高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌的选育方法

技术特征：
1.一种高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌的选育方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）以谷氨酸棒杆菌为对象，在30-37℃，100-200 r/min的摇床中培养一段时间，再经过常温常压等离子体诱变处理30-180 s；（2）待诱变处理后接种到磺胺胍培养基中，在30-37 ℃培养1-2天；（3）将步骤（2）得到的菌株利用茚三酮进行特异性显色反应后识别出优势菌株，将该优势菌株在种子培养基中培养后，再在发酵培养基中培养，进行氨基酸分析检测复筛后，筛选得到产量最高的菌株，即高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌corynebacterium glutamicum b1。2.根据权利要求1所述的高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌的选育方法，其特征在于，常温常压等离子体诱变的辐射功率为100-120 w，氦气流量为3-10 l/min，诱变时间为120-150s。3.根据权利要求1所述的高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌选育方法，其特征在于，磺胺胍培养基中含有0.05-0.4 mg/ml的磺胺胍。4.根据权利要求1所述的高产异亮氨酸的谷氨酸棒杆菌选育方法，其特征在于，步骤（3）中菌株与茚三酮采用多孔板进行特异性显色反应，多孔板包括48-96孔板。5.根据权利要求4所述的高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌选育方法，其特征在于，将多孔板的优势菌株先在种子培养基中，在30-37 ℃、100-200 r/min下培养1-2天；再以5-10%的接种量接种至发酵培养基中，再在30-37 ℃、100-200 r/min下培养1-2天，进行氨基酸分析检测复筛后，可以得到性能稳定的高产菌株corynebacterium glutamicum b1。6.根据权利要求5所述的高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌选育方法，其特征在于，所用的种子液培养基g/l包括：葡萄糖5-10g/l，蛋白胨1-5g/l，氯化钠1-5g/l，牛肉浸粉1-3g/l，磷酸氢二钠0.03-1g/l；发酵培养基g/l包括：葡萄糖5-10g/l，蛋白胨2-7g/l，氯化钠1-5g/l，牛肉浸粉1-3g/l，磷酸氢二钠0.3-1g/l，酵母浸粉1-5g/l，硫酸铵1-6g/l。7.采用权利要求1-6任一项所述的方法筛选得到的高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌，谷氨酸棒杆菌 b1，保藏编号：cctcc no：m 2019118 ，分类命名corynebacterium glutamicum b1，保藏日期：2019年3月16号，湖北，武汉。

技术总结
本发明提供了高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌的选育方法，以谷氨酸棒杆菌为对象，在30-37℃，100-200 r/min的摇床中培养一定时间后，经过常温常压等离子体诱变处理50-180 s后，接种到0.05-0.4 mg/mL浓度的磺胺胍培养基中30-37℃培养1-2天，经过培养后，利用氨基酸与茚三酮的特异性反应与相对应的菌株发酵上清液进行96孔板高通量筛选，可选育出高产菌株Corynebacterium glutamicum B1。该菌株在100mL摇瓶发酵30-48 h的条件下异亮氨酸产量较原始菌株提高了62.03%，且遗传性状稳定。该方法建立了磺胺胍标记初筛和茚三酮多孔板检测的高通量筛选策略，可以广泛应用于高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌高通量选育，提高筛选效率，具有巨大的应用价值。具有巨大的应用价值。具有巨大的应用价值。


技术研发人员：龚大春 孔帅 吕育财 郑美娟
受保护的技术使用者：三峡大学
技术研发日：2019.03.22
技术公布日：2022/8/16