一种双酶分步制备海参肽的方法与流程

7.0，升温灭酶灭菌后降温至68-72℃，静置4小时；（5）将所述海参肽澄清滤液采用0.5微米无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为澄清海参肽溶液；（6）将海参肽陶瓷膜透过液通入纳滤系统进行海参寡肽分离；（7）将海参肽纳滤透过液放入冷冻干燥设备中进行冷冻干燥，控制温度为0℃以下，并在真空状态下水分由冰晶转为蒸汽除掉，冷冻干燥20～40小时，使水分含量控制在3～5%，制得片状海参肽。
7.进一步的，步骤（2）中，步骤（2）中，所述的双酶分别胰蛋白酶和复合风味蛋白酶，其中复合风味蛋白酶采用的是诺维信公司1000lapu/g规格的产品。
8.进一步的，步骤（4）中，所述无机陶瓷膜的滤芯采用碱陶土质材料制作而成。
9.进一步的，步骤（5）中，采用的是100da聚酰胺材质卷式纳滤膜，纳滤系统工作参数是：操作压力8bar,料液温度45摄氏温度，料液ph=6 。
10.以新鲜海参内脏为原料，海参内脏蛋白质含量达50-60％，还含海参多糖、海参皂甙等多种活性物质，富含维生素和微量元素，脂肪含量低，基本不含胆固醇，开发海参内脏深加工产品具有十分重要的意义。
11.本发明具有显著的有益效果：（1）酶解彻底、提取率高，寡肽含量高，产品成分中肽含量达80％以上，肽分子量分布结果：1.1000da以上的肽小于10％，1000da以内的小分子肽大于90％；通过双酶分步酶解技术，把海参内脏通过双酶分步酶解技术变成全部可溶于水的活性成分，吸收完全而迅速，产品寡肽含量高，更有利于海参活性成分的吸收和利用；（2）去味：经过活性炭去味后海参肽在口感上更易被接受，过滤效率、质量得到提高；（3）在酶解之后采用无机纳滤陶瓷膜过滤的技术手段，去除不易溶解的物质和易吸潮的糖类成分，提高最终得到的海参肽成品的水复溶性，为下一个操作单元奠定了很好的基础；（4）产品的腥味少，安全、易吸收，保健与养生功效好。
具体实施方式
12.为使本发明易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
13.实例1一种双酶分步制备海参肽的方法，包括以下步骤：（1）新鲜海参内脏洗净泥沙后，切成小块，磨浆，即为海参内脏原浆；（2）海参内脏原浆与去离子水1：1混匀，加热至95℃维持15min，使海参蛋白适度变性，冷却后，分步加入可溶性蛋白酶进行酶解，第一步加入胰蛋白酶的量为30000u/g，酶解条件为ph9.0，温度为35℃，时间为5h；第二步加入风味蛋白酶的量为50lapu（亮氨酸氨基肽酶单位）/g, 酶解条件为ph6.5，温度为40℃，时间为6h；（3）在酶解结束后加入干物质重量的17％的活性炭进行去味，然后调节ph＝6.0-7.0，升温灭酶灭菌后降温至68-72℃，静置4小时；（4）将所述海参肽澄清滤液采用0.5微米无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为
澄清海参肽溶液；（5）将海参肽陶瓷膜透过液通入纳滤系统进行海参寡肽分离；（6）将海参肽纳滤透过液放入冷冻干燥设备中进行冷冻干燥，控制温度为0℃以下，并在真空状态下水分由冰晶转为蒸汽除掉，冷冻干燥20～40小时，使水分含量控制在3～5%，制得片状海参肽；实例2一种双酶分步制备海参肽的方法，包括以下步骤：（1）新鲜海参内脏洗净泥沙后，切成小块，磨浆，即为海参内脏原浆；（2）海参内脏原浆与去离子水1：1混匀，加热至100℃维持15min，使海参蛋白适度变性，冷却后，分步加入可溶性蛋白酶进行酶解，第一步加入胰蛋白酶的量为20000u/g，酶解条件为ph9.0，温度为35℃，时间为5h；第二步加入风味蛋白酶的量为20lapu（亮氨酸氨基肽酶单位）/g, 酶解条件为ph6.5.0，温度为40℃，时间为6h；（3）在酶解结束后加入干物质重量的17％的活性炭进行去味，然后调节ph＝6.0-7.0，升温灭酶灭菌后降温至68-72℃，静置4小时；（4）将所述海参肽澄清滤液采用0.5微米无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为澄清海参肽溶液；（5）将海参肽陶瓷膜透过液通入纳滤系统进行海参寡肽分离；（6）将海参肽纳滤透过液放入冷冻干燥设备中进行冷冻干燥，控制温度为0℃ 以下，并在真空状态下水分由冰晶转为蒸汽除掉，冷冻干燥20～40小时，使水分含量控制在3～5%，制得片状海参肽；实例3一种双酶分步制备海参肽的方法，包括以下步骤：（1）新鲜海参内脏洗净泥沙后，切成小块，磨浆，即为海参内脏原浆；（2）海参内脏原浆与去离子水1：1混匀，加热至95℃维持10～15min，使海参蛋白适度变性，冷却后，分步加入可溶性蛋白酶进行酶解，第一步加入胰蛋白酶的量为30000u/g，酶解条件为ph9.0，温度为35℃，时间为3h；第二步加入风味蛋白酶的量为50lapu（亮氨酸氨基肽酶单位）/g, 酶解条件为ph6.5，温度为40℃，时间为4h；（3）在酶解结束后加入干物质重量的17％的活性炭进行去味，然后调节ph＝6.0-7.0，升温灭酶灭菌后降温至68-72℃，静置4小时；（4）将所述海参肽澄清滤液采用0.5微米无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为澄清海参肽溶液；（5）将海参肽陶瓷膜透过液通入纳滤系统进行海参寡肽分离；（6）将海参肽纳滤透过液放入冷冻干燥设备中进行冷冻干燥，控制温度为0℃以下，并在真空状态下水分由冰晶转为蒸汽除掉，冷冻干燥20～40小时，使水分含量控制在3～5%，制得片状海参肽；对比例1一种双酶分步制备海参肽的方法，包括以下步骤：（1）新鲜海参内脏洗净泥沙后，切成小块，磨浆，即为海参内脏原浆；（2）海参内脏原浆与去离子水1：1混匀，加热至95℃维持15min，使海参蛋白适度变
性，冷却后，分步加入可溶性蛋白酶进行酶解，加入胰蛋白酶的量30000u/g，酶解条件为ph9.0，温度为35℃，时间为5h；（3）在酶解结束后加入干物质重量的17％的活性炭进行去味，然后调节ph＝6.0-7.0，升温灭酶灭菌后降温至68-72℃，静置4小时；（4）将所述海参肽澄清滤液采用0.5微米无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为澄清海参肽溶液；（5）将海参肽陶瓷膜透过液通入纳滤系统进行海参寡肽分离；（6）将海参肽纳滤透过液放入冷冻干燥设备中进行冷冻干燥，控制温度为0℃以下，并在真空状态下水分由冰晶转为蒸汽除掉，冷冻干燥20～40小时，使水分含量控制在3～5%，制得片状海参肽；对比例2一种双酶分步制备海参肽的方法，包括以下步骤：（1）新鲜海参内脏洗净泥沙后，切成小块，磨浆，即为海参内脏原浆；（2）海参内脏原浆与去离子水1：1混匀，加热至95℃维持15min，使海参蛋白适度变性，冷却后，分步加入可溶性蛋白酶进行酶解，加入风味蛋白酶的量50lapu（亮氨酸氨基肽酶单位）/g, 酶解条件为ph6.5，温度为40℃，时间为6h；（3）在酶解结束后加入干物质重量的17％的活性炭进行去味，然后调节ph＝6.0-7.0，升温灭酶灭菌后降温至68-72℃，静置4小时；（4）将所述海参肽澄清滤液采用0.5微米无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为澄清海参肽溶液；（5）将海参肽陶瓷膜透过液通入纳滤系统进行海参寡肽分离；（6）将海参肽纳滤透过液放入冷冻干燥设备中进行冷冻干燥，控制温度为0℃以下，并在真空状态下水分由冰晶转为蒸汽除掉，冷冻干燥20～40小时，使水分含量控制在3～5%，制得片状海参肽；对比例3一种双酶分步制备海参肽的方法，包括以下步骤：（1）新鲜海参内脏洗净泥沙后，切成小块，磨浆，即为海参内脏原浆；（2）海参内脏原浆与去离子水1：1混匀，加热至95℃维持15min，使海参蛋白适度变性，冷却后，分步加入可溶性蛋白酶进行酶解，加入木瓜蛋白酶的量为30000u/g，酶解条件为ph6.5，温度为37℃，时间为5h；（3）在酶解结束后加入干物质重量的17％的活性炭进行去味，然后调节ph＝6.0-7.0，升温灭酶灭菌后降温至68-72℃，静置4小时；（4）将所述海参肽澄清滤液采用0.5微米无机纳滤陶瓷膜进行过滤，所得透过液为澄清海参肽溶液；（5）将海参肽陶瓷膜透过液通入纳滤系统进行海参寡肽分离。
14.（6）将海参肽纳滤透过液放入冷冻干燥设备中进行冷冻干燥，控制温度为0℃以下，并在真空状态下水分由冰晶转为蒸汽除掉，冷冻干燥20～40小时，使水分含量控制在3～5%，制得片状海参肽；双酶二步酶解效果检测：
实施例1～3以及对比例1～3中，海参内脏经过原料前处理、加热处理后，利用双酶二步进行酶解，为了评估酶解效果，酶解结束后，采用《中华人民共和国国家标准gb/t 22729-2008》附录a中的方法进行酶解产物检测，结果如下表1所示：表1 项目酶解产物的的分子量分布比例（%）由表1的结果可知，实施例1～3的酶解产物分子量小且集中，酶解产物游离氨基酸含量低(小于200da的比例小于5％)，分子量小于1000da的海参肽比例达到了100％，介于200～1000da的海参肽比例达到了95.5％以上，酶解产物分子量明显优于对比例1～3。由此可以说明，采用本发明提供的双酶二步技术手段，能够显著提高酶解海内脏参蛋白的酶解效率，酶解彻底。
15.上述仅以实施例来进一步说明本发明的技术内容，以便于读者更容易理解，但不代表本发明的实施方式仅限于此，任何依本发明所做的技术延伸或再创造，均受本发明的保护。本发明的保护范围以权利要求书为准。