一种生物活性次级代谢产物的制备方法和应用

技术特征：
1.一种生物活性次级代谢产物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1）将raffaelea lauricola活化后，取菌块接种到pdb 培养基中，在160～180 r/min、20~28℃条件下连续培养5~10天，按15wt%~20wt%接种量转接到大米培养基中，继续在20～28℃条件下静置培养28～40天，得到菌丝体；2）将步骤1）得到的菌丝体在35~40℃下干燥后研磨成粉状，用1~2倍体积乙酸乙酯浸泡12~24小时，超声40~60分钟，收集萃取液，残渣中再加入菌丝体1~2倍体积的乙酸乙酯，超声40~60分钟，收集萃取液，重复以上步骤，共得到三份萃取液合并浓缩得到粗提物浸膏；3）将粗提物浸膏用氯仿或二氯甲烷溶解，然后用反相硅胶c
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进行拌样，干法装柱，以甲醇：水自体积比1:9-9:1梯度洗脱，收集甲醇：水体积比为9:1部位洗脱液，旋蒸浓缩得组分a；4）用1倍体积的氯仿溶解组分a，过200-300目硅胶柱，石油醚：乙酸乙酯体积比为30:1开始梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯体积比为10:1部分洗脱液，旋蒸浓缩得浸膏，再过200-300目硅胶柱，以石油醚：氯仿体积比为8:1开始梯度洗脱，收集石油醚:氯仿体积比为4:1部分洗脱液，再过200-300目硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯体积比为20:1开始梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯体积比为8:1部分洗脱液，旋蒸得到白色粉末状a'-neogammacer-17-en-15α-ol，即藿烷型三萜类化合物。2.根据权利要求1所述的生物活性次级代谢产物的制备方法，其特征在于：步骤1）中大米培养基：大米100 g，木屑10 g，加入纯水120 ml，121℃高压灭菌20 min。3.根据权利要求1所述的生物活性次级代谢产物的制备方法，其特征在于：步骤1）中菌块的大小为0.5
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0.5 cm，接种量为4块。4.根据权利要求1所述的生物活性次级代谢产物的制备方法，其特征在于：步骤2）中超声的功率为400 w，频率为35 khz。5.根据权利要求1所述的生物活性次级代谢产物的制备方法，其特征在于：步骤3）中使用的反相硅胶c
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粒径40-60 μm，孔径120
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。6.根据权利要求1所述的生物活性次级代谢产物的制备方法，其特征在于：步骤4）中梯度洗脱中石油醚：乙酸乙酯体积比依次为30:1, 20:1, 10:1, 8:1；石油醚：氯仿体积比依次为8:1, 6:1, 4:1。7.一种如权利要求1-6任一项所述的制备方法制得的生物活性次级代谢产物在抑制人乳腺癌细胞mcf-7、肝癌细胞hepg2、肺癌细胞a549增殖的药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种生物活性次级代谢产物（A'-Neogammacer-17(21)-en-15α-ol）的制备方法和应用，所述真菌为Raffaelea lauricola，提取方法包括：菌体活化及培养，乙酸乙酯萃取得粗提物，将粗提物进行多次硅胶柱层析纯化浓缩制得。本发明制备的A'-Neogammacer-17-en-15α-ol对人乳腺癌细胞MCF-7、肝癌细胞HePG2、肺癌细胞A549均有明显的抑制增殖效果，具有开发抗肿瘤药物的潜力。发抗肿瘤药物的潜力。发抗肿瘤药物的潜力。


技术研发人员：邱君志 朱志强 谭震 刘森 陈宇熹 蒲慧丽 杨晨杰 陈金慧 赖芃宇 王玲
受保护的技术使用者：福建农林大学
技术研发日：2022.09.07
技术公布日：2022/11/11