一种脐带血提取免疫细胞的培养方法与流程

技术特征：
1.一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：包括如下步骤s1、将脐带血单个核细胞用第一培养基培养至细胞生长状态稳定，后续改用第二培养基进行培养，第二培养基中添加胎牛血清、诱导培养组合物、抗生素、间充质干细胞生长添加物、il-1a和抗cd3单克隆抗体得到最终的培养液；s2、第一培养基对单个核细胞进行原代培养及传代培养至第2-3代，后续传代培养改用第二培养基；最终得到免疫细胞；s3、将制得的培养液导入培养袋中，然后将s2中得到的免疫细胞装入进行最后一步的培养；s4、对最终培养的免疫细胞进行收集，然后进行冷存。2.根据权利要求1所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述s2中的单个核细胞接种于培养瓶中后放于34℃，饱和湿度，3％co培养箱中培养2-5天。3.根据权利要求2所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述培养瓶中的培养液，单个核细胞接种于细胞培养瓶后，2-3天后半量换液，一周时间后首次全量换液。4.根据权利要求1所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述s1中的抗cd3单克隆抗体的细胞密度3
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118个/ml。5.根据权利要求1所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述s1中il-1a是在所述脐带血核细胞加入所述胎牛血清和抗生素后15min内加入，且加入时的温度控制在10-20℃为最佳。6.根据权利要求1所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述s1中的诱导培养组合物包括纤维连接蛋白、il-2、il-1a、抗cd3单克隆抗体，优选地，还含有il-15。7.根据权利要求1所述的一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，其特征在于：所述s2中的培养袋体积大于培养液总体积。

技术总结
本发明属于细胞生物学技术领域，尤其为一种脐带血提取免疫细胞的培养方法，包括如下步骤：S1、将脐带血单个核细胞用第一培养基培养至细胞生长状态稳定，后续改用第二培养基进行培养。本发明通过对同一种免疫细胞来说，在总的培养液用量不变的情况下，改变培养液体积和培养袋容积的比例关系，细胞的扩增能力和细胞数量会发生改变，从而让培养液体积和培养袋容积比例的降低，使得免疫细胞的扩增能力有一定提高，使得整个培养方法可以得到更多数量的免疫细胞，更好的满足后期的临床使用；再这就是整体的培养中，通过添加相应的诱导培养组合物，一是加快了培养速度，二是降低了整体的培养成本，更好的有利于大规模培养所需。更好的有利于大规模培养所需。


技术研发人员：占震锋 李庆静
受保护的技术使用者：上海南滨江细胞生物科技有限公司
技术研发日：2022.02.21
技术公布日：2022/8/4