一种用于治疗女性阴道松弛及压力性尿失禁的冷敷凝胶及其制备方法与流程

1.本发明涉及医药制备技术领域，更具体的说是涉及一种用于治疗女性阴道松弛及压力性尿失禁的冷敷凝胶及其制备方法。


背景技术：

2.女性盆底功能障碍性疾病(pfd)是妇科常见病，临床表现为压力性尿失禁(sui)、阴道松弛(vl)、盆腔器官脱垂(pop)及女性性功能障碍(fsd)等，严重影响中老年女性的健康及生活质量。我国sui的发病率为22.9％。美国相关权威机构表示近年美国sui的发病率高达25％，其中表现为pop以及大、小便失禁的患者依次为2.9％、9.4％以及17.1％。近年来pfd备受关注全球大部分国家开始重视该疾病，大部分国家已将女性健康作为评估公共卫生水平的一项不可或缺的硬性指标，我国也已将预防女性pfd等工作作为政府的主要工作之一。
3.盆底功能障碍最常见的症状就是阴道松弛和压力性尿失禁，现有的治疗技术有保守治疗、药物治疗、手术治疗三种方案。
4.(1)保守治疗为盆底肌训练治疗，包括以下三种方法：
5.①
自主锻炼：通过自主的、反复的盆底肌肉群的收缩和舒张，增强支持尿道、膀胱、子宫和直肠的盆底肌张力，增加尿道阻力、恢复盆底肌功能，达到预防和治疗尿失禁的目的。但盆底肌训练必须进行规范的训练和长时间的坚持才可能有效。
6.②
生物电反馈：借助置于阴道或直肠内的电子生物反馈治疗仪，监视盆底肌肉的肌电活动，指导患者进行正确的、自主的盆底肌肉训练，并形成条件反射，疗效与单纯盆底肌肉训练相当。
7.③
电刺激治疗：电流反复刺激盆底神经和肌肉，增加盆底肌的收缩力，反馈抑制交感神经反射，降低膀胱活动度。但心脏起搏器、妊娠、重度盆腔器官脱垂、阴道炎和出血为禁忌证，不可采用此方法。
8.(2)药物治疗主要作用原理在于增加尿道关闭压，目前常用药物有以下几种：
9.①
选择性αl
‑
肾上腺素受体激动剂：对sui有效，尤其同时使用雌激素或盆底肌训练等方法时疗效较好。常用药物：盐酸米多君片。副作用有高血压、心悸、头痛、肢端发冷，严重者可出现脑中风。
10.②
雌激素：促进尿道黏膜、黏膜下血管丛及结缔组织增生；增强α肾上腺素能受体的数量和敏感性。口服雌激素不能减少尿失禁，且有诱发和加重尿失禁的风险。阴道局部使用雌激素对sui有益。
11.(3)手术治疗主要针对严重影响生活质量的pop伴有sui需行盆底重建术者，应同时行抗sui手术。主要的手术方式有：
12.无张力尿道中段悬吊术、耻骨后库柏韧带悬吊(burch)术。并发症包括：膀胱穿孔、出血、排尿困难、对置入吊带的排斥反应或延迟愈合，吊带侵蚀人尿道或阴道，肠穿孔，感染
等。
13.但以上方法均存在一定缺陷，具体为：
14.盆底肌自主锻炼：通过锻炼来恢复盆底肌功能，是需要长期坚持，累积到变量才具有一定效果。因此，此方式时间性长，依从性差，效果不理想。
15.生物电反馈、肌肉电刺激：盆底功能障碍是长期康复的过程，此法必须在医疗机构治疗，依从性差，效果不理想。
16.药物治疗：目前临床用于治疗该疾病的药物只有2类：αl
‑
肾上腺素受体激动剂、雌激素，可选择药物少，且副作用大，单一作用机制改善盆底肌功能，效果不理想。
17.手术治疗：
①
手术创伤较大；
②
松紧度不易掌握，技术要求高；
③
并发症发生率较高；
④
手术操作时间长；
⑤
费用高。
18.因此，如何提供一种效果好、无副作用、实施方便的治疗女性阴道松弛及压力性尿失禁的药物是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

19.有鉴于此，本发明提供了一种用于治疗女性阴道松弛及压力性尿失禁的冷敷凝胶及其制备方法，本发明中各组份合理搭配，制备过程极大保留有效成分，有效成分直接相互协同相互促进，通过阴道给药后的黏膜吸收，促进盆底肌肉组织的收缩，修复肌神经，提升肌肉的张力，实现盆底功能障碍的治疗，对改善因盆底损伤导致的压力性尿失禁具有显著的效果。
20.为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
21.一种用于治疗女性阴道松弛及压力性尿失禁的冷敷凝胶，包括以下有效成分：莪术提取物、补骨脂、铁皮石斛水提物、大豆异黄酮、乳香酸、水解交联胶原蛋白、纤维粘连蛋白。
22.采用上述技术方案的有益效果：
23.盆底肌松弛主要原因是受机械力的影响，成纤维细胞会急剧凋亡，进而导致成纤维细胞数量不断变少，分泌相关胶原蛋白、酶、egfr生长因子以及雌激素等减少，支持组织结构和功能得幅度减弱。而本发明冷敷凝胶的组方主要成分为：莪术提取物、补骨脂、铁皮石斛水提物、大豆异黄酮、乳香酸、水解交联胶原蛋白、纤维粘连蛋白。其技术要点为针对盆底肌松弛从以下几个方面进行修复盆底肌功能：
24.(1)促进成纤维细胞分裂增殖，加快分泌自身胶原蛋白，使盆底肌恢复弹性，从而恢复盆底肌组织结构和功能；
25.(2)有效调控egfr蛋白的表达，从而起到促进c2c12细胞增殖的作用，对被拉伸损失的盆底肌群起到修复作用；
26.(3)通过促进雪旺细胞和胶质细胞ngf/bdnf等因子分泌来保护及修复神经损伤；
27.(4)促进阴道壁收缩，及通过透皮吸收进入盆底微循环使盆底肌收缩；
28.(5)本发明采用植物雌激素替代雌激素：雌激素作为一种重要性激素，具有广泛而重要的生理作用，它既能参与各种疾病的发生发展，又能作为治疗疾病的手段。但雌激素犹如一把双刃剑，人类在选择雌激素作为治疗药物的同时，又不得不承受其带来的大量不良反应。因此，既具有雌激素作用，又不引起严重不良反应的植物雌激素为疾病的治疗带来了
新的希望。从中药补骨脂中提取出的活性成分补骨脂素，大豆异黄酮等，有着雌激素样作用，在盆底肌修复及改善压力性尿失禁的效用虽不如雌激素明显，但将其作为轻度症状者的治疗药物或与其他药物联合使用均具有良好前景。
29.本发明冷敷凝胶的作用原理为：
30.(1)莪术提取物的功能为促进阴道壁收缩，及通过透皮吸收进入盆底微循环使盆底肌收缩，有助于恢复阴道壁及盆底肌的弹性支撑结构功能。莪术提取物具有α肾上腺素受体激动剂的功能，可以促进阴道壁及盆底肌的收缩，达到改善阴道及盆底肌功能的效果。同时莪术提取物具有m胆碱受体激动功能，进一步强化阴道及盆底肌的收缩作用。
31.(2)补骨脂含多种活性成分，如香豆素类的补骨脂素、异补骨脂索、补骨脂酊，黄酮类成分补骨脂乙素，单帖酚炎成分补骨脂酚等，具有雌激素样作用。黄芪含黄、香索、b
‑
谷甾醇等，具有促雌激素作用。即能对垂体
‑
性腺功能有促进作用，亦能提高机休雌激素水乎。从而促进阴道、尿道黏膜的修复，改善道内在括约机能，使阴道、尿道闭合力升高，达到缩阴和尿禁的效果。
32.(3)铁皮石斛水提物能够有效调控egfr蛋白的表达，从而起到促进c2c12细胞增殖的作用。利用盆底骨骼肌组织离体孵育实验体系，我们用含有铁皮石斛水提物的缓冲液对盆底骨骼肌组织进行孵育处理。通过实验，我们发现与对照组相比，骨骼肌组织经过铁皮石斛水提物处理后其egfr表达量显著上调。铁皮石斛提取物通过透皮吸收进入微循环作用于盆底肌群，对被拉伸损失的盆底肌群具有修复作用。
33.(4)大豆异黄酮(soyaisoflavones.sif)是一种天然植物雌激素(phytoestrogen pe)。大豆异黄酮与雌激素分子结构相似，具有与女性体内雌激素竞争结合雌激素受体，从而体内雌激素水平保持平衡。当女性超过35岁以后就出现体内雌激素水平的下降，青春活动受到影响。而适量外源性补充大豆异黄酮可以改善阴道及盆底肌松弛等症状。
34.(5)乳香中的乳香酸具有神经保护作用，其作用是通过刺数细胞分泌神经营养因子g保护神经；乳香具有通过促进轴突生长修复神经损伤的作用。
35.(6)纤维粘连蛋自与水解胶原蛋白都是细胞外基质成分，存在于细胞的间质中，纤维粘连蛋白和较原蛋白联合使用，可以促进肌纸胞分泌胶原等细胞外基质蛋白，使阴道及盆底肌恢复弹性，从而恢复阴道和盆底肌组织结构和功能。
36.以上成分可起到协同作用，如：通过大豆异黄酮的类雌激素的作用，可以进一步提高α肾上腺素受体的敏感度，强化莪术提取物对阴道及盆底肌收缩的刺激作用。铁皮石斛水提物能够有效调控egfr蛋白的表达，进一步促进肌细胞分泌胶原等细胞外基质蛋白等。补骨脂含多种活性成分和大豆异黄酮，为不同类型植物雌激素可起到协同效果等。
37.优选的，在上述冷敷凝胶中，包括以下有效成分：莪术提取物0.3％
‑
1.6％、补骨脂0.5％
‑
2％、铁皮石斛水提物0.5％
‑
2％、大豆异黄酮0.03％
‑
0.6％、乳香酸0.03％
‑
0.6％、水解交联胶原蛋白0.08％
‑
1.2％、纤维粘连蛋白0.01％
‑
0.15％。
38.优选的，在上述冷敷凝胶中，还包括以下辅料：卡波姆0.1％
‑
1％、甘油1％
‑
10％、丙二醇1％
‑
10％、尼泊金甲酯0.04％
‑
0.4％、尼泊金丙酯0.04％
‑
0.4％、三乙醇胺0.15％
‑
1.5％、去离子水补充至100％。
39.本发明采用丙二醇作为渗透促进剂。渗透促进剂是指既能可逆地改变皮肤角质层的屏障功能，又不损伤任何活性细胞的化学物质。理想的渗透促进剂应具有以下特性：
①
具
有化学惰性、化学稳定性，无药理活性；
②
可逆地改变皮肤特性，起效快；
③
与药物和基质无配伍禁忌；
④
无毒，无刺激性，无过敏性，无变态反应；
⑤
无色，无味，无嗅；
⑥
在皮肤上易于铺展，无不适感，与皮肤有良好的相容性。本发明还研究了渗透促进剂
‑
丙二醇在透皮给药系统中释放的情况，发现该渗透促进剂的释放符合higuchi公式，并且释放速率与渗透促进剂摩尔体积的立方根以及基质和接受液间分配系数的对数成反比，基质的种类对释放速率的影响较小，采用丙二醇作为本发明的渗透促进剂是最优选。
40.本发明还提供了上述一种用于治疗女性阴道松弛及压力性尿失禁的冷敷凝胶的制备方法，包括以下步骤：
41.(1)按配比称取相应质量的莪术提取物、补骨脂、铁皮石斛水解物、乳香酸和大豆异黄酮，用丙二醇将各组份原料分散均匀，即得混合物a；
42.(2)称取相应质量的卡波姆粉末和水解胶原蛋白，加入去离子水中，然后加入甘油，升到60
‑
90℃充分搅拌溶解，即得混合物b；
43.(3)待混合物b的温度降为35
‑
50℃时，边搅拌边加入纤维粘连蛋白、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯，即得混合物c；
44.(4)在35
‑
50℃条件下将a、c混合搅拌均匀，均质3
‑
6min，1000
‑
1500转/min，即得混合物d；
45.(5)将三乙醇胺加入混合物d中充分搅拌均匀，即得所述冷敷凝胶。
46.优选的，所述莪术提取物的提取工艺为：以莪术油为原料，经硅胶柱层析，以石油醚洗脱后，收集乙酸乙酯洗脱部分，经真空回收乙酸乙酯后所得的棕黄色油状物即为莪术提取物。
47.优选的，所述石斛水提取物的提取工艺为：首先使用粉碎机将铁皮石斛进行粉碎处理，按照料液比1∶30，温度80
±
10℃热水浸出1小时后，使用双层医用纱布进行过滤处理，滤渣保留，按照1∶30、1∶20、1∶10的料液比反复热水浸出3次，之后将全部滤液合并后做离心处理，取上清液；减压浓缩至原液体积的1/6
‑
1/8后，放入冰箱
‑
20℃冷冻处理；使用真空冷冻干燥机对冷冻后的浓缩液进行冷冻干燥，得到干燥铁皮石斛提取物，含水率低于2.5％。
48.与现有技术相比，本发明解决了以下问题：
49.(1)对植物雌激素的优选，解决了现有临床常用药物的副作用问题。本发明采用植物雌激素替代雌激素，且用药途径为阴道给药，经过阴道粘膜透皮吸收。雌激素作为一种重要性激素，具有广泛而重要的生理作用。它既能参与各种疾病的发生发展，又能作为治疗疾病的手段。但雌激素犹如一把双刃剑，人类在选择雌激素作为治疗药物的同时，又不得不承受其带来的大量不良反应。因此，既具有雌激素作用，又不引起严重不良反应的植物雌激素为疾病的治疗带来了新的希望。从中药补骨脂中提取出的活性成分补骨脂素，大豆异黄酮等，有着雌激素样作用，在盆底肌修复及改善压力性尿失禁的效用虽不如雌激素明显，但将其作为轻度症状者的治疗药物或与其他药物联合使用均具有良好前景。
50.(2)渗透促进剂的优选，既能可逆地改变皮肤角质层的屏障功能，又不损伤任何活性细胞的化学物质：
①
具有化学惰性、化学稳定性，无药理活性；
②
可逆地改变皮肤特性，起效快；
③
与药物和基质无配伍禁忌；
④
无毒，无刺激性，无过敏性，无变态反应；
⑤
无色，无味，无嗅；
⑥
在皮肤上易于铺展，无不适感，与皮肤有良好的相容性。
51.(3)解决了目前临床常用药物疗效不理想的问题：
①
选择性αl肾上腺素受体激动
剂：通过激活尿道平滑肌αl肾上腺素受体及躯体运动神经元，增加尿道阻力，有效率约30％。
②
雌激素：促进尿道黏膜、黏膜下血管丛及结缔组织增生；增强α肾上腺素能受体的数量和敏感性。口服雌激素不能减少尿失禁，且有诱发和加重尿失禁的风险。
52.(4)解决依从性问题：
①
盆底肌训练的治疗方式应达到相当的训练量才可能有效，存在依从性差、训练技巧不易掌握的缺点；
②
临床常用药物α1肾上腺素受体激动剂、雌激素因不良反应较大，不建议长期大量使用患者依从性不高。本发明冷敷凝胶，看在医生指导下带回家用，操作简单方便，安全有效，依从性高。
53.与现有技术相比，本发明具有以下优点：
54.(1)治疗方式和途径的不同，临床上可以多种方式联合治疗达到更佳治疗效果。本发明冷敷凝胶给药途径为阴道推注给药，可与盆地康复训练、肌肉电刺激，生物点反馈等其他治疗方式联合治疗，达到更佳治疗效果。
55.(2)强大的透皮吸收，提高本发明的治疗效果。丙二醇作为渗透促进剂可达到理想的渗透特性：
①
具有化学惰性、化学稳定性，无药理活性；
②
可逆地改变皮肤特性，起效快；
③
与药物和基质无配伍禁忌；
④
无毒，无刺激性，无过敏性，无变态反应；
⑤
无色，无味，无嗅；
⑥
在皮肤上易于铺展，无不适感，与皮肤有良好的相容性。
56.(3)从对症治疗到对因治疗的进步：通过阴道粘膜吸收，外源性补充胶原蛋白和雌激素，并且促进组织egfr生长因子以及雌激素分泌，来提升支持组织结构和功能，从而使盆底肌肉组织得到修复，来根本上实现治疗压力性尿失禁等盆底功能障碍性疾病。
57.(4)本发明冷敷凝胶为阴道推注给药，可由专业医疗机构医生指导下带回家用，安全有效，依从性高。
58.(5)本发明冷敷凝胶中采用植物类雌激素具有雌激素样作用，无不良反应，安全性高，替代雌激素治疗具有同样的效果。
附图说明
59.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
60.图1为不同组别处理c2c12成肌细胞进行划痕实验图片；
61.图2为不同组别处理2h后c2c12细胞中egfr的表达水平；与空白对照组相比*为p<0.05，**为p<0.01；
62.图3为不同组别处理2.5h后c2c12细胞迁移率；与空白对照组相比*为p<0.05；
63.图4为western blot检测各组别大鼠阴道组织中tgf
‑
β1、smad2/3、p
‑
smad2/3蛋白表达；
64.在图1中：
65.a为0h空白对照组划痕；b为2h空白对照组划痕划痕；c为0h冷敷凝胶(1g)划痕；d为2h冷敷凝胶(1g)划痕；e为0h冷敷凝胶(3.5g)划痕；f为2h冷敷凝胶(3.5g)划痕；g为0h冷敷凝胶(7g)划痕；h为2h冷敷凝胶(7g)划痕；
66.在图4中：
67.a为western blot检测结果；b为半定量分析；
68.图a中1为假手术组；2为模型组；3为胶原蛋白组；4为雌激素组。
具体实施方式
69.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
70.实施例1
71.称取1g莪术提取物、1g补骨脂、1g铁皮石斛水解物、0.4g乳香酸和0.4g大豆异黄酮，用8g丙二醇将五个原料分散均匀，即得混合物a；
72.称取0.5g卡波姆u20粉末和0.4g水解胶原蛋白，加入100g去离子水中，然后加入6g甘油，升到80℃充分搅拌溶解，即得混合物b；
73.待混合物b的温度下降到45℃时，一边搅拌，一边加入0.1g的纤维粘连蛋自、0.13g尼泊金甲酯和0.13g尼泊金丙酯，即得混合物c；
74.仍然在45℃的条件下，将混合物a、c混合搅拌均匀，均质5min，转速为1500转/min，即得混合物d；
75.将三乙醇胺加入混合物d中充分搅拌均匀，将凝胶终品灌装到阴道推管中，每管装3.5克，即得冷敷凝胶，可有效治疗盆底肌松弛引起的压力性尿失禁。
76.实施例2
77.称取0.3g莪术提取物、0.5g补骨脂、0.5g铁皮石斛水解物、0.03g乳香酸和0.03g大豆异黄酮，用1g丙二醇将五个原料分散均匀，即得混合物a；
78.称取0.1g卡波姆u20粉末和0.1g水解胶原蛋白，加入70g去离子水中，然后加入1g甘油，升到70℃充分搅拌溶解，即得混合物b；
79.待混合物b的温度下降到40℃时，一边搅拌，一边加入0.1g的纤维粘连蛋自、0.02g尼泊金甲酯和0.06g尼泊金丙酯，即得混合物c；
80.仍然在40℃的条件下，将混合物a、c混合搅拌均匀，均质5min，转速为1500转/min，即得混合物d；
81.将三乙醇胺加入混合物d中充分搅拌均匀，将凝胶终品灌装到阴道推管中，每管装3.5克，即得冷敷凝胶，可有效治疗盆底肌松弛引起的压力性尿失禁。
82.实施例3
83.称取1.6g莪术提取物、2g补骨脂、2g铁皮石斛水解物、0.6g乳香酸和0.6g大豆异黄酮，用10g丙二醇将五个原料分散均匀，即得混合物a；
84.称取1g卡波姆u20粉末和1.2g水解胶原蛋白，加入120g去离子水中，然后加入10g甘油，升到80℃充分搅拌溶解，即得混合物b；
85.待混合物b的温度下降到45℃时，一边搅拌，一边加入0.15g的纤维粘连蛋自、0.3g尼泊金甲酯和0.3g尼泊金丙酯，即得混合物c；
86.仍然在45℃的条件下，将混合物a、c混合搅拌均匀，均质5min，转速为1500转/min，即得混合物d；
87.将三乙醇胺加入混合物d中充分搅拌均匀，将凝胶终品灌装到阴道推管中，每管装3.5克，即得冷敷凝胶，可有效治疗盆底肌松弛引起的压力性尿失禁。
88.本发明制备的冷敷凝胶使用方法：使用前先将外阴部位洗净，反复清洗双手，将凝胶的包装袋撕开，取出装有凝胶的推注器，将推注器前端的前盖取下，插入推注器后作为活塞推杆；采用仰卧位，膝盖弯曲，将载有凝胶的推注器缓缓插入阴道，用食指推动活塞推杆，将凝胶推入阴道，推注完后抽出推注器，躺10到15分钟让其充分吸收。
89.同时撕开第二支凝胶的包装袋，将凝胶涂抹于神阙穴、关元穴、足三里、三阴交穴，效果更佳。
90.使用量：阴道推注给药：每天一支或隔天一支；穴位涂抹：每天一支；有效治疗盆底肌松弛引起的压力性尿失禁。
91.试验例
92.由于盆底肌松弛无相应的动物模型：
93.(1)我们采用离体大鼠结肠平滑肌收缩运动的影响作为观察对象，并初步探讨其作用机制。
94.方法：制备大鼠结肠平滑肌肌条，以10g/l nacl溶液(ns)为对照组，观察不同浓度实施例1制备的冷敷凝胶对结肠平滑肌的收缩效应；以冷敷凝胶为对照组，分别观察1.0g、3.5g、7g 3种剂量孵育肌条后，冷敷凝胶对肌条的收缩效应。结果如表1：
95.表1不同剂量冷敷凝胶对大鼠结肠平滑肌自发收缩的影响
[0096][0097][0098]
结果：冷敷凝胶大剂量组对离体大鼠结肠平滑肌的促进作用明显，与ns对照组比较，冷敷凝胶3.5gm、7gm引起的肌条最大收缩振幅和曲线下面积均有统计学意义。结论：实施例1制备的冷敷凝胶对大鼠结肠平滑肌的收缩活动有兴奋作用，且与剂量呈正相关。
[0099]
(2)采用c2c12成肌细胞和大鼠骨骼肌体外实验体系研究实施例1制备的冷敷凝胶促进肌肉损伤修复作用。
[0100]
方法：用1.0g、3.5g、7g 3种不同剂量冷敷凝胶处理c2c12细胞，进行划痕实验以及提取细胞蛋白检测其egfr的表达水平。通过手术取大鼠滑车上肌，用冷敷凝胶对其进行体外培养并检测其egfr表达水平情况。
[0101]
对c2c12细胞迁移率的影响：用1.0g、3.5g、7g 3种不同剂量冷敷凝胶处理c2c12细胞，进行bca蛋白定量，化学发光试剂显色，曝光机中进行曝光。所有统计数据均采用spss软件anova进行显著性分析。
[0102]
图1为不同组别处理c2c12成肌细胞进行划痕实验图片；图1c2c12细胞划痕实验结果显示，冷敷凝胶(3.5g)组的细胞迁移明显上升(图1.f)，与空白对照组相比有显著性差异，差异具有统计学意义。冷敷凝胶1g及7g组的细胞迁移略高于空白对照组，但差异不明显。
[0103]
图2为不同组别处理2h后c2c12细胞中egfr的表达水平，图2显示实施例1制备的冷敷凝胶处理后的c2c12细胞egfr表达有一定的增加趋势。体外培养肌肉组织中c2c12中egfr表达水平的结果表明，实施例1制备的冷敷凝胶能显著提高肌肉组织中egfr的表达水平。
[0104]
图3为不同组别处理2.5h后c2c12细胞迁移率，图3显示实施例1制备的冷敷凝胶处理2.5h后对c2c12迁移增殖有一定促进作用，其作用效果与浓度相关。
[0105]
结论：实验结果表明实施例1制备的冷敷凝胶通过正向调控c2c12细胞和骨骼肌组织的egfr表达水平，起到促进骨骼肌细胞增殖的作用，可以对骨骼肌运动性损伤起到一定的修复作用。
[0106]
(3)本发明采用去势法建立大鼠va模型，40只大鼠采用随机数字表法分为假手术组、实验组(模型组10只，胶原蛋白(冷敷凝胶)组10只，雌激素10只)。假手术组：打开腹腔暴露于空气中30min后关腹；胶原蛋白组于术后第28天，每日阴道给予冷敷凝胶3.5g，每天一次，连续每日给药14d；雌激素组于术后第28天起，每日阴道给予雌激素0.5ml，每天一次，连续每日给药14d。实验组：去势术后第4周采用实施例1制备的冷敷凝胶组和单纯雌激素组连续阴道给药14d。测定大鼠ph值变化、子宫质量和阴道上皮厚度，western blot检测tgf
‑
β1、smad2/3、p
‑
smad2/3蛋白表达。western blot检测方法：分别在每组组织中加入1ml ripa和1μl pmsf的裂解液，用组织剪剪碎后在组织研磨器下匀浆:冰上静置5min后，低温离心机13000r/min离心15min。取上清液，然后bca试剂盒测定蛋白浓度后，配平加入总体积1/4的上样缓冲液，加热煮沸使蛋白失活将蛋白在10％的凝胶上进行电泳并转膜，脱脂奶粉室温封闭后，一抗4t孵育过夜，tbst洗膜3次后二抗孵育，显影。
[0107]
表2：不同组别大鼠阴道ph值(n＝10,x
‑±
s)
[0108][0109]
a：p<0.05，与0周比较
[0110]
表3各组大鼠子宫质量和阴道上皮厚度(n＝10,x
±
5)
[0111]
[0112][0113]
a：p<0.05，与假手术组比较；b：p<0.05，与雌激素组比较；c：p<0.001，与模型组比较
[0114]
结果：据对阴道ph值的评估，治疗后的胶原蛋白组(冷敷凝胶)和雌激素组ph值有下降趋势(表2)，与治疗前相比差异有统计学意义(p<0.05)，大鼠子宫质量测定结果显示，与假手术组相比，模型组、胶原蛋白组的子宫质量明显减低(p<0.05)；与模型组、胶原蛋白组相比较，雌激素组的子宫质量明显增加(表4，p<0.05)。经实施例1制备的冷敷凝胶治疗后，去势大鼠阴道ph值降低；上皮厚度增加，增殖能力增强；细胞外基质成分合成增多，降解减少；阴道组织中的磷酸化smad2/3蛋白表达增高。相比于单纯雌激素治疗组，实施例1制备的冷敷凝胶组大鼠子宫安全性更高。
[0115]
结论：实施例1制备的冷敷凝胶可以有效缓解阴道萎缩，增加阴道组织中细胞外基质成分，促进阴道上皮的修复。
[0116]
(4)本发明中证实实施例1制备的冷敷凝胶的实际使用效果，采用了试点研究(pilot research)，亦称“预备研究”。是解决正式研究中的方法和程序问题的预备性研究。正式研究所需的、包括最后的资料分析在内的整个程序都要进行。被试总数大大少于正式研究的被试。其一般作用是：1)改进资料收集方法，提出需增设的控制变量和因变量。部分地修改已有的测量技术。2)预检假设，使假设更精确适当。若需要，可去除原有假设，提出新的假设。3)获得有利于正式实验的观点、方法等方面的线索或顿悟。4)检验已计划的统计、分析步骤，考查它们是否有利于解决研究的课题。5)考察按原计划要花多少人力、物力，使正式实验更为经济。甚至可对实验计划的可行性问题作出决断。6)从被试处获得有关指导语、自变量强度等方面的反馈。
[0117]
pilot试验：
[0118]
方法：选取46例患者，平均年龄47岁(38～65岁)，病程2
‑
15年，平均7年，均为经产妇，产次为2～4次，诱发试验及膀胱颈抬高试验均为阳性。治疗前检查尿流动力学和尿常规，排除下尿路梗阻及泌尿系感染引起的排尿异常。
[0119]
诊断标准：
[0120]
1、sui临床诊断标准参照gullen分度标准。(1)i度：咳嗽等腹压突然增加时，偶然出现尿失禁；(2)ⅱ度：每次咳嗽、屏气或用力时均出现尿失禁；(3)ⅲ度：行走、站立式即有尿失禁；(4)1v度：卧床时也有尿失禁。
[0121]
2、治疗期间嘱患者记录排尿日记，记录每天饮水、排尿、漏尿情况；初诊及复诊时均填写问卷调查。进行尿垫试验，试验前15min嘱患者饮水500ml，试验时嘱患者走路或爬楼梯30min、起立10次、咳嗽1o次、跑步1min、弯腰5次、洗手1min，再称量患者尿垫增加的重量，1h漏尿量≥2g为阳性；轻中度：2g≤1h漏尿量<10g；重度：10g≤1h漏尿量<50g；极重度：1h漏尿量≥50g。
[0122]
治疗：实施例1制备的冷敷凝胶阴道推注给药：每天一支治疗14天，随后隔天一支
治疗14天；同时涂抹于神阙穴、关元穴、足三里、三阴交穴，每天一次。
[0123]
评估：
[0124]
(1)盆底肌收缩情况检测。检查者使用食指和中指轻轻压阴道后壁至盆底的深层肌肉，评估其收缩的情况，据此来判断肌肉的力量以及疲劳程度。盆底肌力手测分级采用oxford评分，检测结果分为o
‑
5级共六级，其中0、1、2级为盆底肌肉松弛患者，3、4、5级为正常者。有效：治疗后患者等级上升一级；无效：治疗后患者等级没有改变。统计学方法：采用spss16.0软件进行数据分析，计量资料使用x～s表示，治疗前后比较采用x2检验，p<o.05时具有统计学意义。
[0125]
(2)1h漏尿量≥2g为阳性；轻中度：2g≤1h漏尿量<10g；重度：10g≤1h漏尿量<50g；极重度：1h漏尿量≥50g。治愈：1h漏尿量≤2g，有效：漏尿量减轻向上一级转化；无效：无改变。
[0126]
结果：
[0127]
(1)治疗一个疗程后，46例患者中的38例患者盆底肌肉综合肌力检测结果达到3级以上。正常率达到82.60％，43例患者为有效，有效率为93.47％，只有3例患者没有改善，治疗前后差异显著(p<0.05)
[0128]
(2)尿垫测试结果：治愈33例(71.74％)，改善10例(21.74％)，无效3例(6.52％)；总有效率为93.48％(43/46)。
[0129]
对于本次研究的讨论：
[0130]
压力性尿失禁是机体盆底功能出现障碍的常见一类疾病，在成年女性中具有较高的发病率。该类疾病的发生随着患者年龄的增长，而呈现上升的趋势，给患者的身心健康带来严重的影响。该类疾病的发展与分娩过程中产程延长、产钳助产、急产等因素有关，分娩过程损失韧带、肛提肌等盆底组织，导致盆底组织松弛，膀胱颈朝近尿道方向下移，尿道变短，在咳嗽或是其他腹腔内压力增加时，出现漏尿。
[0131]
临床治疗重点是恢复盆底肌肉功能，提高逼尿肌的稳定性。使用本发明制备的冷敷凝胶进行积极治疗并指导患者主动进行凯格尔运动，提高盆底肌肉的收缩功能。通过盆底康复治疗，有助于对肛周的肌肉进行放松、收缩，提高该部位或是离肛周较远肌肉的弹性，有效提高尿道的闭合压力，改善压力性尿失禁。
[0132]
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。
[0133]
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。