一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法与流程

技术特征：
1.一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：获取幼苗材料，选择籽粒饱满的辣椒种子，37℃水浴4~5 h后，用无菌水冲洗1 min；将种子放入铺有无菌湿滤纸的培养皿中置于培养箱中培养至长出幼苗；步骤2：幼苗根尖材料预处理，将幼苗根尖置于2 ml离心管中，加入2 ml 0.1%秋水仙素和0.002 mol/l的8-羟基喹啉的混合溶液进行预处理；步骤3：固定与低渗处理，将预处理后的根尖用蒸馏水冲洗3次后置于棕色玻璃瓶中，加入卡诺固定液固定，固定后的根尖经滤纸吸干水分后进行低渗处理，再将根尖转移到无菌水中浸泡20 min；步骤4：解离与染色，将低渗处理后的根尖用蒸馏水洗后进行解离，再置于蒸馏水中漂洗20 min，切下根尖端半透明果胶状分生组织1~2 mm，用刀片将根尖分生组织切分为3~5个部分，然后进行染色；步骤5：制片与镜检。2.根据权利要求1所述一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，其特征在于：步骤2中，选择幼苗根长1.0~1.5 cm时，于上午9:00~10:00取细胞分裂旺盛期的根尖进行预处理，所取长度为0.5~1.0 cm。3.根据权利要求2所述一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，其特征在于：步骤2中，预处理在4℃下处理2~3 h。4.根据权利要求3所述一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，其特征在于：步骤3中，卡诺固定液固定2 h，固定后的根尖在0.075 mol/l氯化钾溶液中低渗处理15~20 min。5.根据权利要求4所述一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，其特征在于：步骤4中解离方法为，将根尖放入1 mol/l hcl的2 ml离心管中，60℃水浴解离8~12 min。6.根据权利要求4所述一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，其特征在于：步骤4中解离方法为，将根尖放入2 mol/l hcl 0.1mol/l hclo4的2 ml离心管中，60℃水浴解离10~12 min，然后加入0.01 mol/l的naoh漂洗。7.根据权利要求5或6所述一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，其特征在于：步骤4中，采用卡宝品红染色液进行染色，染色15 min。8.根据权利要求7所述一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，其特征在于：步骤5中，用滤纸吸去染液再滴加蒸馏水，轻轻放下盖玻片，用解剖针后段或铅笔的橡皮头轻敲，压平细胞，先使用显微镜的低倍镜进行观察，找到细胞分散了良好的视野后，再转到高倍镜下继续仔细观察，寻找不同时期的细胞，滴加石蜡油，在油镜下观察并拍照。

技术总结
本发明提供一种基于幼苗根尖的辣椒染色体核型分析方法，包括以下步骤：步骤1：幼苗材料的获取，选择籽粒饱满的辣椒种子，置于培养箱中培养至长出幼苗；步骤2：幼苗根尖材料预处理；步骤3：将预处理后的根尖加入卡诺固定液固定。固定后进行低渗处理；步骤4：将低渗处理后的根尖用蒸馏水洗后进行解离，切分后进行染色；步骤5：制片与镜检。采用本发明提供的辣椒染色体核型分析方法，所制备的细胞染色体制片，染色体分散不重叠，不扭曲、断裂，主缢痕、随体清晰利于辣椒染色体核型分析，对于辣椒种质资源的收集、鉴定、评价及遗传改良具有重要意义。义。义。


技术研发人员：邱化荣 苟晓松 王晓殿 李林 张小微 胡云凤
受保护的技术使用者：遵义市农业科学研究院
技术研发日：2022.05.24
技术公布日：2022/8/12