川芎嗪在制备用于减轻缺血再灌注损伤的药物中的应用的制作方法

1.本发明涉及药物新用途的技术领域，具体涉及川芎嗪在制备用于减轻缺血再灌注损伤的药物中的应用。


背景技术：

2.自肺移植技术开创以来，经过数十年的发展，肺移植已成为终末期肺疾病的唯一的治疗手段。但大量供体肺脏在脑死亡或者器官捐献过程中，受到多种损伤机制影响而无法应用于肺移植，缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,iri)是肺移植过程中无法避免的主要损伤因素之一。缺血再灌注损伤是指组织器官缺血一段时间后恢复血液灌注，所引起的组织器官功能障碍以及结构损伤的现象，广泛存在于脑、肾脏、肺脏等多种器官之间，严重影响器官移植后早期功能和晚期功能。缺血再灌注损伤是多因素作用的结果，如活性氧自由基、炎症反应和细胞内钙超负荷等因素。肺脏缺血再灌注损伤主要表现为非特异性肺泡损伤、肺水肿及低氧血症，严重的再灌注损伤还会增加供肺急性排斥反应的发生率，诱发肺功能衰竭。
3.目前缺乏针对缺血再灌注损伤的特异性治疗方法，临床上主要采用精确的外科技术、缩短冷缺血时间、优化移植物灌注等措施降低缺血再灌注损伤所造成的影响，但上述方法存在难以标准化、缺乏客观指标的缺点，难以应对复杂的个体差异情况。近年来，离体肺脏机械灌注技术(ex vivo lung perfusion,evlp)临床应用发展迅速，在灌注过程中添加不同功能性药物可以针对性对供肺损伤进行修复，如离体肺脏机械灌注液中加入乌司他丁，可在肺缺血再灌注损伤模型中抑制肺组织中炎症反应，减轻损伤。结合evlp技术，开发可以减轻肺脏缺血再灌注损伤的药物，是缺血再灌注损伤治疗的重要研究方向。但目前市面上主要的离体肺脏机械灌注液(steen液、ocs液)不包含功能性药物，对肺脏缺血再灌注损伤的治疗效果不足。功能性药物的添加仍处于试验研究阶段。steen液、ocs液属于国外品牌，形成技术垄断，国内只能依赖进口。
4.川芎是一种中药植物，具有活血行气，祛风止痛的功效，其功能成分川芎嗪(ligustrazine,lz)经研究是一种有效的血管收缩阻断剂，并且具有较强的清除细胞毒性氧自由基的作用。相关研究表明川芎嗪对心脏、肾脏进行处理，可减轻缺血再灌注损伤。而目前未见其具有治疗肺脏缺血再灌注损伤功效的报道。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供川芎嗪在制备用于减轻缺血再灌注损伤的药物中的应用。
6.为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：提供川芎嗪在制备用于减轻缺血再灌注损伤的药物中的应用。
7.川芎嗪又名天然四甲基吡嗪，是从伞形科藁本属植物川芎中分离提纯的生物碱单体，是中药川芎的主要有效成分，是活血行气祛瘀的一种中药活性生物碱。发明人研究发
现，在离体肺脏机械灌注液中加入川芎嗪，可有效减轻肺脏缺血再灌注损伤。因此，川芎嗪可用于开发减轻缺血再灌注损伤的药物，具有广阔的医用前景和经济价值。
8.本发明还提供川芎嗪在制备用于减轻缺血再灌注引起的氧化损伤的药物中的应用。
9.川芎嗪在制备用于减轻缺血再灌注引起的炎症损伤的药物中的应用。
10.研究发现，肺脏缺血再灌注过程容易造成氧化损伤，本技术发明人经过实验发现，川芎嗪能够提升细胞的抗氧化能力，减轻缺血再灌注过程的氧化损伤。
11.作为本发明所述的应用的优选实施方式，所述缺血再灌注为肺脏缺血再灌注。
12.研究发现，肺脏缺血再灌注过程容易造成炎症损伤，本技术发明人经过实验发现，川芎嗪能够减少炎性细胞的激活及减少中性粒细胞在肺内聚集浸润，减轻缺血再灌注过程的炎症反应。
13.作为本发明所述的应用的优选实施方式，所述药物为离体肺脏灌注液。
14.作为本发明所述的应用的优选实施方式，所述药物中川芎嗪的含量为0.1～10mg/l。
15.作为本发明所述的应用的优选实施方式，所述药物中川芎嗪的含量为1mg/l。
16.本发明还提供一种用于减轻缺血再灌注损伤的药物组合物，所述药物组合物包括川芎嗪和药学上可接受的载体。
17.作为本发明所述的药物组合物的优选实施方式，所述药物组合物中川芎嗪的含量为0.1～10mg/l。
18.本发明的有益效果：本发明提供的川芎嗪在制备用于减轻缺血再灌注损伤的药物中的应用，川芎嗪是从中药川芎中提取的具有活血行气祛瘀的一种中药活性生物碱，提取较易、成本低、安全性高；本发明在离体肺脏机械灌注液中加入川芎嗪，可有效减轻肺脏缺血再灌注损伤，不仅为制备治疗肺脏缺血再灌注损伤的药物提供了一种新来源，同时发掘出了川芎嗪新的药用价值。
附图说明
19.图1：a为实施例1中空白对照组、iri组以及iri lz组的mda含量图；b为实施例1中空白对照组、iri组以及iri lz组的sod含量图；c为实施例1中空白对照组、iri组以及iri lz组的il-6含量图；d为实施例1中空白对照组、iri组以及iri lz组的tnf-α含量图。
20.图2：a为实施例2中空白对照组、iri组以及iri lz组的mda含量图；b为实施例2中空白对照组、iri组以及iri lz组的sod含量图；c为实施例2中空白对照组、iri组以及iri lz组的mpo含量图。
具体实施方式
21.以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
22.实施例1缺血再灌注细胞模型的建立
23.具体实验方法：选用人正常肺上皮细胞beas-2b细胞，将同一批传代细胞培养至
80％汇合度，随机分为空白对照组、iri组(steen肺灌注液组)以及iri lz组(steen肺灌注液 川芎嗪组)。其中，空白对照组更换旧培养基，静置于37℃，5％co2的环境中培养。iri组以及iri lz组去除旧的细胞培养基，先加入lpd肺保护液，再将细胞置于4℃，50％o2的环境中培养18h，模拟冷缺血过程；然后弃去lpd肺保护液，iri组以及iri lz组分别加入steen肺灌注液、川芎嗪含量为1mg/l的steen肺灌注液，将细胞静置于37℃，5％co2的环境中培养4h，模拟再灌注过程。最后，采用mtt实验来评估细胞存活率，mda、sod试剂盒检测氧化损伤，il-6、tnf-α试剂盒检测炎症损伤。
24.根据sod、mda表达的变化探讨氧化损伤机制，根据tnf-α、il-6及il-1β表达的变化探讨炎症损伤机制。sod是机体内重要的清除活性氧自由基的一类因子，是细胞抗氧化功能的重要保障。mda是ros与细胞膜或者细胞内的不饱和脂肪酸反应生成过氧化脂质的过程中所产生的另外一种代谢产物，能够从侧面反映出细胞内过氧化脂质生成的量与速度。il-6即前炎症细胞因子，是一种可通过体液或细胞免疫功能影响炎症、宿主防御和组织损伤广泛的细胞因子。tnf-α是炎症反应中早期出现的介质，可启动其它次级细胞因子的产生，直接趋化中性粒细胞，促进粘附分子的表达。
25.实验结果如图1所示。由图1a和图1b可知，与空白对照组相比，经历18h冷缺血 4h再灌注过程的iri组和iri lz组的mda含量明显增加，sod含量明显降低，说明缺血再灌注过程造成氧化损伤。与iri组相比，iri lz组的mda含量明显降低，降低细胞的氧化活性，sod含量明显增加，提升细胞的抗氧化活性。因此，说明川芎嗪能够提升细胞的抗氧化能力，减轻缺血再灌注过程的氧化损伤。由图1c和图1d可知，与空白对照组相比，iri组和iri lz组的il-6含量明显增加，tnf-α含量明显增加，说明缺血再灌注过程造成炎症损伤。与iri组相比，iri lz组的il-6含量和tnf-α含量有所降低。
26.实施例2大鼠肺脏缺血再灌注模型建立和研究
27.选择sd大鼠作为实验动物，将大鼠随机分为假手术组、iri组(steen肺灌注液组)以及iri lz组(steen肺灌注液 川芎嗪组)。
28.实验方法：(1)先于大鼠腹腔注射3％戊巴比妥钠(30mg/kg)进行麻醉，切开大鼠颈部皮下组织、肌肉层，分离气管，剪开气管前壁插入气管插管，连接呼吸机进行机械通气。(2)肺脏灌洗：开胸，全身肝素化。分离主动脉、上腔静脉、下腔静脉与肺动脉后，夹闭主动脉、上腔静脉与下腔静脉。剪开肺动脉与左心耳，使用肺脏lpd灌洗液进行充分的肺脏在体灌洗。假手术组仅行开胸，未行缺血再灌注处理。(3)心肺离体与肺脏获取：夹闭气管，剪断主动脉、上腔静脉与下腔静脉，剪断气管与食管。取出心肺，分离心脏与肺脏，获得离体肺脏。(4)离体肺脏机械灌注：离体肺脏与离体肺脏机械灌注系统连接后，肺灌注液自肺动脉流入，从肺静脉流出。灌注液流量与温度逐步上升，于50min内升至32℃与100％流量。当系统温度达到32℃后，连接呼吸机并给予机械通气。机械通气后后，每小时采集灌注液样本，应用mda、sod试剂盒检测氧化损伤，应用mpo试剂盒检测炎症损伤。
29.实验结果如图2所示。由图2a和图2b可知，与假手术组相比，iri组和iri lz组的mda含量明显增加，sod含量明显降低，说明肺脏缺血再灌注过程造成氧化损伤。与iri组相比，iri lz组的mda含量明显降低，降低细胞的氧化活性，sod含量明显增加，提升细胞的抗氧化活性。因此，说明川芎嗪成分能够提升细胞的抗氧化能力，减轻缺血再灌注过程的氧化损伤。由图2c可知，与假手术组相比，iri组和iri lz组的mpo含量明显增加，说明缺血再灌
注过程造成炎症损伤。与iri组相比，iri lz组的mpo含量明显降低，说明川芎嗪成分可减少炎性细胞的激活及减少中性粒细胞在肺内聚集浸润，减轻缺血再灌注过程的炎症反应。
30.最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。