枯草芽孢杆菌在促进农作物秸秆腐熟中的应用的制作方法

1.本发明涉及微生物与环保技术领域，特别是涉及枯草芽孢杆菌z-14菌株在促进农作物秸秆腐熟中的应用。


背景技术：

2.秸秆是一种农业固体废物，在我国产量巨大。作为工业原料或肥料原料是秸秆资源化综合利用方式的两大方向，但作为工业原料的运输和储存成本过高，因此，将秸秆直接还田、转化为有机肥仍然是目前我国秸秆利用的最佳方式之一。农作物秸秆富含有机质和无机养分，据测定，玉米秸秆中氮、磷、钾的含量分别为0.61％、0.21％、2.28％，是优良的有机肥原料。秸秆还田后经自然界的微生物分解，其中的n、p、k及其他矿质元素等被释放进入土壤，从而实现元素循环，能够缓解我国氮、磷、钾肥比例失调的矛盾，弥补磷、钾化肥的不足。同时秸秆腐解还可有效增加土壤有机质含量，改善土壤团粒结构和理化性状，改良土壤，培肥地力，增加作物产量。
3.秸秆主要由纤维素、半纤维素和木质素等秸秆“三素”组成。纤维素是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，结构相对复杂，分子量较大；半纤维素是由多个单糖构成的异质多聚体；木质素则是一种酚类聚合物，主要由醇单体构成。在秸秆中，纤维素、半纤维素和木质素互相包被缠连，呈现出复杂的、断断续续的层状结构，这种复杂的结构使得秸秆在自然条件下降解速度非常缓慢。若秸秆在直接还田后降解时间过长，则会造成土壤过于松透，空隙不均衡，作物种子在播种后不能与土壤充分接触，使其发芽生长受到影响，出苗不齐，尤其在玉米—小麦轮作区，小麦播种后常会出现不发芽、苗弱、倒伏、枯死现象，冬季小麦还易发生冻害，严重影响小麦的高产。并且，如果前茬作物患病，病原微生物还会在田间的传播，加重病害发生。由于借助降解来开发利用秸秆的方法会产生以上问题，因此我国每年有大量秸秆并未得到妥善利用，秸秆抛弃、焚烧现象严重。但随意抛弃、焚烧的秸秆则会引起一系列的环境问题，对于生态平衡、经济发展、人类健康等都存在长远影响。因此，有效降解秸秆的方法对于推动秸秆还田、提高土壤有机质、改善农田生态、培肥地力、增肥增产具有积极意义。


技术实现要素：

4.针对秸秆不易降解的技术问题，本发明提供了枯草芽孢杆菌z-14菌株在促进农作物秸秆腐熟中的应用。该枯草芽孢杆菌z-14菌株能够促进秸秆降解、加快秸秆腐熟，在秸秆还田过程中应用后能够促进作物生长，提高产量。
5.为解决上述技术问题，本发明实施例采用了如下的技术方案：
6.一方面，本发明实施例提供枯草芽孢杆菌z-14菌株在促进农作物秸秆腐熟中的应用。该枯草芽孢杆菌z-14菌株从小麦产区健壮麦苗根际土壤中分离得到，其分类名称为枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)，于2020年9月25日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为cgmcc no：20821；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号
院3号。
7.该枯草芽孢杆菌z-14菌株已在申请号为cn202110057405.9、名称为“一种防治果蔬根腐病的枯草芽孢杆菌z-14菌株及其应用”的专利中公开。
8.经试验研究表明，枯草芽孢杆菌z-14菌株的纤维素酶活性较高且降解木质素的能力较强，能够显著提高秸秆降解率，促进秸秆腐熟，在秸秆还田中应用后能够增加土壤酶活性。并且，该枯草芽孢杆菌z-14菌株还能拮抗农作物致病菌，如小麦全蚀病菌、小麦纹枯病菌和小麦根腐病菌。将枯草芽孢杆菌z-14菌株用于秸秆还田有利于提高作物产量，并可减少病原微生物在田间的传播。
9.第二方面，本发明实施例还提供一种促进农作物秸秆腐熟的方法，将秸秆粉碎后喷洒含氮源的水溶液，再喷洒上述枯草芽孢杆菌z-14菌株的菌悬液，发酵30天以上。
10.细菌生长需要碳源和氮源，秸秆能够提供碳源，结合喷入的含氮源的水溶液，有利于枯草芽孢杆菌z-14菌株的生长繁殖，使菌量增多，促进秸秆降解。其中氮源可选尿素，补充尿素既可以提供细菌生长所需的氮源，还可以补充小麦生长所需的肥料。
11.优选地，所述枯草芽孢杆菌z-14菌株的菌悬液的活菌浓度为1
×
107～2
×
107cfu/ml。
12.第三方面，本发明实施例还提供一种菌剂，所述菌剂包括上述枯草芽孢杆菌z-14菌株的活菌株。
13.该菌剂可用于在秸秆还田时与秸秆和肥料共同翻入土壤，促进秸秆在土壤中降解、腐熟，释放营养成分，提高土壤酶活性，并拮抗土壤中的病原菌，促进作物健康生长。
14.优选地，所述菌剂为液体菌剂。
15.第四方面，本发明实施例还提供一种在秸秆还田的方法，将秸秆粉碎，施用上述液体菌剂后，与肥料共同翻压到地下，3～7天后种植作物。
16.将施用了含有枯草芽孢杆菌z-14活菌株的菌剂的秸秆与肥料共同翻压到地下后，肥料能够提供枯草芽孢杆菌z-14活菌株生长需要的营养成分，促进枯草芽孢杆菌z-14菌株的生长繁殖，进而促进秸秆在地下降解、发酵腐熟、释放养分，并能提高土壤酶活性，从而提高作物产量。
17.优选地，所述肥料为复混肥料，施入量为50～70kg/亩。
18.优选地，所述复混肥料中的氮、磷、钾元素比例为：n:p2o5:k2o＝15:15:15；总养分≥45％。
19.优选地，所述秸秆的用量为3000～5000斤/亩，所述液体菌剂中枯草芽孢杆菌z-14菌株菌悬液的活菌浓度为1
×
109～2
×
109cfu/ml。
20.本发明的有益效果在于：本发明通过在秸秆还田的过程中利用枯草芽孢杆菌z-14菌株，能够提高秸秆降解率，促进秸秆腐熟，减少秸秆还田后造成的病原微生物在田间的传播，有利于促进农业固废秸秆的妥善利用，对于减少秸秆抛弃、焚烧等破坏环境的现象，减轻环保压力具有十分重要的积极意义，同时降解后秸秆还能增加土壤酶活力，改善土壤理化性质，增加土壤肥力，增加作物产量。
附图说明
21.图1为实施例1中枯草芽孢杆菌z-14菌株纤维素酶活性检测结果；
22.图2为实施例1中葡萄糖含量标准曲线；
23.图3为实施例1中枯草芽孢杆菌z-14菌株纤维素酶活力检测结果；
24.图4为实施例1中枯草芽孢杆菌z-14菌株滤纸酶活力检测结果；
25.图5为实施例1中枯草芽孢杆菌z-14菌株降解苯胺蓝活性检测结果；
26.图6为实施例1中枯草芽孢杆菌z-14菌株漆酶活力检测结果；
27.图7为实施例1中枯草芽孢杆菌z-14菌株锰过氧化物酶活力检测结果；
28.图8为实施例1中枯草芽孢杆菌z-14菌株木质素过氧化物酶活力检测结果；
29.图9为实施例1中枯草芽孢杆菌z-14菌株对小麦纹枯病的拮抗作用；
30.图10为实施例1中枯草芽孢杆菌z-14菌株对小麦全蚀病的拮抗作用；
31.图11为实施例1中枯草芽孢杆菌z-14菌株对小麦根腐病的拮抗作用。
具体实施方式
32.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
33.以下实施例中所采用的实验方法如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
34.以下实施例中所采用的原料、试剂等，如无特殊说明，均从商业途径获得。
35.以下实施例中采用excel 2003软件处理数据和绘表，采用spss13.0软件进行统计分析，采用最小显著极差法(lsd)进行差异显著性检验(p＜0.05)。
36.实施例1
37.本发明实施例提供了枯草芽孢杆菌z-14菌株在促进农作物秸秆腐熟中的应用。
38.1、材料与方法
39.1.1玉米秸秆粉
40.将玉米秸秆切碎至2～3cm小段，放入烘箱烘干，用植物粉碎机粉碎后过40目筛。
41.1.2培养基
42.所有培养基均用121℃高压蒸汽灭菌30min。
43.营养琼脂培养基(nutrient agar，na)：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，nacl 5.0g，琼脂15.0g，水1000ml，ph 7.0～7.2。
44.nb培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，nacl 5.0g，水1000ml，ph 7.0～7.2。
45.羧甲基纤维素(cmc)鉴别培养基：cmc-na 7.5g，kh2po41.0 g，蛋白胨1.0g，酵母膏0.5g，mgso40.5 g，nacl 1.25g，琼脂20.0g，水1000ml，ph 7.0～7.2。
46.苯胺蓝(azure-b)培养基：5g酵母膏，10g胰蛋白胨，10g nacl，苯胺蓝0.1g，琼脂20g，蒸馏水1l。
47.液体发酵培养基：无机盐培养基中加入过40目筛的玉米秸秆粉(10.0g/l)。
48.无机盐培养基：kh2po
4 1.0g，nacl 0.5g，mgso4·
7h2o 0.3g，nano
3 2.5g，cacl
2 0.1g，(nh4)2so
4 1.2g，feso
4 0.01 0g，水100ml，ph 7.0～7.2。
49.种子培养基：nah2po4·
2h2o 2.0g，na2hpo4·
2h2o 4.0g，葡萄糖10.0g，mgso4·
7h2o 0.5g，蛋白胨10.0g，水1000ml，ph 7.0～7.2。
50.1.3试剂及配制方法
51.3,5-二硝基水杨酸(dns)试剂：称取3,5-二硝基水杨酸10.0g，置于约600ml水中，逐渐加入naoh l0.0 g，在50℃水浴中磁力搅拌溶解后，依次加入酒石酸钾钠200.0g、苯酚(重蒸)2.0g和无水亚硫酸钠5.0g，待全部溶解并澄清后，冷却至室温，用水定容至1000ml，过滤。贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置7d后使用。
52.0.05mol/l ph 4.8柠檬酸缓冲液：称取一水柠檬酸4.83g，溶于约750ml水中，在搅拌情况下，加入柠檬酸三钠7.94g，用水定容至1000ml，调节ph 4.8备用。
53.1.0％cmc-na溶液：称取2.0g cmc-na，精确至1.0mg，缓缓加入柠檬酸缓冲液约150ml并加热至80-90℃，边加热边磁力搅拌，直至cmc-na全部溶解，冷却后用相应的缓冲液稀释至200ml，用2.0mol/l hcl或naoh调节ph 4.8，定容到200ml，混匀贮存于4℃冰箱中备用。
54.1.4枯草芽孢杆菌z-14菌株纤维素酶活性定性检测
55.将枯草芽孢杆菌z-14菌株接种到nb培养基中，37℃振荡培养过夜，按照10％接种量接入到种子培养基中，37℃振荡培养48h。吸取1ml培养液10000r/min离心5min，上清液经孔径0.22μm亲水微孔滤膜过滤备用。在cmc鉴别培养基平板均匀打4个直径7mm的孔，吸取50μl无菌滤液加入孔中，每株菌做3个平行。37℃恒温孵育24h，倒入1.0g/l的刚果红溶液，染色1h后弃去刚果红，用1.0mol/l的nacl浸泡1h脱色，观察孔的周围水解圈产生情况。
56.水解圈如图1所示，可见，枯草芽孢杆菌z-14菌株纤维素酶活性较高，发酵上清液纤维素酶活性检测水解圈较大，直径达3.24cm。
57.菌株纤维素水解圈的大小在某种程度上代表了菌株产纤维素酶能力的强弱，为了进一步验证试验结果的可靠性，本研究采用连续取样的方式检测了发酵液纤维素酶及滤纸酶活性。
58.1.5枯草芽孢杆菌z-14菌株合成纤维素酶活性的定量检测
59.将枯草芽孢杆菌z-14菌株接种于nb培养基中37℃摇床振荡培养过夜，按10％的接种量(v/v)接种于液体发酵培养基中，25℃恒温培养，分别于培养3、5、7、9、11d时取5.0ml发酵液，8000r/min离心10min取上清液即粗酶液，以不接菌的空白发酵培养基作对照，测定其纤维素酶活力和滤纸酶活力。纤维素酶及滤纸酶活力的测定采用3,5-二硝基水杨酸(dns)法。
60.1.5.1葡萄糖含量标准曲线绘制
61.准确称取105℃下烘干至恒重的葡萄糖2.5g，精确至0.1mg，用蒸馏水定容至50ml，配置成50mg/ml葡萄糖标准贮备溶液。分别吸取葡萄糖标准贮备溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水定容至50ml，摇匀得到葡萄糖浓度分别为0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mg/ml的标准溶液。按表1分别吸取葡萄糖标准溶液、缓冲液和dns试剂于各管中(每管号作3个平行)，混匀。将试管置于沸水浴反应10min，迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至25ml混匀，540nm测量吸光度。以葡萄糖量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线得线性回归方程，线性回归系数应在0.9990以上时方可使用(否则须重做)。
62.表1葡萄糖标准曲线
[0063][0064]
所得葡萄糖含量标准曲线如图2所示。该标准曲线的回归方程为y＝0.166x－0.163，方差r2＝0.999，表明此曲线具有良好的线性关系。
[0065]
1.5.2纤维素酶活力的测定
[0066]
向25ml具塞试管中加入2.0ml以0.05mol/l ph 4.8的柠檬酸缓冲液配制的1.0％cmc-na溶液，50℃水浴预热5min。加入0.5ml枯草芽孢杆菌z-14菌株发酵上清液，摇匀，50℃反应30min后取出，迅速加入dns试剂3.0ml，放入沸水浴显色10min，取出后立即置于冰水中冷却至室温，用水定容至25.0ml，摇匀。以相同条件下沸水浴灭活5min的发酵上清液为空白，540nm测定其吸光度值，通过查1.5.1中的葡萄糖含量标准曲线求出还原糖的含量。
[0067]
酶活力单位的定义：在上述条件下，每毫升酶液在1min内催化底物生成1μmol葡萄糖所需要的酶量，即1u/ml。纤维素酶活力计算公式：
[0068]
x＝(5.56
×m×
n)/v
×
t；
[0069]
式中x，mc酶活力(u/ml)；
[0070]
m，吸光度在标准曲线上查得(或计算出)的葡萄糖量(mg)；
[0071]
n，酶液的稀释倍数；
[0072]
v，酶液体积(ml)；
[0073]
t，时间(min)；
[0074]
5.56为1mg葡萄糖的μmol数(1000/180＝5.56)。
[0075]
1.5.3滤纸酶活力的测定
[0076]
向25ml具塞试管加入50.0mg无淀粉新华滤纸和2.0ml 0.05mol/l ph 4.8的柠檬酸缓冲液，50℃水浴预热5min，加入枯草芽孢杆菌z-14菌株发酵上清液0.5ml，以相同条件下沸水浴灭活5min发酵上清液为空白对照，50℃水浴保温1h，立即向试管中加入3.0ml dns溶液，充分摇匀后沸水浴放置10min，立即冷却后用蒸馏水定容至25.0ml，充分混匀。540nm测定样品od值，在1.5.1中的葡萄糖标准曲线上查出相应的葡萄糖量，根据葡萄糖量计算出
pda培养基混合后倒平板。在含有3种病原菌的每个平板按照十字交叉的方法均匀打4个孔，其中3个孔放置50μl枯草芽孢杆菌无菌上清液，另外一个孔加入灭菌培养基作为阴性对照。将枯草芽孢杆菌z-14菌株接种到nb培养基中，37℃振荡培养过夜，按照10％接种量接入到种子培养基中，37℃振荡培养48h。吸取1ml培养液10000r/min离心5min，上清液经孔径0.22μm亲水微孔滤膜过滤即为无菌上清液。将平板放置26℃培养箱恒温培养过夜后，将平板倒置培养5～7d。观察抑菌圈或者抑菌带形成情况。
[0090]
检测结果表明，枯草芽孢杆菌z-14菌株对小麦全蚀病菌具有显著的抑制作用，抑菌带宽度达1.31cm(如图9所示)，对小麦纹枯病菌的抑菌带宽度为1.22cm(如图10所示)，对小麦根腐病菌具有显著的抑制活性，抑菌圈直径达2.11cm(如图11所示)。
[0091]
1.9枯草芽孢杆菌z-14菌株对秸秆腐解率检测
[0092]
选取粗细与长度接近的完整的玉米秸秆，裁成约2cm小段，称取40g秸秆(烘干重)，喷洒溶解有0.4g尿素的去离子水10ml，处理1组(t1)在秸秆均匀喷洒活菌含量1
×
107cfu/ml的枯草芽孢杆菌z-14悬液10ml，处理2组(t2)在秸秆均匀喷洒活菌含量2
×
107cfu/ml的枯草芽孢杆菌z-14悬液10ml，以喷洒去离子水为对照组(ck)。将秸秆装入40目尼龙网袋中，水平埋入约5～10cm土层(以覆土厚度5cm为准)。取样时间分别为埋后30、90、150d，每次取3个重复，取样后用水洗至无色，烘干后称重，计算秸秆的腐解率。秸秆腐解率％＝秸秆腐解后干质量/腐解前干质量。
[0093]
结果如表2所示：
[0094]
表2枯草芽孢杆菌z-14菌株对秸秆降解率的影响
[0095][0096]
注：表中数据为平均数
±
标准差。同列数据后不同字母表示同一检测时间下不同处理组的数据经lsd法检验在p《0.05水平差异显著。
[0097]
结果表明，秸秆腐熟30d，和不添加菌剂的ck处理相比，添加菌剂的t1和t2处理对秸秆的降解作用显著提高，同时t2处理对秸秆的降解作用高于t1处理，表明增加菌剂的施用量可以提高秸秆降解率，但两者之间差异不显著。t2处理秸秆降解率最高，达52.23％。利用枯草芽孢杆菌z-14菌株腐熟玉米秸秆90d后，和对照相比，秸秆降解率显著提高，t2处理高于t1处理，但两者之间差异不显著。枯草芽孢杆菌处理150d后，t2处理秸秆的降解率最高，其次为t1处理，和ck组比较差异显著。试验结果表明，枯草芽孢杆菌z-14菌株显著提高了玉米秸秆的降解率，提高菌剂接种剂量，秸秆降解率也显著提高。
[0098]
1.10枯草芽孢杆菌z-14菌株促进玉米秸秆腐熟的田间效果试验
[0099]
试验地点为河北省保定市河北农业大学实验农场，地势平坦，水浇条件良好。玉米
秸秆机械粉碎后全量还田，试验共设3个处理，每个处理666.7m2。处理1，人工收获玉米后将秸秆清理干净，基施复混肥料60kg/亩，翻地时将肥料翻压到地下；处理2：玉米机械收获，秸秆粉碎至粒径小于2cm，基施复混肥料60kg/亩，翻地时将打碎的秸秆和肥料一起翻压到地下；处理3，玉米机械收获，秸秆粉碎至粒径小于2cm，每亩地喷施活菌含量为1
×
109cfu/ml的枯草芽孢杆菌z-14液体菌剂20l，基施复混肥料60kg/亩，翻地时将菌剂同打碎的秸秆和肥料一起翻压到地下。翻地后第5天，种植小麦，之后统一管理。其中，各处理组基施的复混肥料相同，n:p2o5:k2o＝15:15:15，总养分≥45％；处理2和处理3组的秸秆量相同，均为4000斤/亩。
[0100]
在小麦乳熟期，取样测定穗数、穗粒数、千粒重，根据所取植株总产量折合亩产，分析秸秆还田及枯草芽孢杆菌z-14菌株对小麦产量的影响，结果如表3所示。
[0101]
表3不同处理对小麦产量的影响
[0102][0103]
注：表中数据为平均数
±
标准差。同列数据后不同字母表示同一检测指标、不同处理组的数据经lsd法检验在p《0.05水平差异显著。
[0104]
结果表明，和处理1相比，处理2和处理3小麦的穗数、穗粒数、千粒重和产量均有增加，其中穗数、穗粒数和千粒重增加不显著，处理3小麦相较于处理1产量增加显著。和处理1比较，处理2小麦产量达到830.09g/m2，增产6.54％；处理3小麦产量为873.63g/m2，增产12.12％。和处理2比较，处理3小麦产量增产5.25％，以上结果表明秸秆还田配施枯草芽孢杆菌z-14可以通过提高有效分蘖数、穗粒数和籽粒重来提高产量，作用效果显著。
[0105]
1.11土壤理化性质和酶活力检测
[0106]
在1.10中的小麦收获时，采用5点取样法收集各处理5～10cm深度土壤。用2.5:1(质量比)的水土比浸提法测土壤ph，土壤有机质测定采用重铬酸钾容量法，全氮测定采用凯氏定氮法，碱解氮测定采用碱扩散法，速效磷测定采用碳酸氢钠溶解钼锑抗比色法，有效钾测定采用乙酸铵溶解火焰光度计法。脲酶活性检测采用苯酚钠—次氯酸钠比色法：以24h后1g土壤中nh
3-n的毫克数表示；碱性磷酸酶活性检测采用磷酸苯二钠比色法：以24h后1g土壤中释出的酚的质量(mg)表示；纤维素酶活性检测采用3,5-硝基水杨酸比色法：以72h，1g干土生成葡萄糖毫克数表示；过氧化氢酶活性检测采用高锰酸钾滴定法：以每g干土1h内消耗的0.1mol/l kmno4体积数(以ml计)表示。土壤理化性质检测结果如表4所示，土壤生物酶活性检测结果如表5所示。
[0107]
表4不同处理对土壤理化性质的影响
[0108][0109]
注：表中数据为平均数
±
标准差。同列数据后不同字母表示同一检测指标、不同处理组的数据经lsd法检验在p《0.05水平差异显著。
[0110]
表5不同处理对土壤酶活力的影响
[0111][0112]
注：表中数据为平均数
±
标准差。同列数据后不同字母表示同一检测指标、不同处理组的数据经lsd法检验在p《0.05水平差异显著。
[0113]
土壤理化性质检测结果表明，秸秆还田增加了土壤全氮、碱解氮、速效磷、速效钾、有机质含量，效果显著。枯草芽孢杆菌z-14的施用进一步增加了土壤碱解氮、速效磷和速效钾的含量，其中速效磷和ph变化显著。全氮和有机质有所下降，但差异不显著。表明枯草芽孢杆菌z-14的施用促进了秸秆的降解以及营养成分的释放，效果显著。
[0114]
土壤生物酶活性检测结果表明，秸秆还田增加了土壤脲酶、纤维素酶和过氧化氢酶活性，效果显著。枯草芽孢杆菌z-14的施用进一步增加了土壤脲酶、纤维素酶和过氧化氢酶活性，和没有添加菌剂的处理2相比，纤维素酶和过氧化氢酶差异显著。处理3和没有进行秸秆还田的处理1相比，脲酶活性增加22.30％，纤维素酶活性增加36.88％，过氧化氢酶活性增加53.26％，说明枯草芽孢杆菌z-14的施用显著增加了土壤酶活性。
[0115]
实施例2
[0116]
本实施例提供了一种促进农作物秸秆腐熟的方法：
[0117]
将秸秆粉碎至粒径小于2cm后，每1kg秸秆喷洒250ml 40mg/ml的尿素水溶液，再喷洒250ml活菌含量1
×
107～2
×
107cfu/ml的枯草芽孢杆菌z-14菌株菌悬液，发酵30天以上。
[0118]
实施例3
[0119]
本实施例提供了一种液体菌剂，该菌剂为含有枯草芽孢杆菌z-14活菌株的液体制剂，活菌含量为1
×
109～2
×
109cfu/ml。
[0120]
实施例4
[0121]
本实施例提供了一种秸秆还田的方法，将秸秆粉碎至粒径小于2cm，每亩(秸秆用量为3000～5000斤/亩)喷施实施例3中的液体菌剂20l后，与基施复混肥料(n:p2o5:k2o＝15:15:15；总养分≥45％，用量为60kg/亩)共同翻压到地下，3～7天后种植作物。
[0122]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精
神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。