一种磺胺甲恶唑含量的测定方法

1.本发明属于磺胺类抗生素的检测领域，具体涉及一种磺胺甲恶唑含量的测定方法。


背景技术：

2.抗生素是应用最广泛的药物之一，主要用于预防和治疗细菌和真菌性疾病。近年来，抗生素滥用造成的水体污染在欧美一些国家引起了关注，磺胺类抗生素是应用最广泛的一类抗生素之一，是一类含对氨基苯磺酰胺结构的衍生物。该类药物抗菌谱较广泛，对大多数革兰阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑制作用。如长期滥用磺胺类抗生素会导致动物体内及环境中耐药菌(arb)大量繁殖，诱导产生抗生素抗性基因(args)，一旦传递进入人类致病菌中，将降低感染性疾病治愈的可能，对人类健康产生严重影响。因此水环境中残留抗生素灵敏、准确、快速的分析方法是其环境行为和生态效应研究的必要手段。
3.磺胺甲恶唑是磺胺类抗生素的一种，在人类抗菌史上曾发挥过重要的作用。因其具有抗菌广谱、性质稳定、价格低廉、使用方便等优点，被作为畜禽治疗和预防疾病用药广泛使用到畜牧业中，添加到动物饲料中。因此对于磺胺甲恶唑制剂含量以及水体中磺胺甲恶唑含量的检测对于对于其合理使用和污染防治都具有非常重要的意义。
4.现有的抗生素的分析技术手段主要有超高效液相色谱串联紫外检测技术、高效液相色谱串联荧光检测技术、酶联免疫法、毛细管电泳法、气相色谱串联质谱法、液相色谱法及液相色谱串联质谱法等。基于液相色谱串联质谱法将色谱的高分离性能和质谱的高鉴别特征相结合，具有分析范围更广、灵敏度更高、检测限低、定性结构更可靠、可同时检测多组分污染物等优点，对复杂化合物中微量和痕量组分的定性和定量分析具有重要的意义，在抗生素分析中应用最为广泛。然而，目前的检测方法处理普遍存在过程复杂，检测时间长，检测过程中要使用乙腈等有机试剂也会污染环境，并且难以做到保证回收率，效率低、准确率差、稳定性较低。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种磺胺甲恶唑含量的测定方法，可以大幅降低检验成本，缩短检验时间，同时可以减少实验过程中出现偏差的概率，提高检测效率。
6.为实现上述目的，本发明的技术方案是：
7.一种磺胺甲恶唑含量的测定方法，包括以下步骤：
8.1)磺胺甲恶唑标准品和水混合，超声至溶解，得到浓度不大于10mg/l的磺胺甲恶唑原液；使用所述磺胺甲恶唑原液和水配置出不同浓度的标准溶液，测定吸光度，绘制标准曲线，得到线性回归方程；
9.2)将磺胺甲恶唑固体制剂和水混合，超声辅助溶解并过滤，制成检测液；或者将待测水样过滤，制成检测液；测定检测液的吸光度，依据步骤1)确定的线性回归方程，确定磺胺甲恶唑固体制剂或待测水样中磺胺甲恶唑的含量。
10.本发明的磺胺甲恶唑含量的测定方法，利用紫外分光光度法，以水为溶剂测定磺胺甲恶唑制剂中主药含量或环境水样中磺胺甲恶唑浓度，准确性高，可以大幅降低检验成本，缩短检验时间，且前处理变得更为方便快捷，同时可以减少实验过程中出现偏差的概率，提高检测效率。
11.磺胺甲恶唑固体制剂以磺胺甲恶唑为主药，优选磺胺甲恶唑的含量在90％以上，更优选在95％以上。
12.优选的，步骤2)中，检测液的浓度为2mg/l以下。实际污水中抗生素是溶于水中的，使用水作为检测溶剂可以更加快捷、准确的检测。磺胺甲恶唑极难溶于水，控制检测液的浓度为2mg/l以下，可保证溶解的稳定性，提高检测准确性。
13.优选的，步骤1)和步骤2)中，测定吸光度的波长为265nm。
14.优选的，步骤1)和步骤2)中，超声的功率为120w，频率为40khz，时间为20min。利用超声辅助，可提高磺胺甲恶唑的溶解性，结合溶解浓度的控制，可使检测过程顺利进行。
15.优选的，步骤1)中，所述标准溶液的浓度不大于2mg/l。进一步优选的，标准溶液的浓度范围为0.2～2mg/l。如可以为0.2mg/l、0.4mg/l、0.8mg/l、1.2mg/l和2mg/l。
16.优选的，步骤2)中，过滤所用滤纸的孔径为5μm。
附图说明
17.图1为本发明实施例1中得到标准曲线图。
具体实施方式
18.本发明提供的一种磺胺甲恶唑含量的测定方法，以水为检测浓度，控制检测浓度，在265nm的波长处采用紫外分光光度法测定样品的吸光度，以外标法计算磺胺甲恶唑的含量。检测过程中仅使用水作为溶剂，相比常规方法使用的有机溶剂具有绿色环保、安全无毒、准确性高的特点。
19.采用上述技术方案所产生的有益效果在于：
20.(1)检测速度快、准确性高：用液相色谱法检测一个样品至少需要半个小时的时间，当样品数量过多时可能影响生产进度；而同样的时间内用本发明方法可以检测至少6个样品，极大地提高了生产效率；
21.(2)安全环保：使用液相色谱法检测磺胺甲恶唑的含量时需要用到有毒的有机溶剂，该溶剂对人体有一定危害，检测人员长期接触容易损害健康；而本发明方法仅仅使用水作为溶剂，具有安全无毒、绿色环保、快捷准确的特点；
22.(3)hplc液相系统最终也是采用vwd或dad紫外检测器来测定一定波长的吸收度，检测原理一致。此外，紫外检测较液相系统更节约时间。实际废水中抗生素一般是溶于水中的，以水为检测溶剂，两者溶剂相同，可进一步减少溶剂干扰，提高检测稳定性和准确性。
23.下面结合具体实施例对本发明的实施方式作进一步说明。
24.本发明的磺胺甲恶唑含量的测定方法的具体实施例如下：
25.实施例1
26.本实施例的磺胺甲恶唑含量的测定方法，包括以下步骤：
27.1.建立标准工作曲线
28.磺胺甲恶唑标准溶液的配制：准确称取10mg磺胺甲恶唑标准品，用纯化水混合均匀，后转移至1l容量瓶，定容至刻度，使用超声波清洗仪超声20分钟(超声功率为120w，频率为40khz)促进药品溶解，得10mg/l的磺胺甲恶唑原液。在一系列25ml的比色管中分别加入0.5，1.0，2.0，3.0，5.0ml的磺胺甲恶唑原液，加纯化水定容至25ml，得到浓度为0.2mg/l、0.4mg/l、0.8mg/l、1.2mg/l、和2mg/l的标准溶液。于265nm处测吸光度，得到标准曲线，见图1。
29.工作曲线评价标准：回归方程r2不小于0.999。
30.表1含量线性范围确认数据
[0031][0032]
结论：如图1所示，磺胺甲恶唑的标准工作曲线线性符合标准，方法验证成功。
[0033]
2.精密度试验
[0034]
取不同浓度的磺胺甲恶唑标准溶液，在265nm处测吸光值，连续测定6次，计算相对标准偏差如下表2所示：
[0035]
表2方法的相对标准偏差
[0036][0037]
由上表2可知，本发明方法加标回收率在97.66％～100.04％之间，符合测量要求。精密度相对标准偏差在0.67％-2.19％范围内，满足精密度要求。
[0038]
3.磺胺甲恶唑制剂含量测定：
[0039]
准确称取磺胺甲恶唑(主药)制剂10mg于1l容量瓶中，加入纯化水混合均匀后并加水至刻度，使用超声波清洗仪超声20分钟(超声功率为120w，频率为40khz)促进药品溶解，制成供试液；使用滤纸过滤后，吸取2.5ml于25ml比色管中，加入纯化水定容，使用石英比色皿于265nm处三次测定吸光度值分别为0.060，0.061，0.061；根据样品溶液的吸光度和线性回归方程，可计算出待测样品中磺胺甲恶唑的含量为96.09％，96.09％，94.53％，平均95.57％。
[0040]
实验例2
[0041]
本实验例的磺胺甲恶唑含量的测定方法，与实施例1的不同之处在于，使用实验室的合成的模拟废水代替超纯水，检验本方法用于水体中磺胺甲恶唑含量检验的可行性，模拟废水的成分为：c2h3o2na，1.282g/l；(nh4)2so4，0.47g/l；k2hpo4·
7h2o，0.022g/l；kh2po4，
0.040g/l；cacl2，0.046g/l；mgso4·
7h20，0.044g/l；feso4·
7h20，0.018g/l；nahco3，0.1g/l；cocl2·
6h2o，250μg/l；cuso4·
5h2o，250μg/l；mnso4·
h2o，250μg/l；nicl
·
6h2o，250μg/l，溶剂为水。
[0042]
将含有不同含量磺胺甲恶唑的待测水样使用滤纸过滤，之后直接使用比色皿于265nm处三次测定吸光度，根据待测水样的吸光度和线性回归方程，可计算出待测水样中磺胺甲恶唑的含量。
[0043]
表3本方法用于水体中磺胺甲恶唑含量测量的精密度加标回收率
[0044][0045][0046]
由上表3可知，本发明方法用于水体中磺胺甲恶唑含量测量时，加标回收率在93.97％～104.82％之间，符合测量要求。精密度相对标准偏差在0.80％-2.30％范围内，满足精密度要求。
[0047]
综合以上结果可知，本发明方法得出的结果比较稳定，且准确度较高。由此看出，本发明即一种利用紫外分光光度法测定磺胺甲恶唑含量的方法可应用于磺胺甲恶唑制剂含量测定以及水体中磺胺甲恶唑的含量分析检测。