一种血管紧张素转化酶抑制剂专用纸芯片及检测分析方法

1.本发明属于药物分析技术领域，涉及一种检测分析专用纸芯片及检测方法，特别涉及一种血管紧张素转化酶抑制剂筛选专用3d微流控纸芯片及检测分析方法。


背景技术：

2.血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme，ace)又称激肽酶ii或肽基-羧基肽酶。研究表明，ace可催化血管紧张素i(十肽)水解成八肽的血管紧张素ii，使血管进一步收缩，血压升高。因此，ace抑制剂(acei)广泛应用于治疗高血压、心力衰竭、心肌梗塞等疾病。由于ace活性测定各种参考值不尽相同，与年龄、性别及血清血管紧张素转换酶(sace)相关，国内外尚有争论。目前，ace的活性检测常用方法包括分光光度法、荧光光度法、高效液相色谱法、酶偶联法、毛细管电泳法等。分光光度法需用乙酸乙酯萃取产物马尿酸，步骤繁琐；荧光光度法、hplc和毛细管电泳法对仪器设备要求高，难以在一般实验室使用；酶偶联法适用于手工操作，但底物马尿酸双甘肽与酶反应产物马尿酸有相同紫外吸收峰，且血脂较高时易产生混浊。
3.微流控纸芯片，也称微流控纸分析器件(microfluidic paper-based analytical devices，μpad)，微流控纸芯片是由whitesides组于2007年首次提出，是继hplc和毛细管电泳(ce)后又一强有力的分离分析方法，它用纸张作为基底代替了玻璃、硅、高聚物等材料，通过各种加工技术，在纸上加工出具有一定结构的亲/疏水微细通道网络及相关分析器件，构建“纸上微型实验室”(lab-on-paper)。除了具有传统微流控芯片的样品用量小、分析快速等特点。μpad分析中的检测方法主要有比色检测、电化学检测、化学发光检测以及电化学发光检测等四种。其中，比色法不需要特殊的仪器设备，是纸芯片分析中最常用的一种检测方法。它主要通过显色反应(或反应后颜色消失)，使待检测组分转化为有颜色的物质(或无颜色的物质)，利用颜色强度与待测组分浓度的相关性，采用数码相机或智能手机拍照、扫描仪扫描成图像，然后利用photoshop等图像处理软件进行处理，根据图像颜色强度与待测物浓度间的关系进行定量分析。
4.因此，本发明设计制作了一种专用3dμpad，通过选择相应的显色体系，建立了天然降压活性成分的新型快速筛选平台。以ace为模型，马尿酰-甘氨酰-甘氨酸(hgg)为底物，通过纸芯片法对药物的半抑制浓度(ic50值)进行测定，对其抑制活性进行了评价。目前为止，本发明所用纸芯片及其筛选血管紧张素转化酶抑制剂方法尚未见相关报道。


技术实现要素：

5.针对上述现有技术状况，本发明的目的首先提供一种专用于血管紧张素转化酶抑制剂筛选的纸芯片，本发明的另一个目的是提供一种用该纸芯片进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法。
6.现将本发明构思及技术解决方案叙述如下：
7.本发明的基本构思是，利用纸芯片成本低廉、制备简单、无需复杂外围设备，能够
进行真正意义上的快速、廉价、便捷地检测分析特点，设计一种专用于血管紧张素转化酶抑制剂筛选的纸芯片；本发明是将血管紧张素转化酶抑制剂筛选过程在纸芯片上实现，基于血管紧张素转化酶可将底物马尿酰甘氨酰甘氨酸(hgg)分解为马尿酸和甘氨酸二肽，甘氨酸二肽可与茚三酮反应产生紫色配合物，显色强度与酶活性呈正比。加入中药提取物后，酶活性被抑制，显色强度降低，通过photoshop软件分析其颜色变化程度，以对药物抑制活性进行评价；3dμpad体系检测过程(附图1)是基于纤维素纸张自身较强的毛细作用，通过折叠使第二层纸芯片上(2nd layer)的显色剂茚三酮均匀加载至加载于第一层纸芯片(1st layer)的显色区。将底物和酶反应一定时间后，加载于1st layer显色区；沿折叠线对折压紧，酶解产物与茚三酮接触、反应。将3dμpad放置于65℃的加热板上加热显色2min后，手机拍照记录实验结果(1st layer背面)，photoshop软件分析rgb值。药物抑制活性越强，ace活性降低越显著，体系中水解产物的含量越少，rgb值(红、绿、蓝三通道叠加分析means值)越低；反之，则rgb值越高；根据梯度浓度药物对酶解反应的抑制率，可求得各药物的ic50值，μpad平台可一次性对多个浓度梯度药物的抑制效果进行平行测定，一次操作即可获得该药物的ic50值。本发明以人空白血清作为ace的来源，半胱氨酸等含量又非常小，对双甘肽的检测无干扰。
8.本发明一种专用于血管紧张素转化酶抑制剂筛选的纸芯片，其特征在于：纸芯片由两层色谱纸组成；第一层色谱纸上设计有平行的圆形反应区域；第二层色谱纸与第一层反应区域对应的位置上设计液体流动通道；所述的色谱纸为黑色，采用黑色蜡打印，圆形的样品加载区和液体流动通道为亲水区域，其余均为疏水区；所述圆形反应区域直径0.60cm～1.0cm；所述液体流动通道长0.8cm～1.2cm，宽0.25cm～0.45cm。
9.本发明还同时提供一种用该纸芯片进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法，其特征在于：包括以下步骤：
10.步骤1：用喷蜡打印机按照本发明设计打印出专用于血管紧张素转化酶抑制剂筛选的纸芯片，经磁性半自动热压印机加热，将固体石蜡融化并完全渗透纸张形成疏水阻断或堤坝；
11.步骤2：检测前配制hgg母液、茚三酮溶液、hcl溶液、卡托普利母液、天麻素母液、乙酰天麻素母液和甘氨酸二肽母液；
12.步骤3：考察上样量、反应时间、显色时间、底物浓度、显色剂浓度、底物终止剂对反应结果的影响，得到最佳反应条件；
13.步骤4：制作标准工作曲线；
14.步骤5：最低检测限测定；
15.步骤6：重复性实验
16.步骤7：卡托普利对ace活性抑制测定；
17.步骤8：天麻素对ace活性抑制测定；
18.步骤9：乙酰天麻素对ace活性抑制测定；
19.步骤10：紫外分光光度法检测不同药物对ace的抑制。
20.本发明进一步提供一种用3dμpad进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法，其特征在于：结合步骤1、2、3：分别在反应底物上样量2～6μl、显色剂上样量30～50μl、反应时间10-50min、显色时间30-150s、底物浓度6～30mmol/l、显色剂浓度0.2％～1.0％和反应终止
剂1～9μl条件下进行检测，得到最佳检测条件。
21.本发明进一步提供一种用3dμpad进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法，其特征在于：步骤4中所述的“制作标准工作曲线”具体如下：
22.取五支离心管，分别加入不同浓度的甘氨酸二肽溶液(5、9、13、17、21
×
10-3
mol/l)10μl，血清10μl，1
×
pbs缓冲溶液25μl，hcl(1mmol/l)5μl，混合后各吸取4μl混合液加至纸芯片1st layer显色区，2nd layer加载区加入50μl茚三酮(8mg/ml)溶液，折叠压紧，65℃加热2min显色，拍照分析不同浓度甘氨酸二肽rgb值，以rgb值对甘氨酸二肽浓度作图得标准工作曲线。
23.本发明进一步提供一种用3dμpad进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法，其特征在于：步骤5中所述的“最低检测限试验”具体如下：
24.不停稀释甘氨酸二肽溶液进行显色，直至rgb与空白值相差至10所对应的甘氨酸二肽浓度为甘氨酸二肽浓度检测限。
25.本发明进一步提供一种用3dμpad进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法，其特征在于：步骤6中所述所述的“重复性实验”具体如下：
26.将10μl血清和5μl卡托普利溶液(100.46nmol/l)混合于20μl pbs缓冲溶液中，加入10μl底物溶液(24mmol/l)反应20min后，加入5μl hcl(1mmol/l)终止反应。吸取4μl反应液加至纸芯片1st layer显色区，2nd layer加载区加入50μl茚三酮(8mg/ml)溶液，折叠压紧，于65℃加热显色2min考察重复性。重复做五次，对天麻素(2.48mmol/l)和乙酰天麻素(2.56mmol/l)的活性抑制重复性进行考察。
27.本发明进一步提供一种用3dμpad进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法，其特征在于：步骤7中所述的“卡托普利对ace活性抑制测定”具体如下：
28.将5μl不同浓度(1.0046
×
10-1
μmol/l，1.0046
×
10-2
μmol/l，1.0046
×
10-3
μmol/l，1.0046
×
10-4
μmol/l，1.0046
×
10-5
μmol/l)的卡托普利溶液分别和10μl血清混合于20μl pbs缓冲溶液中，加入10μl底物溶液(24mmol/l)反应20min后加入5μl hcl(1mmol/l)终止反应，各吸取4μl反应液加至纸芯片1st layer显色区，2nd layer加载区加入50μl茚三酮(8mg/ml)溶液，折叠压紧，65℃加热2min显色，拍照分析不同浓度卡托普利的rgb值，以抑制率对卡托普利浓度进行非线性拟合，得卡托普利对ace抑制的ic50值。
29.本发明进一步提供一种用3dμpad进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法，其特征在于：步骤8中所述的“天麻素对ace活性抑制测定”具体如下：
30.配制2.48
×
10-2
mol/l，2.48
×
10-3
mol/l，2.48
×
10-4
mol/l，2.48
×
10-5
mol/l，2.48
×
10-6
mol/l的天麻素溶液，分别和10μl血清混合于20μl pbs缓冲溶液中，加入10μl底物溶液(24mmol/l)反应20min后加入5μl hcl(1mmol/l)终止反应，各吸取4μl反应液加至纸芯片1st layer显色区，2nd layer加载区加入50μl茚三酮(8mg/ml)溶液，折叠压紧，65℃加热2min显色，拍照分析不同浓度天麻素溶液的rgb值，以抑制率对天麻素浓度进行非线性拟合，得卡天麻素对ace抑制的ic50值。
31.本发明进一步提供一种用3dμpad进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法，其特征在于：步骤9中所述的“乙酰天麻素对ace活性抑制测定”具体如下：
32.配制2.56
×
10-2
mol/l，2.56
×
10-3
mol/l，2.56
×
10-4
mol/l，2.56
×
10-5
mol/l，2.56
×
10-6
mol/l的乙酰天麻素溶液，分别和10μl血清混合于20μl pbs缓冲溶液中，加入10μl底
物溶液(24mmol/l)反应20min后加入5μl hcl(1mmol/l)终止反应，各吸取4μl反应液加至纸芯片1st layer显色区，2nd layer加载区加入50μl茚三酮(8mg/ml)溶液，折叠压紧，65℃加热2min显色，拍照分析不同浓度乙酰天麻素溶液的rgb值，以抑制率对乙酰天麻素浓度进行非线性拟合，得乙酰天麻素对ace抑制的ic50值。
33.本发明进一步提供一种用3dμpad进行血管紧张素转化酶抑制剂筛选的方法，其特征在于：步骤10中所述的“紫外分光光度法检测不同药物对ace的抑制”具体如下：
34.将25μl不同浓度(2.48
×
10
‑‑2mol/l，2.48
×
10-3
mol/l，2.48
×
10-4
mol/l，2.48
×
10-5
mol/l，2.48
×
10-6
mol/l)的天麻素溶液和50μl血清混合于100μl pbs缓冲溶液中，加入50μl底物溶液(24mmol/l)反应20min后加入25μl hcl(1mmol/l)终止反应，加入200μl茚三酮溶液(8mg/ml)显色后稀释，在568nm下测量吸光度值。以抑制率对天麻素浓度进行拟合，得紫外法天麻素对ace抑制的ic
50
值；配制2.56
×
10-2
mol/l，2.56
×
10-3
mol/l，2.56
×
10-4
mol/l，2.56
×
10-5
mol/l，2.56
×
10-6
mol/l的乙酰天麻素溶液，其余操作同天麻素；配制1.0046
×
10-1
μmol/l，1.0046
×
10-2
μmol/l，1.0046
×
10-3
μmol/l，1.0046
×
10-4
μmol/l，1.0046
×
10-5
μmol/l的卡托普利溶液，其余操作同天麻素。
35.本发明同现有技术相比，具有检测速度快、准确度高、样品用量少、能耗低、污染小、成本低等优点，且纸芯片携带方便、操作简单，制作的3dμpad用于血管紧张素转化酶抑制剂筛选无需进行特殊的样品预处理，可直接进行定量分析，可用于酶抑制剂类药物的活性筛选，在临床诊断、食品质量控制和环境监测等领域有着广阔的应用前景。
附图说明
36.图1：显色反应原理检测流程图
37.图2：纸芯片外观图
具体实施方式
38.下面结合附图对本发明具体实施方式作进一步详细说明。
39.实施例1：
40.参见图1，结合步骤1：使用inkscape 0.91软件设计出纸芯片的形状和通道，用xerox phaser 8570喷蜡打印机打印在a4纸尺寸的whatman grade 1色谱纸上，经过磁性半自动热压印机176.7℃下加热105s，将固体石蜡融化并完全渗透纸张形成疏水阻断(或堤坝)，在第一层色谱纸(1
st layer)上设计平行的圆形反应区域(直径0.80cm)，加载底物马尿酰甘氨酰甘氨酸(hgg)和血管紧张素转化酶(ace)溶液，在第二层(2
nd layer)上，与第一层(1
st layer)反应区域对应的位置设计液体流动通道(长1.00cm，宽0.35cm)，1
st layer色谱纸为黑色蜡打印；
41.实施例2：
42.结合步骤2：检测前配制hgg母液(30mmol/l)、茚三酮溶液(10mg/ml)、hcl溶液(1mmol/l)、卡托普利母液(1.0046
×
10-3
mol/l)、天麻素母液(2.48
×
10-2
mol/l)、乙酰天麻素母液(2.56
×
10-2
mol/l)和甘氨酸二肽母液(6.0
×
10-2
mol/l)；
43.实施例3：
44.结合步骤3：
45.上样量的考察：将10μl底物溶液(30mmol/l)与10μl血清混合于20μl pbs缓冲溶液中，反应20min后加入10μl hcl(1mmol/l)终止反应，分别吸取2μl、3μl、4μl、5μl、6μl反应液加至纸芯片1
st layer显色区，2
nd layer加载区加入50μl茚三酮(10mg/ml)溶液，折叠压紧，充分显色，反应液在2-6μl时，均可将显色区铺满，且随着反应液上样量的增加，显色强度随之增强，但多于4μl上样且时折叠过程溶液易流失，影响实验稳定性；向加载区分别加入30μl、35μl、40μl、45μl、50μl的茚三酮(10mg/ml)溶液，随着茚三酮加载量的增多，加载区逐渐被充满，50μl时恰好充满整个显色区；故本研究确定反应液和显色剂的最佳加载量分别为4μl和50μl；
46.反应时间的考察：取离心管五支，分别编号1-5，在离心管中加入20μlpbs缓冲溶液，10μl底物溶液(30mmol/l)和10μl血清，分别反应10min，20min，30min，40min，50min，反应时间达到后加入10μlhcl(1mmol/l)终止反应，从五支离心管分别吸取4μl反应液加至纸芯片1
st layer显色区，2
nd layer加载区加入50μl茚三酮(10mg/ml)溶液，折叠压紧，充分显色，拍照分析不同反应时间rgb通道的mean值(后简称rgb值)，结果显示，反应时间为20min时，人血清中ace酶的活性良好，20min以后结果显色强度略有增加，但本着经济、高效的原则，本发明选择最佳反应时间为20min；
47.显色时间的考察：将10μl底物溶液(30mmol/l)与10μl血清混合于20μlpbs缓冲溶液中，反应20min后加入10μlhcl(1mmol/l)终止反应，吸取4μl反应液加至纸芯片1
st layer显色区，2
nd layer加载区加入50μl茚三酮(10mg/ml)溶液，折叠压紧，使用65℃加热板加热，每30s拍照一次，分析不同显色时间rgb值，结果显示，65℃加热条件下，显色强度随时间延长而增大，2min时达到最大，之后趋于稳定，故本发明中采用65℃加热2min进行显色；
48.底物浓度的考察：取底物母液，用底物缓冲溶液分别稀释配置成6、12、18、24、30mmol/l的底物溶液；取离心管五支，编号1-5，向20μl pbs缓冲溶液中加入10μl不同浓度底物溶液和10μl血清，反应20min后加入10μlhcl(1mmol/l)终止反应，从五只离心管分别吸取4μl反应液加至纸芯片1
st layer显色区，2
nd layer加载区加入50μl茚三酮(10mg/ml)溶液，折叠压紧，65℃加热2min显色，拍照分析不同底物浓度rgb值，结果显示，随着底物浓度的增大，显色强度逐渐增大，当底物为24mmol/l时，显色强度达到最大；底物浓度继续增加，显色强度基本不变，故本发明所用底物浓度为24mmol/l；
49.显色剂浓度的考察：将20μl底物溶液(24mmol/l)与20μl血清混合于40μl pbs缓冲溶液中，反应20min后加入20μlhcl(1mmol/l)终止反应，吸取50μl反应液加至纸芯片2
nd layer加载区，1
st layer显色区加入4μl不同浓度茚三酮溶液，折叠压紧，于65℃加热显色2min，拍照分析不同显色剂浓度rgb值，结果显示，随着显色剂浓度的增大，显色强度随之增大，在0.8％浓度时达到最大，之后趋于稳定，故本发明中茚三酮溶液的最佳浓度为0.8％；
50.反应终止剂加入量的考察：取5支离心管，编号1-5，将10μl底物溶液(30mmol/l)与10μl血清混合，反应20min后加入1μl，3μl，5μl，7μl，9μl hcl(1mmol/l)终止反应，各吸取4μl反应液加至纸芯片1
st layer显色区，2
nd layer加载区加入50μl茚三酮(8mg/ml)溶液，折叠压紧，使用65℃加热板加热，拍照分析不同量反应终止剂rgb值，结果显示，随着终止剂hcl加入体积的增加，ace活性逐渐降低，酶解反产物量逐渐减小，显色强度逐渐减弱；当hcl加入量5μl时，显色强度最小，之后基本保持恒定，故本发明采用加入5μl hcl(1mmol/l)来终止酶解反应；
51.实施例4：
52.结合步骤4：
53.检测前制作甘氨酸二肽标准曲线；取用不同浓度的甘氨酸二肽溶液(5、9、13、17、21
×
10-3
mol/l)10μl，与显色剂进行反应，以rgb值对甘氨酸二肽标准溶液作图，结果表明，显色强度随着甘氨酸二肽溶液浓度增加而增强，以rgb值对甘氨酸二肽溶液浓度进行线性拟合，得线性回归方程y＝1.5223x 107.32，其线性相关系数r2为0.9981，表明在4～21mmom/l浓度范围内，线性关系良好；
54.实施例5：
55.步骤5：最低检测限测定：不断稀释甘氨酸二肽溶液进行显色，直至rgb与空白(74.25)值相差至10，得到检测限为0.001mmol/l；
56.实施例6：
57.结合步骤6：重复性实验
58.将10μl血清和5μl卡托普利溶液(100.46nmol/l)混合于20μl pbs缓冲溶液中，加入10μl底物溶液(24mmol/l)反应20min后，加入5μl hcl(1mmol/l)终止反应。吸取4μl反应液加至纸芯片1
st layer显色区，2
nd layer加载区加入50μl茚三酮(8mg/ml)溶液，折叠压紧，于65℃加热显色2min考察重复性。天麻素溶液(2.48mmol/l)和乙酰天麻素溶液(2.56mmol/l)方法同卡托普利，结果表明，卡托普利、天麻素和乙酰天麻素对ace抑制率的相对标准偏差(rsd)分别为1.35％、3.02％和1.78％(n＝5)。
59.实施例7：
60.结合步骤7：卡托普利对ace活性抑制测定
61.将5μl不同浓度(1.0046
×
10-1
μmol/l，1.0046
×
10-2
μmol/l，1.0046
×
10-3
μmol/l，1.0046
×
10-4
μmol/l，1.0046
×
10-5
μmol/l)的卡托普利溶液分别和10μl血清混合于20μl pbs缓冲溶液中，加入10μl底物溶液(24mmol/l)反应20min后加入5μl hcl(1mmol/l)终止反应，各吸取4μl反应液加至纸芯片1st layer显色区，2nd layer加载区加入50μl茚三酮(8mg/ml)溶液，折叠压紧，65℃加热2min显色，拍照分析不同浓度卡托普利的rgb值，以抑制率对卡托普利浓度进行非线性拟合，随着卡托普利溶液浓度的增加，显色强度之间降低，说明对ace活性的增强。以抑制率对卡托普利浓度对数作图，得出当hgg浓度为24mmol/l时，卡托普利对ace的ic
50
值为1.98nmol/l，该值在文献报道的ic
50
值范围0.75～22nmol/l之内，说明方法可行。
62.实施例8：
63.结合步骤8：天麻素对ace活性抑制测定
64.配制2.48
×
10-2
mol/l，2.48
×
10-3
mol/l，2.48
×
10-4
mol/l，2.48
×
10-5
mol/l，2.48
×
10-6
mol/l的天麻素溶液，分别和10μl血清混合于20μl pbs缓冲溶液中，加入10μl底物溶液(24mmol/l)反应20min后加入5μl hcl(1mmol/l)终止反应，各吸取4μl反应液加至纸芯片1st layer显色区，2nd layer加载区加入50μl茚三酮(8mg/ml)溶液，折叠压紧，65℃加热2min显色，拍照分析不同浓度天麻素溶液的rgb值，以抑制率对天麻素浓度进行非线性拟合，不同浓度的天麻素溶液对ace的抑制程度在纸芯片上的显色强度也随之变化，随着天麻素浓度的递增对ace的抑制作用也增加，显色逐渐变浅。得出当hgg浓度分别24mmol/l时，天麻素对ace的ic
50
值为506.12μmol/l。
65.实施例9：
66.结合步骤9：乙酰天麻素对ace活性抑制测定
67.配制2.56
×
10-2
mol/l，2.56
×
10-3
mol/l，2.56
×
10-4
mol/l，2.56
×
10-5
mol/l，2.56
×
10-6
mol/l的乙酰天麻素溶液，分别和10μl血清混合于20μl pbs缓冲溶液中，加入10μl底物溶液(24mmol/l)反应20min后加入5μl hcl(1mmol/l)终止反应，各吸取4μl反应液加至纸芯片1st layer显色区，2nd layer加载区加入50μl茚三酮(8mg/ml)溶液，折叠压紧，65℃加热2min显色，拍照分析不同浓度乙酰天麻素溶液的rgb值，以抑制率对乙酰天麻素浓度进行非线性拟合，随着乙酰天麻素浓度的递增对ace的抑制作用也增加，显色逐渐变浅，当hgg浓度为24mmol/l时，乙酰天麻素对ace的ic
50
值为304.88μmol/l。
68.实施例10：
69.结合步骤10：紫外分光光度法检测不同药物对ace的抑制
70.将25μl不同浓度(2.48
×
10
‑‑2mol/l，2.48
×
10-3
mol/l，2.48
×
10-4
mol/l，2.48
×
10-5
mol/l，2.48
×
10-6
mol/l)的天麻素溶液和50μl血清混合于100μl pbs缓冲溶液中，加入50μl底物溶液(24mmol/l)反应20min后加入25μl hcl(1mmol/l)终止反应，加入200μl茚三酮溶液(8mg/ml)显色后稀释，在568nm下测量吸光度值。以抑制率对天麻素浓度进行拟合，得紫外法天麻素对ace抑制的ic
50
值；配制2.56
×
10-2
mol/l，2.56
×
10-3
mol/l，2.56
×
10-4
mol/l，2.56
×
10-5
mol/l，2.56
×
10-6
mol/l的乙酰天麻素溶液，其余操作同天麻素；配制1.0046
×
10-1
μmol/l，1.0046
×
10-2
μmol/l，1.0046
×
10-3
μmol/l，1.0046
×
10-4
μmol/l，1.0046
×
10-5
μmol/l的卡托普利溶液，其余操作同天麻素。在568nm处空白组吸光度为0.2967，对照组为0.4939，不同浓度的acei溶液对ace的抑制在568nm处测得吸光值不同。当hgg浓度为24mmol/l时，卡托普利对ace的ic
50
值为2.08nmol/l，天麻素对ace的ic
50
值为514μmol/l，乙酰天麻素对ace的ic
50
值为309μmol/l。3dμpad法与之相比较，相对误差分别为4.8％、1.5％、1.3％，误差在5％以内，符合要求，表明3dμpad法可用于酶抑制剂类药物的活性筛选。