用于构建LMNA基因突变的扩张型心肌病模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用的制作方法

技术特征：
1.用于构建lmna基因突变的基因编辑系统，其特征在于包含cas9蛋白、lmna-t7-grna1、lmna-t7-grna3；所述的lmna-t7-grna1的转录模板如seq id no.24所示，lmna-t7-grna3的转录模板如seq id no.25所示。2.根据权利要求1所述的基因编辑系统，其特征在于还包含核苷酸序列如seq id no.26所示单链dna作为donor dna。3.根据权利要求1所述的基因编辑系统，其特征在于所述的cas9蛋白的核苷酸序列如seq id no.4中第5701-9801位核苷酸所示。4.根据权利要求3所述的基因编辑系统，其特征在于所述的cas9蛋白由seq id no.4所示的pkg-ge4质粒转化入大肠杆菌表达菌株bl21(de3)，经iptg诱导表达后对菌体粗提、ni-nta琼脂糖柱纯化获得融合蛋白trxa-his-ek-nls-spcas9-nls，并经带his标签的重组牛肠激酶(ek)酶切该融合蛋白，最后分离纯化cas9蛋白所得。5.根据权利要求4所述的基因编辑系统，其特征在于所述的基因编辑系统中cas9蛋白：lmna-t7-grna1：lmna-t7-grna3的质量比为4:1:1。6.权利要求1-5中任一项所述的基因编辑系统在制备lmna基因突变的猪重组细胞中的应用。7.一种重组细胞，其特征在于由权利要求1～5中任一项所述的基因编辑系统共转染猪原代成纤维细胞经验证后所得。8.权利要求7所述的重组细胞在构建lmna基因突变的扩张型心肌病模型猪中的应用。9.一种表达cas9蛋白的pkg-ge4质粒，其特征在于质粒全序列如seq id no.4所示。10.一种cas9蛋白，其特征在于由权利要求9所述的pkg-ge4质粒转化入大肠杆菌表达菌株bl21(de3)，经iptg诱导表达后对菌体粗提、ni-nta琼脂糖柱纯化获得融合蛋白trxa-his-ek-nls-spcas9-nls，并经带his标签的重组牛肠激酶酶切该融合蛋白，最后分离纯化cas9蛋白所得。

技术总结
本发明公开了用于构建LMNA基因突变的扩张型心肌病模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。用于构建LMNA基因突变的基因编辑系统，其特征在于包含Cas9蛋白、LMNA-T7-gRNA1、LMNA-T7-gRNA3；所述的LMNA-T7-gRNA1的转录模板如SEQ ID NO.24所示，LMNA-T7-gRNA3的转录模板如SEQ ID NO.25所示；所述的基因编辑系统还包含核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示的单链DNA作为Donor DNA。利用本发明所得到的靶基因突变单细胞克隆株进行体细胞核移植动物克隆可直接得到含靶标基因纯合突变的克隆猪，并且该纯合突变可稳定遗传。并且该纯合突变可稳定遗传。并且该纯合突变可稳定遗传。


技术研发人员：牛冬 汪滔 陶裴裴 曾为俊 王磊 程锐 赵泽英 马翔 黄彩云
受保护的技术使用者：南京启真基因工程有限公司
技术研发日：2021.03.01
技术公布日：2022/9/1