一种用于治疗I型单纯疱疹病毒感染的外用药物组合物及其用途的制作方法

一种用于治疗i型单纯疱疹病毒感染的外用药物组合物及其用途
技术领域
1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于治疗i型单纯疱疹病毒感染的外用药物组合物及其用途。


背景技术：

2.单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，hsv)是一种嗜神经性的双链dna包膜病毒，分2个血清型，即i型(hsv-1)和ⅱ型(hsv-2)。hsv可以引起脑炎、角膜炎、口腔粘膜炎、生殖器疱疹等多种感染，在健康人群中约有90％携带hsv-1，其中有40％正遭受病毒的感染的痛苦。单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,hsk)是主要由hsv-1型感染眼部所引起的角膜炎，占角膜病的首位，因其高复发率、高致盲率而被国内外公认为最常见的致盲眼病之一。据调查，在我国，角膜盲是仅次于白内障盲居第二位，而hsk盲为角膜盲首位，约占42.85％；在发达国家的发病率为每年5.9/10
5-20.7/105，患病率为149/105。hsv-1初次感染后往往引起眼睑炎及角膜结膜炎，并且病毒易潜伏在局部神经节，主要为三叉神经节(tg)，日后当免疫功能低下，如感冒、劳累、不恰当地应用皮质内固醇激素以及免疫抑制剂时，会导致病毒被从新激活，产生复发性的hsk。有学者统计，其3年的复发率可达到33.5％。近年来，由于抗生素和皮质类固醇的广泛应用，hsk发病率有逐渐增高趋势。
3.临床上常用的抗hsv药物有阿昔洛韦、喷昔洛韦,更昔洛韦等核苷类抗病毒药物，其作用途径主要是抑制病毒复制过程中重要酶的活性，特异性干扰其中某一阶段，从而中止病毒复制和侵染宿主细胞。但是，目前存在的几十种核苷药物存在许多缺陷，如生物利用度低、溶解度小并在体内迅速失效及潜在致畸等副作用，虽有少数核苷药物经改造表现出高效低毒的特征，但长期服用可产生耐药性。临床使用的抗疱疹药物不能根除hsv-1，易复发的问题不能得到根本解决，由于抗病毒药物大量使用而产生的hsv-1耐药性仍然是i型单纯疱疹病毒感染(特别是hsk)治疗中的难题。因此，联合用药或可成为有效控制i型单纯疱疹病毒感染以及治疗hsk的方法。
4.基于不同药物机制或者不同靶点的联合抗病毒，或可成为有效控制i型单纯疱疹病毒感染以及治疗hsk的方法，或抗病毒活性明显大于单药使用。以阿昔洛韦和更昔洛韦为代表的核苷类抗病毒药物主要机制是抑制病毒dna的合成。但是，目前尚无文献或专利报道阿托品和核苷类抗病毒药物联合协同用药。该种协同并非简单药物效果叠加，而是“1 1》2”。该部分理论构成本发明的研究理论基础和背景。


技术实现要素：

5.为了克服现有技术中存在的缺陷，本发明提供了一种用于治疗i型单纯疱疹病毒感染的外用药物组合物及其。本发明所述外用药物组合物包含活性成分阿托品和选择性抗病毒药物。
6.为了实现上述目的，本发明通过以下方案予以实现：
7.在第一个方面中，本发明提供了一种用于治疗i型单纯疱疹病毒感染的外用药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的阿托品和选择性抗病毒药物，所述阿托品和所述选择性抗病毒药物之间具有协同增效作用。
8.在第二个方面中，本发明提供了一种用于治疗由i型单纯疱疹病毒感染引起的疾病的外用药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的阿托品和选择性抗病毒药物，所述疾病选自角膜炎、口腔粘膜炎、皮肤疱疹、唇疱疹或生殖器疱疹，所述阿托品和所述选择性抗病毒药物之间具有协同增效作用。
9.优选地，所述疾病是由i型单纯疱疹病毒感染引起的角膜炎。
10.作为可选的方式，在上述外用药物组合物中，其中所述选择性抗病毒药物选自以下一种或多种：阿昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、西多福韦、膦甲酸钠或福米韦林或其药学上可接受的盐。
11.优选地，所述选择性抗病毒药物是阿昔洛韦。
12.作为可选的方式，在上述外用药物组合物中，所述阿托品和所述选择性抗病毒药物的重量比为5:1-1:30。
13.优选地，所述阿托品和所述选择性抗病毒药物的重量比为1:1-1:20。更优选地，所述阿托品和所述选择性抗病毒药物的重量比为1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8、1：9、1：10、1：11、1：12、1：13、1：14、1：15、1：16、1：17、1：18、1：19或1：20。
14.在第三个方面中，本发明提供了一种外用药物制剂，所述外用药物制剂包含上述第一个方面或上述第二个方面所述的外用药物组合物，以及药学上可接受的载体。
15.作为可选的方式，在上述外用药物制剂中，所述药物制剂的剂型为滴眼剂、眼膏剂、眼用注射剂、喷雾剂或凝胶剂。
16.优选地，所述外用药物制剂为眼用制剂。
17.在第四个方面中，本发明提供了上述第一个方面或第二个方面所述的外用药物组合物或者上述第三个方面所述的外用药物制剂在制备治疗i型单纯疱疹病毒感染的外用药物中的用途。
18.在第五个方面中，本发明提供了上述第一个方面或第二个方面所述的外用药物组合物或者上述第三个方面所述的外用药物制剂在制备治疗由i型单纯疱疹病毒感染引起的疾病的外用药物中的用途。
19.作为可选的方式，在上述用途中，所述疾病选自角膜炎、口腔粘膜炎、皮肤疱疹、唇疱疹或生殖器疱疹。
20.优选地，所述疾病是由i型单纯疱疹病毒感染引起的角膜炎。
21.本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：
22.本发明提供了一种用于治疗i型单纯疱疹病毒感染的外用药物组合物及其用途。实验结果表明，相比于单一组分，药物组合物产生了协同效应，即“1 1》2”，并非简单相加。本发明所提供的外用药物组合物在治疗i型单纯疱疹病毒感染引起的疾病(特别是，角膜炎、口腔粘膜炎、皮肤疱疹、唇疱疹或生殖器疱疹)时，具有协同增效作用，与单一组分使用疗效相比，组合物可以显著增加疗效。
附图说明
23.图1：梯度浓度协同结果。
具体实施方式
24.下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。
25.实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
26.下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
27.效果实施例：
28.效果实施例1：体外抗hsv-1活性
29.(1)实验方法
30.样品体外抗hsv-1活性由细胞病变(cpe)实验测定。阿托品和阿昔洛韦测试8个浓度，三复孔。同时测定阿托品和阿昔洛韦对vero细胞的毒性。测试浓度见表1。
31.表1测试浓度
[0032][0033]
病毒实验方法总结见表2。
[0034]
表2抗病毒活性实验方法
[0035][0036][0037]
将vero细胞以10,000个细胞每孔的密度接种到96孔细胞培养板中并于5％co2、37℃培养箱中培养。第二天加入倍比稀释的药物活性成分和病毒，设置细胞(无病毒感染)和病毒感染对照。细胞培养dmso终浓度为0.5％。细胞于37℃、5％co2培养箱中培养5天、至病毒对照孔细胞病变率达80-95％。细胞毒性实验与抗病毒实验相同，但无病毒感染。使用cck-8试剂检测细胞活力，原始数据用于药物活性成分抗病毒活性和细胞毒性计算。样品的抗病毒活性和细胞毒性分别由不同浓度下的样品对病毒引起的细胞病变效应的抑制率(％)和细胞的活率(％)表示。计算公式如下：
[0038]
抑制率(％)＝(测试孔读值-病毒对照平均值)/(细胞对照平均值-病毒对照平均值)
×
100％
[0039]
细胞活率(％)＝(测试孔读值-培养液对照平均值)/(细胞对照平均值-培养液对照平均值)
×
100％
[0040]
使用graphpad prism(version 5)对样品的抑制率和细胞活率进行非线性拟合分析，计算样品的半数有效浓度(ec
50
)和半数细胞毒性浓度(cc
50
)值。在软件中选择拟合公式为“log(inhibitor)vs.response
‑‑
variable slope”。
[0041]
(2)实验结果
[0042]
表3体外抗hsv-1活性实验结果
[0043][0044]
分析：表3结果显示，阿托品比阿昔洛韦具有更好的药物安全性(cc
50
)，但对hsv-1的抑制活性阿托品比阿昔洛韦低得多(ec
50
)。从表3中还可以看出，阿托品单用对hsv-1几乎没有抑制hsv-1的作用。
[0045]
效果实施例2：体外联合抗hsv-1药效评价
[0046]
(1)实验方法
[0047]
该实验的评价原理基于文献(prichard,m.n.and c.shipman,jr.1990.(review)a three-dimensional model to analyze drug-drug interactions.antiviral res.14:181-206.)。
[0048]
将vero细胞以以每孔10,000个细胞的密度接种于96孔细胞板内，于37℃、5％co2培养箱中培养过夜。第二天，阿托品和阿昔洛韦分别2倍梯度稀释7个浓度，以棋盘格方式组合排布于一块96孔板上，同一组合做三复板，每块板都设单药对照。化合物测试浓度分别为8
×
ec
50
，4
×
ec
50
，2
×
ec
50
，1
×
ec
50
，0.5
×
ec
50
，0.25
×
ec
50
和0.125
×
ec
50
(参见体外抗hsv-i活性实验结果)。随后加入病毒hsv-1ghsv-ul46。设置细胞对照(细胞，无病毒感染或化合物处理)和病毒对照(细胞感染病毒，无化合物处理)。细胞培养液中dmso终浓度为0.5％。细胞于37℃、5％co2培养箱中培养5天。细胞毒性实验条件与抗病毒实验相同，但无病毒感染。使用cck-8试剂检测细胞活力，原始数据用于化合物抗病毒活性和细胞毒性计算。
[0049]
化合物的抗病毒活性和细胞毒性分别由化合物对病毒引起的cpe的抑制率(％)和细胞活率(％)表示。计算公式如下：
[0050]
抑制率(％)＝(测试孔读值-病毒对照平均值)/(细胞对照平均值-[0051]
病毒对照平均值)
×
100
[0052]
细胞活率(％)＝(测试孔读值-培养液对照平均值)/(细胞对照平均值-培养液对照平均值)
×
100
[0053]
应用macsynergy软件分析阿托品和阿昔洛韦对单纯疱疹病毒hsv-1ghsv-ul46联合药效。
[0054]
表4协同浓度梯度表
[0055][0056]
(2)实验结果
[0057]
表5体外联合抗hsv-1药效评价结果
[0058][0059]
梯度浓度协同结果见图1，正值代表协同倍数。
[0060]
分析：表5和图1结果显示，与单药相比，阿托品和阿昔洛韦联合使用对hsv-1存在强协同效果，协同倍数达到了175倍。
[0061]
制剂实施例：
[0062]
实施例1
[0063]
取阿托品0.01g，加入阿昔洛韦0.1g，并加注射用水至100ml，缓缓搅拌使之溶解，制成滴眼液。
[0064]
实施例2
[0065]
取阿托品0.05g，加入阿昔洛韦0.1g，并加注射用水至100ml，缓缓搅拌使之溶解，制成滴眼液。
[0066]
实施例3
[0067]
取阿托品0.05g，加入阿昔洛韦0.1g，并加注射用水至100ml，缓缓搅拌使之溶解，装入喷雾器，制成喷雾剂。
[0068]
实施例4
[0069]
取阿托品0.02g，加入阿昔洛韦0.1g，并加凡士林：液体石蜡：羊毛脂＝8:1:1(共100g)，缓缓搅拌，制成软膏剂。
[0070]
综上所述，本发明提供了一种用于治疗i型单纯疱疹病毒感染的外用药物组合物及其用途。实验结果表明，相比于单一组分，药物组合物产生了协同效应，即“1 1》2”，并非简单相加。本发明所提供的外用药物组合物在治疗i型单纯疱疹病毒感染引起的疾病(特别是，角膜炎、口腔粘膜炎、皮肤疱疹、唇疱疹或生殖器疱疹)时，具有协同增效作用，与单一组分使用疗效相比，组合物可以显著增加疗效。
[0071]
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，根据已经公开的所有教导，本领域的技术人员可以对本发明技术方案的细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部保护范围由所附权利要求及其任何等同物给出。