靶向CD33的嵌合抗原受体的制作方法

技术特征：
1.一种嵌合抗原受体(car)，所述car包含细胞外组分，根据north、imgt、kabat或chothia，所述细胞外组分包含具有抗体1e6、1h10、1a9、1d2、1b9、1h8、2d3或2e3的互补决定区(cdr)集合的结合结构域；细胞内组分，所述细胞内组分包含效应结构域；和跨膜结构域，所述跨膜结构域将所述细胞外组分连接至所述细胞内组分。2.如权利要求1所述的car，其中所述结合结构域包含单链可变片段(scfv)。3.如权利要求2所述的car，其中所述scfv由以下编码：如seq id no:2中所示的1h10 scfv编码序列；如seq id no:3中所示的1a9 scfv编码序列；如seq id no:4中所示的1e6 scfv编码序列；如seq id no:5中所示的1d2 scfv编码序列；如seq id no:6中所示的1b9 scfv编码序列；如seq id no:7中所示的1h8 scfv编码序列；如seq id no:8中所示的2d3 scfv编码序列；或如seq id no:9中所示的2e3 scfv编码序列。4.如权利要求2所述的car，其中所述scfv是如seq id no:190中所示的呈vh-vl取向的1h10 scfv；如seq id no:191中所示的呈vl-vh取向的1h10 scfv；如seq id no:192中所示的呈vh-vl取向的1a9 scfv；如seq id no:193中所示的呈vl-vh取向的1a9 scfv；如seq id no:194中所示的呈vh-vl取向的1e6 scfv；如seq id no:195中所示的呈vl-vh取向的1e6 scfv；如seq id no:196中所示的呈vh-vl取向的2d3 scfv；或如seq id no:197中所示的呈vl-vh取向的2d3 scfv。5.如权利要求1所述的car，其中所述细胞外组分还包含间隔子区。6.如权利要求5所述的car，其中所述间隔子区是135个氨基酸或更少或者16个氨基酸或更少。7.如权利要求5所述的car，其中所述间隔子区是131个氨基酸或更少并且由igg4的铰链区和ch3结构域组成。8.如权利要求5所述的car，其中所述间隔子区是12个氨基酸或更少并且由igg4的铰链区组成。9.如权利要求7所述的car，其中所述igg4是人igg4。10.如权利要求5所述的car，其中所述间隔子区由如seq id no:10、seq id no:11或seq id no:12中所示的序列编码。11.如权利要求1所述的car，其中所述效应结构域包含cd3ζ的信号传导结构域的全部或一部分；4-1bb的信号传导结构域的全部或一部分；cd28的信号传导结构域的全部或一部分；cd3ζ和4-1bb的信号传导结构域的全部或一部分；cd3ζ和cd28的信号传导结构域的全部或一部分；或cd3ζ、4-1bb和cd28的信号传导结构域的全部或一部分。12.如权利要求1所述的car，其中所述效应结构域包含cd3ζ和4-1bb的信号传导结构域
的全部或一部分。13.如权利要求11所述的car，其中所述cd3ζ信号传导结构域由如seq id no:14中所示的cd3ζ编码序列编码。14.如权利要求11所述的car，其中所述cd3ζ具有如seq id no:15或seq id no:16中所示的序列。15.如权利要求11所述的car，其中所述4-1bb信号传导结构域由如seq id no:17或seq id no:18中所示的序列编码。16.如权利要求11所述的car，其中所述4-1bb具有如seq id no:19或seq id no:20中所示的序列。17.如权利要求1所述的car，其中所述跨膜结构域包含cd28跨膜结构域。18.如权利要求17所述的car，其中所述cd28跨膜结构域由如seq id no:21、seq id no:22或seq id no:23中所示的序列编码。19.如权利要求17所述的car，其中所述cd28跨膜结构域具有如seq id no:24或seq id no:25中所示的序列。20.如权利要求1所述的car，所述car还包含选自标签盒、转导标记物和/或自杀开关的控制特征。21.一种基因构建体，所述基因构建体编码权利要求1所述的car。22.如权利要求21所述的基因构建体，其中所述基因构建体包含如seq id no:46；seq id no:47；seq id no:48；seq id no:49；seq id no:50；seq id no:51；seq id no:200；seq id no:201；seq id no:202；或seq id no:203中所示的序列。23.一种纳米粒子，所述纳米粒子包封权利要求21或22所述的基因构建体。24.一种细胞，所述细胞被基因修饰成表达权利要求1所述的car。25.如权利要求24所述的细胞，其中所述细胞相对于受试者是自体细胞或同种异体细胞。26.如权利要求24所述的细胞，其中所述细胞是在体内或离体的。27.如权利要求24所述的细胞，其中所述细胞是t细胞、b细胞、自然杀伤(nk)细胞、nk-t细胞、单核细胞/巨噬细胞、造血干细胞(hsc)或造血祖细胞(hpc)。28.如权利要求24所述的细胞，其中所述细胞是选自以下的t细胞：cd3 t细胞、cd4 t细胞、cd8 t细胞、中央记忆t细胞、效应记忆t细胞和/或初始t细胞。29.如权利要求24所述的细胞，其中所述细胞是cd8 t细胞。30.如权利要求24所述的细胞，其中所述细胞已经在包含il-2、il-7、il-15和/或il-21的培养基中培育。31.如权利要求30所述的细胞，其中所述细胞已经在包含il-2的细胞培养基中培育。32.如权利要求31所述的细胞，其中所述细胞培养基包含10-100ng/ml il-2。33.如权利要求32所述的细胞，其中所述细胞培养基包含50ng/ml il-2。34.如权利要求30所述的细胞，其中所述细胞已经在包含il-7和il-15的细胞培养基中培育。35.如权利要求34所述的细胞，其中所述细胞培养基包含5-15ng/ml il-7和5-15ng/ml il-15。
36.如权利要求35所述的细胞，其中所述细胞培养基包含10ng/ml il-7和10ng/ml il-15。37.如权利要求30所述的细胞，其中所述细胞培养基包含il-7、il-15和il-21。38.如权利要求37所述的细胞，其中所述细胞培养基包含5-15ng/ml il-7、5-15ng/ml il-15和5-15ng/ml il-21。39.如权利要求38所述的细胞，其中所述细胞培养基包含10ng/ml il-7、10ng/ml il-15和10ng/ml il-21。40.一种权利要求24所述的细胞的群体，所述群体被配制用于施用给受试者。41.一种治疗患有cd33相关病症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求23所述的纳米粒子和/或权利要求40所述的细胞的群体，由此治疗所述患有cd33相关病症的受试者。42.如权利要求41所述的方法，其中所述细胞的群体包含自体细胞或同种异体细胞。43.如权利要求41所述的方法，其中cd33表达细胞包含急性骨髓性白血病(aml)细胞。44.如权利要求41所述的方法，其中所述cd33相关病症包含急性淋巴母细胞性白血病(all)、慢性髓细胞性白血病(cml)、慢性髓单核细胞性白血病(cml)、肥大细胞白血病、骨髓增生异常综合征(mds)、b细胞急性淋巴母细胞性白血病(b-all)、t细胞急性淋巴母细胞性白血病(t-all)或巨核细胞白血病。45.如权利要求41所述的方法，所述方法还包括确定所述受试者是表达还是缺乏cd33的v型结构域，并且如果所述受试者表达所述cd33的v型结构域，则选择包含以下的组合疗法：组合物，所述组合物包含1h10、1a9、1e6、1d2和1b9中的一者或多者的结合结构域，以及1h8、2d3和2e3中的一者或多者中的一者或多者的结合结构域。46.如权利要求41所述的方法，所述方法还包括确定所述受试者是表达还是缺乏所述cd33的v型结构域，并且如果所述受试者不表达所述cd33的v型结构域，则选择包含以下的疗法：包含1h10、1a9、1e6、1d2和1b9中的一者或多者的结合结构域的组合物。47.一种活化有需要受试者的针对cd33表达细胞的免疫反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求23所述的纳米粒子或权利要求40所述的细胞的群体，由此活化所述有需要受试者的针对cd33表达细胞的免疫反应。48.如权利要求47所述的方法，其中所述细胞群体包含自体细胞或同种异体细胞。49.如权利要求47所述的方法，其中所述cd33表达细胞包含急性骨髓性白血病(aml)细胞。50.如权利要求47所述的方法，其中所述cd33表达细胞包含急性淋巴母细胞性白血病(all)、慢性髓细胞性白血病(cml)、慢性髓单核细胞性白血病(cml)、肥大细胞白血病、骨髓增生异常综合征(mds)、b细胞急性淋巴母细胞性白血病(b-all)、t细胞急性淋巴母细胞性白血病(t-all)或巨核细胞白血病细胞。51.如权利要求47所述的方法，所述方法还包括确定所述受试者是表达还是缺乏cd33的v型结构域，并且如果所述受试者表达所述cd33的v型结构域，则选择包含以下的组合疗法：
组合物，所述组合物包含1h10、1a9、1e6、1d2和1b9中的一者或多者的结合结构域，以及1h8、2d3和2e3中的一者或多者中的一者或多者的结合结构域。52.如权利要求47所述的方法，所述方法还包括确定所述受试者是表达还是缺乏所述cd33的v型结构域，并且如果所述受试者不表达所述cd33的v型结构域，则选择包含以下的疗法：包含1h10、1a9、1e6、1d2和1b9中的一者或多者的结合结构域的组合物。53.一种试剂盒，所述试剂盒包括：编码包含1h10、1a9、1e6、1d2和1b9中的一者或多者的结合结构域的car的核苷酸序列；以及编码包含1h8、2d3和2e3中的一者或多者中的一者或多者的结合结构域的car的核苷酸序列。

技术总结
描述了嵌合抗原受体(CAR)，所述CAR具有来源于一套新颖人CD33结合抗体的结合结构域。所述CAR包括优化的短间隔子区和中等间隔子区。本公开还提供了利用IL-2、IL-7、IL-15和/或IL-21进行细胞扩增/活化过程的方法，所述方法将改善所描述的CAR的细胞增殖和细胞溶解。改善所描述的CAR的细胞增殖和细胞溶解。改善所描述的CAR的细胞增殖和细胞溶解。


技术研发人员：C
受保护的技术使用者：弗莱德哈钦森癌症中心
技术研发日：2021.03.31
技术公布日：2022/11/15