乙酸钠缓冲液分散、振摇；
[0156]
(2)将步骤(1)所得产物利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0157]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0158]
所述冷冻干燥程序为：
[0159]
a.预冻：温度-35℃，时间为2h；
[0160]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0161]
c.解析干燥：温度升至20℃，保持5h，即得。
[0162]
对比实施例4普罗布考脂质体制备
[0163]
配方：
[0164]
普罗布考
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
10g
[0165]
鞘磷脂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
10g
[0166]
胆固醇
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
2g
[0167]
制备方法：
[0168]
(1)将磷脂、胆固醇、普罗布考溶于适量三氯甲烷中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝5.2的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲溶液分散、振摇；
[0169]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0170]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0171]
所述冷冻干燥程序为：
[0172]
a.预冻：温度-35℃，时间为2h；
[0173]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0174]
c.解析干燥：温度升至20℃，保持5h，即得。
[0175]
对比实施例5普罗布考脂质体制备
[0176]
配方：
[0177][0178]
制备方法：
[0179]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考溶于适量三氯甲烷中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝5.2的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲溶液分散、振摇；
[0180]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0181]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0182]
所述冷冻干燥程序为：
[0183]
a.预冻：温度-20℃，时间为2h；
[0184]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0185]
c.解析干燥：温度升至30℃，保持5h，即得。
[0186]
对比实施例6普罗布考脂质体制备
[0187]
配方：
[0188][0189]
制备方法：
[0190]
(1)将磷脂、胆固醇、聚山梨酯、普罗布考、甘氨酸溶于适量三氯甲烷中，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入ph＝5.2的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲溶液分散、振摇；
[0191]
(2)将步骤(1)所得产物进行超声、利用french挤压法形成30-80nm的脂质体；
[0192]
(3)将步骤(2)所得脂质体进行冷冻干燥，即得。
[0193]
所述冷冻干燥程序为：
[0194]
a.预冻：温度-35℃，时间为2h；
[0195]
b.升华：真空20pa，温度升到2℃；
[0196]
c.解析干燥：温度升至20℃，保持5h，即得。
[0197]
二、普罗布考制剂的制备
[0198]
实施例8普罗布考片(100片)
[0199]
配方：
[0200][0201]
制备方法：按配方，采用直接压片法制成片剂。
[0202]
实施例9普罗布考片(100片)
[0203]
配方：
[0204][0205]
制备方法：按配方，采用直接压片法制成片剂。
[0206]
实施例10普罗布考片(100片)
[0207]
配方：
[0208][0209]
制备方法：按配方，采用直接压片法制成片剂。
[0210]
实施例11普罗布考片(100片)
[0211]
配方：
[0212]
[0213][0214]
制备方法：按配方，采用直接压片法制成片剂。
[0215]
实施例12普罗布考胶囊
[0216][0217]
制备方法：按配方，湿法制粒，制成胶囊。
[0218]
实施例13普罗布考颗粒
[0219][0220]
制备方法：按配方，湿法制粒，制成颗粒剂。
[0221]
对比实施例7：普罗布考片(之乐)
[0222]
验证实施例
[0223]
一、普罗布考脂质体质量评价
[0224]
1.普罗布考脂质体的载药量、包封率研究
[0225]
表1实施例与各实施例普罗布考脂质体的载药量和包封率
[0226]
[0227][0228]
2.普罗布考脂质体的渗漏率研究
[0229]
各实施例与对比实施例分别在0℃、4℃、25℃温度下储存，测试第0d、30d、60d、90d、180d时药物的渗漏情况。
[0230]
表2实施例与对比实施例普罗布考脂质体渗漏率(％)
[0231]
[0232][0233]
二、普罗布考制剂质量评价
[0234]
1.普罗布考制剂的溶出度研究
[0235]
取实施例8-13、对比实施例7的普罗布考制剂，按照中国药典2020版四部通则0931溶出度与释放度测定法第二法测定，取900ml ph＝5.0的磷酸盐缓冲溶液作为溶出介质，添加0.5％十二烷基硫酸钠，桨法每分钟75r/min，根据取样时间5min、10min、15min、30min、45min、60min取溶液测定。
[0236]
2.稳定性考察——含量与有关物质研究
[0237]
2.1含量测定照中国药典2020版高效液相色谱法(通则0512)测定。
[0238]
供试品溶液：取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。
[0239]
对照品溶液：取普罗布考对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.15mg的溶液。
[0240]
色谱条件：用辛基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(85∶15)为流动相；检测波长为242nm；进样体积20μl。
[0241]
系统适用性要求：理论板数按普罗布考峰计算不低于2500。
[0242]
测定法：精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算。
[0243]
2.2有关物质照中国药典2020版高效液相色谱法(通则0512)测定。
[0244]
供试品溶液：取本品，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液。
[0245]
对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。
[0246]
色谱条件：用硅胶为填充剂；以无水乙醇-正己烷(1∶4000)为流动相；检测波长为242nm；进样体积20μl。
[0247]
系统适用性要求：理论板数按普罗布考峰计算不低于4000。
[0248]
测定法：精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。
[0249]
限度：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积(1.0％)。
[0250]
加速试验：按市售包装，温度40
±
2℃，相对湿度75％
±
5％条件下放置6个月，在试验期间的第1个月、2个月、3个月、6个月末分别取样，测有关物质含量和普罗布考含量。
[0251]
表3实施例8-13、对比实施例7普罗布考制剂稳定性考察
[0252]