一种适用于社会大众自助采集的咽拭子的制作方法

1.本发明属于病毒检测领域，特别涉及一种适用于社会大众自助采集的咽拭子。


背景技术：

2.咽拭子标本采集对于新冠、流感等防控至关重要。
3.防疫一线的医护人员自身经常需要完成核酸检测，久而久之大多数医护人员可不借助镜子等辅助完成咽拭子的自助采集。但社会大众短时间内实现高质量的自助采集却并非易事，如果自助采集标本的质量控制不能得到保证，因此，亟需发明一种简易的能够满足社会大众自助采集咽拭子的方法。


技术实现要素：

4.为了解决上述现有的技术问题，本发明发现了一种新的技术方案。即在现有一次性拭子的基础上，增添美蓝(无毒)做为化学指示剂并在采集过程中使用手机拍照或录制视频等手段记录采集部位(本团队比对发现即便采集后习惯性地吞咽口水仍不影响标记范围和效果)。采集结束后以家庭为单位将标本送至社区指定的收纳箱或由社区工作人员上门收集，同时将照片或视频传至社区质控人员用于监督采集是否达标。
5.具体的，本发明的技术方案如下：
6.本发明第一个方面公开了一种适用于社会大众自助采集的咽拭子，所述咽拭子包括一次性采样拭子，所述一次性采样拭子上涂有化学指示剂。
7.优选的，所述一次性采样拭子上涂有0.5-4％的美蓝。
8.在本发明的一些具体实施例中，所述一次性采样拭子上涂有1％的美蓝。
9.本发明第二个方面公开了一种利用上述的咽拭子进行采样的方法，包括：
10.s1：检测对象进行居家咽部采样，在采集过程中使用拍照或录制视频的方法记录采集部位；
11.s2：采集结束后以家庭为单位将标本送至指定的收纳点或上门收集，同时将采样过程中拍摄的照片或录制的视频传至质控人员用于监督采集是否达标；若检测达标，则采样完成，若检测不达标，则检测对象需重复进行检测。
12.优选的，在s1中，用一次性采样拭子擦拭扁桃体或咽后壁。
13.在本发明的一些具体实施例中，用一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子擦拭双侧咽扁桃体和/或咽后壁，左右各刮3个来回，将拭子头浸入病毒保存液(也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液)的管中，尾部弃去，旋紧管盖。擦拭过程拍摄照片或录制视频。
14.优选的，在s2中，以家庭为单位将标本送至社区指定的收纳箱或由社区工作人员上门收集。
15.本发明第三个方面公开了上述的咽拭子或上述的方法在病毒采样领域中的应用。
16.优选的，所述应用为在新型冠状病毒检测领域中的应用。
17.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
18.本发明公开的咽拭子制造简单，技术门槛低；该咽拭子制造成本低，不会增加耗材支出；该咽拭子及采用该咽拭子进行采样的方法可以极大减少医护人员和社区工作人员的劳动量，提高防疫效率。而且能够提高大众自己采样检测结果的准确性，为防控消除隐患。
附图说明
19.图1为本发明实施例中增添1％美蓝的一次性咽拭子示意图；
20.图2为本发明常规咽拭子采集部位；
21.图3为本发明咽拭子自采后显示的采集部位。
22.图4为本发明实施例中fam通道结果示意图；
23.图5为本发明实施例中vic通道结果示意图；
24.图6为本发明实施例中fam通道结果示意图；
25.图7为本发明实施例中vic通道结果示意图；
26.图8为本发明实施例中fam通道结果示意图；
27.图9为本发明实施例中vic通道结果示意图；
28.图10为本发明实施例中fam通道结果示意图；
29.图11为本发明实施例中vic通道结果示意图；
30.图12为本发明实施例中fam通道结果示意图；
31.图13为本发明实施例中vic通道结果示意图；
32.图14为本发明实施例中fam通道结果示意图；
33.图15为本发明实施例中vic通道结果示意图；
34.图16为本发明实施例中fam通道结果示意图；
35.图17为本发明实施例中fam通道结果示意图；
36.图18为本发明实施例中vic通道结果示意图；
37.图19为本发明实施例中rox通道结果示意图；
38.图20为本发明实施例中cy5通道结果示意图。
具体实施方式
39.下面结合附图和实施例对本发明的技术方案进行详细描述，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
40.下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。本发明所用试剂和原料均市售可得。
41.实施例1
42.本实施例公开了一种咽拭子及利用该咽拭子进行采样的方法。
43.该咽拭子为适用于社会大众自助采集的咽拭子，所述咽拭子包括一次性采样拭子，所述一次性采样拭子上涂有化学指示剂。该化学指示剂为1％的美蓝。
44.利用该咽拭子进行采样的方法包括以下步骤：
45.s1：检测对象进行居家咽部采样，在采集过程中使用拍照或录制视频的方法记录采集部位；
46.s2：采集结束后以家庭为单位将标本送至指定的收纳点或上门收集，同时将采样
过程中拍摄的照片或录制的视频传至质控人员用于监督采集是否达标；若检测达标，则采样完成，若检测不达标，则检测对象需重复进行检测。
47.发明人使用1％美蓝浸湿后干燥的咽拭子(见图1)，借助灯光光源及镜子反复试验。发现借助一般家庭均具备的手机、光源(手电、卫生间灯光等)简易装备，应用本发明的咽拭子可非常容易展示咽拭子接触部位并利于专业审核人员判别(见图2和图3)。
48.实施例2
49.为测试加入美兰后是否影响新冠核酸pcr检测结果，申请人应用新冠假病毒和两种新冠核酸检测试剂盒进行了两个实验研究。实验发现所有组别美蓝浓度均未产生明显影响，说明本发明咽拭子可用于指示社会大众自主采集标本的同时，对采样效率及检验结果均不构成影响(包括十混一检测)。实验结果如下：
50.实验一：不同浓度美蓝对pcr测试的影响
51.pcr扩增曲线：
52.核酸提取试剂的残留计算，每步骤有10微升残留到下一个步骤，则加入裂解液后含量为200/200 400＝1/3，经过核提之后为(1/3)*(1/50)*(1/50)*(1/10)＝1/75000，取5微升加入20 微升体系后，pcr的终浓度为(1/75000)*5/20；
53.美蓝终浓度＝(美蓝初始浓度1％*(加入体积)/保存液体积3500μl)*(1/75000)* (5/20)。
54.表1
[0055][0056]
表2
[0057][0058]
实验数据：
[0059]
表3
[0060][0061][0062]
表4
[0063][0064]
表5
[0065][0066][0067]
表6
[0068][0069]
备注：对照组与实验组的唯一区别是未添加美蓝溶液。
[0070]
实验结论：
[0071]
1.扩增曲线正常，均为s型曲线；
[0072]
2.所有组别美蓝浓度均未产生明显影响。
[0073]
实验二：十混一美蓝标识拭子对pcr的测试测试影响及蓝标识拭子对采样效率的影响研究。
[0074]
实验目的：验证-不同浓度美蓝对扩增反应影响(10混1保存液)、验证美蓝存在对样本采集的影响
[0075]
实验原料：4％美蓝溶液，新冠试剂盒(c20220149)，a7793yf，核酸提取试剂，友康保存液、水等。
[0076]
实验方案：
[0077]
1.方案：新冠假病毒ct约24，用友康稀释至ct值约33，各提取2个重复；人背(人源性背景)(含150μl美蓝)友康保存液，人背友康保存液，各提取2个重复；
[0078]
2.提取程序：
[0079]
xabt48提取仪，使用cn8043(i)-ks程序如下表7所示；
[0080]
表7
[0081][0082]
3.pcr体系配置方案
[0083]
ct8223的pcr方案如表8所示：
[0084]
表8
[0085]
[0086][0087]
a7793yf的pcr方案如表9所示：
[0088]
表9
[0089]
试剂名称 用量(μl) 核酸扩增反应液mix(a7793yf) 18 酶混合液 2 核酸样本 5 [0090]
4.反应程序及仪器：abi 7500荧光pcr扩增仪
[0091]
ct8223的pcr方案如表10所示：
[0092]
表10
[0093][0094]
a7793yf的pcr方案如表11所示：
[0095]
表11
[0096][0097]
5.实验结果：
[0098]
pcr扩增曲线：
[0099]
核酸提取试剂的残留计算，每步骤有10微升残留到下一个步骤，则加入裂解液后
含量为200/(200 400)＝1/3，经过核提之后为(1/3)**(1/50)*(1/50)*(1/10)＝1/75000，取5微升加入20微升体系后，pcr的终浓度为(1/75000)*5/20；
[0100]
美蓝终浓度＝(美蓝初始浓度1％*(样本中美蓝体积)/(友康体积6000μl 样本中美蓝体积))*(1/75000)*(模板体积/pcrmix总体积)；
[0101]
实验组1：取10个拭子，每个拭子浸润100μl的1％美蓝，然后全部加入6ml的保存液中(总体积：7000μl)，pcr终浓度4.7e-9
；
[0102]
实验组2：取10个拭子，每个拭子浸润150μl的1％美蓝，然后全部加入6ml的保存液中(总体积7500μl)，pcr终浓度6.6e-9
。
[0103]
表12
[0104][0105][0106]
表13
[0107][0108]
表14
[0109][0110]
4.实验数据：
[0111]
ct8223的实验结果如表15所示：
[0112]
表15
[0113][0114][0115]
a7793yf的实验结果如表16所示：
[0116]
表16
[0117][0118]
人核糖核酸酶p(rnase p)内标基因的实验结果如表17所示
[0119]
表17
[0120][0121]
5.结论：
[0122]
1)扩增曲线正常，均为s型曲线；
[0123]
2)10混1实验的两个组别美蓝浓度均未对pcr扩增产生明显影响(每个拭子浸润150μl 美蓝，已经超出拭子的正常可浸润的液体量)；
[0124]
3)拭子浸润美蓝后采集正常人咽拭子比直接采样(不含美蓝)ct值提前1左右，综合上边添加假病毒的验证结果，说明美蓝对样本采集影响不大。