一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法与流程

1.本发明属于细胞学分析方法领域,具体涉及幼苗根尖的染色体核型检测方法。


背景技术：

2.辣椒为茄科辣椒属一年生或多年生草本，又名海椒、番椒、辣子等。辣椒起源于美洲的热带和亚热带地区，目前在世界各地已被广泛种植，中国是世界上辣椒种植面积最广，产量最大的国家。辣椒营养丰富，可新鲜食用、加工，含有的辣椒素可开胃消食促进食欲、温暖散寒、强身健脾；辣椒还具有抗菌消炎、增强免疫力等功效。辣椒是集药用食用于一身的优良植物，种植产量高，市场需求量大，深受大众的青睐，已然成为了一种世界性的重要蔬菜作物与调味品，拥有巨大的开发利用价值与广阔的发展前景。
3.辣椒资源丰富，已经鉴定的种有31个，而不同的辣椒品种在不同的生态环境下形成了优良的地方资源。目前对于辣椒的研究集中在新品种的选育、辣椒栽培技术、辣椒植株生长发育、辣椒素的生物合成生理功能等方面，而国内关于辣椒染色体核型分析方法的细节探索少有报道，植物染色体核型分析主要通过研究染色体数目及形态特征，反映不同物种或品种之间存在的染色体细胞学差异，传统的表型分析资源遗传性的方法有许多局限性，制备的染色体制片会存在染色体重叠、扭曲、断裂等情况，对染色体核型分析有很大的影响。


技术实现要素：

4.为解决上述问题，本发明提供一种新的辣椒染色体核型分析方法，通过将辣椒幼苗根尖制成细胞染色体制片，来对辣椒染色体核型进行分析。
5.一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，包括以下步骤：步骤1：幼苗材料的获取，选择籽粒饱满的辣椒种子，37℃水浴4~5 h后，用无菌水冲洗1 min；将种子放入铺有无菌湿滤纸的培养皿中置于培养箱中培养至长出幼苗；步骤2：幼苗根尖材料预处理，将幼苗根尖置于2 ml离心管中，加入2 ml 0.1%秋水仙素和0.002 mol/l的8-羟基喹啉的混合溶液进行预处理；步骤3：固定与低渗处理，将预处理后的根尖用蒸馏水冲洗3次后置于棕色玻璃瓶中，加入卡诺固定液固定。固定后的根尖经滤纸吸干水分后进行低渗处理，再将根尖转移到无菌水中浸泡20 min；步骤4：解离与染色，将低渗处理后的根尖用蒸馏水洗后进行解离，再置于蒸馏水中漂洗20 min，切下根尖端半透明果胶状分生组织1~2 mm，用刀片将根尖分生组织切分为3~5个部分，然后进行染色；步骤5：制片与镜检。
6.作为优选，步骤2中，选择幼苗根长1.0~1.5 cm时，于上午9:00~10:00取细胞分裂旺盛期的根尖进行预处理，所取长度为0.5~1.0 cm。
7.作为优选，步骤2中，预处理在4℃下处理2~3 h。
8.作为优选，步骤3中，卡诺固定液固定2 h，固定后的根尖在0.075 mol/l氯化钾溶液中低渗处理15~20 min。
9.作为优选，步骤4中解离方法为，将根尖放入1 mol/l hcl的2 ml离心管中，60℃水浴解离8~12 min。
10.作为优选，步骤4中解离方法为，将根尖放入2 mol/l hcl 0.1mol/l hclo4的2 ml离心管中，60℃水浴解离10~12 min，然后加入0.01 mol/l的naoh漂洗。
11.作为优选，步骤4中，采用卡宝品红染色液进行染色，染色15 min。
12.作为优选，步骤5中，用滤纸吸去染液再滴加蒸馏水，轻轻放下盖玻片，用解剖针后段或铅笔的橡皮头轻敲，压平细胞。先使用显微镜的低倍镜进行观察，找到细胞分散了良好的视野后，再转到高倍镜下继续仔细观察，寻找不同时期的细胞，滴加石蜡油，在油镜下观察并拍照。
13.采用本发明提供的辣椒染色体核型分析方法，所制备的细胞染色体制片，染色体分散不重叠，不扭曲、断裂，主缢痕、随体清晰利于辣椒染色体核型分析，对于辣椒种质资源的收集、鉴定、评价及遗传改良具有重要意义。
附图说明
14.图1为染色体压片镜检图；图2为预处理下的染色体形态及数目；图3为辣椒染色体核型；图4为辣椒染色体核型模式图。
具体实施方式
15.下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。
16.须知，本说明书附图所绘的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容能涵盖的范围内。同时，本说明书中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中间”等的用语，亦仅为便于叙述明了，而非用以限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本发明可实施的范畴。
17.一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，包括以下步骤：步骤1：幼苗材料的获取，选择籽粒饱满的辣椒种子，37℃水浴4~5 h后，用无菌水冲洗1 min；将种子放入铺有无菌湿滤纸的培养皿中置于培养箱中培养至长出幼苗；步骤2：幼苗根尖材料预处理，将幼苗根尖置于2 ml离心管中，加入2 ml 0.1%秋水仙素和0.002 mol/l的8-羟基喹啉的混合溶液进行预处理；步骤3：固定与低渗处理，将预处理后的根尖用蒸馏水冲洗3次后置于棕色玻璃瓶中，加入卡诺固定液固定。固定后的根尖经滤纸吸干水分后进行低渗处理，再将根尖转移到无菌水中浸泡20 min；步骤4：解离与染色，将低渗处理后的根尖用蒸馏水洗后进行解离，再置于蒸馏水
hclo4的2 ml离心管中，60℃水浴解离10min，然后加入0.01 mol/l的naoh漂洗，再置于蒸馏水中漂洗20 min，切下根尖端半透明果胶状分生组织1mm，用刀片将根尖分生组织切分为3个部分，采用卡宝品红染色液进行染色，染色15 min；步骤5：制片与镜检。
22.实施例4：步骤1：选择籽粒饱满的辣椒种子，37℃水浴5 h后，用无菌水冲洗1 min；将种子放入铺有无菌湿滤纸的培养皿中置于培养箱中培养至长出幼苗；步骤2：将幼苗根尖置于2 ml离心管中，加入2 ml 0.1%秋水仙素和0.002 mol/l的8-羟基喹啉的混合溶液在4℃下预处理3h；步骤3：将预处理后的根尖用蒸馏水冲洗3次后置于棕色玻璃瓶中，加入卡诺固定液固定2h，固定后的根尖经滤纸吸干水分后在0.075 mol/l氯化钾溶液中低渗处理20 min，再将根尖转移到无菌水中浸泡20 min；步骤4：将低渗处理后的根尖用蒸馏水洗后放入将根尖放入2 mol/l hcl 0.1mol/l hclo4的2 ml离心管中，60℃水浴解离12 min，然后加入0.01 mol/l的naoh漂洗，再置于蒸馏水中漂洗20 min，切下根尖端半透明果胶状分生组织2 mm，用刀片将根尖分生组织切分为5个部分，采用卡宝品红染色液进行染色，染色15 min；步骤5：制片与镜检。
23.上述实施例中，步骤5均采用下述方法对幼苗根尖进行观察：用滤纸吸去染液再滴加蒸馏水，轻轻放下盖玻片，用解剖针后段或铅笔的橡皮头轻敲，压平细胞。先使用显微镜的低倍镜进行观察，找到细胞分散了良好的视野后，再转到高倍镜下继续仔细观察，寻找不同时期的细胞，滴加石蜡油，在油镜下观察并拍照，观察到的细胞染色体情况如图1所示。
24.选择染色体分散良好的细胞观察计数，如图2和图3所示，结果显示辣椒染色体数目为2n=2x=24；染色体长度、臂比及类型如下表所示，辣椒染色体平均臂比为1.36；最长染色体与最短染色体长度比为1.66；第四对染色体臂比大于2，属于2a类型；染色体相对系数(kuo类型)为16m1 6m2 2l；辣椒染色体核型模式图如图4所示。
25.以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。