确定贫血的潜在病因的系统的制作方法

确定贫血的潜在病因的系统
相关申请的交叉引用
1.本技术要求2020年2月11日提交的美国临时专利申请号62/972,835的权益和优先权，其全部公开内容通过引用并入本文。


背景技术：

2.贫血是美国最常见的血液障碍，每年影响超过三百万人。贫血与在患有慢性病的人中较差的健康结局独立相关，且增加患上心脏病和肝病的风险。贫血病症的风险可能与以下相关：饮食不均衡、肠病、妊娠、月经、血液病、自身免疫性障碍、酒精中毒、有毒化学品暴露、慢性病症或遗传预先倾向性。


技术实现要素：

3.本文公开用于确定贫血的潜在病因的方法和系统。在一些实施方案中，本文还公开用于确定小细胞性贫血、正常细胞性贫血和大细胞性贫血的潜在病因的方法和系统。在一些实施方案中，本文公开治疗所述潜在病因的方法。
4.在一个方面，本公开文本提供自动化方法，其包括通过处理模块从获自怀疑患有贫血的个体的血液样品确定血红蛋白水平、平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)和平均红细胞体积(mcv)；比较所述血红蛋白水平、mchc水平和mcv值与血红蛋白水平、mchc和mcv的限定标准；以及(i)如果所述mchc水平与mchc的限定标准相比有所升高，则通过相同的处理模块或通过另外的处理模块评估网织红细胞计数；或者(ii)如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值低于mcv的限定标准，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准，则通过相同的处理模块和/或至少另外的处理模块评估网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价；或者(iii)如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值与mcv的限定标准相比是正常的，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准，则通过相同的处理模块和/或至少另外的处理模块评估网织红细胞计数、铁蛋白水平、c反应蛋白(crp)和综合代谢检测组套(cmp)；或者(iv)如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，并且所述mcv值与mcv的限定标准相比升高至少约10％，则通过相同的处理模块和/或至少另外的处理模块评估网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和肝脏功能检测组套。
5.在一个方面，本公开文本提供确定贫血的病因的自动化方法，其包括：(a)在来自患有贫血的个体的血液样品中评估所述样品的平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)并比较所述样品中的mchc水平与mchc的限定标准；(b-i)如果(a)中所述样品中的mchc水平与mchc的限定标准相比有所升高，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数；(c)如果(b-i)中所述样品的网织红细胞计数与所述限定标准网织红细胞计数相比是正常的或有所升高，则推荐溶血性贫血病症的遗传测试；
(b-ii)如果(a)中所述样品中的mchc水平与mchc的限定标准相比没有升高或者如果(b-i)中所述样品的网织红细胞计数与所述限定标准网织红细胞计数相比较低，则评估所述样品中的血红蛋白水平并比较所述样品中的血红蛋白水平与血红蛋白的限定截断值；(d-i)如果(b-ii)中所述样品中的血红蛋白水平不低于血红蛋白的限定截断值，则不推荐进一步测试；(d-ii)如果(b-ii)中所述样品中的血红蛋白水平低于血红蛋白的限定截断值，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数，并且评估平均红细胞体积(mcv)并比较所述样品的mcv与mcv的限定标准；(e-i)如果(d-ii)中所述样品中的mcv与mcv的限定标准相比较低，则评估所述样品中的铁蛋白水平并比较所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值；(f-i)如果(e-i)中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较低，则表明所述个体缺铁或推荐α-珠蛋白生成障碍性贫血血红蛋白病的进一步测试；(f-ii)如果(e-i)中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比是正常的或较高，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数并进行血红蛋白病评价；(g-i)如果(f-ii)中的所述网织红细胞计数没有升高并且所述血红蛋白病评价是正常的，则表明所述个体患有慢性病性贫血；(g-ii)如果(f-ii)中的所述网织红细胞计数有所升高并且所述血红蛋白病评价是正常的，则表明所述个体患有溶血性贫血；以及(g-iii)如果(f-ii)中的所述网织红细胞计数是正常的或有所升高并且所述血红蛋白病评价是异常的，则表明所述个体患有血红蛋白病性贫血；(e-ii)如果(d-ii)中所述样品中的mcv与mcv的限定标准相比升高至少10％，则评估所述样品中的b12和/或叶酸水平并比较所述b12和/或叶酸水平与b12和/或叶酸的限定截断值；(h-i)如果(e-ii)中所述样品中的b12和/或叶酸水平低于b12和/或叶酸的限定截断值，则评估所述样品的甲基丙二酸含量以确认或排除b12和/或叶酸缺乏；(h-ii)如果(e-ii)中所述样品中的b12和/或叶酸水平高于b12和/或叶酸的限定截断值，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数；(i-i)如果(h-ii)中所述样品的网织红细胞计数与所述限定标准网织红细胞计数相比是正常的或有所升高，则推荐溶血性贫血病症的遗传测试；(i-ii)如果(h-ii)中所述样品的网织红细胞计数与所述限定标准网织红细胞计数相比较低，则评估所述样品中肝功能的一种或多种标记并比较所述样品中肝功能的一种或多种标记与肝功能的所述一种或多种标记的限定范围；(j-i)如果(i-ii)中肝功能的所述一种或多种标记在肝功能的所述一种或多种标记的限定范围内，则建议针对血液学疾病评估所述个体；以及(j-ii)如果(i-ii)中肝功能的所述一种或多种标记在肝功能的所述一种或多种标记的限定范围内，则建议针对继发于酒精性或非酒精性肝病的慢性病评估所述个体。(e-iii)如果(d-ii)中所述样品中的mcv与mcv的限定标准相比是正常的，则评估
所述样品中的铁蛋白水平并比较所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值；(k-i)如果(e-iii)中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较低，则表明所述个体缺铁并推荐铁缺乏的进一步评价；(k-ii)如果(e-iii)中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较高，则表明所述个体正在经历急性期或慢性期反应并推荐进一步临床评价；(k-iii)如果(e-iii)中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比是正常的，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数，并且评估所述样品中的c反应蛋白(crp)水平并比较所述样品中的crp水平与crp的限定截断值；(l-i)如果(k-iii)中的所述网织红细胞计数和crp是正常的，则推荐对慢性病或二形性贫血(其为铁缺乏与叶酸或b12缺乏的组合)的进一步评价；(l-ii)如果(k-iii)中的所述网织红细胞计数有所增加并且(l-iii)中的crp是正常的，则推荐对溶血性贫血或胃肠出血的进一步评价；(l-iii)如果(k-iii)中的所述网织红细胞计数是低的或正常的并且(l-iii)中的所述crp有所增加，则进行完整代谢检测组套(cmp)，并且如果所述cmp是异常的，则表明所述个体患有慢性病性贫血。
6.在一些实施方案中，针对其推荐遗传测试的溶血性贫血病症是遗传性干瘪红细胞增多症(hx)、镰状细胞贫血和/或遗传性球形红细胞增多症。
7.在一些实施方案中，血红蛋白的限定截断值对于成年男性为约13.2mg/l，并且对于成年女性为约11.7mg/l。
8.在一些实施方案中，所述血红蛋白病评价包括评估血红蛋白a、血红蛋白f、总血红蛋白、血红蛋白a2(quant)、血红蛋白s、血红蛋白c、血红蛋白e和任何血红蛋白变体。在一些实施方案中，所述血红蛋白病评价还包括红细胞计数、血细胞比容、评估平均红细胞体积(mcv)、评估平均红细胞血红蛋白(mch)以及红细胞分布宽度(rdw)。
9.在一些实施方案中，所述血液学疾病是脊髓发育不良或血液学恶性肿瘤。
10.在一些实施方案中，仅从所述个体获得单一血液样品。在一些实施方案中，所述方法在72小时或更短时间内完成。在一些实施方案中，所述个体在评估时并未处于针对铁缺乏的治疗中。在一些实施方案中，所述个体没有红细胞障碍的家族史。在一些实施方案中，所述血液样品是由初级护理医师获得或在初级护理医师的指导下获得。
11.在另一个方面，本公开文本提供确定小细胞性贫血的潜在病因的自动化方法，其包括：(a)确定来自患有贫血的个体的血液样品中铁蛋白的量并且平均红细胞体积(mcv)低于约80fl或约79fl的限定截断值；(i)如果中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较低，则表明所述个体缺铁或推荐α-珠蛋白生成障碍性贫血血红蛋白病的进一步测试；(ii)如果中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比是正常的或较高，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数并进行血红蛋白病评价；(a)如果(ii)中的所述网织红细胞计数没有升高并且所述血红蛋白病评价是正常
的，则表明所述个体患有慢性病性贫血；(b)如果(ii)中的所述网织红细胞计数有所升高并且所述血红蛋白病评价是正常的，则表明所述个体患有溶血性贫血；以及(c)如果(ii)中的所述网织红细胞计数是正常的或有所升高并且所述血红蛋白病评价是异常的，则表明所述个体患有血红蛋白病性贫血。
12.在一些实施方案中，所述个体具有低血红蛋白和正常的平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)。
13.在一些实施方案中，所述血红蛋白病评价包括评估血红蛋白a、血红蛋白f、总血红蛋白、血红蛋白a2(quant)、血红蛋白s、血红蛋白c、血红蛋白e和任何血红蛋白变体。在一些实施方案中，所述血红蛋白病评价还包括红细胞计数、血细胞比容、评估平均红细胞体积(mcv)、评估平均红细胞血红蛋白(mch)以及红细胞分布宽度(rdw)。
14.在一些实施方案中，仅从所述个体获得单一血液样品。在一些实施方案中，所述方法在72小时或更短时间内完成。
15.在另一个方面，本公开文本提供确定正常细胞性贫血的潜在病因的自动化方法，其包括：(a)确定来自患有贫血的个体的血液样品中铁蛋白的量并且平均红细胞体积(mcv)在约80fl至约100fl、约80fl至约98fl或约80fl至约96fl的范围内；(i)如果所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较低，则表明所述个体缺铁(其可能由急性期或慢性期反应引起)并推荐铁缺乏的进一步评价；(ii)如果所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较高，则表明所述个体正在经历急性期反应并推荐进一步临床评价；(iii)如果所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比是正常的，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数，并且评估所述样品中的c反应蛋白(crp)水平并比较所述样品中的crp水平与crp的限定截断值；(a)如果(iii)中的所述网织红细胞计数和crp是正常的，则推荐对慢性病或二形性贫血的进一步评价；(b)如果(iii)中的所述网织红细胞计数有所增加并且(l-iii)中的crp是正常的，则推荐对溶血性贫血或胃肠出血的进一步评价；(c)如果(iii)中的所述网织红细胞计数是低的或正常的并且(l-iii)中的所述crp有所增加，则进行完整代谢检测组套(cmp)，并且如果所述cmp是异常的，则表明所述个体患有慢性病性贫血。
16.在一些实施方案中，所述个体具有低血红蛋白和正常的平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)。
17.在一些实施方案中，仅从所述个体获得单一血液样品。在一些实施方案中，所述方法在72小时或更短时间内完成。
18.在另一个方面，本公开文本提供确定大细胞性贫血的潜在病因的自动化方法，其包括：(a)确定来自患有贫血的个体的血液样品中b12和/或叶酸的量并且平均红细胞体积(mcv)比约96fl、约97fl、约98fl、约99fl或约100fl的限定截断值大至少10％；
(i)如果中所述样品中的b12和/或叶酸水平低于b12和/或叶酸的限定截断值，则评估所述样品的甲基丙二酸含量以确认或排除b12和/或叶酸缺乏；(ii)如果中所述样品中的b12和/或叶酸水平高于b12和/或叶酸的限定截断值，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数；(a)如果(ii)中所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数相比是正常的或有所升高，则推荐溶血性贫血病症的遗传测试；(b)如果(ii)中所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数相比较低，则评估所述样品中肝功能的一种或多种标记并比较所述样品中肝功能的一种或多种标记与肝功能的所述一种或多种标记的限定范围；(i)如果(b)中肝功能的所述一种或多种标记在肝功能的所述一种或多种标记的限定范围内，则建议针对血液学疾病评估所述个体；以及(ii)如果(b)中肝功能的所述一种或多种标记在肝功能的所述一种或多种标记的限定范围内，则建议针对继发于酒精性或非酒精性肝病的慢性病评估所述个体。
19.在一些实施方案中，所述个体具有低血红蛋白和正常的平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)。在一些实施方案中，针对其推荐遗传测试的溶血性贫血病症是遗传性干瘪红细胞增多症(hx)、镰状细胞贫血和/或遗传性球形红细胞增多症。
20.在一些实施方案中，仅从所述个体获得单一血液样品。在一些实施方案中，所述方法在72小时或更短时间内完成。
21.在另一个方面，本公开文本提供用于确定贫血的潜在病因的自动化方法，其包括：通过处理模块从获自怀疑患有贫血的个体的血液样品确定血红蛋白水平、平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)和平均红细胞体积(mcv)；比较所述血红蛋白水平、mchc水平和mcv值与血红蛋白水平、mchc和mcv的限定标准；以及如果所述mchc水平与mchc的限定标准相比有所升高，则通过相同的处理模块或通过另外的处理模块评估网织红细胞计数；或者如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值低于mcv的限定标准，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准，则通过相同的处理模块和/或至少另外的处理模块评估网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价；或者如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值与mcv的限定标准相比是正常的，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准，则通过相同的处理模块和/或至少另外的处理模块评估网织红细胞计数、铁蛋白水平、c反应蛋白(crp)和综合代谢检测组套(cmp)；或者如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，并且所述mcv值与mcv的限定标准相比有所升高至少约10％，则通过相同的处理模块和/或至少另外的处理模块评估网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和肝脏功能检测组套。
22.一些实施方案可能还包括比较步骤i)的所述网织红细胞计数与限定标准，其中升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血或者可能由于胃肠(gi)出血所致。
23.一些实施方案可能还包括比较步骤ii)的所述铁蛋白水平与限定标准，其中降低
的铁蛋白水平指示铁缺乏。
24.一些实施方案可能还包括比较步骤ii)的所述网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价与其相应限定标准，其中：a)正常或升高的铁蛋白水平、正常的血红蛋白病评价和正常的网织红细胞计数指示慢性病性贫血；b)正常或升高的铁蛋白水平、正常的血红蛋白病评价和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血；或者c)正常或升高的铁蛋白水平、异常的血红蛋白病评价和正常或升高的网织红细胞计数指示血红蛋白病性贫血。
25.一些实施方案可能还包括比较步骤iii)的所述铁蛋白水平与限定标准，其中降低的铁蛋白水平指示铁缺乏，任选地早期铁缺乏。
26.一些实施方案可能还包括比较步骤iii)的所述铁蛋白水平与限定标准，其中升高的铁蛋白水平指示急性期反应或慢性期反应。
27.一些实施方案可能还包括比较步骤iii)的所述铁蛋白水平、crp、cmp和所述网织红细胞计数与其相应限定标准，其中：a)正常的铁蛋白水平和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血或胃肠出血；b)正常的铁蛋白水平、低的或正常的网织红细胞计数、升高的crp水平以及异常或正常的cmp指示慢性病性贫血(acd)；或者c)正常的铁蛋白水平、正常的网织红细胞计数和正常的crp水平指示慢性病或二形性贫血。
28.一些实施方案可能还包括比较步骤iv)的叶酸和维生素b12与其相应限定标准，其中低叶酸或维生素b12水平指示叶酸或维生素b12缺乏。
29.一些实施方案可能还包括比较步骤iv)的所述网织红细胞计数、叶酸和维生素b12与其相应限定标准，其中低叶酸或维生素b12水平和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血。
30.一些实施方案可能还包括比较步骤iv)的所述网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和所述肝脏功能检测组套与其相应限定标准，其中：a)低叶酸或维生素b12水平、升高的网织红细胞计数和正常的肝功能指示血液学疾病；或者b)低叶酸或维生素b12水平、升高的网织红细胞计数和异常的肝功能指示慢性病性贫血，任选地继发于肝病的慢性病性贫血，进一步任选地与酒精相关的慢性病性贫血。
31.在一些实施方案中，所述溶血性贫血包括遗传性溶血性贫血或获得性溶血性贫血。在一些实施方案中，所述遗传性溶血性贫血包括镰状细胞贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、遗传性干瘪红细胞增多症、遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症(卵圆形红细胞增多症)、葡糖-6-磷酸脱氢酶(g6pd)缺乏和丙酮酸激酶缺乏。在一些实施方案中，所述获得性溶血性贫血包括免疫性溶血性贫血、机械性溶血性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、病原体诱导的获得性溶血性贫血和化学品诱导的获得性溶血性贫血。在一些实施方案中，所述免疫性溶血性贫血包括自身免疫性溶血性贫血(aiha)、同种免疫性溶血性贫血和药物诱导的溶血性贫血。在一些实施方案中，所述病原体诱导的获得性溶血性贫血包
括损伤红细胞的一种或多种病原体，任选地包括来自疟原虫属(plasmodium)的原生动物或来自疏螺旋体属(borrelia)的细菌。在一些实施方案中，疟原虫属包括恶性疟原虫(p.falciparum)、三日疟原虫(p.malariae)、卵形疟原虫(p.ovale)和间日疟原虫(p.vivax)。在一些实施方案中，疏螺旋体属包括伯氏疏螺旋体(b.burgdorferi)、梅氏疏螺旋体(b.mayonii)、包柔氏疏螺旋体(b.afzelii)和嘎氏疏螺旋体(b.garinii)。在一些实施方案中，所述化学品诱导的获得性溶血性贫血包括损伤红细胞的一种或多种化学品，任选地包括毒性化学品或毒液。在一些实施方案中，所述血液学疾病包括脊髓发育不良。
32.一些实施方案可能还包括甲基丙二酸测试。
33.在任何前述方面的一些实施方案中，mchc的限定标准为约32％至约36％、约33％至约36％、约33％至约35％或约32％至约35％。
34.在任何前述方面的一些实施方案中，升高的mchc水平为大于约35％或大于约36％。
35.在任何前述方面的一些实施方案中，降低的或低的mchc水平为小于约33％或小于约32％。
36.在任何前述方面的一些实施方案中，mchc的限定标准为约32g/dl至约36g/dl、约33g/dl至约36g/dl或约33.4g/dl至约35.5g/dl。
37.在任何前述方面的一些实施方案中，升高的mchc水平为大于约35g/dl、大于约35.5g/dl或大于约36g/dl。
38.根据权利要求1-46或50中任一项所述的自动化方法，其中降低的或低的mchc水平为小于约33.4g/dl、小于约33g/dl或小于约32g/dl。
39.在任何前述方面的一些实施方案中，男性的血红蛋白水平的限定标准为约13mg/l至约17.5mg/l或约13.2mg/l至约17.5mg/l。
40.在任何前述方面的一些实施方案中，降低的男性的血红蛋白水平为小于约13.2mg/l或小于约13mg/l。
41.在任何前述方面的一些实施方案中，女性的血红蛋白水平的限定标准为约11mg/l至约15.3mg/l、约11.6mg/l至约15mg/l、约11.7mg/l至约15mg/l或约12mg/l至约15mg/l。
42.在任何前述方面的一些实施方案中，降低的女性的血红蛋白水平为小于约11mg/l、小于约11.6mg/l、小于约11.7mg/l或小于约12mg/l。
43.在任何前述方面的一些实施方案中，mcv的限定标准为约80fl至约100fl、约80fl至约98fl或约80fl至约96fl。
44.在任何前述方面的一些实施方案中，升高的mcv值为大于约96fl、大于约97fl、大于约98fl、大于约99fl或大于100fl。
45.在任何前述方面的一些实施方案中，降低的或低的mcv值为小于约80fl或小于约79fl。
46.在任何前述方面的一些实施方案中，网织红细胞计数的限定标准为约0.5％至约2.5％、约0.5％至约2％或约0.5％至约1.5％。
47.在任何前述方面的一些实施方案中，升高的网织红细胞计数为大于1.5％、大于2％或大于2.5％。
48.在任何前述方面的一些实施方案中，网织红细胞计数的限定标准为约10x109至约
110x109个rbc/l、约50x109至约100x109个rbc/l或约50x109至约150x109个rbc/l。
49.在任何前述方面的一些实施方案中，升高的网织红细胞计数为大于100x109个rbc/l、大于110x109个rbc/l或大于150x109个rbc/l。
50.在任何前述方面的一些实施方案中，男性的铁蛋白的限定标准为约12至约300ng/ml、约20至约300ng/ml或约20至约250ng/ml。
51.在任何前述方面的一些实施方案中，升高的男性的铁蛋白水平为大于约250ng/ml或大于约300ng/ml。
52.在任何前述方面的一些实施方案中，女性的铁蛋白的限定标准为约12至约270ng/ml、约12至约263ng/ml、约20至约200ng/ml、约12至约150ng/ml或约10至约120ng/ml。
53.在任何前述方面的一些实施方案中，升高的女性的铁蛋白水平为大于约120ng/ml、大于约150ng/ml、大于约200ng/ml、大于约263ng/ml或大于约270ng/ml。
54.在任何前述方面的一些实施方案中，降低的或低的铁蛋白水平为小于约20ng/ml、小于约12ng/ml或小于10ng/ml。
55.在任何前述方面的一些实施方案中，crp的限定标准为约0.2mg/l至约6.1mg/l、约0.2mg/l至约6mg/l或约0.2mg/l至约5mg/l。
56.在任何前述方面的一些实施方案中，升高的crp水平为大于约5mg/l、大于约6mg/l或大于约6.2mg/l。
57.在任何前述方面的一些实施方案中，对血浆实施的叶酸的限定标准为约2ng/ml至约10ng/ml或约2.7ng/ml至约17ng/ml。
58.在任何前述方面的一些实施方案中，对rbc实施的叶酸的限定标准为约140ng/ml至约960ng/ml。
59.在任何前述方面的一些实施方案中，维生素b12的限定标准为约200至约900ng/ml。
60.在任何前述方面的一些实施方案中，所述肝脏功能检测组套包括测试以下的水平：总蛋白、白蛋白、胆红素、碱性磷酸酶(alp)、丙氨酸转氨酶(alt)和天冬氨酸转氨酶(ast)。在一些实施方案中，alp的限定标准为约25iu/l至约160iu/l或约40iu/l至约129iu/l。在一些实施方案中，alt的限定标准为约0iu/l至约55iu/l或约7iu/l至约55iu/l。在一些实施方案中，ast的限定标准为约0iu/l至约40iu/l或约8iu/l至约48iu/l。
61.在任何前述方面的一些实施方案中，所述血红蛋白病评价检测血红蛋白变体和/或珠蛋白生成障碍性贫血的存在。在一些实施方案中，所述血红蛋白变体包括血红蛋白a、血红蛋白a2、血红蛋白f、血红蛋白s、血红蛋白c或血红蛋白e。在一些实施方案中，所述血红蛋白病评价不检测α-珠蛋白生成障碍性贫血的存在。
62.在任何前述方面的一些实施方案中，所述方法不包括血液涂片测试。
63.在任何前述方面的一些实施方案中，所述方法不检测和/或评估红细胞分布宽度(rwd)。
64.在任何前述方面的一些实施方案中，所述方法包括进行全血细胞计数(cbc)测试以检测所述血红蛋白水平、mchc和mcv。
65.在任何前述方面的一些实施方案中，所述方法在约72小时或更短时间内完成。在任何前述方面的一些实施方案中，所述个体并未处于针对铁缺乏的治疗中。在任何前述方
面的一些实施方案中，从所述个体获得单一血液样品。
66.在任何前述方面的一些实施方案中，所述比较步骤通过处理器来进行。
67.在另一个方面，本公开文本提供治疗有需要的个体的贫血的潜在病因的方法，其包括：从获自所述个体的血液样品评估血红蛋白水平、平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)和平均红细胞体积(mcv)；比较所述血红蛋白水平、mchc水平和mcv值与血红蛋白水平、mchc和mcv的限定标准；进行选自以下的一个或多个另外的测试：网织红细胞计数，如果所述mchc水平与mchc的限定标准相比有所升高；网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价，如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值低于mcv的限定标准，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准；网织红细胞计数、铁蛋白水平、c反应蛋白(crp)和综合代谢检测组套(cmp)，如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值与mcv的限定标准相比是正常的，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准；或者网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和肝脏功能检测组套，如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，并且所述mcv值与mcv的限定标准相比有所升高至少约10％；以及将治疗施用至所述个体，从而治疗贫血的所述潜在病因。
68.一些实施方案可能还包括比较所述网织红细胞计数与限定标准，其中升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血。
69.一些实施方案可能还包括比较所述铁蛋白水平与限定标准，其中降低的铁蛋白水平指示铁缺乏。
70.一些实施方案可能还包括比较所述网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价与其相应限定标准，其中：a)正常或升高的铁蛋白水平、正常的血红蛋白病评价和正常的网织红细胞计数指示慢性病性贫血；b)正常或升高的铁蛋白水平、正常的血红蛋白病评价和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血；或者c)正常或升高的铁蛋白水平、异常的血红蛋白病评价和正常或升高的网织红细胞计数指示血红蛋白病性贫血。
71.一些实施方案可能还包括比较所述铁蛋白水平与限定标准，其中降低的铁蛋白水平指示铁缺乏，任选地早期铁缺乏。
72.一些实施方案可能还包括比较所述铁蛋白水平与限定标准，其中升高的铁蛋白水平指示急性期反应。
73.一些实施方案可能还包括比较所述铁蛋白水平、crp、cmp和所述网织红细胞计数与其相应限定标准，其中：a)正常的铁蛋白水平和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血或胃肠出血；
b)正常的铁蛋白水平、低的或正常的网织红细胞计数、升高的crp水平以及异常或正常的cmp指示慢性病性贫血(acd)；或者c)正常的铁蛋白水平、正常的网织红细胞计数和正常的crp水平指示慢性病或二形性贫血。
74.一些实施方案可能还包括比较叶酸和维生素b12与其相应限定标准，其中低叶酸或维生素b12水平指示叶酸或维生素b12缺乏。
75.一些实施方案可能还包括比较所述网织红细胞计数、叶酸和维生素b12与其相应限定标准，其中低叶酸或维生素b12水平和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血。
76.一些实施方案可能还包括比较所述网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和所述肝脏功能检测组套与其相应限定标准，其中：a)低叶酸或维生素b12水平、升高的网织红细胞计数和正常的肝功能指示血液学疾病；或者b)低叶酸或维生素b12水平、升高的网织红细胞计数和异常的肝功能指示慢性病性贫血，任选地继发于肝病的慢性病性贫血，进一步任选地与酒精相关的慢性病性贫血。
77.一些实施方案可能还包括甲基丙二酸测试。
78.一些实施方案可能还包括遗传测试。
79.在一些实施方案中，所述溶血性贫血包括遗传性溶血性贫血或获得性溶血性贫血。例如，在一些实施方案中，所述遗传性溶血性贫血包括镰状细胞贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、遗传性干瘪红细胞增多症、遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症(卵圆形红细胞增多症)、葡糖-6-磷酸脱氢酶(g6pd)缺乏和丙酮酸激酶缺乏。在一些实施方案中，所述获得性溶血性贫血包括免疫性溶血性贫血、机械性溶血性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、病原体诱导的获得性溶血性贫血和化学品诱导的获得性溶血性贫血。在一些实施方案中，所述免疫性溶血性贫血包括自身免疫性溶血性贫血(aiha)、同种免疫性溶血性贫血和药物诱导的溶血性贫血。在一些实施方案中，所述病原体诱导的获得性溶血性贫血包括损伤红细胞的一种或多种病原体，任选地包括来自疟原虫属的原生动物或来自疏螺旋体属的细菌。在一些实施方案中，疟原虫属包括恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫和间日疟原虫。在一些实施方案中，疏螺旋体属包括伯氏疏螺旋体、梅氏疏螺旋体、包柔氏疏螺旋体和嘎氏疏螺旋体。在一些实施方案中，所述化学品诱导的获得性溶血性贫血包括损伤红细胞的一种或多种化学品，任选地包括毒性化学品或毒液。
80.在一些实施方案中，所述血液学疾病包括脊髓发育不良。
81.在一些实施方案中，针对溶血性贫血的治疗包括输血、血浆去除术、血液和/或骨髓干细胞移植、手术、治疗剂或其组合。在一些实施方案中，针对缺铁性贫血(ida)的治疗包括可溶性铁的施用。在一些实施方案中，针对慢性病性贫血(acd)的治疗包括用于潜在炎症的治疗的类固醇或非类固醇抗炎剂、用于潜在病原体感染的抗生素或癌症治疗。
82.在一些实施方案中，mchc的限定标准为约32％至约36％、约33％至约36％、约33％至约35％或约32％至约35％。在一些实施方案中，升高的mchc水平为大于约35％或大于约36％。在一些实施方案中，降低的或低的mchc水平为小于约33％或小于约32％。在一些实施方案中，mchc的限定标准为约32g/dl至约36g/dl、约33g/dl至约36g/dl或约33.4g/dl至约35.5g/dl。在一些实施方案中，升高的mchc水平为大于约35g/dl、大于约35.5g/dl或大于约
36g/dl。在一些实施方案中，降低的或低的mchc水平为小于约33.4g/dl、小于约33g/dl或小于约32g/dl。
83.在一些实施方案中，男性的血红蛋白水平的限定标准为约13mg/l至约17.5mg/l或约13.2mg/l至约17.5mg/l。在一些实施方案中，降低的男性的血红蛋白水平为小于约13.2mg/l或小于约13mg/l。在一些实施方案中，女性的血红蛋白水平的限定标准为约11mg/l至约15.3mg/l、约11.6mg/l至约15mg/l、约11.7mg/l至约15mg/l或约12mg/l至约15mg/l。在一些实施方案中，降低的女性的血红蛋白水平为小于约11mg/l、小于约11.6mg/l、小于约11.7mg/l或小于约12mg/l。
84.在一些实施方案中，mcv的限定标准为约80fl至约100fl、约80fl至约98fl或约80fl至约96fl。在一些实施方案中，升高的mcv值为大于约96fl、大于约97fl、大于约98fl、大于约99fl或大于100fl。在一些实施方案中，降低的或低的mcv值为小于约80fl或小于约79fl。
85.在一些实施方案中，网织红细胞计数的限定标准为约0.5％至约2.5％、约0.5％至约2％或约0.5％至约1.5％。
86.在一些实施方案中，升高的网织红细胞计数为大于1.5％、大于2％或大于2.5％。
87.在一些实施方案中，网织红细胞计数的限定标准为约10x109至约110x109个rbc/l、约50x109至约100x109个rbc/l或约50x109至约150x109个rbc/l。
88.在一些实施方案中，升高的网织红细胞计数为大于100x109个rbc/l、大于110x109个rbc/l或大于150x109个rbc/l。
89.在一些实施方案中，男性的铁蛋白的限定标准为约12至约300ng/ml、约20至约300ng/ml或约20至约250ng/ml。
90.在一些实施方案中，升高的男性的铁蛋白水平为大于约250ng/ml或大于约300ng/ml。
91.在一些实施方案中，女性的铁蛋白的限定标准为约12至约270ng/ml、约12至约263ng/ml、约20至约200ng/ml、约12至约150ng/ml或约10至约120ng/ml。
92.在一些实施方案中，升高的女性的铁蛋白水平为大于约120ng/ml、大于约150ng/ml、大于约200ng/ml、大于约263ng/ml或大于约270ng/ml。
93.在一些实施方案中，降低的或低的铁蛋白水平为小于约20ng/ml、小于约12ng/ml或小于10ng/ml。
94.在一些实施方案中，crp的限定标准为约0.2mg/l至约6.1mg/l、约0.2mg/l至约6mg/l或约0.2mg/l至约5mg/l。
95.在一些实施方案中，升高的crp水平为大于约5mg/l、大于约6mg/l或大于约6.2mg/l。
96.在一些实施方案中，对血浆实施的叶酸的限定标准为约2ng/ml至约10ng/ml或约2.7ng/ml至约17ng/ml。
97.在一些实施方案中，对rbc实施的叶酸的限定标准为约140ng/ml至约960ng/ml。
98.在一些实施方案中，维生素b12的限定标准为约200至约900ng/ml。
99.在一些实施方案中，所述肝脏功能检测组套包括测试以下的水平：总蛋白、白蛋白、胆红素、碱性磷酸酶(alp)、丙氨酸转氨酶(alt)和天冬氨酸转氨酶(ast)。在一些实施方
案中，alp的限定标准为约25iu/l至约160iu/l或约40iu/l至约129iu/l。在一些实施方案中，alt的限定标准为约0iu/l至约55iu/l或约7iu/l至约55iu/l。在一些实施方案中，ast的限定标准为约0iu/l至约40iu/l或约8iu/l至约48iu/l。
100.在另一个方面，本公开文本提供治疗有需要的个体的小细胞性贫血的潜在病因的方法，其包括：从获自所述个体的血液样品评估网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价；比较所述网织红细胞计数和铁蛋白水平与其相应限定标准；以及如果所述铁蛋白水平低于所述限定标准，则向所述个体施用可溶形式的铁；或者如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的或有所升高，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比是正常的，并且所述血红蛋白病评价是正常的，则向所述个体施用针对慢性病性贫血的治疗；或者如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的或有所升高，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，并且所述血红蛋白病评价是正常的，则向所述个体施用针对溶血性贫血的治疗；或者如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的或有所升高，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比是正常的或有所升高，并且所述血红蛋白病评价是异常的，则向所述个体施用针对血红蛋白病的治疗。
101.在另一个方面，本公开文本提供治疗有需要的个体的正常细胞性贫血的潜在病因的方法，其包括：从获自所述个体的血液样品评估网织红细胞计数、铁蛋白水平、c反应蛋白(crp)和综合代谢检测组套(cmp)；比较所述网织红细胞计数、铁蛋白水平、crp水平和cmp与其相应限定标准；以及如果所述铁蛋白水平低于所述限定标准，则向所述个体施用可溶形式的铁；或者如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比有所升高，则进行所述个体的另外的评价；或者如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的并且所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，则向所述个体施用针对溶血性贫血的治疗或胃肠出血；或者如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，并且所述cmp是正常的或异常的，则向所述个体施用针对慢性病性贫血(acd)的治疗；或者如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比是正常的，并且所述crp是正常的，则向所述个体施用针对慢性病或二形性贫血的治疗。在另一个方面，本公开文本提供治疗有需要的个体的大细胞性贫血的潜在病因的方法，其包括：从获自所述个体的血液样品评估网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和肝脏功能检测组套；比较所述网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和肝脏功能检测组套与其相应限定标
准；以及如果所述叶酸或维生素b12的水平与所述限定标准相比较低，则向所述个体施用叶酸补充剂或维生素b12补充剂；或者如果所述叶酸或维生素b12的水平与所述限定标准相比较低并且所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，则向所述个体施用针对溶血性贫血的治疗；或者如果所述叶酸或维生素b12的水平与所述限定标准相比较低，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，并且所述肝功能与限定标准相比是正常的，则向所述个体施用针对血液学疾病的治疗；或者如果所述叶酸或维生素b12的水平与所述限定标准相比较低，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，并且所述肝功能与限定标准相比是异常的，则向所述个体施用针对慢性病性贫血的治疗。
102.以下详细说明是示例性和解释性的，并且意图提供对本发明的进一步解释。
附图说明
103.本公开文本的不同方面在随附权利要求书中具体阐述。将通过参考阐述了利用本公开文本的原理的说明性实施方案的以下具体实施方式和附图获得对本公开文本的特征和优点的更好的理解，在所述附图中：
104.图1a和图1b图解说明本文所述的用于确定贫血的潜在病因的自动化方法。
具体实施方式
105.贫血是一种病症，其中红细胞(rbc)的数量不足以满足身体的生理需求。贫血可以从三个角度进行分类：发病机制、红细胞形态和临床表现。病原性分类涉及红细胞的产生或不充足产生，并且可以被细分为两个类型，即再生不足型和再生型。再生不足型贫血是指其中骨髓产生由于功能受损、前体细胞数量减少、骨髓浸润降低或缺乏营养而减少的致病条件。再生型贫血是指其中骨髓通过增加红细胞的产生对低红细胞量适当反应的致病条件。
106.基于红细胞形态分类的贫血可以被进一步细分为小细胞性贫血、正常细胞性贫血和大细胞性贫血。小细胞性贫血可以被定义为外周血涂片中小的低色素性红细胞的存在，并且特征还可以在于低平均红细胞体积(mcv)。正常细胞性贫血可以被定义为具有正常mcv范围但血细胞比容和/或血红蛋白值减小的贫血。大细胞性贫血可以被定义为大于正常的红细胞的存在。
107.贫血不一定是疾病，而是通常是潜在障碍的表现。贫血背后的病因可能很复杂，并且在一定程度上难于确定。例如，贫血的诊断可以以全身检查和全血细胞计数(cbc)检查开始。基于来自cbc检查的参数，进一步进行一种或多种另外的测试，有时需要个体进行一次或多次另外的医院或临床就诊和/或每个测试结果之间需要长时间等待。
108.在疾病或损伤环境(例如，危重疾病或损伤环境)中，贫血可能是常见的，并且时机和准确度是诊断贫血的正确潜在病因的重要因素。例如，危重疾病或损伤期间的贫血可能是由于rbc循环寿命缩短或rbc产生减少所致。寿命缩短的原因可能包括溶血、静脉切开术失血或者由于损伤部位(例如，胃肠出血)或侵入性操作所致的出血。rbc产生减少的原因可能是由于营养缺乏或炎症性贫血所致。在一些情况下，炎症性贫血可能是小细胞性贫血或
低色素性贫血，并且小细胞性贫血或低色素性贫血的血液参数可能与缺铁性贫血的那些血液参数类似或无法区分，从而使得正确的诊断复杂且耗时。
109.确定贫血的潜在病因的常规方法通常需要多次诊疗室就诊(通常访问专科医生，如血液学专家)、多次抽血以及数周或数月的随访。大多数初级护理医师设备不良，无法安排进行确定所需的必需的测试和随访，并且这一般不仅导致诊断的长时间延迟，还使患者经历多余的或不必要的测试。常规方法是资源和人力密集的，并且迫使贫血患者等待数周或数月才能确定病症的潜在病因。
110.本文公开将贫血和临床表现背后的潜在病因的诊断自动化和合理化的方法和系统。在一些情况下，所述方法和系统仅需要来自个体的单一样品，从而减小和/或消除所述个体一次或多次返回医院或诊所就诊的需要。在一些情况下，所述方法和系统在72小时或更短时间内完成。在一些情形中，所述方法被简化至贫血的每种潜在病因的诊断所需的必要测试，并且任选地进一步减少和/或消除复杂的、耗时的且可能昂贵的诊断测试。诊断方法
111.本文在某些实施方案中公开一种用于在有需要的个体中确定贫血的存在和潜在病因的自动化方法。在一些实施方案中，所述自动化方法包括从个体获得血液样品。接下来，可以确定血红蛋白水平以及一个或多个红细胞指标。基于血红蛋白水平和来自所述一个或多个红细胞指标的值，可以进行来自测试组套的一项或多项另外的测试。可以作出基于所述另外的测试的报告并任选地转交给医师、分析的第三方和/或从其获得血液样品的个体。参见图1a。
112.在一些实施方案中，所述自动化方法如图1b中图解说明。如本文所说明，第一步骤包括提供关于血红蛋白(hb或hgb)浓度和一个或多个红细胞指标的参数。正常的hb浓度范围可以根据进行分析的实验室而变化。在一些情况下，正常的男性hb浓度范围为约13mg/l(或约13g/分升(dl)或约130g/l)至约17.5mg/l(或约17.5g/dl或约175g/l)、约13.1mg/l(或约13.1g/dl或约131g/l)至约17.5mg/l(或约17.5g/dl或约175g/l)、约13.1mg/l(或约13.1g/dl或约131g/l)至约16.6mg/l(或约16.6g/dl或约166g/l)、约13.2mg/l(或约13.2g/dl或约132g/l)至约17.5mg/l(或约17.5g/dl或约175g/l)或约13.2mg/l(或约13.2g/dl或约132g/l)至约16.6mg/l(或约16.6g/dl或约166g/l)。在一些情形中，异常的男性hb浓度为小于约13mg/l(或13g/dl或130g/l)、小于约13.1mg/l(或13.1g/dl或131g/l)或小于约13.2mg/l(或13.2g/dl或132g/l)。在一些情形中，异常hb浓度指示贫血。在一些情形中，正常的范围在本文中也称为hb浓度的限定标准。
113.在一些情况下，正常的女性hb浓度范围为约11mg/l(或约11g/dl或约110g/l)至约15.3mg/l(或约15.3g/dl或约153g/l)、约11.6mg/l(或约11.6g/dl或约116g/l)至约15mg/l(或约15g/dl或约150g/l)、约11.7mg/l(或约11.7g/dl或约117g/l)至约15mg/l(或约15g/dl或约150g/l)或约12mg/l(或约12g/dl或约120g/l)至约15mg/l(或约15g/dl或约150g/l)。在一些情形中，异常的女性hb浓度为小于约11mg/l(或小于约11g/dl或小于约110g/l)、小于约11.6mg/l(或11.6g/dl或116g/l)、小于约11.7mg/l(或11.7g/dl或117g/l)或小于约12mg/l(或12g/dl或120g/l)。在一些情形中，异常hb浓度指示贫血。在一些情形中，正常的和异常的女性hb浓度范围涵盖怀孕的女性和/或行经的女性。
114.在一些情况下，小于5岁龄的儿童的异常的hb浓度为小于约11mg/l(或小于约11g/
dl或小于约110g/l)。在一些情形中，异常hb浓度指示贫血。
115.在一些情形中，约5岁龄至约12岁龄的儿童的异常的hb浓度为小于约11.5mg/l(或小于约11.5g/dl或小于约115g/l)。在一些情形中，异常hb浓度指示贫血。
116.红细胞指标包括对以下的测量：平均细胞体积(或平均红细胞体积或mcv)、平均细胞血红蛋白(或平均红细胞血红蛋白或mch)以及平均细胞血红蛋白浓度(或平均红细胞血红蛋白浓度或mchc)。mcv是指rbc的平均大小。正常的mcv值可以根据进行分析的实验室而变化。在一些情况下，mcv的正常范围为约80飞升(fl)至约100fl、约80fl至约98fl或约80fl至约96fl。在一些情形中，正常的mcv值与正常细胞性贫血(或正常细胞性正常色素性贫血)相关。在一些情形中，所述正常范围涵盖男性和女性二者的范围。在一些情形中，mcv的正常范围在本文中也称为mcv的限定标准。
117.在一些情形中，高的或升高的mcv为大于约96fl、大于约97fl、大于约98fl、大于约99fl或大于约100fl。在一些情形中，高的或升高的mcv不高于约150fl。在一些情形中，高的或升高的mcv值与大细胞性贫血相关。在一些情形中，所述高的或升高的mcv值涵盖男性和女性二者的值。
118.在一些情形中，低mcv为小于约80fl或小于约79fl。在一些情形中，低mcv为小于约80fl或小于约79fl但高于约50fl。在一些情形中，所述低mcv值与小细胞性贫血相关。在一些情形中，所述低mcv值涵盖男性和女性二者的值。
119.在一些情形中，儿童的高mcv为大于约86fl、大于约87fl、大于约95fl、大于约98fl或大于约102fl。在一些情形中，所述儿童为小于或约18岁龄。在一些情形中，小于约2岁龄的儿童的高mcv为大于约86fl。在一些情形中，约2岁龄至约6岁龄的儿童的高mcv为大于约87fl。在一些情形中，约6岁龄至约12岁龄的儿童的高mcv为大于约95fl。在一些情形中，约12岁龄至约18岁龄的儿童的高mcv为大于约98fl或大于约102fl。
120.在一些情况下，儿童的低mcv为小于约78fl、小于约77fl、小于约75fl或小于约70fl。在一些情形中，所述儿童为小于或约18岁龄。在一些情形中，小于约2岁龄的儿童的低mcv为小于约70fl。在一些情形中，约2岁龄至约6岁龄的儿童的低mcv为小于75fl。在一些情形中，约6岁龄至约12岁龄的儿童的低mcv为小于77fl。在一些情形中，约12岁龄至约18岁龄的儿童的低mcv为小于78fl。
121.mch是指每个红细胞的血红蛋白的平均量或数量。正常的mch值可以根据进行分析的实验室而变化。在一些情况下，mch的正常范围为约26皮克(pg)至约34pg、约27pg至约34pg、约27.5pg至约33.2pg、约27pg至约33pg或约27pg至约31pg。在一些情形中，高mch为大于约31pg、大于约33pg、大于约33.2pg或大于约34pg。在一些情形中，低mch为小于约27.5pg或小于约27pg。在一些情形中，所述mch值涵盖男性和女性二者的范围。在一些情形中，mch的正常范围在本文中也称为mch的限定标准。
122.在一些情况下，儿童的高mch为大于约30pg、大于约31pg、大于约33pg、大于约34pg或大于约35pg。在一些情形中，所述儿童为小于或约18岁龄。在一些情形中，小于约2岁龄的儿童的高mch为大于约31pg。在一些情形中，约2岁龄至约6岁龄的儿童的高mch为大于约30pg。在一些情形中，约6岁龄至约12岁龄的儿童的高mch为大于约33pg。在一些情形中，约12岁龄至约18岁龄的儿童的高mch为大于约35pg。
123.在一些情况下，儿童的低mch为小于约26pg、小于约25pg、小于约24pg或小于约
23pg。在一些情形中，所述儿童为小于或约18岁龄。在一些情形中，小于约2岁龄的儿童的低mch为小于约23pg。在一些情形中，约2岁龄至约6岁龄的儿童的低mch为小于约24pg。在一些情形中，约6岁龄至约18岁龄的儿童的低mch为小于25pg。
124.mchc是指给定体积的rbc中血红蛋白的浓度，并且可以通过将hb除以血细胞比容(hct)来计算。正常mchc值可以根据进行分析的实验室而变化。在一些情况下，mchc的正常范围表示为质量，并且为约32g/dl至约36g/dl、约33g/dl至约36g/dl或约33.4g/dl至约35.5g/dl。在一些情形中，mchc的正常范围表示为摩尔浓度，并且为约4.81mmol/l至约5.58mmol/l。在一些情形中，mchc的正常范围还表示为百分比(例如，m
hb
/m
rbc
的质量分数)，并且为约32％至约36％、约33％至约36％、约33％至约35％或约32％至约35％。在一些情形中，高mchc为大于约35g/dl、大于约35.5g/dl或大于约36g/dl。在一些情形中，高mchc为大于约5.58mmol/l。在一些情形中，高mchc为大于约35％或大于约36％。在一些情形中，低mchc为小于约33.4g/dl、小于约33g/dl或小于约32g/dl。在一些情形中，低mchc为小于约4.81mmol/l。在一些情形中，低mchc为小于约33％或小于约32％。在一些情形中，所述mchc值涵盖男性和女性二者的范围。在一些情形中，mchc值的正常范围在本文中也称为mchc的限定标准。
125.在一些情况下，儿童的高mchc为大于约36％。在一些情形中，所述儿童为小于或约18岁龄。
126.在一些情形中，儿童的低mchc为小于约32％或30％。在一些情形中，所述儿童为小于或约18岁龄。在一些情形中，小于2岁龄的儿童的低mchc为小于约30％。在一些情形中，约2岁龄至约18岁龄的儿童的低mchc为小于约32％。
127.在一些实施方案中，所公开的方法的第一步骤包括测量hb浓度以及mcv、mch和/或mchc。在一些情况下，第一步骤包括测量hb浓度、mcv和mchc。在一些情况下，第一步骤是全血细胞计数(cbc)，其提供hb浓度、mcv和mchc的测量值。
128.在一些情况下，cbc提供另外的参数，如血细胞比容、白细胞(wbc)计数、血小板计数、血小板分布宽度(pdw)、平均血小板体积(mpv)、红细胞计数、红细胞分布宽度(rdw)和细胞形态。血细胞比容(hct)确定血液中rbc的百分比。在一些情况下，男性的正常范围为约38％至约51％、约38.3％至约48.6％或约41.5％至约50.4％。在一些情形中，小于约41.5％、小于约41％、小于约39％、小于约38.3％或小于约38％的范围指示贫血。
129.在一些情形中，女性的hct的正常范围为约35％至约45％、约35.5％至约44.9％或约36.9％至约44.6％。在一些情形中，小于约36.9％、小于约36％、小于约35.5％或小于约35％的范围指示贫血。
130.wbc计数测量血液中白细胞的数量。在一些情形中，白细胞计数的正常范围为约34亿至约96亿个细胞/l(或约3400至约9600个细胞/mcl)。还可以将wbc计数测量为细胞差异，其确定血液中存在的每种类型的白细胞的百分比，或者测量为嗜中性粒细胞的核分割。
131.血小板计数测量血液中血小板的数量。在一些情况下，正常范围为约150,000至约450,000个血小板/mcl。在一些情形中，男性的正常范围为约1350亿至约3170亿/l(或约135,000至约317,000个血小板/mcl)。在一些情形中，女性的正常范围为约1570亿至约3710亿/l(或约157,000至约371,000个血小板/mcl)。
132.血小板分布宽度(pdw)测量血小板大小的变异，并且正常范围为约8.3至约25fl。
133.平均血小板体积(mpv)是指血液中血小板的平均大小，并且正常范围为约8.6至约15.5fl。
134.红细胞计数测量血液中rbc的数量。在一些情况下，男性的正常范围为约43500亿至约56500亿个细胞/l(或约432万至约572万个细胞/mcl)。在一些情形中，女性的正常范围为约39200亿至约51300亿个细胞/l(或约390万至约503万个细胞/mcl)。
135.红细胞分布宽度是指rbc大小的变异。在一些情况下，男性的正常范围为约11.8％至约14.5％，并且女性的正常范围为约12.2％至约16.1％。
136.在一些情形中，细胞形态包括红细胞大小不均、异形红细胞症和多染性。红细胞大小不均是指其中rbc的大小不等的病症。异形红细胞症是指细胞形状的变异的存在，例如，如卵形、泪珠状、镰刀状或不规则收缩的rbc。多染性是指血液中存在异常高数量的不成熟rbc的病症。
137.在一些实施方案中，基于mchc、hb浓度和mcv的值，在随后步骤中进行一个或多个另外的测试组套(或级联)。在一些情况下，如果mchc的值是高的或增加至高于正常范围，则进行网织红细胞计数。网织红细胞计数测量血液中新产生的、相对不成熟的rbc的数量。新产生的rbc含有称为网硬蛋白的残留核物质，并且不成熟rbc的存在可能反映最近的骨髓功能和/或活性。在一些情况下，网织红细胞计数反映为网织红细胞百分比。在一些情形中，网织红细胞计数的正常范围为约0.5％至约2.5％、约0.5％至约2％或约0.5％至约1.5％。在一些情形中，升高的网织红细胞计数为大于1.5％、大于2％或大于2.5％。在一些情况下，将网织红细胞计数测量为绝对网织红细胞计数。在一些情形中，网织红细胞计数的正常范围为约10x109至约110x109个rbc/l、约50x109至约100x109个rbc/l或约50x109至约150x109个rbc/l。在一些情形中，升高的网织红细胞计数为大于100x109个rbc/l、大于110x109个rbc/l或大于150x109个rbc/l。在一些情况下，网织红细胞计数涵盖在cbc内。在其他情况下，网织红细胞计数是单独测试。在一些情形中，包括网织红细胞计数的测试组套在本文中称为级联1(还参见表1和图1b)。
138.在一些情况下，如果mchc的值落在正常范围内或低于正常范围，hb浓度降至低于正常范围，并且mcv值降至低于正常范围，则进行包括网织红细胞计数和铁蛋白和任选地血红蛋白病评价的测试组套。铁蛋白测试测量血液中铁蛋白的量。在一些情况下，男性的铁蛋白(或血清铁蛋白)的正常范围为约12至约300ng/ml、约20至约300ng/ml或约20至约250ng/ml。在一些情形中，升高的男性的铁蛋白水平为大于约250ng/ml或大于约300ng/ml。在一些情况下，女性的铁蛋白(或血清铁蛋白)的正常范围为约12至约270ng/ml、约12至约263ng/ml、约20至约200ng/ml、约12至约150ng/ml或约10至约120ng/ml。在一些情形中，升高的女性的铁蛋白水平为大于约120ng/ml、大于约150ng/ml、大于约200ng/ml、大于约263ng/ml或大于约270ng/ml。在一些情形中，降低的或低的铁蛋白水平为小于约20ng/ml、小于约12ng/ml或小于10ng/ml。
139.在一些情形中，儿童的铁蛋白(或血清铁蛋白)的正常范围为约7至约140ng/ml。在一些情形中，所述儿童为小于约18岁龄或小于约15岁龄。
140.血红蛋白病评价是一组测试，其检测并鉴定血红蛋白病的类型。血红蛋白病是一种遗传性血液障碍，并且特征为异常形式的血红蛋白(或变体)或者降低的血红蛋白产生(例如，珠蛋白生成障碍性贫血)。在一些情况下，血红蛋白病评价检测血红蛋白变体的存
在，所述血红蛋白变体如血红蛋白a、血红蛋白a2、血红蛋白f、血红蛋白s、血红蛋白c和血红蛋白e。在一些情形中，所述血红蛋白病评价检测β-珠蛋白生成障碍性贫血。在一些情形中，所述血红蛋白病评价不检测α-珠蛋白生成障碍性贫血。在一些情形中，进行单独的遗传测试以检测α-珠蛋白生成障碍性贫血的存在。
141.在一些情况下，包括网织红细胞计数、铁蛋白和血红蛋白病评价的测试组套在本文中称为级联2(还参见表1和图1b)。
142.在一些情况下，如果mchc的值落在正常范围内或低于正常范围，hb浓度降至低于正常范围，并且mcv值在正常范围内，则进行包括网织红细胞计数、铁蛋白和任选地c反应蛋白(crp)和/或综合代谢检测组套(cmp)的测试组套。c反应蛋白(crp)是一种肝脏蛋白，并且crp水平在炎症的存在下增加。crp测试测量血液中crp的水平。在一些情况下，crp的正常范围为约0.2mg/l至约6.1mg/l、约0.2mg/l至约6mg/l或约0.2mg/l至约5mg/l。在一些情形中，高的或升高的crp水平为大于约5mg/l、大于约6mg/l或大于约6.2mg/l。
143.综合代谢检测组套(cmp)是一项测量血液中约14种不同参数的测试，并且包括葡萄糖、钙、钠、钾、二氧化碳、氯化物、白蛋白、总蛋白、碱性磷酸酶(alp)、丙氨酸转氨酶(alt)、天冬氨酸转氨酶(ast)、胆红素、血尿素氮(bun)和肌酐。在一些情况下，葡萄糖的正常范围为约65mg/dl至约100mg/dl。在一些情形中，bun的正常范围为约5至约26mg/dl。在一些情形中，肌酐的正常范围为约0.76mg/dl至约1.27mg/dl。在一些情形中，钠的正常范围为约135mmol/l至约145mmol/l。在一些情形中，钾的正常范围为约3.5mmol/l至约5.2mmol/l。在一些情形中，氯化物的正常范围为约97mmol/l至约108mmol/l。在一些情形中，二氧化碳的正常范围为约20mmol/l至约32mmol/l。在一些情形中，钙的正常范围为约8.5mg/dl至约10.6mg/dl。在一些情形中，白蛋白的正常范围为约3.6g/dl至约4.8g/dl或约3.5g/dl至约5g/dl。在一些情形中，总蛋白的正常范围为约6g/dl至约8.5g/dl或约6.3g/dl至约7.9g/dl。在一些情形中，胆红素(例如，总胆红素)的正常范围为约0.1mg/dl至约1.2mg/dl。在一些情形中，alp的正常范围为约25iu/l至约160iu/l或约40iu/l至约129iu/l。在一些情形中，ast的正常范围为约0iu/l至约40iu/l或约8iu/l至约48iu/l。在一些情形中，alt的正常范围为约0iu/l至约55iu/l或约7iu/l至约55iu/l。
144.在一些情形中，包括网织红细胞计数、铁蛋白、c反应蛋白和综合代谢检测组套的测试组套在本文中称为级联3(还参见表1和图1b)。
145.在一些情况下，如果mcv值有所升高并且hb浓度降至低于正常范围，则进行包括网织红细胞计数、叶酸测试、维生素b12和任选地肝脏功能检测组套的测试组套。叶酸(folate)测试(或叶酸(folic acid)测试)测量血液中叶酸的量。如本文所用，术语“叶酸(folate)”涵盖叶酸(folic acid)或其衍生物、叶酸的还原形式以及5-甲基四氢叶酸。叶酸或n-[4-(2-氨基-3,4-二氢-4-氧代-6-蝶啶基甲基氨基)-苯甲酰基]-l-谷氨酸也称为维生素b9、folicin、n-蝶酰基-l-谷氨酸和n-蝶酰基-l-谷氨酸酯。叶酸的示例性还原形式包括但不限于6(r,s)-5-甲基四氢叶酸、(6(s)-5-甲基四氢叶酸、10-亚甲基四氢叶酸、10-甲酰基四氢叶酸、5-甲酰基四氢叶酸、5-亚氨甲基四氢叶酸、5,10-次甲基四氢叶酸、5,10-甲基四氢叶酸、l-甲基叶酸、6(r,s)-5-甲酰基四氢叶酸(亚叶酸)以及四氢叶酸(tetrahydrofolic acid)/四氢叶酸(tetrahydrofolate)。
[0146]
在一些情况下，对血浆进行叶酸测试。在这样的情况下，正常范围为约2ng/ml至约
10ng/ml或约2.7ng/ml至约17ng/ml。在一些情况下，对rbc进行叶酸测试。在这样的情况下，正常范围为约140ng/ml至约960ng/ml。在一些情形中，如果对血浆进行所述测试，则降低的或低的叶酸水平为小于约2.7ng/ml或小于约2ng/ml。在另外的情形中，如果对rbc进行所述测试，则降低的或低的叶酸水平为小于约140ng/ml。
[0147]
维生素b12测试测量血液中维生素b12的量。维生素b12也称为钴胺素，是一种水溶性维生素，并且如本文所用是指一组称为钴胺素的含钴维生素化合物：其包括氰钴胺素、羟钴胺素以及人体中b
12
的两种天然存在的辅因子形式：5'-脱氧腺苷钴胺素(腺苷钴胺素-adob12，甲基丙二酰基辅酶a变位酶(mut)的辅因子)和甲基钴胺素(meb
12
，5-甲基四氢叶酸-同型半胱氨酸甲基转移酶(mtr)的辅因子)。在一些情况下，正常的维生素b12范围为约200至约900ng/ml。在一些情形中，降低的或低的维生素b12水平为小于约200ng/ml。
[0148]
肝脏功能检测组套测量血液中以下的水平：总蛋白、白蛋白、胆红素以及肝脏酶(如碱性磷酸酶(alp)、丙氨酸转氨酶(alt)和天冬氨酸转氨酶(ast))。在一些情形中，总蛋白的正常范围为约6g/dl至约8.5g/dl或约6.3g/dl至约7.9g/dl。在一些情形中，白蛋白的正常范围为约3.6g/dl至约4.8g/dl或约3.5g/dl至约5g/dl。在一些情形中，胆红素(例如，总胆红素)的正常范围为约0.1mg/dl至约1.2mg/dl。在一些情形中，alp的正常范围为约25iu/l至约160iu/l或约40iu/l至约129iu/l。在一些情形中，alt的正常范围为约0iu/l至约55iu/l或约7iu/l至约55iu/l。在一些情形中，ast的正常范围为约0iu/l至约40iu/l或约8iu/l至约48iu/l。
[0149]
在一些情形中，包括网织红细胞计数、叶酸测试、维生素b12和肝脏功能检测组套的测试组套在本文中称为级联4(还参见表1和图1b)。
[0150]
在一些实施方案中，本文公开一种用于确定贫血的病因的自动化方法，其包括：(a)在来自患有贫血的个体的血液样品中评估所述样品的平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)并比较所述样品中的mchc水平与mchc的限定标准；(b-i)如果(a)中所述样品中的mchc水平与mchc的限定标准相比有所升高，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数；(c)如果(b-i)中所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数相比是正常的或有所升高，则推荐溶血性贫血病症的遗传测试；(b-ii)如果(a)中所述样品中的mchc水平与mchc的限定标准相比没有升高或者如果(b-i)中所述样品的网织红细胞计数与所述限定标准网织红细胞计数相比较低，则评估所述样品中的血红蛋白水平并比较所述样品中的血红蛋白水平与血红蛋白的限定截断值；(d-i)如果(b-ii)中所述样品中的血红蛋白水平不低于血红蛋白的限定截断值，则不推荐进一步测试；(d-ii)如果(b-ii)中所述样品中的血红蛋白水平低于血红蛋白的限定截断值，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数，并且评估平均红细胞体积(mcv)并比较所述样品的mcv与mcv的限定标准；(e-i)如果(d-ii)中所述样品中的mcv与mcv的限定标准相比较低，则评估所述样品中的铁蛋白水平并比较所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值；(f-i)如果(e-i)中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较低，则表明所
述个体缺铁或推荐α-珠蛋白生成障碍性贫血血红蛋白病的进一步测试；(f-ii)如果(e-i)中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比是正常的或较高，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数并进行血红蛋白病评价；(g-i)如果(f-ii)中的所述网织红细胞计数没有升高并且所述血红蛋白病评价是正常的，则表明所述个体患有慢性病性贫血；(g-ii)如果(f-ii)中的所述网织红细胞计数有所升高并且所述血红蛋白病评价是正常的，则表明所述个体患有溶血性贫血；以及(g-iii)如果(f-ii)中的所述网织红细胞计数是正常的或有所升高并且所述血红蛋白病评价是异常的，则表明所述个体患有血红蛋白病性贫血；(e-ii)如果(d-ii)中所述样品中的mcv与mcv的限定标准相比升高至少10％，则评估所述样品中的b12和/或叶酸水平并比较所述b12和/或叶酸水平与b12和/或叶酸的限定截断值；(h-i)如果(e-ii)中所述样品中的b12和/或叶酸水平低于b12和/或叶酸的限定截断值，则评估所述样品的甲基丙二酸含量以确认或排除b12和/或叶酸缺乏；(h-ii)如果(e-ii)中所述样品中的b12和/或叶酸水平高于b12和/或叶酸的限定截断值，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数；(i-i)如果(h-ii)中所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数相比是正常的或有所升高，则推荐溶血性贫血病症的遗传测试；(i-ii)如果(h-ii)中所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数相比较低，则评估所述样品中肝功能的一种或多种标记并比较所述样品中肝功能的一种或多种标记与肝功能的所述一种或多种标记的限定范围；(j-i)如果(i-ii)中肝功能的所述一种或多种标记在肝功能的所述一种或多种标记的限定范围内，则建议针对血液学疾病评估所述个体；以及(j-ii)如果(i-ii)中肝功能的所述一种或多种标记在肝功能的所述一种或多种标记的限定范围内，则建议针对继发于酒精性或非酒精性肝病的慢性病评估所述个体。(e-iii)如果(d-ii)中所述样品中的mcv与mcv的限定标准相比是正常的，则评估所述样品中的铁蛋白水平并比较所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值；(k-i)如果(e-iii)中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较低，则表明所述个体缺铁(其可能由急性期或慢性期反应引起)并推荐铁缺乏的进一步评价；(k-ii)如果(e-iii)中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较高，则表明所述个体正在经历急性期或慢性期反应并推荐进一步临床评价；(k-iii)如果(e-iii)中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比是正常的，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数，并且评估所述样品中的c反应蛋白(crp)水平并比较所述样品中的crp水平与crp的限定截断值；(l-i)如果(k-iii)中的所述网织红细胞计数和crp是正常的，则推荐对慢性病或二形性贫血的进一步评价；
(l-ii)如果(k-iii)中的所述网织红细胞计数有所增加并且(l-iii)中的crp是正常的，则推荐对溶血性贫血或胃肠出血的进一步评价；(l-iii)如果(k-iii)中的所述网织红细胞计数是低的或正常的并且(l-iii)中的所述crp有所增加，则进行完整代谢检测组套(cmp)，并且如果所述cmp是异常的，则表明所述个体患有慢性病性贫血。
[0151]
在一些实施方案中，针对其推荐遗传测试的溶血性贫血病症是遗传性干瘪红细胞增多症(hx)、镰状细胞贫血和/或遗传性球形红细胞增多症。在一些实施方案中，血红蛋白的限定截断值对于成年男性为约13.2mg/l，并且对于成年女性为约11.7mg/l。在一些实施方案中，所述血红蛋白病评价包括评估血红蛋白a、血红蛋白f、总血红蛋白、血红蛋白a2(quant)、血红蛋白s、血红蛋白c、血红蛋白e和任何血红蛋白变体。在一些实施方案中，所述血红蛋白病评价还包括红细胞计数、血细胞比容、评估平均红细胞体积(mcv)、评估平均红细胞血红蛋白(mch)以及红细胞分布宽度(rdw)。在一些实施方案中，所述血液学疾病是脊髓发育不良或血液学恶性肿瘤。在一些实施方案中，仅从所述个体获得单一血液样品。在一些实施方案中，所述方法在72小时或更短时间内完成。在一些实施方案中，所述个体并未处于针对铁缺乏的治疗中。在一些实施方案中，所述个体没有红细胞障碍的家族史。在一些实施方案中，所述血液样品是由初级护理医师获得或在初级护理医师的指导下获得。
[0152]
在一些实施方案中，本文还公开一种确定小细胞性贫血的潜在病因的自动化方法，其包括：(a)确定来自患有贫血的个体的血液样品中铁蛋白的量并且平均红细胞体积(mcv)低于约80fl或约79fl的限定截断值；(i)如果中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较低，则表明所述个体缺铁或推荐α-珠蛋白生成障碍性贫血血红蛋白病的进一步测试；(ii)如果中的所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比是正常的或较高，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数并进行血红蛋白病评价；(a)如果(ii)中的所述网织红细胞计数没有升高并且所述血红蛋白病评价是正常的，则表明所述个体患有慢性病性贫血；(b)如果(ii)中的所述网织红细胞计数有所升高并且所述血红蛋白病评价是正常的，则表明所述个体患有溶血性贫血；以及(c)如果(ii)中的所述网织红细胞计数是正常的或有所升高并且所述血红蛋白病评价是异常的，则表明所述个体患有血红蛋白病性贫血。
[0153]
在一些实施方案中，所述个体具有低血红蛋白和正常的平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)。在一些实施方案中，所述血红蛋白病评价包括评估血红蛋白a、血红蛋白f、总血红蛋白、血红蛋白a2(quant)、血红蛋白s、血红蛋白c、血红蛋白e和任何血红蛋白变体。在一些实施方案中，所述血红蛋白病评价还包括红细胞计数、血细胞比容、评估平均红细胞体积(mcv)、评估平均红细胞血红蛋白(mch)以及红细胞分布宽度(rdw)。在一些实施方案中，仅从所述个体获得单一血液样品。在一些实施方案中，所述方法在72小时或更短时间内完成。
[0154]
在一些实施方案中，本文还公开一种确定正常细胞性贫血的潜在病因的自动化方法，其包括：
(a)确定来自患有贫血的个体的血液样品中铁蛋白的量并且平均红细胞体积(mcv)在约80fl至约100fl、约80fl至约98fl或约80fl至约96fl的范围内；(i)如果所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较低，则表明所述个体缺铁并推荐铁缺乏的进一步评价；(ii)如果所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比较高，则表明所述个体正在经历急性期或慢性期反应并推荐进一步临床评价；(iii)如果所述铁蛋白水平与铁蛋白的限定截断值相比是正常的，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数，并且评估所述样品中的c反应蛋白(crp)水平并比较所述样品中的crp水平与crp的限定截断值；(a)如果(iii)中的所述网织红细胞计数和crp是正常的，则推荐对慢性病或二形性贫血的进一步评价；(b)如果(iii)中的所述网织红细胞计数有所增加并且(l-iii)中的crp是正常的，则推荐对溶血性贫血或胃肠出血的进一步评价；(c)如果(iii)中的所述网织红细胞计数是低的或正常的并且(l-iii)中的所述crp有所增加，则进行完整代谢检测组套(cmp)，并且如果所述cmp是异常的，则表明所述个体患有慢性病性贫血。
[0155]
在一些实施方案中，所述个体具有低血红蛋白和正常的平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)。在一些实施方案中，仅从所述个体获得单一血液样品。在一些实施方案中，所述方法在72小时或更短时间内完成。
[0156]
在一些实施方案中，本文另外公开一种确定大细胞性贫血的潜在病因的自动化方法，其包括：(a)确定来自患有贫血的个体的血液样品中b12和/或叶酸的量并且平均红细胞体积(mcv)比约96fl、约97fl、约98fl、约99fl或约100fl的限定截断值大至少10％；(i)如果中所述样品中的b12和/或叶酸水平低于b12和/或叶酸的限定截断值，则评估所述样品的甲基丙二酸含量以确认或排除b12和/或叶酸缺乏；(ii)如果中所述样品中的b12和/或叶酸水平高于b12和/或叶酸的限定截断值，则评估所述样品的网织红细胞计数并比较所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数；(a)如果(ii)中所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数相比是正常的或有所升高，则推荐溶血性贫血病症的遗传测试；(b)如果(ii)中所述样品的网织红细胞计数与限定标准网织红细胞计数相比较低，则评估所述样品中肝功能的一种或多种标记并比较所述样品中肝功能的一种或多种标记与肝功能的所述一种或多种标记的限定范围；(i)如果(b)中肝功能的所述一种或多种标记在肝功能的所述一种或多种标记的限定范围内，则建议针对血液学疾病评估所述个体；以及(ii)如果(b)中肝功能的所述一种或多种标记在肝功能的所述一种或多种标记的限定范围内，则建议针对继发于酒精性或非酒精性肝病的慢性病评估所述个体。
[0157]
在一些实施方案中，所述个体具有低血红蛋白和正常的平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)。在一些实施方案中，针对其推荐遗传测试的溶血性贫血病症是遗传性干瘪红细胞
增多症(hx)、镰状细胞贫血和/或遗传性球形红细胞增多症。在一些实施方案中，仅从所述个体获得单一血液样品。
[0158]
此外，在一些实施方案中，本文公开用于确定贫血的潜在病因的自动化方法，其包括：通过处理模块从获自怀疑患有贫血的个体的血液样品确定血红蛋白水平、平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)和平均红细胞体积(mcv)；比较所述血红蛋白水平、mchc水平和mcv值与血红蛋白水平、mchc和mcv的限定标准；以及(i)如果所述mchc水平与mchc的限定标准相比有所升高，则通过相同的处理模块或通过另外的处理模块评估网织红细胞计数；或者(ii)如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值低于mcv的限定标准，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准，则通过相同的处理模块和/或至少另外的处理模块评估网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价；或者(iii)如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值与mcv的限定标准相比是正常的，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准，则通过相同的处理模块和/或至少另外的处理模块评估网织红细胞计数、铁蛋白水平、c反应蛋白(crp)和综合代谢检测组套(cmp)；或者(iv)如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，并且所述mcv值与mcv的限定标准相比有所升高至少约10％，则通过相同的处理模块和/或至少另外的处理模块评估网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和肝脏功能检测组套。
[0159]
在一些实施方案中，所述方法还包括比较步骤i)的所述网织红细胞计数与限定标准，其中升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血或胃肠出血。
[0160]
在一些实施方案中，所述方法还包括比较步骤ii)的所述铁蛋白水平与限定标准，其中降低的铁蛋白水平指示铁缺乏。
[0161]
在一些实施方案中，所述方法还包括比较步骤ii)的所述网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价与其相应限定标准，其中：a)正常或升高的铁蛋白水平、正常的血红蛋白病评价和正常的网织红细胞计数指示慢性病性贫血；b)正常或升高的铁蛋白水平、正常的血红蛋白病评价和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血；或者c)正常或升高的铁蛋白水平、异常的血红蛋白病评价和正常或升高的网织红细胞计数指示血红蛋白病性贫血。
[0162]
在一些实施方案中，所述方法还包括比较步骤iii)的所述铁蛋白水平与限定标准，其中降低的铁蛋白水平指示铁缺乏，任选地早期铁缺乏。
[0163]
在一些实施方案中，所述方法还包括比较步骤iii)的所述铁蛋白水平与限定标准，其中升高的铁蛋白水平指示急性期反应。
[0164]
在一些实施方案中，所述方法还包括比较步骤iii)的所述铁蛋白水平、crp、cmp和所述网织红细胞计数与其相应限定标准，其中：a)正常的铁蛋白水平和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血或胃肠出血；b)正常的铁蛋白水平、低的或正常的网织红细胞计数、升高的crp水平以及异常或正常的cmp指示慢性病性贫血(acd)；或者c)正常的铁蛋白水平、正常的网织红细胞计数和正常的crp水平指示慢性病或二形性贫血。
[0165]
在一些实施方案中，所述方法还包括比较步骤iv)的叶酸和维生素b12与其相应限定标准，其中低叶酸或维生素b12水平指示叶酸或维生素b12缺乏。在一些情况下，进一步进行甲基丙二酸测试以确认维生素b12缺乏。
[0166]
在一些实施方案中，所述方法还包括比较步骤iv)的所述网织红细胞计数、叶酸和维生素b12与其相应限定标准，其中低叶酸或维生素b12水平和升高的网织红细胞计数指示
溶血性贫血。
[0167]
在一些实施方案中，所述方法还包括比较步骤iv)的所述网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和所述肝脏功能检测组套与其相应限定标准，其中：a)低叶酸或维生素b12水平、升高的网织红细胞计数和正常的肝功能指示血液学疾病；或者b)低叶酸或维生素b12水平、升高的网织红细胞计数和异常的肝功能指示慢性病性贫血，任选地继发于肝病的慢性病性贫血，进一步任选地与酒精相关的慢性病性贫血。
[0168]
在一些实施方案中，所述溶血性贫血包括遗传性溶血性贫血或获得性溶血性贫血。
[0169]
在一些实施方案中，所述遗传性溶血性贫血包括镰状细胞贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、遗传性干瘪红细胞增多症、遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症(卵圆形红细胞增多症)、葡糖-6-磷酸脱氢酶(g6pd)缺乏和丙酮酸激酶缺乏。
[0170]
溶血性贫血的已知病因包括但不限于遗传性病症，如镰状细胞贫血和珠蛋白生成障碍性贫血；压力源，如感染、药物、蛇或蜘蛛毒液或者某些食物；来自晚期肝病或肾病的毒素；免疫系统的不当攻击；血管移植物、人工心脏瓣膜、肿瘤、重度烧伤、暴露于某些化学品、重度高血压或凝血障碍；以及在个别情况下，脾肿大。因此，在一些实施方案中，所述获得性溶血性贫血包括免疫性溶血性贫血、机械性溶血性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、病原体诱导的获得性溶血性贫血和化学品诱导的获得性溶血性贫血。
[0171]
在一些实施方案中，所述免疫性溶血性贫血包括自身免疫性溶血性贫血(aiha)、同种免疫性溶血性贫血和药物诱导的溶血性贫血。
[0172]
在一些实施方案中，所述病原体诱导的获得性溶血性贫血包括损伤红细胞的一种或多种病原体，任选地包括来自疟原虫属的原生动物或来自疏螺旋体属的细菌。在一些情况下，疟原虫属包括恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫和间日疟原虫。在一些情况下，疏螺旋体属包含伯氏疏螺旋体、梅氏疏螺旋体、包柔氏疏螺旋体和嘎氏疏螺旋体。
[0173]
在一些实施方案中，所述化学品诱导的获得性溶血性贫血包括损伤红细胞的一种或多种化学品，任选地包括毒性化学品或毒液。
[0174]
在一些实施方案中，所述血液学疾病包括脊髓发育不良。
[0175]
在一些情况下，所述血红蛋白病评价检测血红蛋白变体和/或珠蛋白生成障碍性贫血的存在。
[0176]
在一些情况下，所述血红蛋白变体包括血红蛋白a、血红蛋白a2、血红蛋白f、血红蛋白s、血红蛋白c或血红蛋白e。
[0177]
在一些情况下，所述血红蛋白病评价不检测α-珠蛋白生成障碍性贫血的存在。
[0178]
在一些情况下，所述方法不包括血液涂片测试。
[0179]
在一些情况下，所述方法不检测和/或评估红细胞分布宽度(rwd)。
[0180]
在一些情况下，所述方法包括进行全血细胞计数(cbc)测试以检测所述血红蛋白水平、mchc和mcv。
[0181]
在一些情况下，所述方法在约72小时或更短时间内完成。
[0182]
在一些情况下，所述个体并未处于针对铁缺乏的治疗中。
[0183]
在一些情况下，从所述个体获得单一血液样品。
[0184]
在一些情况下，所述比较步骤通过处理器来进行。
[0185]
在一些实施方案中，本文所述的方法提供诊断贫血的潜在病因的改进的特异性。在一些情况下，与标准方法(例如，标准临床方法)相比，所述改进的特异性为2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍或更高改进。
[0186]
在一些实施方案中，本文所述的方法还提供诊断贫血的潜在病因的改进的灵敏度。在一些情况下，与标准方法(例如，标准临床方法)相比，所述改进的灵敏度为2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍或更高改进。用于确定贫血的存在和潜在病因的系统和样品
[0187]
本文在某些实施方案中公开一种用于自动化处理血液样品以确定贫血的潜在病因的系统，其包括：存储器；显示器；以及与所述存储器耦合的用可执行指令编程的至少一个处理器，所述指令包括：(a)从获自怀疑患有贫血的个体的血液样品确定血红蛋白水平、平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)和平均红细胞体积(mcv)；(b)比较所述血红蛋白水平、mchc水平和mcv值与血红蛋白水平、mchc和mcv的限定标准；以及(i)如果所述mchc水平与mchc的限定标准相比有所升高，则评估网织红细胞计数；或者(ii)如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值低于mcv的限定标准，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准，则评估网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价；或者(iii)如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值与mcv的限定标准相比是正常的，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准，则评估网织红细胞计数、铁蛋白水平、c反应蛋白(crp)和综合代谢检测组套(cmp)；或者(iv)如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，并且所述mcv值与mcv的限定标准相比有所升高至少约10％，则评估网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和肝脏功能检测组套。
[0188]
在一些实施方案中，所述指令还包括比较步骤i)的所述网织红细胞计数与限定标准，其中升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血或胃肠出血。
[0189]
在一些实施方案中，所述指令还包括比较步骤ii)的所述铁蛋白水平与限定标准，其中降低的铁蛋白水平指示铁缺乏。
[0190]
在一些实施方案中，所述指令还包括比较步骤ii)的所述网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价与其相应限定标准，其中：a)正常或升高的铁蛋白水平、正常的血红蛋白病评价和正常的网织红细胞计数指示慢性病性贫血；b)正常或升高的铁蛋白水平、正常的血红蛋白病评价和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血；或者c)正常或升高的铁蛋白水平、异常的血红蛋白病评价和正常或升高的网织红细胞计数指示血红蛋白病性贫血。
[0191]
在一些实施方案中，所述指令还包括比较步骤iii)的所述铁蛋白水平与限定标准，其中降低的铁蛋白水平指示铁缺乏，任选地早期铁缺乏。
[0192]
在一些实施方案中，所述指令还包括比较步骤iii)的所述铁蛋白水平与限定标准，其中升高的铁蛋白水平指示急性期反应。
[0193]
在一些实施方案中，所述指令还包括比较步骤iii)的所述铁蛋白水平、crp、cmp和所述网织红细胞计数与其相应限定标准，其中：a)正常的铁蛋白水平和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血或胃肠出血；b)正常的铁蛋白水平、低的或正常的网织红细胞计数、升高的crp水平以及异常或正常的cmp指示慢性病性贫血(acd)；或者c)正常的铁蛋白水平、正常的网织红细胞计数和正常的crp水平指示慢性病或二形性贫血。
[0194]
在一些实施方案中，所述指令还包括比较步骤iv)的叶酸和维生素b12与其相应限
定标准，其中低叶酸或维生素b12水平指示叶酸或维生素b12缺乏。
[0195]
在一些实施方案中，所述指令还包括比较步骤iv)的所述网织红细胞计数、叶酸和维生素b12与其相应限定标准，其中低叶酸或维生素b12水平和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血。
[0196]
在一些实施方案中，所述指令还包括比较步骤iv)的所述网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和所述肝脏功能检测组套与其相应限定标准，其中：a)低叶酸或维生素b12水平、升高的网织红细胞计数和正常的肝功能指示血液学疾病；或者b)低叶酸或维生素b12水平、升高的网织红细胞计数和异常的肝功能指示慢性病性贫血，任选地继发于肝病的慢性病性贫血，进一步任选地与酒精相关的慢性病性贫血。
[0197]
在一些实施方案中，所述指令还包括如果叶酸或维生素b12的水平低但所述网织红细胞计数是正常的，则进行甲基丙二酸测试。
[0198]
在一些情况下，使用保存血液的一种或多种组分的采集方法从个体获得血液样品(例如，全血样品或外周血样品)。在一些情形中，在从采集时间起72小时、48小时、24小时、12小时、6小时、4小时、2小时、1小时、45分钟、30分钟或更短时间内进行一次或多次测量。在一些情况下，通过离心、溶胞(例如，涡旋)、匀浆化、冻融法和/或过滤进一步处理血液样品，之后利用一种或多种上述方法进行随后的测试。
[0199]
在测量cbc分析中包括的组分时，hgb、mcv和红细胞可以直接确定，而hct和mchc可以基于间接测量来计算。升高的mchc可能是细胞失水导致脱水的结果。
[0200]
在一些实施方案中，利用血液学分析器进行本文所述的一种或多种方法和测试。在一些情况下，利用血液学分析器来进行cbc测量、网织红细胞计数测试和/或肝脏功能检测组套测试。示例性血液学分析器包括但不限于手动、半自动化或自动化血液学分析器，包括但不限于例如以下文献中所述的那些：美国专利号5,017,497、5,266,269、5,378,633、5,631,165、5,812,419、6,228,652、6,524,858、6,320,656、7,324,194和7,981,681，以及公开的美国专利申请us20080153170、us20080158561、us20080268494、us20110178716、20110077871和20110070606。多种型号的血液学分析器可从市场购得，例如，购自abbott laboratories(abbott park，伊利诺伊州，美国)(例如，cell-dyn sapphire)；以及siemens healthcare diagnostics(柏油村，纽约州，美国)(例如，advia 120或2120自动化血液分析仪)。其他制造商包括beckman coulter,inc.(富勒顿，加利福尼亚州，美国)；toa medical electronics co.(神户，日本)；constitution medical(波士顿，马萨诸塞州，美国)；以及horiba abx inc.(尔湾，加利福尼亚州，美国)。
[0201]
网织红细胞计数还可以通过流式细胞仪(例如，荧光激活的细胞分选或facs)、自动化细胞计数器或通过血细胞计数器来进行。示例性自动化细胞计数器基于图像的细胞计数器、基于荧光的细胞计数器和库尔特计数器。示例性自动化细胞计数器型号可从市场购得，例如，购自thermofisher scientific(沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)(例如，invitrogen countess ii自动化细胞计数器、invitrogen countess ii fl自动化细胞计数器)；olympus life science solutions(森特瓦利，宾夕法尼亚州，美国)(例如，细胞计数器r1型)；以及bio-rad(赫拉克勒斯，加利福尼亚州，美国)(例如，tc20细胞计数器)。血细胞计数器是手动细胞计数器，并且示例性型号包括但不限于来自thermofisher scientific(沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)的计数器(例如，hausser scientific系列的计数室和血细胞计数
器)。
[0202]
在一些实施方案中，使用血气分析仪(bga)来确定不限于血气(如ph(酸度)、二氧化碳(测量为pco2—二氧化碳分压)和/或氧(测量为po2—氧分压))；电解质(如钠(na

)、钾(k

)、钙(ca
2
)和/或氯化物(ci))；代谢物(如葡萄糖、乳酸盐、血尿素氮(“bun”)和/或肌酐)；和/或co-血氧浓度测量(如总血红蛋白(thb)、还原血红蛋白/去氧血红蛋白(hh b)氧合血红蛋白(o2hb)、饱和氧(so2)、碳氧血红蛋白(coh b)、高铁血红蛋白(methb)、胎儿血红蛋白(hbf)和/或胆红素)。在一些情况下，在血气分析仪上进行综合代谢检测组套和/或肝脏功能检测组套。示例性血气分析仪包括但不限于来自以下的型号：radiometer america inc.(布雷亚，加利福尼亚州，美国)(例如，abl90 flex)；siemens healthcare diagnostics(柏油村，纽约州，美国)(例如，rapidpoint 500血气系统)；nova biomedical(沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)(例如，stat profile prime)；instrumentation laboratory(圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)(例如，具有intelligent quality management(iqm)的gem premier 4000)；roche diagnostics corp.(巴塞尔，瑞士)(例如，cobas b 221)；以及alere inc.(沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)(例如，enterprise point of care(epoc)血液分析系统)。
[0203]
在一些实施方案中，使用酶测定来检测和/或定量来自本文所述的测试或测试组套的一种或多种分析物。在一些情况下，所述测试或测试组套包括综合代谢检测组套(例如，葡萄糖和/或乳糖)、肝脏功能检测组套、铁蛋白、叶酸、维生素b12、反应蛋白或血红蛋白病评价测试。在一种情况下，经由光吸收的变化对酶测定的产物进行定量。在这样的情形中，基于光吸收的变化的酶测定被称为比色测定或发光测定。在另一种情况下，使用荧光测定来确定来自本文所述的测试或测试组套的分析物的存在和/或浓度。
[0204]
在一些实施方案中，酶测定是用于检测和/或定量本文所述的测试或测试组套中的一种或多种分析物的酶免疫测定(eia)(或酶联免疫吸附测定)。在这样的情况下，所述测试或测试组套包括综合代谢检测组套、肝脏功能检测组套、c反应蛋白或血红蛋白病评价。
[0205]
检测c反应蛋白(crp)的方法可以包括荧光免疫色谱、胶体金法、酶联免疫吸附和脱脂载脂蛋白。crp检测测定可以进一步分为包括定性、半定量和定量分析的crp测定；高灵敏度crp(hscrp)测定以及心脏crp(ccrp)测定。在一些情况下，用于crp检测的方法如pct申请公开号wo2018/29885a1中所述。
[0206]
用于确定铁蛋白水平的方法可以包括酶免疫测定。在一些情形中，酶免疫测定包括固相酶免疫测定、化学发光酶免疫测定或放射免疫测定。
[0207]
用于确定维生素b12水平的方法可以包括测量样品中的维生素b12水平的放射测定；测量样品中的全反钴胺素(维生素b12的活性组分)浓度(参见例如，clarke等人,clin.chem.,53:963-970,2007)；检查抗体的抗体测试；测量甲基丙二酸的存在的甲基丙二酸测试；或者希林试验(schilling test)，其可以包括个体首先摄取少量放射性或标记的维生素b-12，之后检查血液以确定身体是否已经吸收放射性标记的维生素b-12。
[0208]
用于血红蛋白病评价的方法可以包括色谱法，如液相色谱(lc)方法、气相色谱(gc)方法以及毛细管电泳(ce)方法。在一些情况下，lc分类为正相色谱、反相色谱、尺寸排阻色谱、离子交换色谱、亲和色谱、置换色谱、分配色谱、快速色谱、手性色谱和水相正相色谱。
[0209]
在一些实施方案中，lc方法是高效液相色谱(hplc)方法。在一些情形中，hplc方法进一步归类为正相色谱、反相色谱、尺寸排阻色谱、离子交换色谱、亲和色谱、置换色谱、分配色谱、手性色谱和水相正相色谱。示例性hplc方法包括但不限于亲水相互作用液相色谱(hilic)、静电排斥-亲水相互作用液相色谱(erlic)和反相液相色谱(rplc)。
[0210]
在一些实施方案中，gc与质谱耦合为gc-ms方法。示例性gc-ms方法包括但不限于二维气相色谱飞行时间质谱(gc*gc-tofms)、气相色谱飞行时间质谱(gc-qtof-ms)和气相色谱-串联质谱(gc-ms/ms)。
[0211]
在一些实施方案中，ce与质谱耦合为ce-ms方法。示例性ce-ms方法包括但不限于毛细管电泳-负离子电喷雾电离-质谱(ce-esi-ms)、毛细管电泳-负离子电喷雾电离-四极飞行时间-质谱(ce-esi-qtof-ms)和毛细管电泳-四极飞行时间-质谱(ce-qtof-ms)。
[0212]
在一些情况下，用于血红蛋白病评价的方法包括等电聚焦(ief)，其在凝胶介质中分离蛋白质，所述凝胶介质具有由两性电解质(两性离子)组成的ph梯度；hplc，如阳离子交换hplc；醋酸纤维素电泳(或碱性电泳)；柠檬酸盐琼脂电泳(其在酸性环境中进行)；碱性珠蛋白链电泳(其中可以在2-巯基乙醇和尿素的存在下将血红蛋白分子分离为其相应的珠蛋白链组分和血红素基团)；或者毛细管区带电泳。
[0213]
在一些实施方案中，用于血红蛋白病评价的方法还包括分子方法，如例如，基于聚合酶链式反应(pcr)的测定、限制性片段长度多态性(rflp)(例如，利用对应于基因的正常等位基因或突变等位基因的限制性内切酶的识别序列来确定在β-珠蛋白b(hbb)基因内是否存在突变)、使用实时pcr的等位基因分型(ad)或者dna测序(例如，桑格测序(sanger sequencing))。
[0214]
在一些实施方案中，还利用另外的方法来检测和/或定量本文所述的测试或测试组套中的一种或多种分析物。在一些情况下，所述另外的方法包括核磁共振(nmr)方法。在一些实施方案中，nmr方法包括一维(1d)nmr方法、二维(2d)nmr方法、固态nmr方法和nmr色谱。示例性1d nmr方法包括1氢、
13
碳、
15
氮、
17
氧、
19
氟、3磷、
39
钾、
23
钠、
33
硫、
87
锶、
27
铝、
43
钙、
35
氯、
37
氯、
63
铜、
65
铜、
57
铁、
25
镁、
199
汞或
67
锌nmr方法、无畸变极化转移增强(dept)方法、连接质子测试(apt)方法以及1d-难以置信的自然丰度双量子跃迁实验(inadequate)方法。示例性2d nmr方法包括相关光谱(cosy)、总相关光谱(tocsy)、2d-inadequate、2d-充分双量子转移实验(adequate)、核欧沃豪斯效应谱(nosey)、旋转坐标系noe光谱(roesy)、异形核多量子相关光谱(hmqc)、异形核单量子相干光谱(hsqc)、短程耦合和长程耦合方法。示例性固态nmr方法包括固态
13
碳nmr、高分辨率魔角旋转(hr-mas)和正交极化魔角旋转(cp-mas)nmr方法。示例性nmr色谱包括扩散排序谱(dosy)、dosy-tocsy和dosy-hsqc。
[0215]
在一些实施方案中，所述系统包含一个或多个计算装置，所述一个或多个计算装置整合为多重计算装置或成为多重计算装置的部分。在替代性实施方案中，所述系统包含单独的计算装置。
[0216]
在一些情况下，所述系统包含存储器、显示器和与所述存储器耦合的用可执行指令编程的至少一个处理器。在一些情况下，可执行指令或编程可以在物理存储器或传输介质中提供。计算机可读的存储介质的例子包括软盘、磁带、cd-rom、硬盘驱动器、rom或集成电路、磁光盘或计算机可读卡(如pcmcia卡等)，不论这些装置位于计算机的内部还是外部。可以将含有信息的文件“存储”在计算机可读介质上，其中“存储”意指记录信息，使得其是
日后通过计算机在本地网或远程网上可访问的和可检索的。在一些实施方案中，本文所述的方法是在每次运行样品时自动执行的。
[0217]
如本文所用，计算装置可以涵盖各种形式的数字计算机，包括例如，笔记本计算机、台式计算机、工作站、个人数字助理、服务器、刀片服务器、大型计算机和其他适当的计算机；以及各种形式的移动装置，包括例如个人数字助理、蜂窝电话、智能手机和其他类似的计算装置。
[0218]
在一些情况下，示例性计算装置包括处理器、存储器、存储装置、与存储器和高速扩展端口连接的高速用户界面以及与低速总线和存储装置连接的低速用户界面。每个部件可以使用各个总线互联，并且可以安装在共用主板上或视情况以其他方式安装。处理器可以处理用于在计算装置内执行的指令，包括储存在存储器中或存储装置上的指令，以在外部输入/输出装置(包括例如与高速用户界面耦合的显示器)上显示gui的图形信息。在其他实现方式中，可以视情况使用多个处理器和/或多个总线，以及多个存储器和多个存储器类型。此外，可以连接多个计算装置，每个装置提供必需操作的部分(例如，作为服务器库(bank)、刀片服务器组或多处理器系统)。
[0219]
存储器可以存储计算装置内的信息。在一种实现方式中，存储器是一个或多个易失性存储器单元。在另一种实现方式中，存储器是一个或多个非易失性存储器单元。存储器还可以是另一种形式的计算机可读介质，包括例如磁盘或光盘。
[0220]
存储装置可能能够提供用于计算装置的海量存储。在一种实现方式中，存储装置可以是或含有计算机可读介质，包括例如软盘装置、硬盘装置、光盘装置、或磁带装置、闪速存储器或其他类似的固态存储器装置，或者装置阵列(包括呈存储区域网或其他配置的装置)。计算机程序产品可以以信息载体有形地体现。计算机程序产品还可以含有在执行时进行一种或多种方法(包括例如本文所述的那些方法)的指令。信息载体是计算机可读或机器可读介质，包括例如存储器、存储装置、处理器上的存储器等。
[0221]
高速控制器可以管理计算装置的带宽密集型操作，而低速控制器管理较低的带宽密集型操作。这样的功能分配只是一个例子。在一种实现方式中，高速控制器与存储器、显示器(例如，经由图形处理器或加速器)以及与可以接受各种扩展卡(未显示)的高速扩展端口耦合。在所述实现方式中，低速控制器可以与存储装置和低速扩展端口耦合。可以包括各种通信端口(例如，usb、以太网、无线以太网)的低速扩展端口可以与一个或多个输入/输出装置耦合，所述输入/输出装置包括例如键盘、点击装置、扫描仪或联网装置(包括例如交换机或路由器，例如，经由网络适配器)。
[0222]
计算装置可以以多种不同的形式实现，如例如，作为标准服务器，或者可以在这样的服务器的组中多次实现。其还可以作为机架式服务器系统的部分来实现。另外或作为替代方案，其可以以个人计算机(包括例如笔记本计算机)实现。在一些例子中，来自计算装置的部件可以与例如移动装置中的其他部件组合。每个这样的装置可以含有一个或多个计算装置，并且整个系统可以由多个彼此通信的计算装置构成。
[0223]
显示器可以是例如tft lcd(薄膜晶体管液晶显示器)或oled(有机发光二极管)显示器，或者其他适当的显示技术。显示用户界面可以包括用于驱动显示器向用户呈现图形信息和其他信息的适当电路。控制用户界面可以从用户接受命令，并且转换所述命令以供提交给处理器。另外，外部用户界面可以与处理器通信，以使得计算装置能与其他装置近区
通信。外部用户界面可以在一些实现方式中提供例如有线通信，或者在其他实现方式中提供无线通信，并且还可以使用多个用户界面。
[0224]
在一些情况下，计算装置可以经由通信用户界面无线通信，所述通信用户界面在需要时可以包括数字信号处理电路。通信用户界面可以在各种模式或协议下提供通信，所述模式或协议尤其包括例如gsm语音呼叫、sms、ems或mms消息处理、cdma、tdma、pdc、wcdma、cdma2000或gprs。这样的通信可以例如经由射频收发器来进行。另外，可以进行短程通信，包括例如使用wifi或其他这样的收发器来进行。另外，gps(全球定位系统)接收器模块可以将另外的导航相关的和定位相关的无线数据提供至计算装置，所述数据可以视情况通过在所述计算装置上运行的应用来使用。
[0225]
在一些情形中，计算装置还可以使用音频编解码器进行有声通信，所述音频编解码器可以接收用户说出的信息并将其转换为可用数字信息。音频编解码器同样可以为用户生成可听声，包括例如经由扬声器(例如，在计算装置的手柄单元中)来生成。这样的声音可以包括来自语音电话呼叫的声音，可以包括记录的声音(例如，语音消息、音乐文件等)，并且还可以包括通过在计算装置上操作的应用生成的声音。
[0226]
本文所述的系统和方法的各种实现方式可以在以下中实现：数字电子电路、集成电路、特殊设计的asic(专用集成电路)、计算机硬件、固件、软件和/或其组合。这些不同的实现方式可以包括在一个或多个计算机程序中的实现方式，所述计算机程序在包括至少一个可编程处理器的可编程系统上是可执行的和/或可解释的，所述可编程处理器可以出于特殊或一般目的耦合以从存储系统、至少一个输入装置和至少一个输出装置接收数据和指令，以及将数据和指令发送至存储系统、至少一个输入装置和至少一个输出装置。
[0227]
这些计算机程序(也称为程序、软件、软件应用或代码)包括可编程处理器的机器指令，并且可以以高级过程语言和/或面向对象程序设计语言来实现，和/或以汇编/机器语言来实现。如本文所用，术语机器可读介质和计算机可读介质是指用于向可编程处理器提供机器指令和/或数据的计算机程序产品、设备和/或装置(例如，磁盘、光盘、存储器、可编程逻辑器件(pld))，包括接收机器指令的机器可读介质。
[0228]
为了提供与用户的交互，本文所述的系统和方法可以在如下计算机上实现，所述计算机具有用于向用户显示信息的显示装置(例如，crt(阴极射线管)或lcd(液晶显示器)监视器)以及用户可以通过其向计算机提供输入的键盘和点击装置(例如，鼠标或跟踪球)。也可以使用其他种类的装置提供与用户的交互；例如，提供给用户的反馈可以呈感觉反馈(例如，视觉反馈、听觉反馈或触觉反馈)的形式；并且来自用户的输入可以以某种形式来接收，所述形式包括听觉、言语或触觉输入。
[0229]
本文所述的系统和方法可以在如下计算系统中实现，所述计算系统包括后端部件(例如，作为数据服务器)，或者包括中间件部件(例如，应用服务器)，或者包括前端部件(例如，具有图形用户界面或网络浏览器的客户端计算机，用户可以通过其与本文所述的系统和技术的实现方式进行交互)，或者这样的后端、中间件或前端部件的组合。所述系统的部件可以通过数字数据通信的形式或介质(例如，通信网络)互连。通信网络的例子包括局域网(lan)、广域网(wan)和因特网。
[0230]
计算系统可以包括客户端和服务器。客户端和服务器通常彼此远离，并且通常经由通信网络进行交互。客户端与服务器的关系是由于在相应计算机上运行并且彼此具有客
户端-服务器关系的计算机程序而产生的。治疗方法
[0231]
在另外的实施方案中，本文公开治疗有需要的个体的贫血的潜在病因的方法。如本文所述的贫血通常是指如下病症，其中存在低血红蛋白、低血细胞比容、低红细胞压积或降低的红细胞载氧至组织的能力。在一些情况下，贫血病症包括但不限于溶血性贫血(包括但不限于珠蛋白生成障碍性贫血、遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症、遗传性干瘪红细胞增多症、葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏(g6pd)、丙酮酸激酶缺乏、免疫性溶血性贫血、同种免疫性溶血性贫血、药物诱导的溶血性贫血、机械性溶血性贫血和阵发性睡眠性血红蛋白尿)、慢性病性贫血(其中潜在病症可能是例如自身免疫性障碍(如，例如克罗恩病、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎)、包括癌症在内的肿瘤性障碍(如，例如淋巴瘤和霍奇金病)、长期感染(如，例如细菌、病毒和真菌感染)、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、霍奇金病、代谢综合征、糖尿病(例如，2型糖尿病)和慢性炎症的其他病因)、贫血、再生障碍性贫血(包括但不限于先天性再生不良性贫血、diamond-blackfan贫血和范科尼贫血)、缺铁性贫血(ida)、rbc大小异常性贫血(包括但不限于巨幼细胞贫血和小细胞性贫血)、维生素缺乏性贫血(包括但不限于恶性贫血)、rbc突变性贫血(包括但不限于珠蛋白生成障碍性贫血、铁粒幼细胞贫血和镰状细胞贫血)。
[0232]
贫血病症可以被分类为正常色素性，其通常被理解为是如下贫血病症：其中rbc中血红蛋白的浓度并非病理性的，但是rbc的数量不足。贫血病症可以被分类为正常细胞性，其通常被理解为是如下贫血病症：其中rbc的大小没有异常。正常细胞性、正常色素性贫血包括慢性病性贫血(acd)和溶血性贫血。
[0233]
与过早rbc破坏相关的贫血通常称为溶血性贫血。一些形式的溶血性贫血是遗传性的，并且其他形式是获得性的。
[0234]
溶血性贫血与包括但不限于以下的病症相关：自身免疫性障碍,感染(如，例如，肝炎)、细胞增殖障碍(如，例如，白血病和淋巴瘤)、某些药物治疗、镰状细胞贫血和wiskott-aldrich综合征。在一些情况下，将溶血性贫血分为遗传性溶血性贫血和获得性溶血性贫血。在一些情形中，所述遗传性溶血性贫血包括镰状细胞贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、遗传性干瘪红细胞增多症、遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症(卵圆形红细胞增多症)、葡糖-6-磷酸脱氢酶(g6pd)缺乏和丙酮酸激酶缺乏。在一些情形中，所述获得性溶血性贫血包括免疫性溶血性贫血、机械性溶血性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、病原体诱导的获得性溶血性贫血和化学品诱导的获得性溶血性贫血。另外的类型的免疫性溶血性贫血可以包括自身免疫性溶血性贫血(aiha)、同种免疫性溶血性贫血和药物诱导的溶血性贫血。病原体诱导的获得性溶血性贫血可以包括损伤红细胞的一种或多种病原体，任选地包括来自疟原虫属的原生动物(任选地包括恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫和间日疟原虫)或者来自疏螺旋体属的细菌(任选地包括伯氏疏螺旋体、梅氏疏螺旋体、包柔氏疏螺旋体和嘎氏疏螺旋体)。化学品诱导的获得性溶血性贫血可以包括损伤红细胞的一种或多种化学品，任选地包括毒性化学品或毒液(例如，蛇毒)。
[0235]
可以由于衰老而从循环去除rbc。不希望受限于理论，rbc经历年龄依赖性改变，所述改变可以包括代谢活性下降、进行性细胞形状转变、膜重塑、氧化性损伤、微囊泡形成以及表面去除标记的暴露。这些改变可能触发巨噬细胞的吞噬作用，其中rbc被破坏。人们认
为，蛋白酶钙蛋白酶在所述过程中可能被激活，其可能被细胞溶质钙的增加触发。升高的rbc破坏率可能导致贫血病症。
[0236]
慢性病性贫血(acd)也称为炎症性贫血和炎性贫血，其为与慢性潜在病症相关的贫血。潜在病症可能抑制骨髓中红细胞的产生，可能缩短红细胞的寿命，或者可能产生关于身体如何利用铁的问题。通常，acd的发展和呈现缓慢，症状轻微或无症状。
[0237]
炎症可能在acd的发病机制中起作用。不希望受限于理论，人们认为，许多慢性病中存在的炎性细胞因子既降低红细胞产生又增加衰老细胞的过早瓦解，从而导致贫血。因此，细胞因子和网状内皮系统的细胞影响铁稳态、红系祖细胞的产生、红细胞生成素的产生以及rbc的寿命，它们各自都可能促成贫血病症。此外，acd可能与体内异常铁稳态相关。可能观察到网状内皮系统的细胞内铁的摄取和保留增加。在患有acd的受试者中，铁蛋白水平可能升高。
[0238]
acd的潜在病症包括与溶血性贫血相关的那些，包括但不限于自身免疫性障碍(如，例如克罗恩病、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎)、包括癌症在内的肿瘤性障碍(如，例如实体瘤或血液学疾病、任选地淋巴瘤(如b细胞淋巴瘤或t细胞淋巴瘤)、霍奇金病或非霍奇金病)、长期感染(如，例如细菌、病毒和真菌感染)、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、代谢综合征、糖尿病(例如，2型糖尿病)以及慢性炎症的其他病因。
[0239]
在acd的潜在病症是肿瘤性障碍的情况下，红细胞发生可能受到肿瘤细胞浸润至骨髓中的影响。肿瘤细胞可能产生促炎性细胞因子和损伤红系祖细胞的自由基。出血发作、维生素缺乏、脾功能亢进、自身免疫性溶血、肾功能不全以及放射治疗和化学治疗干预也可能加重贫血。
[0240]
在潜在病症是感染的情况下，可以将acd分类为慢性感染性贫血(aci)。红细胞发生可能受到微生物浸润的影响，如在多种感染中所见，包括人类免疫缺陷病毒(hiv)感染、丙型肝炎和疟疾。
[0241]
伴有慢性肾病的贫血共有慢性病性贫血的一些特征。由于肾功能不全和积累毒素所致的红细胞生成素的产生减少可能有贡献。在患有末期肾病的患者中，慢性免疫激活可能由于透析膜对免疫细胞的接触激活和/或由于感染的频繁发作而发生。
[0242]
再生障碍性贫血与低rbc产生相关。
[0243]
缺铁性贫血与铁储备缺乏相关，使得红细胞发生不足。
[0244]
在一些情况下，与限定标准相比，血清铁蛋白水平有所升高，并且升高的铁蛋白水平预示在全面激活响应感染或创伤的免疫应答之前身体的急性期反应或应答。所述急性期反应或应答包括所选蛋白质(称为急性期蛋白质(app))的产生，其可能升高(称为阳性app)或减少(称为阴性app)。这些app的测量提供感染和/或创伤的病因和/或类型的另外的输入。在一些情形中，阳性app包括crp、α-1-胰凝乳蛋白酶抑制剂(act)、agp(也称为α1酸性糖蛋白)、血清淀粉样蛋白a(saa)、纤维蛋白原、触珠蛋白、铜蓝蛋白和铁蛋白。在一些情形中，阴性app包括转铁蛋白、白蛋白、甲状腺素视黄质运载蛋白和视黄醇结合蛋白(rbp)。在一些情况下，与限定标准相比，血清铁蛋白水平有所升高，并且升高的铁蛋白水平预示慢性期反应或应答。
[0245]
镰状细胞贫血可能由产生突变型镰刀状血红蛋白的突变引起。铁粒幼细胞贫血是一组障碍，其共同特征为骨髓中的线粒体铁积累、无效红细胞发生以及增加的组织铁水平。
[0246]
范科尼贫血是指一种与高频率的血液学异常和先天性异常相关的罕见遗传障碍。
[0247]
维生素缺乏性贫血是指由低于正常量的某些维生素引起的健康红细胞的缺乏。与维生素缺乏性贫血相关的维生素包括叶酸、维生素b-1或维生素c。
[0248]
小细胞性贫血的特征为小于正常的红细胞的产生。在一些情况下，小细胞性贫血由以下中的一种或多种引起：珠蛋白产物的缺乏(珠蛋白生成障碍性贫血)、血红蛋白的血红素基团的铁递送受限以及血红素基团合成中的缺陷。示例性小细胞性贫血包括但不限于缺铁性贫血(ida)、珠蛋白生成障碍性贫血性状(tt)和慢性病性贫血(acd)。
[0249]
正常细胞性贫血的特征为落在正常范围内的红细胞的产生，但具有正常或低mchc水平和/或降低水平的hb水平。示例性正常细胞性贫血包括但不限于营养性贫血(例如，ida、钴胺素和/或叶酸缺乏)、肾功能不全性贫血、溶血性贫血、acd、与原发性骨髓障碍(例如，骨髓发育不全，如特发性、pnh或范科尼综合征；纯红细胞再生障碍，如获得性、先天性或diamond-blackfan综合征；骨髓增生异常综合征；外部病因，如药物、毒素、辐射、病原体、免疫介导的或骨髓浸润)相关的贫血。
[0250]
大细胞性贫血的特征为大于rbc正常范围的红细胞的产生。示例性大细胞性贫血包括但不限于药物诱导的贫血(例如，羟基脲、齐多夫定、氨甲蝶呤)、营养缺乏(例如，维生素b12、叶酸和/或铜)、药物诱导的溶血性贫血、红细胞生成不良症、骨髓增生异常综合征、血液学障碍(例如，克隆血液学障碍或遗传性血液学障碍)、肝病、遗传性疾病(例如，唐氏综合征)或肺病(例如，慢性阻塞性肺病)。
[0251]
在一些实施方案中，针对溶血性贫血的治疗包括输血、血浆去除术、血液和/或骨髓干细胞移植、手术、治疗剂或其组合。在一些情形中，针对溶血性贫血的示例性治疗包括类固醇，如倍氯米松、倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼松或曲安西龙；利妥昔单抗；叶酸；硫唑嘌呤；环磷酰胺；麦考酚酯；环孢菌素；达那唑；阿仑珠单抗；西罗莫司；或脾切除术。
[0252]
在一些实施方案中，针对缺铁性贫血(ida)的治疗包括可溶性铁的施用(例如，铁补充剂)。示例性药物包括但不限于右旋糖酐铁、sumalate铁、多糖铁、延胡索酸铁、羰基铁、天冬氨酸甘氨酸亚铁、血红素铁多肽和双甘氨酸亚铁，它们可以与其他药物共施用，所述其他药物如雄激素、叶酸、维生素b12、维生素c、琥珀酸、烟酸、吡哆醇、核黄素、生物素、硫胺、甲酸钙、aminoxin、anadrol-50、chromagen forte、阿法依泊汀、epogen、fe c tab plus、feriva、ferivafa、ferocon、ferotrin、ferralet 90、ferrex28、ferrogels forte、folitab 500、fumatinic、hematogen forte、hemetab、integra plus、irospan 42/6、lenalidomide、maxaron forte、myferon 150forte、mykidz iron、novaferrum、oxymetholone、procrit、proferrin-forte、吡哆醇、repliva 21/7、revlimid或tricon。
[0253]
在一些实施方案中，针对血红蛋白病的治疗是支持性治疗而不是治愈性治疗。在一些情形中，利用干细胞移植来治疗几种形式的珠蛋白生成障碍性贫血。可以利用输血来治疗血红蛋白病，所述输血任选地与一种或多种药物组合，所述药物如镇痛药、抗生素、ace抑制剂和羟基脲。
[0254]
在一些实施方案中，针对慢性病性贫血(acd)的治疗包括用于潜在炎症的治疗的类固醇或非类固醇抗炎剂、用于潜在病原体感染的抗生素或癌症治疗。示例性类固醇包括倍氯米松、倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼
松或曲安西龙。示例性非类固醇抗炎剂(nsaid)包括阿司匹林、塞来昔布、双氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、萘丁美酮、萘普生、奥沙普秦、吡罗昔康、双水杨酯、舒林酸或托美汀。
[0255]
在一些情况下，抗生素类别包括青霉素、四环素、头孢菌素、喹诺酮、林可霉素、大环内酯、氨苯磺胺、糖肽、氨基糖苷和碳青霉烯。示例性抗生素包括但不限于阿莫西林、多西环素、头孢氨苄、环丙沙星、甲硝唑、阿奇霉素、磺胺甲噁唑和甲氧苄啶、阿莫西林和克拉维酸以及左氧氟沙星。
[0256]
在一些情况下，癌症疗法包括化学治疗剂、免疫治疗剂、靶向疗法、放射疗法或其组合。示例性治疗剂包括但不限于烷基化剂，如六甲蜜胺、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、洛莫司汀、美法仑、奥沙利铂、替莫唑胺或塞替派；抗代谢药，如5-氟尿嘧啶(5-fu)、6-巯嘌呤(6-mp)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、氨甲蝶呤或培美曲塞；蒽环类抗生素，如柔红霉素、多柔比星、表柔比星或伊达比星；拓扑异构酶i抑制剂，如托泊替康或伊立替康(cpt-11)；拓扑异构酶ii抑制剂，如依托泊苷(vp-16)、替尼泊苷或米托蒽醌；有丝分裂抑制剂，如多西他赛、雌莫司汀、伊沙匹隆、紫杉醇、长春碱、长春新碱或长春瑞滨；或者皮质类固醇，如泼尼松、甲泼尼龙或地塞米松。
[0257]
在一些实施方案中，本文公开一种治疗有需要的个体的贫血的潜在病因的方法，其包括：(a)从获自所述个体的血液样品评估血红蛋白水平、平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)和平均红细胞体积(mcv)；(b)比较所述血红蛋白水平、mchc水平和mcv值与血红蛋白水平、mchc和mcv的限定标准；(c)基于步骤b)，进行选自以下的一个或多个另外的测试：(i)网织红细胞计数，如果所述mchc水平与mchc的限定标准相比有所升高；(ii)网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价，如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值低于mcv的限定标准，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准；(iii)网织红细胞计数、铁蛋白水平、c反应蛋白(crp)和综合代谢检测组套(cmp)，如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，所述mcv值与mcv的限定标准相比是正常的，并且所述mchc水平是正常的或低于mchc的限定标准；或者(iv)网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和肝脏功能检测组套，如果所述血红蛋白水平低于血红蛋白水平的限定标准，并且所述mcv值与mcv的限定标准相比有所升高至少约10％；以及(d)基于步骤c)，将治疗施用至所述个体，从而治疗贫血的所述潜在病因。
[0258]
在一些情况下，步骤ci)还包括比较所述网织红细胞计数与限定标准，其中升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血。在一些情形中，需要随后的遗传测试以进一步评价溶血性贫血的潜在情形。
[0259]
在一些情况下，步骤cii)还包括比较所述铁蛋白水平与限定标准，其中降低的铁蛋白水平指示铁缺乏。
[0260]
在一些情况下，步骤cii)还包括比较所述网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价与其相应限定标准，其中：a)正常或升高的铁蛋白水平、正常的血红蛋白病评价和正常的网织红细胞计数指示慢性病性贫血；b)正常或升高的铁蛋白水平、正常的血红蛋白病评价和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血；或者c)正常或升高的铁蛋白水平、异常的血红蛋白病评价和正常或升高的网织红细胞计数指示血红蛋白病性贫血。
[0261]
在一些情况下，步骤ciii)还包括比较所述铁蛋白水平与限定标准，其中降低的铁
蛋白水平指示铁缺乏，任选地早期铁缺乏。
[0262]
在一些情况下，步骤ciii)还包括比较所述铁蛋白水平与限定标准，其中升高的铁蛋白水平指示急性期反应。
[0263]
在一些情况下，步骤ciii)还包括比较所述铁蛋白水平、crp、cmp和所述网织红细胞计数与其相应限定标准，其中：a)正常的铁蛋白水平和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血或胃肠出血；b)正常的铁蛋白水平、低的或正常的网织红细胞计数、升高的crp水平以及异常或正常的cmp指示慢性病性贫血(acd)；或者c)正常的铁蛋白水平、正常的网织红细胞计数和正常的crp水平指示慢性病或二形性贫血。
[0264]
在一些情况下，步骤civ)还包括比较叶酸和维生素b12与其相应限定标准，其中低叶酸或维生素b12水平指示叶酸或维生素b12缺乏。在一些情形中，进一步进行甲基丙二酸测试以确认维生素b12缺乏。
[0265]
在一些情况下，步骤civ)还包括比较所述网织红细胞计数、叶酸和维生素b12与其相应限定标准，其中低叶酸或维生素b12水平和升高的网织红细胞计数指示溶血性贫血。
[0266]
在一些情况下，步骤civ)还包括比较所述网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和所述肝脏功能检测组套与其相应限定标准，其中：a)低叶酸或维生素b12水平、升高的网织红细胞计数和正常的肝功能指示血液学疾病；或者b)低叶酸或维生素b12水平、升高的网织红细胞计数和异常的肝功能指示慢性病性贫血，任选地继发于肝病的慢性病性贫血，进一步任选地与酒精相关的慢性病性贫血。
[0267]
在一些实施方案中，本文还公开一种治疗有需要的个体的小细胞性贫血的潜在病因的方法，其包括：从获自所述个体的血液样品评估网织红细胞计数、铁蛋白水平和血红蛋白病评价；比较所述网织红细胞计数和铁蛋白水平与其相应限定标准；以及(i)如果所述铁蛋白水平低于所述限定标准，则向所述个体施用可溶形式的铁；或者(ii)如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的或有所升高，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比是正常的，并且所述血红蛋白病评价是正常的，则向所述个体施用针对慢性病性贫血的治疗；或者(iii)如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的或有所升高，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，并且所述血红蛋白病评价是正常的，则向所述个体施用针对溶血性贫血的治疗；或者(iv)如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的或有所升高，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比是正常的或有所升高，并且所述血红蛋白病评价是异常的，则向所述个体施用针对血红蛋白病的治疗。
[0268]
在一些实施方案中，本文还公开一种治疗有需要的个体的正常细胞性贫血的潜在病因的方法，其包括：从获自所述个体的血液样品评估网织红细胞计数、铁蛋白水平、c反应蛋白(crp)和综合代谢检测组套(cmp)；比较所述网织红细胞计数、铁蛋白水平、crp水平和cmp与其相应限定标准；以及(i)如果所述铁蛋白水平低于所述限定标准，则向所述个体施用可溶形式的铁；或者(ii)如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比有所升高，则进行所述个体的另外的评价；或者(iii)如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的并且所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，则向所述个体施用针对溶血性贫血的治疗或胃肠出血；或者(iv)如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是正常的，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，并且所述cmp是正常的或异常的，则向所述个体施用针对慢性病性贫血(acd)的治疗；或者(v)如果所述铁蛋白水平与所述限定标准相比是
正常的，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比是正常的，并且所述crp是正常的，则向所述个体施用针对慢性病或二形性贫血的治疗。
[0269]
在一些实施方案中，本文另外公开一种治疗有需要的个体的大细胞性贫血的潜在病因的方法，其包括：从获自所述个体的血液样品评估网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和肝脏功能检测组套；比较所述网织红细胞计数、叶酸、维生素b12和肝脏功能检测组套与其相应限定标准；以及(i)如果所述叶酸或维生素b12的水平与所述限定标准相比较低，则向所述个体施用叶酸补充剂或维生素b12补充剂；或者(ii)如果所述叶酸或维生素b12的水平与所述限定标准相比较低并且所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，则向所述个体施用针对溶血性贫血的治疗；或者(iii)如果所述叶酸或维生素b12的水平与所述限定标准相比较低，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，并且所述肝功能与限定标准相比是正常的，则向所述个体施用针对血液学疾病的治疗；或者(iv)如果所述叶酸或维生素b12的水平与所述限定标准相比较低，所述网织红细胞计数与所述限定标准相比有所升高，并且所述肝功能与限定标准相比是异常的，则向所述个体施用针对慢性病性贫血的治疗。
[0270]
在一些情况下，所述溶血性贫血包括遗传性溶血性贫血或获得性溶血性贫血。在一些情形中，所述遗传性溶血性贫血包括镰状细胞贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、遗传性干瘪红细胞增多症、遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症(卵圆形红细胞增多症)、葡糖-6-磷酸脱氢酶(g6pd)缺乏和丙酮酸激酶缺乏。在一些情形中，所述获得性溶血性贫血包括免疫性溶血性贫血、机械性溶血性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、病原体诱导的获得性溶血性贫血和化学品诱导的获得性溶血性贫血。在一些情形中，所述免疫性溶血性贫血包括自身免疫性溶血性贫血(aiha)、同种免疫性溶血性贫血和药物诱导的溶血性贫血。在一些情形中，所述病原体诱导的获得性溶血性贫血包括损伤红细胞的一种或多种病原体，任选地包括来自疟原虫属的原生动物或来自疏螺旋体属的细菌。在一些情形中，疟原虫属包括恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫和间日疟原虫。在一些情形中，疏螺旋体属包含伯氏疏螺旋体、梅氏疏螺旋体、包柔氏疏螺旋体和嘎氏疏螺旋体。在一些情形中，所述化学品诱导的获得性溶血性贫血包括损伤红细胞的一种或多种化学品，任选地包括毒性化学品或毒液。
[0271]
在一些情况下，所述血液学疾病包括脊髓发育不良。
[0272]
在一些情况下，针对溶血性贫血的治疗包括输血、血浆去除术、血液和/或骨髓干细胞移植、手术、治疗剂或其组合。
[0273]
在一些情况下，针对缺铁性贫血(ida)的治疗包括可溶性铁的施用。
[0274]
在一些情况下，针对慢性病性贫血(acd)的治疗包括用于潜在炎症的治疗的类固醇或非类固醇抗炎剂、用于潜在病原体感染的抗生素或癌症治疗。
[0275]
在一些实施方案中，mchc的限定标准为约32％至约36％、约33％至约36％、约33％至约35％或约32％至约35％。在一些情况下，升高的mchc水平为大于约35％或大于约36％。在一些情况下，降低的或低的mchc水平为小于约33％或小于约32％。
[0276]
在一些实施方案中，mchc的限定标准为约32g/dl至约36g/dl、约33g/dl至约36g/dl或约33.4g/dl至约35.5g/dl。在一些情况下，升高的mchc水平为大于约35g/dl、大于约35.5g/dl或大于约36g/dl。在一些情况下，降低的或低的mchc水平为小于约33.4g/dl、小于
约33g/dl或小于约32g/dl。
[0277]
在一些实施方案中，男性的血红蛋白水平的限定标准为约13mg/l至约17.5mg/l或约13.2mg/l至约17.5mg/l。在一些情况下，降低的男性的血红蛋白水平为小于约13.2mg/l或小于约13mg/l。
[0278]
在一些实施方案中，女性的血红蛋白水平的限定标准为约11mg/l至约15.3mg/l、约11.6mg/l至约15mg/l、约11.7mg/l至约15mg/l或约12mg/l至约15mg/l。在一些情况下，降低的女性的血红蛋白水平为小于约11mg/l、小于约11.6mg/l、小于约11.7mg/l或小于约12mg/l。
[0279]
在一些实施方案中，mcv的限定标准为约80fl至约100fl、约80fl至约98fl或约80fl至约96fl。在一些情况下，升高的mcv值为大于约96fl、大于约97fl、大于约98fl、大于约99fl或大于100fl。在一些情况下，降低的或低的mcv值为小于约80fl或小于约79fl。
[0280]
在一些实施方案中，网织红细胞计数的限定标准为约0.5％至约2.5％、约0.5％至约2％或约0.5％至约1.5％。在一些情况下，升高的网织红细胞计数为大于1.5％、大于2％或大于2.5％。
[0281]
在一些实施方案中，网织红细胞计数的限定标准为约10x109至约110x109个rbc/l、约50x109至约100x109个rbc/l或约50x109至约150x109个rbc/l。在一些情况下，升高的网织红细胞计数为大于100x109个rbc/l、大于110x109个rbc/l或大于150x109个rbc/l。
[0282]
在一些实施方案中，男性的铁蛋白的限定标准为约12至约300ng/ml、约20至约300ng/ml或约20至约250ng/ml。在一些情况下，升高的男性的铁蛋白水平为大于约250ng/ml或大于约300ng/ml。
[0283]
在一些实施方案中，女性的铁蛋白的限定标准为约12至约270ng/ml、约12至约263ng/ml、约20至约200ng/ml、约12至约150ng/ml或约10至约120ng/ml。在一些情况下，升高的女性的铁蛋白水平为大于约120ng/ml、大于约150ng/ml、大于约200ng/ml、大于约263ng/ml或大于约270ng/ml。
[0284]
在一些实施方案中，降低的或低的铁蛋白水平为小于约20ng/ml、小于约12ng/ml或小于10ng/ml。在一些情形中，降低的或低的铁蛋白水平适用于男性和女性二者。
[0285]
在一些实施方案中，crp的限定标准为约0.2mg/l至约6.1mg/l、约0.2mg/l至约6mg/l或约0.2mg/l至约5mg/l。在一些情况下，升高的crp水平为大于约5mg/l、大于约6mg/l或大于约6.2mg/l。
[0286]
在一些实施方案中，对血浆实施的叶酸的限定标准为约2ng/ml至约10ng/ml或约2.7ng/ml至约17ng/ml。在一些情况下，对rbc实施的叶酸的限定标准为约140ng/ml至约960ng/ml。
[0287]
在一些实施方案中，维生素b12的限定标准为约200至约900ng/ml。
[0288]
在一些实施方案中，所述肝脏功能检测组套包括测试以下的水平：总蛋白、白蛋白、胆红素、碱性磷酸酶(alp)、丙氨酸转氨酶(alt)和天冬氨酸转氨酶(ast)。在一些情况下，alp的限定标准为约25iu/l至约160iu/l或约40iu/l至约129iu/l。在一些情况下，alt的限定标准为约0iu/l至约55iu/l或约7iu/l至约55iu/l。在一些情况下，ast的限定标准为约0iu/l至约40iu/l或约8iu/l至约48iu/l。定义
[0289]
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有本公开文本所属领域中的技术人员通常所理解的含义。以下参考文献为技术人员提供本发明中使用的许多术语的通用定义：singleton等人,dictionary of microbiology and molecular biology(第2版1994)；the cambridge dictionary of science and technology(walker编辑,1988)；the glossary of genetics,第5版,r.rieger等人(编辑),springer verlag(1991)；以及hale和marham,the harper collins dictionary of biology(1991)。如本文所用，除非另有说明，否则以下术语具有下文赋予它们的含义。本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并且并非意图限制本公开文本。
[0290]
本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。
[0291]
如在本发明说明书和所附权利要求中所用，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述”可互换使用，并且意图也包括复数形式并且落入每种含义内，除非上下文清楚地指示。此外，如本文所用，“和/或”是指并且涵盖一个或多个所列项目的任何和所有可能的组合，以及在解释为替代方案(“或”)时组合的缺少。
[0292]
如本文所用，术语“约”将为本领域普通技术人员所理解，并且在某种程度上将根据其使用的上下文而变化。如果本领域的普通技术人员考虑到使用所述术语的上下文时对所述术语的使用不清楚，则“约”将意味着高达特定术语的加或减10％。
[0293]
如本文所用，术语“施用”药剂至受试者包括将药剂引入或递送至受试者以执行其预期功能的任何途径。可以通过任何合适的途径进行施用，所述途径包括但不限于静脉内、肌内、腹膜内、皮下和如本文描述的其他合适途径。施用包括自施用和由他人施用。
[0294]
如本文所用，术语“自动化”表明，所述方法是在没有关于所述方法应如何进行的间歇性指令的情况下进行的。换言之，一旦医师(即，初级护理医师)要求或安排所公开的方法或过程，则进行所述步骤至完成，不需要进一步要求或安排进行下一个测试步骤。因此，所公开的方法不需要在没有人类交互的情况下在单一机器中进行，但是在一些实施方案中这可能会发生。在一些实施方案中，单独的测试步骤(例如，确定铁蛋白水平、确定网织红细胞计数、评估c反应蛋白等)可能涉及人类交互，如由实验室技师操作，但是所述方法仍然是“自动化的”，因为操作其的个体是在没有来自医师的新的、直接的或间歇性指令的情况下进行所需测试。
[0295]
如本文所用，术语“包含”意图意指组合物和方法包括列举的要素，但不排除其他要素。当用于定义组合物和方法时，“基本上由
……
组成”应当意指排除对组合物或方法具有任何重要意义的其他要素。“由
……
组成”应当意指对于所要求保护的组合物和实质方法步骤排除其他成分的多于微量的要素。由这些过渡术语中的每一个定义的实施方案均在本公开文本的范围内。因此，意图是方法和组合物可以包括另外的步骤和组分(包含)，或者可替代地包括不重要的步骤和组合物(基本上由
……
组成)，或者可替代地意图仅是所述方法步骤或组合物(由
……
组成)。
[0296]
如本文所用，术语“一个或多个个体”、“一名或多名受试者”和“一名或多名患者”意指任何哺乳动物。在一些实施方案中，所述哺乳动物是人。在一些实施方案中，所述哺乳动物是非人。所述术语均不要求或不限于以卫生保健工作者(例如医生、注册护士、执业护士、医师助理、护理员或临终关怀工作者)进行监督(例如持续或间断)为特征的情况。
[0297]
在一些情况下，“正常范围”还可以称为“限定标准”。例如，mchc、mcv或mch值的正
常范围还可以称为限定标准。
[0298]
如本文所用，“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形可能发生或可能不发生，并且所述描述包括所述事件或情形发生的情况和不发生的情况。
[0299]
如本文所用短语“治疗有效量”意指提供特定药理学作用的该药物剂量或在受试者体内的血浆浓度，针对所述药理学作用在需要这样的治疗的受试者中施用所述药物，所述药理学作用即减少、改善或消除贫血和/或其潜在病因(例如，血液学疾病或突变、来自慢性病的贫血、溶血性贫血等)的症状或影响。要强调的是，药物的治疗有效量或治疗性水平在治疗本文所述的病症/疾病中不会始终有效，即使本领域技术人员认为这样的剂量是治疗有效量。治疗有效量可以尤其基于以下而变化：施用途径和剂型、受试者的年龄和体重和/或受试者的状况，包括个体的贫血或贫血的潜在病因的类型和严重程度。
[0300]
如本文所用术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指减少、改善或消除贫血或其潜在病因的一种或多种症状或影响。
[0301]
提供上述公开文本和以下实施例来帮助读者理解本专利申请，并且不承认它们描述或构成本专利申请的现有技术。实施例
[0302]
这些实施例仅仅出于说明性目的提供，并且不限制本文提供的权利要求的范围。实施例1
[0303]
贫血是最常见的血液障碍，影响超过300万美国人。贫血概况是基于患者的症状和临床实验室结果鉴定各种贫血的诊断工具。这个实施例为初级护理医师(pcp)改进患者护理结局提供综合反射测试。基于mcv结果，可以将贫血按形态学分类为小细胞性(低mcv)、正常细胞性(正常mcv)或大细胞性(高mcv)。
[0304]
mcv的结果将决定反射测试的标准化级联。反射测试的标准化级联的目标是基于hb水平、mchc和mcv同时启动适当测试，并且其将减少患者返回进行另外的测试和/或减少回转以诊断的需要。表1说明标准化反射测试级联。还参见图1b，其说明与标准化反射测试级联相关的贫血算法。
[0305]
此实验的入选标准包括在过去3个月中未被评价为铁缺乏的患者。
[0306]
排除标准包括当前处于铁缺乏的评价或治疗中或者具有红细胞障碍的已知个人或家族史的患者。排除标准还包括怀疑患有再生障碍性贫血的患者。表1
[0307]
虽然已经在此示出并描述了本公开的优选实施方案，但是对本领域的普通技术人员而言应该清楚的是这样的实施方案仅以举例方式提供。在不背离本公开文本的情况下，本领域技术人员现将想到多种修改、改变和取代。应理解，本文描述的本公开文本的实施方案的不同替代方案可以用于实施本公开文本。以下权利要求旨在限定本公开的范围，并且在这些权利要求及其等同物的范围内的方法和结构涵盖在其中。